胺基酸對映體拆分的酶方法
2023-06-17 11:27:01
專利名稱：胺基酸對映體拆分的酶方法
技術領域：
本發明涉及一種新的酶方法，該方法能使呈外消旋混合物形式的胺基酸進行對映體拆分。
這些胺基酸可以用於各種各樣的工業，例如常常作為生物活性化合物，或者作為製備主要是藥物、化學或農用目的的化合物的合成中間體。因此，人們很快發現這樣一個問題，即往往需要能夠從這些胺基酸中獲得一種或另一種旋光活性的對映體。於是，人們曾研製前-手性胺基酸對映體的分離方法。特別地，已公開許多使這些胺基酸對映體拆分的酶方法，這些方法對於非對稱合成方法來說是一種有意義的可代替的辦法。
這樣，Soloshonok等人[四面體(Tetrahedron)Assymetry，卷6(7)，1995年，第1601-1610頁]提出了一種根據下述反應流程圖的β-胺基酸對映體拆分的酶方法 類似地，Topgi等人(Bioorg.Med.Chem.，1999年，卷7，第2221-2229頁)描述了一種呈純對映體形式的(R)-和(S)-3-氨基4-戊炔酸乙酯對映體的拆分方法，其反應流程圖如下
通過苯乙酸的作用，通過醯化相應胺可得到起始苯基乙醯胺，或 專利申請WO98/50575更一般地描述了一種手性β-胺基酸的製備方法，該方法包括在適當的條件下，讓所述胺基酸的外消旋混合物與醯基供體和青黴素G醯基轉移酶(或醯胺水解酶)接觸，以便立體選擇性地將β-胺基酸外消旋混合物中的一種對映體醯化成其相應的N-醯化衍生物，同時得到β-胺基酸的相反對映體，呈富集對映體形式，其反應流程圖如下
上述的「醯基供體」具有下述通式 式中R3選自苯基、苯氧基、氨基、苯基和吡啶基的不同衍生物，R4選自羥基、烷氧基、烷基、烯基、炔基、滷代烷基、芳基(anyle)、芳基烷基、糖或甾族化合物。
專利申請WO98/50575還描述了另一種製備手性β-胺基酸的可選擇方法，該方法包括在適當的條件下，讓呈外消旋形式的醯胺與青黴素G醯基轉移酶接觸，以便選擇性地將呈外消旋形式醯胺的其中一種對映體去醯化成其相應的β-胺基酸，同時得到醯胺的相反對映體，呈富集對映體形式，其反應流程圖如下 但是，前面所討論方法還存在較大缺陷，即在酶步驟之先或與酶步驟同時通過一個醯胺中間體，該醯胺的化學式可用如下方式概括芳環，優選苯基 這樣一種醯胺因其結構中含有芳環而在含水人質中是不溶的，由此造成諸多不便。例如，人們知道，某些酶在含水介質中是可溶的，並且對存在的有機溶劑往往很敏感。然而，為了優化酶反應的產率，使底物的溶解度比酶好以使它們能夠密切接觸，這一點很重要。
這正是本發明要克服的主要缺陷。事實上，本發明首先涉及胺基酸對映體分離的新方法，該方法是先用戊二酸酐、後用戊二醯基7-ACA醯基轉移酶處理所述胺基酸的外消旋混合物，以便回收所述胺基酸的一種對映體，而另一種對映體仍呈相應的戊二醯基醯胺衍生物的形式。
這種方法是特別有利的，因為使用戊二酸酐可以使該反應能夠通過相應於起始胺基酸的戊二醯基醯胺衍生物中間體進行，戊二醯基官能團使該分子可以在含水介質中溶解。由此，本發明的方法可以在溫和的反應條件下、在含水介質中實施，具體而言不需要使用有機助溶劑。
本發明方法還具有的優點是，能夠應用於任何形態的胺基酸(α、β、γ等)。在本發明中，術語「胺基酸」不僅包括胺基酸本身(即具有氨基官能團和酸官能團-COOH的化合物)，而且還包括其相應的酯衍生物(即酸官能團被酯官能團COOR取代的化合物)。優選地，本發明的方法更確切地應用於下述通式(I)的胺基酸 式中-n是選自0、1、2、3、4、5和6的整數，-R代表氫原子、烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、縮合多環烴基，或雜環基，所有這些基團可任選地被取代，-和R′代表烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、縮合多環烴基、雜環基，或被烷基、芳基、環烷基或雜環取代的氧基、硫代、亞碸或磺醯基，所有這些基團還任選地被取代。
因此，在這些胺基酸是通式(I)的情況下，本發明的方法可以用圖1的反應流程圖表示。這個流程圖表示了用戊二酸酐處理的第一個步驟與用戊二醯基7-ACA醯基轉移酶處理的第二個步驟。每個所得產物的構型，即一方面是胺基酸，另一方面是戊二醯基醯胺衍生物，取決於R′基的性質。
在本發明中，烷基、烯基和炔基一般為含有1-30個碳原子的直鏈或支鏈，但這並非是限制性的。這同樣適合於這些基是其它基團的取代基的情況。優選地，這些基團為含有1-20個碳原子的直鏈或支鏈，更優選地，為含有1-10個碳原子的直鏈或支鏈。這些烷基例如可以選自甲基、乙基、正-丙基、正-丁基、正-戊基、正-己基、正-庚基、正-辛基、正-壬基、正-癸基、正-十一烷基、正-十二烷基、正-十三烷基、正-十五烷基、正-十六烷基、正-十七烷基、正-十八烷基、異丙基、異丁基、異戊基、異己基、3-甲基戊基、新戊基、辛己基、2，3，5-三甲基己基、仲-丁基、叔-丁基、叔-戊基。優選的烷基例如是甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、正-戊基、異戊基、正-己基和異己基。烯基例如可以選自乙烯基、1-丙烯基、烯丙基、丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基和3-甲基-2-丁烯基。炔基例如可以選自乙炔基、1-丙炔基和炔丙基。
在本發明中，環烷基一般含有3-12個碳原子。優選地，環烷基選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基和環十二烷基。根據本發明的另一個方面，環烷基可以是多環的。優選地，這些基團選自雙環烷基和三環烷基。
根據本發明，「芳基」是指單價芳族烴基。在這些芳基中，優選任選取代的苯基。
在本發明中，術語「縮合多環烴」是指優選選自下列的基團並環戊二烯、茚、萘、甘菊環、庚搭烯、聯苯撐、不對稱indacéne、對稱indacéne、苊烯、芴、苯嵌萘、菲、蒽、熒蒽、醋菲(acephenanthrylene)、醋蒽烯(aceanthrylene)、三亞苯、芘、、萘並萘、pleiadene、二萘品苯、二萘嵌苯、戊芬、戊省、亞四苯基、己芬、己省、玉紅省、六苯並苯、聯三萘、庚芬、庚省、皮蒽或卵苯。
在本發明中，術語「雜環」表示單環或稠合多環化合物，它們含有一個或多個雜原子，每個環由3-10個鏈節構成。優選地，本發明的雜環在由3-10個鏈節構成的環中含有1-3個選自氧、硫和氮的雜原子。本發明的雜環優選地選自噻吩、苯並[b]噻吩、萘並[2，3-b]噻吩、噻蒽、呋喃、2H-吡喃、異苯並呋喃、2H-色烯、氧雜蒽、phenoxathiine、2H-吡咯、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、中氮茚、異吲哚、3H-吲哚、吲哚、1H-吲唑、嘌呤、4H-喹嗪、異喹啉、喹啉、酞嗪、1，8-二氮雜萘、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、4aH-咔唑、咔唑、β-咔啉、菲啶、吖啶、萘嵌間二氮雜苯、1，7-菲咯啉、吩嗪、吩砒嗪、異噻唑、吩噻嗪、異噁唑、呋咱、吩噁嗪、異色滿、吡咯烷、Δ2-吡咯啉、咪唑啉、Δ2-咪唑啉、吡唑烷、Δ3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、2，3-二氫化吲哚、異2，3-二氫化吲哚、奎寧環和嗎啉。
在本發明中，當前面定義的這些不同的基團被取代時，根據這些基團的性質，所述的一種或多種取代基一般可選自滷素原子、芳基、雜環基、羥基、烷氧基、芳氧基、硫代、烷硫基、芳硫基、烷基亞碸、芳基亞碸、烷基磺醯基、芳基磺醯基、氰基、硝基、磺醯氨基、烷基磺醯氨基和芳基磺醯氨基基團。優選地，前面定義的這些基團被取代1、2或3次。根據優選的方面，所述滷素原子可選自氯、氟、溴和碘。在這些烷基被滷素取代的情況下，優選所述滷素原子為氟原子。優選地，氟取代基的數目是1、2、3、4、5、6或7。例如，三氟甲基。
優選地，本發明的胺基酸選自通式(I)化合物，其中n是選自0、1、2和3的整數，R代表氫原子、烷基或芳基，R′如前面所定義。
更優選地，本發明的胺基酸選自通式(I)化合物，其中n是選自0、1和2的整數，R代表氫原子或烷基，R′選自任選取代的芳基或雜環。在後一種情況下，這些芳基和/或雜環優選地被取代1、2或3次。
在許多工業方法中，特別是在水解β-內醯胺例如N-戊二醯基7-氨基乙酸基頭孢菌素)時，戊二醯基7-ACA醯化轉移酶已經用作催化劑。根據本技術領域的技術人員，即酶領域專家熟知的技術，所述酶可以由許多微生物得到，例如不動桿菌(Acinetobacter)、節桿菌(Arthrobacter)、桿菌(Bacillus)、假單胞菌(Pseudomonas)、寡養單胞菌(Stenotrophomonas)或黃單胞桿菌(Xanthomonas)屬。戊二醯基7-ACA醯化轉移酶也可以從市場上獲得，例如Roche Diagnostic GmbH(Roche Molecular Biochemicals，Standhofer Strasse 116，D-68305 Mannheim)或Recordati S.p.A.(Stabilimento di opera，Via Lambro 38，I-20090 Opera(MI))。
可以使用不同形式的戊二醯基7-ACA醯化轉移酶，但這不會改變立體特異性和立體選擇性。例如，可以使用可溶形式或固定形式的戊二醯基7-ACA醯化轉移酶。在第二種情況下，一般是通過根據本技術領域的技術人員熟知的技術固定這種酶。例如，這種酶可以嵌入聚合物凝膠中，或通過共價鍵、交聯作用、吸附作用或包封將其固定在固體載體上。通常使用的合適載體例如是多孔玻璃、多孔陶瓷、合成聚合物(例如聚苯乙烯、聚乙烯醇、聚乙烯、聚醯胺或聚丙烯醯胺)，或天然來源的聚合物(例如纖維素)。
通過使用戊二醯基7-ACA醯化轉移酶，有可能得到高對映體過量(ee)的對映體，特別地高於或等於90％，甚至高於或等於95％，優選地高於或等於99％。在本發明中，「對映體過量」是指以外消旋混合物計，以％表示的其中一種對映體的過量。更確切地，對映體過量按照下式計算ee(%)=[R]-[S][R]+[S]*100=(R)%-(S)%]]>[R]和[S]分別表示(R)-對映體和(S)-對映體的濃度一般地，以起始胺基酸(底物)總量計，使用的酶量是每毫摩爾底物為1-100單位(U)，優選每毫摩爾底物為10-40單位(U)。1單位酶為在本技術領域的技術人員已知的標準pH和溫度條件下，每分鐘水解1微摩爾N-戊二醯基7-氨基乙酸基頭孢菌素酸所需要的酶量。
根據本發明，在任選緩衝的含水介質中進行該反應。在這種情況下，濃度為10-200mM的含水緩衝液可以選自在pH5-6.5下可使用的乙酸鹽緩衝液，或在pH6.5-8下可使用的磷酸鹽緩衝液，或在pH8-9下可使用的焦磷酸鹽緩衝液。
因此，本發明的方法可以在pH能控制並調節到6-9的介質中實施。優選地，反應介質的pH可情確地控制並調節到7.5-8.5，更優選地，8-8.5。使用pH-調節器，通過添加酸(例如像鹽酸、硫酸或磷酸)與添加鹼(例如像氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化銨)，可以控制pH穩態。
在溫度20-40℃、優選25-35℃下，用戊二酸酐處理本發明的胺基酸。另外，在溫度10-50℃、優選25-35℃下進行第二個步驟，該步驟使用戊二醯基7ACA醯基轉移酶進行。
最後，反應時間變化很大，可以是1-100小時，主要取決於所涉及的胺基酸和酶的濃度。一般地講，該反應進行的時間是得到希望的對映體，並具有令人滿意的對映體過量所需要的時間。通過採用本技術領域的技術人員已知的經典技術，可以控制所得到的手性胺基酸的量和對映體過量。最好採用HPLC(高效液相色譜)進行控制。
根據本發明，由於採用前述方法得到的(R)-對映體和(S)-對映體中的一種在含水介質中呈可溶性胺形式，而另一種呈固體醯胺形式，所以它們能很容易分離。因此，本發明的另一個目的涉及前面公開的方法，該方法還包括將(R)-對映體和(S)-對映體分離的步驟。
藉助於本技術領域的技術人員已知的經典技術，可以很容易進行所述的(R)-對映體和(S)-對映體的分離。例如採用過濾、提取、色譜或結晶方法操作。
在希望分離的另一種對映體呈胺基酸形式而不是呈戊二醯基醯胺衍生物形式的情況下，可以將根據前述方法已分離的戊二醯基醯胺衍生物對映體進行水解，以便回收呈對映體形式的相應胺基酸。應該指出，這種方法是有利的，因為這種水解能夠保持使用化合物的立體化學，不會導致手性戊二醯基醯胺衍生物的外消旋作用。在胺基酸是通式(I)的情況下，這個補充步驟可用圖2的反應流程圖表示。
可以根據本技術領域的技術人員已知的經典技術進行水解。本發明特別地涉及酸性或鹼性水解。在後一種情況下，例如在像氫氧化鈉的鹼存在下，在溫度50-90℃與大氣壓下操作。然而，也可以使用本技術領域的技術人員已知的其他適合的操作條件。
本發明的方法可以用於分離呈外消旋形式氨的基酸，這樣能夠獲得所述胺基酸的一種或另一種對映體，所述的對映體特別可用作合成中間體。
例如，本發明例如能夠獲得(S)型的3-氨基3-苯基丙酸，它是合成下述通式化合物的中間體
它是哮喘病中特別涉及的VLA4受體的拮抗劑。
除了前述的內容外，本發明還包括可以由下面實施例得出的本發明的特徵與優點，這些實施例應該認為是說明本發明的，不限制其保護範圍。
圖1圖解表示使用戊二酸酐處理本發明通式(I)胺基酸的第一個步驟，與使用戊二醯基7-CAC醯基轉移酶處理的第二個步驟。每個得到的產物構型，即一方面是胺基酸，另一方面是戊二醯基醯胺衍生物，取決於R′的性質。
圖2圖解表示通過水解將手性戊二醯基醯胺衍生物轉化成其相應手性胺基酸的步驟。
實施例實施例1呈外消旋混合物形式的3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸的拆分a)外消旋3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸的醯化作用將40.6克外消旋3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸溶於200毫升蒸餾水和55毫升三乙胺中。再分小份添加29.4克戊二酸酐，將該反應混合物攪拌1小時。然後，用8.2毫升95％(重量/體積)硫酸酸化該反應混合物。這樣得到的沉澱經過濾後，每次用15毫升蒸餾水洗滌3次，然後在55℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到52.84克外消旋的3-(戊二醯基醯胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸。
採用HPLC(高效液相色譜)測定所得到產物的性質。
b)使用呈懸浮液狀的結晶戊二醯基7-CAC醯基轉移酶的酶脫醯基作用(100毫升反應器)將20克在前面步驟得到的酸溶於75毫升蒸餾水中。添加11.2毫升30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，把懸浮液的pH調節到8.2。往這種溶液添加826毫克(626單位)結晶戊二醯基7-CAC醯基轉移酶懸浮液。該反應混合物在35℃與控制和調節pH為7.9-8.1的條件下攪拌51小時。反應結束後，反應混合物冷卻到20℃，添加5N鹽酸，把pH調節到7.0。這時添加20毫升乙醇。這樣得到(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸沉澱，該沉澱經過濾後每次用30毫升乙醇洗滌三次，然後在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到5.65克(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸，對映體過量高於99％。
母液用17.5毫升5N鹽酸酸化。生成的沉澱經過濾後每次用10毫升蒸餾水洗滌2次。得到的濾餅在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到8.25克(S)-3-(戊二醯基醯胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸和(R)-3-(戊二醯基醯胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸，其比為91∶9。
採用HPLC測定所得到產物的性質。
c)使用從Roche Diagnostic GmbH得到的固定化戊二醯基7-CAC醯基轉移酶的酶脫醯基作用(100毫升反應器)將20.5克在步驟a)得到的酸溶於75毫升蒸餾水中。添加11.9毫升30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，把懸浮液的pH調節到8.2。往這種溶液添加6.2克(632.4單位)溼的固定化戊二醯基7-CAC醯基轉移酶(Roche Diagnostic GmbH)。該反應混合物在35℃與控制和調節pH為7.9-8.1的條件下攪拌18小時。反應結束後，添加30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，調節反應混合物的pH，並且把反應混合物的體積調節到200毫升，以便溶解生成的(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸。過濾除去固定酶，添加5N鹽酸，把母液的pH調節到7.0。這時往反應混合物添加50毫升乙醇。過濾(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸沉澱，用10毫升乙醇洗滌，然後在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到5.375克(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸，對映體過量等於98％。
母液用20毫升5N鹽酸酸化。生成的沉澱經過濾後每次用15毫升蒸餾水洗滌2次。濾餅在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到6克(S)-3-(戊二醯基醯胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸，其比為94∶6。
採用HPLC測定所得到產物的性質。
d)使用呈懸浮液狀的結晶戊二醯基7-CAC醯基轉移酶的酶脫醯基作用(500亳升反應器)
將100克如步驟a)得到的外消旋3-(戊二醯基醯胺)-3-(4′-硝基苯基)丙酸溶於400毫升蒸餾水中。添加60毫升30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，把懸浮液的pH調節到8.2。往這種溶液添加6.4克(4653單位)結晶戊二醯基7-CAC醯基轉移酶懸浮液。該反應混合物在35℃與控制和調節pH為7.9-8.1的條件下攪拌30小時。反應結束後，反應混合物冷卻到20℃，添加25毫升30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，把pH調節到13，以便溶解生成的(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸。過濾不溶的顆粒，添加27毫升36％鹽酸，把母液的pH調節到7.0。這時往反應混合物添加100毫升乙醇。得到(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸沉澱，該沉澱經過濾後每次用100毫升乙醇洗滌2次，然後在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到28.87克(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸，對映體過量等於97％。
採用HPLC測定所得到產物的性質。
實施例2呈外消旋混合物形式的3-氨基-3-苯基丙酸的拆分a)外消旋3-氨基-3-苯基丙酸的醯化作用將488克外消旋3-氨基-3-苯基丙酸溶於2升蒸餾水中，其中含有236克片狀氫氧化鈉。在20℃，在攪拌下一小時內分小份往反應混合物添加437.5克戊二酸酐。1小時後，用236毫升95％(重量/體積)硫酸酸化該反應混合物，並冷卻到10℃。這樣生成的沉澱經過濾後，每次用600毫升蒸餾水洗滌3次。這樣得到的1610克溼濾餅含有602克外消旋的3-戊二醯基醯胺-3-苯基丙酸。採用HPLC測定所得到產物的性質。
b)使用呈懸浮液狀的結晶戊二醯基7-CAC醯基轉移酶的酶脫醯基作用(5升反應器)將1575克在前面步驟得到的溼濾餅，其中含有589克外消旋的3-戊二醯基醯胺-3-苯基丙酸，溶於1610毫升蒸餾水中。添加440毫升30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，把懸浮液的pH調節到8.0。往這種溶液添加52.6毫克(3200單位)結晶戊二醯基7-CAC醯基轉移酶懸浮液。該反應混合物在35℃與控制和調節pH為7.9-8.1的條件下攪拌41小時。反應結束後，反應混合物冷卻到20℃，添加25毫升30％(重量/體積)氫氧化鈉溶液，將pH調節到13，以便溶解生成的(R)-3-氨基-3-(4′-硝基苯基)丙酸。過濾不溶顆粒，添加27毫升36％鹽酸溶液調節母液的pH為7.0。
如此得到的(R)-3-氨基-3-苯基丙酸沉澱，經過濾後用150毫升蒸餾水洗滌，然後在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到96.9克(R)-3-氨基-3-苯基丙酸，對映體過量等於98％。
母液用180毫升95％(重量/體積)硫酸酸化。如此生成的沉澱經過濾後每次用400毫升冷蒸餾水洗滌2次。其濾餅在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到314.6克(S)-3-(戊二醯基醯胺)-3-苯基丙酸和(R)-3-(戊二醯基醯胺)-3-苯基丙酸，其比為90∶10。
採用HPLC測定所得到產物的性質。
c)採用鹼性水解使(S)-3-戊二醯基醯胺-3-苯基丙酸脫醯基將557.2克在前面步驟b)得到的(S)-3-(戊二醯基醯胺)-3-苯基丙酸和(R)-3-(戊二醯基醯胺)-3-苯基丙酸混合物(其比為90∶10)溶於3.91升蒸餾水和1.65升30％(重量/體積)氫氧化鈉中。該反應混合物在70℃攪拌4天。
然後，該反應混合物冷卻到15℃。添加3.21升37％(重量/體積)鹽酸，沉澱所得到的產物，過濾，並在45℃真空下乾燥直至達到恆重。這樣得到202.4克(S)-3-氨基-3-苯基丙酸和(R)-3-氨基-3-苯基丙酸，其對映體過量高於98％。
採用HPLC測定所得到產物的性質。
權利要求
1.分離胺基酸對映體的方法，該方法包括先用戊二酸酐、後用戊二醯基7-ACA醯基轉移酶處理所述胺基酸的外消旋混合物，以便回收所述胺基酸的一種對映體，另一種對映體仍呈相應的戊二醯基醯胺衍生物的形式。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的胺基酸具有下述通式(I) 式中-n是選自0、1、2、3、4、5和6的整數，-R代表氫原子、烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、縮合多環烴或雜環，所有這些基團可任選地被取代，且-R′代表烷基、烯基、炔基、環烷基、芳基、縮合多環烴、雜環，或被烷基、芳基、環烷基或雜環取代的氧基、硫代、亞碸或磺醯基，所有這些基團還任選地被取代。
3.根據權利要求2所述的方法，其特徵在於所述的胺基酸選自下述通式(I)化合物 式中n是選自0、1、2和3的整數，R代表氫原子、烷基或芳基，R′如權利要求2所定義。
4.根據權利要求2或3所述的方法，其特徵在於所述的胺基酸選自下述通式(I)化合物 式中n是選自0、1和2的整數，R代表氫原子或烷基，R′選自任選取代的芳基或雜環。
5.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於使用呈可溶或固定形式的戊二醯基7-ACA醯基轉移酶。
6.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於以起始胺基酸(底物)總量計，使用的酶量是每毫摩爾底物為1-100單位。
7.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於在緩衝含水介質中進行該反應。
8.根據權利要求7所述的方法，其特徵在於所述含水緩衝液的濃度是10-200mM，所述含水緩衝液選自在pH5-6.5下可使用的乙酸鹽緩衝液、在pH6.5-8下可使用的磷酸鹽緩衝液和在pH8-9下可使用的焦磷酸鹽緩衝液。
9.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於控制pH並調節到6-9。
10.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於在溫度20-40℃下用戊二酸酐處理胺基酸。
11.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於在溫度10-50℃下使用戊二醯基7ACA醯基轉移酶進行處理。
12.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於反應時間是1-100小時。
13.根據上述權利要求中任一項權利要求所述的方法，其特徵在於還分離(R)-對映體和(S)-對映體。
14.根據權利要求13所述的方法，其特徵在於可採用過濾、提取、色譜或結晶方法進行所述(R)-對映體和(S)-對映體的分離。
15.根據權利要求13或14所述的方法，其特徵在於由分離的戊二醯基醯胺衍生的對映體還進行水解，以便回收呈對映體形式的相應胺基酸。
16.分離胺基酸對映體的方法，該方法包括a)先用戊二酸酐、後用戊二醯基7-ACA醯基轉移酶處理所述胺基酸的外消旋混合物，以便回收所述胺基酸的一種對映體，另一種對映體仍呈相應的戊二醯基醯胺衍生物的形式，b)然後分離如此得到的兩種對映體。
17.分離胺基酸對映體的方法，該方法包括a)先用戊二酸酐、後用戊二醯基7-ACA醯基轉移酶處理所述胺基酸的外消旋混合物，以便回收所述胺基酸的一種對映體，另一種對映體仍呈相應的戊二醯基醯胺衍生物的形式，b)然後分離如此得到的兩種對映體，並且c)水解由戊二醯基醯胺衍生的對映體，以便回收呈對映體形式的胺基酸。
全文摘要
本發明涉及一種新的酶方法，該方法可用於胺基酸的對映體拆分。更確切地說，這種胺基酸對映體分離方法是先用戊二酸酐，後用戊二醯基7－ACA醯基轉移酶處理所述胺基酸的外消旋混合物，以便回收所述胺基酸的一種對映體，另一種對映體仍呈相應的戊二醯基醯胺衍生物的形式。
文檔編號C07C7/148GK1551922SQ02817198
公開日2004年12月1日 申請日期2002年8月30日 優先權日2001年9月4日
發明者C·薩拉尼亞, C·戈貝爾, M－O·迪裡, C 薩拉尼亞, 俠, 炊 申請人:安萬特醫藥股份有限公司