減毒的非免疫原性痘病毒和副痘病毒衍生的多功能副痘病毒免疫誘導劑用作藥物的新適應症的製作方法

2023-06-16 03:15:51 1

專利名稱：減毒的非免疫原性痘病毒和副痘病毒衍生的多功能副痘病毒免疫誘導劑用作藥物的新適應症的製作方法
技術領域：
本發明涉及以痘病毒和副痘病毒及其成分為基礎的多功能副痘病毒免疫誘導劑(痘病毒誘導劑)單獨或聯合在製備針對全新領域適應症和治療迄今尚無有效療方的疾病的藥物中的應用，最重要的是提供無危害的藥物。
優選地，由減毒的、無複製能力和無免疫原性的痘病毒和副痘病毒衍生的製劑(也稱為痘病毒誘導劑)，以調節、補償和恢復的方式分別非特異或近特異地幹預複合免疫系統(天然免疫系統、先天性免疫系統、初級免疫系統)中系統發生順序較早的部分。下文中這些痘病毒誘導劑因此也被稱為「生物調節劑」。在細胞水平上，痘病毒誘導劑活化巨噬細胞、調節NK細胞和其它淋巴網狀細胞，而在體液水平上，它們調控各種細胞因子的形成，如白介素1α、白介素2、6和12，腫瘤壞死因子，CSA，或幹擾素(細胞因子釋放)。用痘病毒誘導劑治療動物的介紹和各實驗結果的綜述參閱B.Mayr和A.Mayr:″″Zum derzeitigen Stand der praklinischen Forschung uber dieWirksamkeit und Unschadlichkeit von Paramunitatsinducern ausPockenviren.Eine Literaturstudie″,Tierarztl.Praxis,Vol.23(1995)542-552。該預防和治療新概念已在獸醫用藥中實驗證明效果良好。
文中所述本發明的重要性和新穎性在於令人驚奇地發現由痘病毒誘導劑釋放的細胞因子促進T輔助細胞亞型1(Th1)的形成，因此--如從文獻中所知的--阻礙亞型2(Th2)的形成。事實上，Th2細胞調節體液免疫應答，通過肥大細胞分泌IgE引起速髮型變態反應(抗體依賴型變態反應)。因此，根據本發明，Th1細胞作為Th2細胞的拮抗物可以分別防止速髮型變態反應或減弱已存在的速髮型變態反應。Th1細胞與免疫系統中細胞病原體非特異的細胞和病原體特異的細胞共同作用，並與用痘病毒誘導劑處理釋放的白介素1和2、幹擾素、CSF和TNF等細胞因子相關聯(相互作用)。
關於其效果和無危害性，痘病毒誘導劑已在人和獸醫用藥中實驗證明效果良好。DE-C-44 05 841中對其製備方法以及作為藥劑預防和治療特定疾病的使用進行了說明。
根據DE-C-44 05 841所述方法製備痘病毒誘導劑。製備痘病毒誘導劑的初始病毒一般通過在細胞株中擴增減毒痘病毒和副痘病毒獲得，優選VERO細胞株或雞胚胎成纖維細胞的原代或二代培養物。滴度大於107.0KID50/ml的病毒收集物才可用。該減毒的痘病毒株收集物通過生理-生化技術失活，如採用至少0.05％的β-丙內酯，具體由所用的痘病毒株而定。於4,000g離心30分鐘(或其它化學方法)純化後，在痘病毒中加入穩定劑，如碳水化合物，多價糖，蛋白，優選用量為2.5％的明膠(Polygeline(TM))，依所用的痘病毒株而定。得到的製劑分裝凍幹，保存於+4℃。如DE-C-44 05 841所述方案，在使用時將乾粉溶於去離子水中配製藥劑。1ml溶解液所含的乾粉相當於一個劑量，至少應有640，優選至少1280VSV有效單位。
如DE-C-44 05 841所述，完整的病毒顆粒和各病毒株的結構成分可用於痘病毒誘導劑的製備，其中包括融合蛋白、吸附蛋白或39KD的副痘病毒蛋白，以及所謂的痘病毒「空殼」。它們不需要失活處理。
DE-C-44 05 841包括各製備步驟的詳細說明，介紹了幾種痘病毒或副痘病毒株的聯合使用的可能性，附此供參考。
關於作為藥物使用，我們不僅可以根據本專利文獻列出的發明來確定來自聯合使用的痘病毒的痘病毒誘導劑的適應症，而且令人驚奇的發現，痘病毒誘導劑在預防和治療上具有全新應用潛力，至今在非腸道性和口服藥物中還未發現如此高效且同時長時間大劑量使用而無危害性的藥物。
因此，在DE-C-44 05 841中所述的延伸範圍之中，本發明涉及基於痘病毒和副痘病毒基礎上的痘病毒誘導劑在預防和治療人類疾病的應用中的新適應症。這些新適應症是以令人驚奇地發現痘病毒誘導劑可以調節紊亂的免疫系統達到理想的生理範圍為基礎的，這種調節不僅分別著眼於增加或刺激被降低或受抑制的的活性，還著眼於降低病理性升高的免疫學指標。為了理解痘病毒誘導劑在生物調節意義上發生的與包括免疫系統，體液系統和神經系統相關的調節作用，必須認識到個體免疫系統的體液和細胞活性以刺激和抑制方式相互影響。也就是說，如果複合免疫系統中的細胞和體液(可溶部分)成分被痘病毒誘導劑誘導，機體會形成自身調節系統。例如，這種調節可通過分別增加或降低特定效應細胞(如巨噬細胞、白細胞、T細胞、NK細胞)的數量或活性來實現，或增加或降低細胞或體液的信息交流分子(如IL1或2、幹擾素等)的產生來實現。在這些情況下，在採用痘病毒誘導劑進行治療的開始階段，每一個體根據各自防禦系統的功能狀態而顯示出不同個體反應。因而，在此痘病毒誘導劑的「生物調節作用」一詞意義廣泛，包括於通常所說的「免疫治療」的範疇。因此，例如一個病人接受痘病毒誘導劑的治療後白細胞數量可能上升，而反過來，NK細胞數量可能保持在活性水平甚至可能下降。因而，為了使失調的免疫系統得以平衡，沒有必要使所有的免疫學指標都同時被激活或被抑制，因為只需平衡未達標的或超標參量。因為這一原因，用痘病毒誘導劑治療達到正常生理範圍具有個體性，這是一個全新發現。由於痘病毒誘導劑在幹預個體防禦系統的同時，還對神經和體液系統有調控作用，所以痘病毒誘導劑不應僅局限於作為免疫調節劑，還應聯想到其可作為生物調節劑。目前為止，尚未有生物調節劑用作藥物而在嚴重超劑量時也沒有毒副作用，不影響免疫系統的「正常生理值」，以及在功能紊亂時通過調節產生生理正常化結果，即分別指整體功能的穩定和恢復。因此，痘病毒誘導劑對免疫系統失調的患者有突出的前期預防和後期預防應用價值，所述的免疫系統失調例如在免疫抑制治療後不同原因導致的免疫缺陷、免疫抑制性基礎條件的存在或由外部影響因素如應急狀態、特殊重負、長時間旅行和環境中存在急性感染事件導致的免疫低下。對於預防性的副痘病毒免疫，通常需要在預計緊張狀態發生的前幾天內連續注射2至3次痘病毒誘導劑製劑。痘病毒誘導劑的後期預防和治療用藥應至少施用3天或直到臨床症狀消退。嚴重的病症過後和感染性疾病恢復期應每周注射2至3次痘病毒誘導物製劑，直到完全恢復。
此外，本發明基於另一驚人發現即痘病毒誘導劑可單獨或聯合用作佐劑，在抗腫瘤或防止轉移時輔助化療和放療以伴隨療法分別減少或防止不希望出現的損傷。根據目前的經驗，這時痘病毒誘導劑的使用應分階段進行。開始時病人在連續的幾天裡注射5至10次，每次注射1ml(i.m.)，其中至少有640VSV有效單位。接下來，每周注射2至3次，至少延續3周，然後每周注射1次。對於各種臨床和免疫檢驗陰性的腫瘤病人，進一步的治療可減少到每月注射2次。病情不完全清楚時應在較長時期內(數周或數月)每周注射1次。
痘病毒誘導劑的單獨或聯合使用還令人驚奇地在腫瘤治療的最後階段具有應用的潛力，例如當腫瘤已發展到不能施行手術而不可治時，痘病毒誘導劑可緩解難以忍受的病痛，改善病情和病人的生活質量。對於這種情況，痘病毒誘導劑的用量至少是每周兩次或每天一次，根據病人的客觀反映而定。這種治療與目前使用的止痛劑如嗎啡不相矛盾。它甚至可以減少止痛劑的用量至最終停止使用。
此外，本發明還基於如下觀察，利用痘病毒誘導劑對HIV患者進行長期治療能意外地提高免疫水平，並部分導致血液中HIV抗原濃度的減少。報告統一陳述了改善病情的優化條件，表現的改進和戰勝疾病的積極態度。隨機的再次感染得以防止或很快結束，沒有出現感染後的併發症，如單純性皰疹、帶狀皰疹、假單胞菌感染和流感病毒感染等。該治療方式與用於腫瘤患者的方式相同。同樣，HIV陽性患者應終身給以痘病毒誘導劑(如果可能，每周一次)以維持抵抗感染的最佳狀態。感染一旦發生，立即開始每天一次的加強治療，直到觀察到明顯的臨床好轉才能減藥。
本發明的另一個用途是多發性硬化症的長期陪同治療，用以減緩疾病周期，延長兩個周期之間的間歇。該治療效果與腫瘤患者的治療效果一樣。同樣，該治療必須延至終身。直到目前，已有對兒童和老年病人單獨或聯合使用痘病毒誘導劑的經驗。
不僅如此，本發明涉及在手術預防時單獨或聯合使用痘病毒誘導劑以分別減少或防止醫院感染並使創傷癒合最佳化。該處理優選在實施手術前3至5天開始，並至少延續至手術結束後3天。肌肉內用藥最好，也可通過鼻孔在鼻內使用未溶解的凍幹劑(即粉末)。
另人驚奇的是，如果傳統療法無效，創傷和皮膚疼痛的治癒效果不好或不能治癒時，痘病毒誘導劑在替代治療中(如抗生素)有作用。難癒合的傷口和皮膚疼痛比較典型的例子為腳部潰瘍，瘭疽和慢性開放溼疹。對這些病例，除非腸道給藥外用合適的pH為7-8的製劑如粉劑，藥膏，油膏，洗液等對感染皮膚進行局部處理特別有效。在這些病例中，病人每天均注射誘導劑直至傷口癒合。用合適的藥膏如Bepanthen(TM)進行連續的局部處理可加速傷口癒合。
針對新的適應症根據本發明使用的基於痘病毒和副痘病毒的痘病毒誘導劑在超劑量和長期應用的情況下仍有良好的耐受力並是無害的。迄今為止無論是預防性或是治療性均沒有符合此標準的非腸道給藥方式。在醫學上治療的無害性被認為是最重要的標準。目前還沒有一種預防或治療的方法能在本發明提到適應症領域內表現出足夠的效果。
目前應用的稱為免疫調節劑的製劑，如BCG,levamisole,C.parvum及Freund′s佐劑，一方面不是無害的，另一方面只在某一方向上即或者刺激性(刺激劑，佐劑等)或者抑制性(免疫抑制劑)起作用。目前為止還沒有一種藥物能達到在滿足本文定義的生物調節劑達到的最適生理指標的情況下同時具有上面這兩種特性。此外，在本發明的其他臨床應用方面，如替代性腫瘤治療，免除最後階段的疼痛，對HIV陽性患者的AIDS治療，多樣硬化症的長期治療，促進傷口癒合，目前還沒有可與之相比較的無害並有效的其他藥物。
根據本發明使用的針對本文所述適應症的痘病毒誘導劑可應用在非腸道給藥或局部治療兩方面，如鼻內給藥，以氣溶膠噴霧，口服，直腸或陰道給藥等方式。更適宜的是痘病毒誘導劑可通過肌內方式應用。藥物的製備以常規方式進行。然而，必須將製劑的pH調節至7到8。
下面的實施例用於進一步闡述本發明。
本發明描述的痘病毒誘導劑是以痘病毒或副痘病毒為基礎聯合製備的製劑，在後面稱為″Conpind″(申請的商標)，每一劑量的含量為1280 VSV有效單位。一劑量溶解於1毫升無菌水中。實施例1自1994年4月開始，共有17個病人在一個免疫學醫生的診室接受了6次1毫升的Conpind肌內注射，每次間隔為三到五天。在治療開始和結束前的臨床和免疫學指標均進行了測定並記錄下來。觀察的個體均為對各種不同來源的感染具有高易感性的病人，並導致很多嚴重的臨床疾病，如周期性丹毒，周期性皰疹病毒感染，大腸炎，竇炎以及過敏。肌內注射具有良好的耐受，未見局部或系統副反應。在所有的17個病人中，即使是經過短期的治療也可觀察到普遍狀態有明顯的提高。所觀察到的陽性副作用為食慾增加，並部分伴隨有體重增加及情緒好轉。所有的病人至少跟蹤一年。在這段期間，10個病人無新的感染發生，而另7個病人感染的易感性明顯降低。
與用Conpind治療的臨床評估得到的陽性和均一的結果不同的是免疫學指標表現出巨大的個體差異。在最大間隔為3個星期的短期治療中，病理學上增加的指標下降了，而缺損的指標增加。與此相反，在治療前處於正常值的免疫學指標保持不變。因此，在後面的表1中，它們未被分別列出。表1示範性地列出了3個病人的典型免疫學指標。對該表進行研究可以發現對單個病人的不同指標，有的增加而另一些卻降低了。令人感興趣和驚奇的是即使一個82歲的女性患者對此治療也表現出陽性反應。
表1Conpind對3個免疫缺損患者的生物調節效應
實施例215個受到嚴重病毒感染或不可能進行治療的病毒感染的患者分別在臨床接受Conpind的治療。治療以每天一次肌內注射一劑量的Conpind進行直至觀察到明顯的臨床症狀好轉。隨後直至完全康復，患者每星期接受一劑量的Conpind治療。這15個患者分別患有不同的皰疹病毒感染(單純皰疹，生殖器皰疹，帶狀皰疹)，B型肝炎，以及不同起因的周期性病毒感染。從表2中也可以清楚地看出在患者群體中，單個患者的個體免疫學指標有的增加而有的降低。通常這些病人的白細胞和淋巴細胞計數有增加儘管增加幅度較小。一般情況下CD4/CD8比率及Th細胞有明顯增加。相比之下Ts細胞未見有明顯增加。
表2Conpind對15個病毒感染患者的生物調節效應
實施例315個患有不同腫瘤的患者在一個免疫學醫生的診所內按實施例1中的療程進行治療(共6劑量的Conpind，間隔3至5天)。有4個患者在手術成功並完成放療後來診所接受治療，3個是在腫瘤切除術後，其餘8個是在化療後。患者在治療前和最後一次治療後的免疫學指標均進行了測定。所有的患者至少跟蹤一年。所有的患者對治療均有非常好的耐受。未見局部或系統性副反應。所有患者的普遍狀態均有提高，此外，Conpind治療對患者的食慾和心情均有陽性效應。一些患者的腫瘤變小。在隨後的一年中無轉移發生。
表3到5總結了用Conpind治療對腫瘤患者針對單個病例的免疫學指標的影響。那些在治療前為正常且仍保持不變的指標被省略。在這方面令人驚奇的是在這些病人中也是有些單個指標增加而其他指標則降低。儘管這些變化經常在正常範圍內，但它們卻清楚地表明患者對治療的陽性反應。此外，令人感興趣的是即使是非常年老的患者如第27號93歲的女性患者對治療也表現出陽性反應。目前還不清楚是什麼機制導致不同指標的不同反應。然而，已經證明，在Conpind治療後，這些個別指標按不同方式向著生理學的正常化方向變化，無論如何，這種生物調節對患者的健康是有利的。
表3Conpind對手術和放療後的腫瘤患者的免疫學狀態的生物調節效應
表4Conpind對切除腫瘤的腫瘤患者免疫狀態的生物調節效果
表5Conpind對化療後腫瘤患者免疫狀態的生物調節效果
實施例4連續使用Conpind治療對放療或化療期間或之後的有害副反應的發生的效應已在7例腫瘤患者上被檢測。其中4例患者已經切除原發性腫瘤。3例患者由於發生轉移而未接受手術治療。這7例患者全部接受了化療。例如使用順鉑或endoxan。而且，2例作過手術的患者和1例未經手術的患者接受了放療。這7例患者從放療或化療開始就接受每日1劑量的Conpind和治療間隔期中每周2到3次，每次1劑量的Conpind。所有這些患者(2男5女)都未受到由放射或化療引起的可怕損傷。患者自感健康狀況良好並向積極方向發展。放療和化療結束後繼續Conpind治療。5周內，每周2天每次1劑量Conpind。然後每月2肌肉注射劑量的Conpind。至今，使用Conpind的患者都處於健康狀態(副痘病毒免疫分別開始於3.5或2年前)。根據回顧性研究，對照患者在化療或放療期間或之後遭受了眾所周知的嚴重機體和精神損傷。實施例5在本病例中，5個不可實施手術而採用維持治療的腫瘤患者儘管採用了適當的鎮痛措施，仍有嚴重的疼痛和精神壓抑，並因此有自殺傾向。使用Conpind治療的優點用於緩解疼痛和精神壓抑。3個患者患有結腸癌並已形成全身系統性轉移，2個女性患者患有乳腺癌並伴有腦，脊髓，肺和其他器官的轉移，這5例患者全部瀕於死亡。在這一階段患者分別接受每日或每2到5天1個肌肉注射劑量的Conpind直到死亡。3到5次治療之後疼痛已經減緩，在幾例中甚至完全停止。令人驚奇的是患者的精神狀態發生變化，不再精神壓抑，而變得對恢復健康充滿樂觀並主觀感到症狀減輕。其中2例患者甚至因確信自己可以恢復健康而要求出院。在Conpind治療開始之後的2到5個月中，5例患者在自感健康狀況樂觀的情況下全部死亡。
另一前列腺癌擴散的患者使用嗎啡治療。在Conpind治療開始後嗎啡治療可立即停止而無有害結果。實施例67例HIV感染者(5例尚無症狀，2例在Conpind治療開始時有流感症狀，1女性患者有大面積帶狀庖疹)在1至3年之間分三個階段進行Conpind治療。在第一階段，他們接受10天以上的每日一劑的Conpind治療。隨後的第二階段持續5周。在此期間，每周有兩天接受1劑Conpind，接下來的第三階段每月接受一到兩次1劑Conpind治療，直至現在。這7例HIV感染的患者沒有出現症狀且擁有有償工作。兩例發病患者的流感症狀和女性患者的帶狀庖疹在治療開始後幾天內消失。未出現皰疹後的神經炎。檢測1例患者血液中的病毒抗原，發現4周內病毒抗原減少50％以上。按HIV感染者的願望，每月的Conpind劑量改為每周的劑量。在這種治療方式下，HIV感染者有更多的安樂感。這種方式可減少他們對出現新的精神壓抑和疾病的恐懼。實施例7提供了關於5例多發性硬化症患者長期伴隨性治療的陽性效果的經驗。這些患者年齡為25歲(2例，女)和72歲(1例，男)。另外兩個患者(男)介於50和60歲之間。Conpind治療始於3年前並持續至今。患者每周兩天接受1劑量的Conpind。這5人均報告具有很好的耐受性，在精神上有陽性效果，MS期之間的間隔時間不斷延長，並且新的MS期過程和緩。第六例女性患者(13(13歲)患多發性硬化症2年但仍可行走。由於3周前出現永久性進行性大小便失禁，治療採用1個劑量的肌肉內注射。1次Conpind治療後的5個小時內失禁可得到完全緩解。實施例8
Conpind的預防性和協調性治療的陽性效果在要進行手術的病人中得以證明。手術前2至3天預防性地結合抗體或無抗體使用Conpind(肌肉內注射，鼻內一未溶解的凍乾粉)，結果至少在5例臨床手術中獲得成功。Conpind的肌肉內注射在連續的幾天裡進行2至3至3次(每次1個劑量)。術後可重複這樣的治療。共有60例對應不同病症的手術(如，分流術、部分切除乳房、部分切除子宮)接受者以此方式進行了處理。報告總地反映出傷口癒合有所改善(初級癒合，無併發症，癒合過程縮短)。無醫院感染發生。實施例912例被診斷為甲型、乙型、或C型肝炎感染的具有不同程度肝損傷的患者3年前根據實施例6接受Conpind治療。給藥方式為肌肉內注射。病人反映疼痛消失，總體狀況和工作能力改善。肝的相關指標下降，例如γ-GT轉氨酶，至今無復發。因此痘病毒誘導物可以用於肝細胞的再生和慢性肝病的治療。
痘病毒誘導物單獨及聯合使用的無害性總結評價。
痘病毒誘導物PIND-AVI和PIND-ORF及聯合使用的Conpind的無害性已經通過自體試驗和在家庭成員及朋友的廣泛範圍內長期使用而確定。1972到1982年之間，來源於痘病毒的副痘病毒免疫誘導物(Conpind藥物的前身，例如Duphapind,Baypamun P,PIND-AVI,PIND-ORF,Paravi)己被經常性使用，即2月內至少1次。通過局部用藥(口腔(含漱)或鼻腔(吸入))，以治療易感染傾向和強化預防。一次局部治療包括6到10次用藥，每次間隔4-10小時。
在家庭成員和朋友範圍內的另一些人從1983年開始進行了有規律的非腸道給藥治療。為此目的，每年進行6-8個療程，每個療程2-3次地注射1個劑量的痘病毒誘導物(非聯合製劑例如Duphapind,Baypamun P)，以進行前期預防和後期預防。
從1993年起，為此目的，同一群體的人使用Conpind，經常結合局部和非腸道用藥，治療高感染風險。至今在上述病例中從未發現不良的負反應和過敏，而療效完全保持。除了非腸道、口腔和鼻腔用藥之外，通過軟膏局部用藥在治療嚴重創傷和潰瘍方面取得了成功。
權利要求
1．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於輔助伴隨治療的藥物中的應用，以降低或防止在抗腫瘤和防止轉移的化療或放療之後所不希望出現的損傷。
2．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於後期腫瘤治療以減輕患者病痛及改善患者的精神狀態的藥物中的應用。
3．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於改善HIV患者的免疫狀況的藥物中的應用。
4．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於多發性硬化症的伴隨治療的藥物中的應用。
5．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於手術預防以防止感染的藥物中的應用。
6．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於優化創傷癒合，治療傷口或皮膚疼痛的藥物中的應用。
7．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於在其他治療已經不可行時治療病毒感染，治療感染傾向和增強預防的藥物中的應用。
8．痘病毒誘導劑單獨或者聯合在製備用於肝炎感染的肝損傷的治療的藥物中的應用。
9．權利要求1至8中的任何一項所述的應用，用於製備局部或非腸道應用的藥物。
10．權利要求1至9中的任何一項所述的應用，其特徵在於所說的痘病毒誘導劑是基於減毒的非免疫原性的痘病毒或副痘病毒的製劑。
11．權利要求1至9中的任何一項所述的應用，其特徵在於所說的痘病毒誘導劑是基於無活性的、減毒的非免疫原性的痘病毒或副痘病毒的製劑。
12．用於對進行化療或放療患者的輔助治療以減少或防止不希望出現的損傷的方法，包括權利要求10或11中所述的痘病毒誘導劑單獨或聯合地在局部或非腸道應用。
全文摘要
公開了來自減毒的非免疫原性痘病毒或副痘病毒的多功能副痘病毒免疫誘導劑(痘病毒誘導劑)在生產具有新的適應症範圍的人類藥物中的應用。
文檔編號A61P17/02GK1215996SQ97193820
公開日1999年5月5日 申請日期1997年4月14日 優先權日1996年4月15日
發明者安東·邁耶 申請人:安東·邁耶