一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用的製作方法

2023-06-09 02:48:01

一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用。其製備方法是將毛蓮菜提取後，通過高速逆流色譜法、聚醯胺等色譜純化技術，得到毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C，將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C按一定比例混合，即為毛蓮菜提取物。該毛蓮菜提取物，可與藥學上可接受的載體或其他適宜輔料相結合，按照常規方法製成口服給藥的劑型，可用於製備預防和治療糖尿病的藥物。
【專利說明】一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物醫藥領域，涉及一種中藥材提取物的製備方法及應用，具體是涉及一種毛蓮菜提取物的製備方法及其在製備預防和治療糖尿病藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]隨著世界人口的老齡化，糖尿病已經成為一種常見病、多發病，在工業發達國家其發病率呈上升趨勢。據統計，全世界約有1.5億糖尿病患者，80%為非胰島素依賴型糖尿病(2型)，其中我國約有3000萬。由糖尿病併發症引起的死亡人數在發達國家已是繼心腦血管疾病、癌症之後列第三位，引起了世界各國的高度重視，紛紛對糖尿病的發病機制、藥物防治等進行研究。由於I型糖尿病病因已基本明確，只需補充胰島素即可，而2型糖尿病則較複雜，目前我國醫學界對其採取的是包括飲食療法、藥物治療與其它輔助療法的綜合治療措施。西藥雖然層出不窮，但不能從根本上解決問題，而且西藥治療具有一定的副作用及「治療失效」。中醫藥治療糖尿病歷史悠久，臨床經驗豐富，療效顯著，已成為近年來國內外研究熱點。中醫學對糖尿病的認識與西醫不同，中醫強調整體觀，以陰、陽二者的變化反映疾病的本質。正常機體是「陰平陽秘」，陰陽平衡，即機體內環境維持穩態，糖代謝也維持穩定；並且中藥的毒副作用相對較小，病人可長期服用，這是西藥所不能比擬的獨特的優勢。
[0003]毛蓮菜:本品為菊科植物毛蓮菜(Picris japonica T hunb.)的乾燥地上部分。夏、秋二季花開時採收，除去雜質，曬乾。收載於1998年《中華人民共和國衛生部藥品標準蒙藥分冊》。性涼、糙，味苦。殺「粘」，止痛，清熱，消腫，解毒。用於瘟疫，結喉，乳腺炎，胸刺痛，腮腺炎，陣刺痛。為我國藏蒙等少數民族地區的常用藥物。但有關毛蓮菜的基礎研究尚十分有限，使該藥材的後續推廣和應用受到限制。現代研究表明，毛蓮菜含有毛連菜苷(picriside)A、B、C，山萵苣素(lactucin)，11 β-13-二氫山萵苣素(11 β -13-dihydrolac tucin),假還陽參式(caepidiaside) A 及苦蕒菜內酯(ixerin) F 等，還含有多糖和黃酮類化合物，其他化學成分不詳；藥理作用研究表明，毛蓮菜水提取，過DlOl大孔樹脂，水洗脫部分具有降血糖，調節血脂作用。詳見文獻:席嘯虎，葛睿，高建平。日本毛連菜水洗部位降血糖、調血脂作用研究，中國醫藥導報，2011，8 (13):34-36。其他藥理作用未見報導。
[0004]國內專利檢索結果，未見毛蓮菜相關專利。
[0005]上述文獻及專利等，尚未見採用高速逆流色譜法、聚醯胺等色譜純化技術製備毛蓮菜提取物的報導。

【發明內容】

[0006]本發明的目的在於提供一種毛蓮菜提取物的製備方法及其在製備預防和治療糖尿病藥物中的應用。
[0007]本發明所用毛蓮菜為菊科植物毛蓮菜(Picris japonica T hunb.)的乾燥地上部分。[0008]一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用，所述毛蓮菜提取物的製備方法為:
(1)毛蓮菜，用濃度65%乙醇作為溶劑，在10°C-35°C溫浸提取，提取次數為1-5次，每次提取時間為12-48小時，每次溶劑用量為毛蓮菜重量的21-25倍；濾過，合併提取液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得毛蓮菜提取物A ；
(2)將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加5-20倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A；將沉澱A，採用高速逆流色譜法，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物B ；
(3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度10%-70%的乙醇溶液進行洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物C ；
(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C按一定比例混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物。
[0009]毛蓮菜提取物的製備方法為:
(1)毛蓮菜，用濃度65%乙醇作為溶劑，在25°C溫浸提取，提取次數為3次，每次提取時間為24小時，每次溶劑用量為毛蓮菜重量的23倍；濾過，合併提取液，回收乙醇,濃縮,乾燥，得毛蓮菜提取物A ;
(2)將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加15倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A;將沉澱A，採用高速逆流色譜法，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-7K (2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物B ；
(3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液進行洗脫，收集60%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物C ；
(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物。
[0010]本發明的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物B在毛蓮菜提取物中的含量為質量分數10%-90%。
[0011]本發明的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物B主要含有:中美菊素C (Zaluzanin C) ;9 α -羥基-11 β，13-二氧中美菊素C 3_0_β-批喃別苷(9 a-Hydroxy-1Iβ，13-dihydrozaluzanin C 3-0-β -allopyranoside)；10 β,14 -Dihydroxy-1O (14) , 10 β (13)-tetrahydro-8, 9-didehydro-3-deoxyzaluzanin C 10-0-β-glucopyranoside ;毛連菜苷 A (picriside A);毛連菜苷 B (picrisideB);毛連菜苷C (picriside C);山萵苣素(lactucin) ；11 β -13- 二氫山萵苣素(11 β -13-dihydrolactucin)等成分。
[0012]本發明的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物C在毛蓮菜提取物中的含量為質量分數10%-90%。
[0013]本發明的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物C主要含有:木犀草素(Iuteolin),木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖苷,金絲桃素(hypericin),金絲桃苷(hyperoside)等成分。
[0014]本發明的毛蓮菜提取物，可通過加入藥劑學允許的各種輔料，製成藥劑學上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
[0015]本發明的毛蓮菜提取物的製備方法應用為毛蓮菜提取物在製備預防和治療糖尿病藥物中的應用。[0016] 本發明的毛蓮菜提取物、以及毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C,可用於製備預防和治療糖尿病藥物。
[0017]本發明的毛蓮菜提取物、毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C與化學藥或中藥或天然藥物組成預防和治療糖尿病藥物。
[0018]本發明的毛蓮菜提取物與化學藥或中藥或天然藥物組成預防和治療糖尿病藥物。
[0019]本發明首次對毛蓮菜採用高速逆流色譜、聚醯胺色譜技術進行降糖提取物製備研究，分離得到了具有降糖活性的提取物，包括毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C，二者按一定比例混合即得本發明的毛蓮菜提取物。製備工藝操作簡便，生產成本低，適於工業化大生產。
[0020]本發明提供的毛蓮菜提取物，通過觀察對鏈脲黴素性大鼠糖尿病的治療作用，結果表明，毛蓮菜提取對STZ-DM大鼠糖代謝有明顯的改善作用，對葡萄糖引起的血糖升高有明顯的拮抗作用；對STZ-DM大鼠血脂代謝障礙有明顯的改善作用，表現在血CHO，TG, LDL水平的降低，HDL水平的升高；對STZ-DM大鼠血MDA水平有顯著的降低作用，表明本品有一定的抗氧化作用；對鏈脲黴素造成胰島細胞損傷有一定的修復作用。毛蓮菜提取等對正常大鼠的空腹血糖和血清胰島素沒有明顯的影響，對正常大鼠的血脂代謝亦沒有顯著的影響。
【具體實施方式】
[0021]下面通過具體實驗例和實施例對一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用做進一步說明但不限於本發明。
[0022]實施例1:毛蓮菜提取物及單體化合物製備
(1)毛蓮菜30kg，用濃度65%乙醇作為溶劑，在25°C溫浸提取，提取次數為3次，每次提取時間為24小時，每次溶劑用量為藥材重量的23倍；濾過，合併提取液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得毛蓮菜提取物A ;
(2)將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加15倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A;將沉澱A，採用高速逆流色譜法(HSCCC)，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，即得到毛蓮菜提取物B ；
(3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液進行梯度洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得毛蓮菜提取物C ；
(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物，其中毛蓮菜提取物B佔65%和毛蓮菜提取物C佔35%。
[0023]如上所述方法製備毛蓮菜提取物B，再經200-300目矽膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(10:0.5-5:1)，薄層跟蹤檢測，合併相同流份，靜置析晶，抽濾，丙酮-乙烷(1:2)重結晶，分別得到中美菊素C (Zaluzanin C) ;9 α -羥基-11 β，13-二氫中美菊素 C 3-0-β -吡喃別苷(9 a-Hydroxy-1l β，13-dihydrozaluzanin C3-0-β -allopyranoside)；10 β , 14 -Dihydroxy-1O (14)，10 β (13)-tetrahydro-8, 9-didehydro-3-deoxyzaluzanin C 10-0-β-glucopyranoside ;毛連菜苷 A (picriside A);毛連菜苷 B (picriside B);毛連菜苷 C (picriside C);山萵苣素(lactucin) ;11β_13_ 二氫山萵苣素(11 β-13-dihydrolactucin)等成分，以上各化合物的化學結構均經質譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經高效液相色譜檢測均大於98.5%。[0024]如上所述方法製備毛蓮菜提取物C，再經200-300目矽膠柱層析，以三氯甲烷_甲醇梯度洗脫(100:1-2.5:1)，薄層跟蹤檢測，合併相同流份，靜置析晶，抽濾，甲醇重結晶，分別得到木犀草素(Iuteolin),木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖苷,金絲桃素(hypericin),金絲桃苷(hyperoside)等成分，以上各化合物的化學結構均經質譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經高效液相色譜檢測均大於98%。
[0025]實施例2:毛蓮菜提取物及單體化合物製備
(1)毛蓮菜10kg，用濃度65%乙醇作為溶劑，在10°C溫浸提取，提取次數為5次，每次提取時間為48小時，每次溶劑用量為藥材重量的25倍；濾過，合併提取液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得毛蓮菜提取物A ;
(2)將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加20倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A;將沉澱A，採用高速逆流色譜法(HSCCC)，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，即得到毛蓮菜提取物B ； (3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度10%的乙醇溶液進行梯度洗脫，收集10%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得毛蓮菜提取物C ；
(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C按一定比例混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物，其中毛蓮菜提取物B佔90%和毛蓮菜提取物C佔10%。
[0026]如上所述方法製備毛蓮菜提取物B，再經200-300目矽膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(10:0.5-5:1)，薄層跟蹤檢測，合併相同流份，靜置析晶，抽濾，丙酮-乙烷(1:2)重結晶，分別得到中美菊素C (Zaluzanin C) ;9 α -羥基-11 β，13-二氫中美菊素 C 3-0-β -吡喃別苷(9 a-Hydroxy-1l β，13-dihydrozaluzanin C3-0-β -allopyranoside)；10 β , 14 -Dihydroxy-1O (14)，10 β (13)-tetrahydro-8, 9-didehydro-3-deoxyzaluzanin C 10-0-β-glucopyranoside ;毛連菜苷 A (picriside A);毛連菜苷 B (picriside B);毛連菜苷 C (picriside C);山萵苣素(lactucin) ;11β_13_ 二氫山萵苣素(11 β-13-dihydrolactucin)等成分，以上各化合物的化學結構均經質譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經高效液相色譜檢測均大於98.5%。
[0027]如上所述方法製備毛蓮菜提取物C，再經200-300目矽膠柱層析，以三氯甲烷_甲醇梯度洗脫(100:1-2.5:1)，薄層跟蹤檢測，合併相同流份，靜置析晶，抽濾，甲醇重結晶，分別得到木犀草素(Iuteolin),木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖苷,金絲桃素(hypericin),金絲桃苷(hyperoside)等成分，以上各化合物的化學結構均經質譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經高效液相色譜檢測均大於98%。
[0028]實施例3:毛蓮菜提取物及單體化合物製備
(I)毛蓮菜10kg，用濃度65%乙醇作為溶劑，在35°C溫浸提取，提取次數為I次，每次提取時間為12小時，每次溶劑用量為藥材重量的21倍；濾過，合併提取液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得毛蓮菜提取物A ;
(2 )將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加5倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A ;將沉澱A，採用高速逆流色譜法(HSCCC)，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，即得到毛蓮菜提取物B ；
(3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度70%的乙醇溶液進行梯度洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，即得毛蓮菜提取物C ；(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C按一定比例混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物，其中毛蓮菜提取物B佔10%和毛蓮菜提取物C佔90%。
[0029]如上所述方法製備毛蓮菜提取物B，再經200-300目矽膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫(10:0.5-5:1)，薄層跟蹤檢測，合併相同流份，靜置析晶，抽濾，丙酮-乙烷(1:2)重結晶，分別得到中美菊素C (Zaluzanin C) ;9 α -羥基-11 β，13-二氫中美菊素 C 3-0-β -吡喃別苷(9 a-Hydroxy-1l β，13-dihydrozaluzanin C3-0-β -allopyranoside)；10 β , 14 -Dihydroxy-1O (14)，10 β (13)-tetrahydro-8, 9-didehydro-3-deoxyzaluzanin C 10-0-β-glucopyranoside ;毛連菜苷 A (picriside A);毛連菜苷 B (picriside B);毛連菜苷 C (picriside C);山萵苣素(lactucin) ;11β_13_ 二氫山萵苣素(11 β-13-dihydrolactucin)等成分，以上各化合物的化學結構均經質譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經高效液相色譜檢測均大於98.5%。
[0030]如上所述方法製備毛蓮菜提取物C，再經200-300目矽膠柱層析，以三氯甲烷_甲醇梯度洗脫(100:1-2.5:1)，薄層跟蹤檢測，合併相同流份，靜置析晶，抽濾，甲醇重結晶，分別得到木犀草素(Iuteolin),木犀草素-7-0-β -D-葡萄糖苷,金絲桃素(hypericin),金絲桃苷(hyperoside)等成分，以上各化合物的化學結構均經質譜和核磁共振等波譜手段確證，純度經高效液相色譜檢測均大於98%。
[0031]實施例4:毛蓮菜提取物片的製備
取實施例1毛蓮菜提取物155g，加入澱粉60g，混勻，制粒，乾燥，過篩，加15g微晶纖維素，0.5g硬脂酸鎂，混勻，壓製成1000片，即得毛蓮菜提取物片。
[0032]實施例5:毛蓮菜提取物顆粒的製備
取實施例2毛蓮菜提取物155g，加入糊精100g，混勻，制粒，乾燥，整粒，，即得毛蓮菜提取物顆粒。
[0033]實施例6:毛蓮菜提取物膠囊的製備
取實施例3毛蓮菜提取物155g，加入澱粉80g，混勻，制粒，乾燥，過篩，裝膠囊1000粒，即得毛蓮菜提取物膠囊。
[0034]實驗例1:毛蓮菜提取物對鏈脲黴素糖尿病大鼠的治療作用
鏈脲黴素糖尿病動物模型造模:將鏈脲黴素(STZ)溶於0.lmol/L檸檬酸緩衝液(pH4.5)中，臨用前配製。大鼠常用量為60-80mg/kg (ip或iv)。一次足量給予動物鏈脲黴素，造成β細胞大量損傷，胰島素合成和分泌減少，引起糖代謝紊亂，導致糖尿病。將STZ溶液用0.lmol/L無菌枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩衝液新鮮配製成2%溶液，調節pH至4.5，濾菌器過濾除菌。大鼠禁食IOh按50-65 mg/kg體重腹腔內或尾靜脈一次性注射STZ溶液，24h內隨機血糖≥16.7 mmol/L，穩定5d即可作為成功模型。
[0035]藥物:毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C、毛蓮菜提取物(實施例1方法製備得到，批號分別為:20120203、20120204、20120205、20120206)。藥物配製:分別取粉末200mg溶於40ml蒸懼水中，製成混懸液。
[0036]陽性藥:降糖靈，山東省醫藥工業研究所製藥廠出品，批號120115。優降糖，山東省醫藥工業研究所製藥廠出品，批號120136。鏈脲黴素(STREPT0Z0CIN，STZ)，規格:lg/瓶，批號:015K1279, SIGMA 公司。
[0037]儀器:日本京都II型GLUC0CAR0血糖儀，全自動生化測定儀，美國產12孔y-放免測定儀。
[0038]試劑:京都血糖儀所用血糖電極片、全自動生化儀所用血脂試劑，天津德普公司(DPC)提供的胰島素放免試劑盒。
[0039]動物:Wistar大鼠，購於山東省實驗動物中心。合格證號:魯動質130101。
[0040]鏈脲黴素糖尿病大鼠的試驗:取上述Wistar大鼠280隻，雌雄各半，體重160-200g。穩定飼料lw，期間取血測空腹血糖2次，以3.6-5.4mmol/L為入選動物標準。其中40隻作為正常對照備用。其餘240隻用鏈脲黴素(STZ)造模，造模後7-10d複測空腹血糖，以大於13.8mmol/L作為模型成功大鼠。
[0041]將鏈脲黴素性糖尿病(STZ—DM)大鼠60隻隨機分為造模，毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C、毛蓮菜提取物、降糖靈共6組，每組各10隻，並設正常對照組10隻。毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C、毛蓮菜提取物，均按生藥量0.5g/kg給藥，降糖靈9 mg/kg給藥，連續口服葡萄糖耐量試驗(1.5 g/kg)，尾靜脈取血分別測空腹、口服葡萄糖後30min，60min，90min，120min的血糖水平，計算空腹血糖及葡萄糖灌胃後60min血糖區線面積(AUC)。
[0042]另取STZ-DM大鼠60隻，分組、給藥劑量和方法同前。試驗前禁食8h，末次給藥後12h,空腹眶靜脈取血檢測膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平。
[0043]另取STZ-DM大鼠60隻，分組、給藥劑量和方法同前。試驗前禁食8h，末次給藥後12h,空腹眶靜脈取血，按文獻TCA-TBA法，于波長535nm檢測樣品吸收值，以反映MDA水平。
[0044]另取STZ-DM大鼠60隻，分組、給藥劑量和方法同前。試驗前禁食8h，末次給藥後12h，按口服葡萄糖耐量試驗(1.5 g/kg)方法進行，尾靜脈取血分別測空腹、口服葡萄糖後30min,60min, 120min的胰島素水平,之後將動物處死,迅速取胰腺固定,進行病理學檢查。
[0045]正常大鼠的試驗:取上述Wistar大鼠120隻，雌雄各半,體重160_200g。穩定飼料lw，期間取血測空腹血糖2次，以3.6-5.4mmol/L為入選動物標準。然後隨機分為正常，毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C、毛蓮菜提取物，降糖靈共6組。毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C、毛蓮菜提取物，均按生藥量0.5g/kg給藥，降糖靈組1.35mg/kg給藥，連續給藥20d。正常對照組給等體積水灌胃。試驗前禁食8h，末次給藥後12h，空腹每組各10隻尾靜脈取血測血糖、胰島素水平；每組各10隻眶靜脈取血測血脂水平。
[0046]試驗結果:
(1)毛蓮菜提取物對STZ-DM大鼠糖代謝的影響表1結果可見，毛蓮菜提取物對STZ-DM大鼠空腹血糖升高有明顯的降低作用，與造模組比較均有極顯著差異。表1結果表明，毛蓮菜提取物等對STZ-DM大鼠糖代謝有顯著的改善作用，對葡萄糖引起的血糖升高有顯著的降低作用，明顯降低血糖區線面積，與造模組比較均有極顯著差異。其對STZ-DM大鼠葡萄糖耐量的影響見表2 ；
表1毛蓮菜提取物等對STZ-DM大鼠空腹血糖的影響(mmol/L)
【權利要求】
1.一種毛蓮菜提取物的製備方法及其應用，所述毛蓮菜提取物的製備方法為:(1)毛蓮菜，用濃度65%乙醇作為溶劑，在10°C-35°C溫浸提取，提取次數為1-5次，每次提取時間為12-48小時，每次溶劑用量為毛蓮菜重量的21-25倍；濾過，合併提取液，回收乙醇，濃縮，乾燥，得毛蓮菜提取物A ；(2)將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加5-20倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A；將沉澱A，採用高速逆流色譜法，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物B ；(3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度10%-70%的乙醇溶液進行洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物C ；(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C按一定比例混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物。
2.根據權利要求1所述的毛蓮菜提取物的製備方法為:(1)毛蓮菜，用濃度65%乙醇作為溶劑，在25°C溫浸提取，提取次數為3次，每次提取時間為24小時，每次溶劑用量為毛蓮菜重量的23倍；濾過，合併提取液，回收乙醇,濃縮,乾燥，得毛蓮菜提取物A ;(2)將步驟(1)得到的毛蓮菜提取物A加15倍量水溶解，濾過，得藥液A和沉澱A;將沉澱A，採用高速逆流色譜法，以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(2:2:1:1)為溶劑系統，進行分離純化，回收溶劑，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物B ；(3)將步驟(2)得到的藥液A，通過聚醯胺柱柱，用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液進行洗脫，收集60%濃度乙醇洗脫液，回收乙醇，濃縮乾燥，得到毛蓮菜提取物C ；(4)將上述毛蓮菜提取物B和毛蓮菜提取物C混勻，即得本發明的毛蓮菜提取物。
3.根據權利要求1，所述的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物B在毛蓮菜提取物中的含量為質量分數10%-90%。
4.根據權利要求1、權利要求2所述的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物B主要含有:中美菊素C (Zaluzanin C) ;9 α -羥基-11 β，13-二氫中美菊素 C 3-0-β -吡喃別苷(9 a-Hydroxy-1l β，13-dihydrozaluzanin C3-0-β -allopyranoside)；10 β , 14 -Dihydroxy-1O (14)，10 β (13)-tetrahydro-8, 9-didehydro-3-deoxyzaluzanin C 10-0-β-glucopyranoside ;毛連菜苷 A (picriside A);毛連菜苷 B (picriside B);毛連菜苷 C (picriside C);山萵苣素(lactucin) ;11β_13_ 二氫山萵苣素(11 β -13-dihydrolactucin)。
5.根據權利要求1，所述的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物C在毛蓮菜提取物中的含量為質量分數10%-90%。
6.根據權利要求1，權利要求2所述的毛蓮菜提取物的製備方法，其特徵在於:所述的毛蓮菜提取物C主要含有:木犀草素(Iuteolin),木犀草素-7-0- β -D-葡萄糖苷，金絲桃素(hypericin),金絲桃苷(hyperoside)。
7.根據權利要求1所述的毛蓮菜提取物，通過加入藥劑學允許的各種輔料，製成藥劑學上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
8.根據權利要求1所述的應用為毛蓮菜提取物在製備預防和治療糖尿病藥物中的應用。
9.根據權利要求1所述的毛蓮菜提取物A、毛蓮菜提取物B、毛蓮菜提取物C在製備預防和治療糖尿病藥物中的應用。
10.根據權利要求1、權利要求2所述的毛蓮菜提取物與化學藥或中藥或天然藥物組成預防和治療糖尿病藥物。·
【文檔編號】A61K9/16GK103585226SQ201310525676
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月31日 優先權日:2013年10月31日
【發明者】孔倩倩 申請人:濟南星懿醫藥技術有限公司