3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮作為非甾體雄激素受體調節劑的用途的製作方法

2023-06-08 19:54:46 1

專利名稱：：3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮作為非甾體雄激素受體調節劑的用途的製作方法
技術領域：
：本發明屬於藥物化學領域，涉及3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-l-(4-氯苯基)-1-丙酮作為非甾體雄激素受體調節劑在製備預防或/和治療前列腺增生、前列腺癌、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮或痤瘡等症狀或疾病的藥物中的用途。
背景技術：
：雄激素(Androgen)是人體內一類重要的甾體類性激素，通過與相應的特異受體結合促進細胞分化和組織生長，參與眾多關鍵生理功能如男性胎兒生殖器官(如前列腺、貯精囊、附睪等)的形成、第二性徵的發育與維持、以及精子產生等。男性或女性體內都存在一定比例的雄激素，如雄酮、二氫雄酮和腎上腺雄酮等。雄激素通過與雄激素受體(AndrogenRec印tor，AR)結合發揮重要的生理效應。雄激素或其受體的代謝及功能紊亂可誘發許多疾病或加速疾病進程，如前列腺增生、前列腺癌、男子不育、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮和痤瘡等，這些疾病不僅嚴重影響了患者的生理和心理健康，而且極大地降低了他們的生活質量。良性前列腺增生是前列腺尿道周圍區細胞的良性腺瘤性增生，並非癌症，生長緩慢且不會擴散到身體其他部分。良性前列腺增生是泌尿外科最常見的疾病之一，已經成為威脅男性健康的"隱形殺手"。臨床統計表明，男性在40-79歲期間，良性前列腺增生症的發病率約為50%，80歲後則高達80%。隨著生活節奏不斷加快，良性前列腺增生患者日漸增多，且呈年輕化趨勢。良性前列腺增生在困擾患者日常生活的同時，也易引起多種潛在併發症，如急性尿瀦留、泌尿道感染、肉眼血尿、膀胱憩室、結石、腎積水及腎功能衰竭等。研究表明，患者體內的二氫睪酮是良性前列腺增生的最主要誘因。前列腺癌是一種嚴重的男性老年疾病，在歐美地區的發病率和死亡率非常高，佔男性惡性腫瘤的首位[LandisSH，MurrayT，1998，CACancerJ.Clin.48，6-29]。我國前列腺癌的發病率雖低於歐美國家，但近年來隨著人口老齡化程度的加速，傳統飲食結構的改變，以及對這類疾病診斷水平的提高，發病率呈顯著增長勢態。臨床調查顯示，這類患者的年齡出現低齡化傾向，尤其在電腦操作員和計程車司機等需要長時間坐著工作的人群中。有關前列腺增生/前列腺癌的病因學研究和臨床治療已在全世界範圍內受到醫學界的廣泛關注。AR蛋白是核受體超家族的一個成員，屬配體激活的轉錄因子，如圖l所示，具有三個結構域N端結構域(NTerminalDomain,NTD))、DNA結合域(DNABindingDomain,DBD)禾口配體結合域(LigandBindingDomain，LBD)[HeB，K卿pai體JA，1999，J.Biol.Chem.274(52)，37219-25]。雄激素和AR的LBD形成複合物後，與位於耙基因啟動子區的雄激素應答原件(AndrogenResponseElement,ARE)結合，起到激活或抑制耙基因表達的作用，從而調控靶組織的生理功能。前列腺是雄激素作用的重要靶器官，在胚胎期雄激素與分布於泌尿竇內胚層的AR結合，引起前列腺表皮細胞表型分化並誘導產生前列腺特異蛋白；在成熟腺體中，雄激素促進前列腺上皮細胞的分裂增殖從而維持器官的形態和功能[WallerAS，SharrardRM，2000，J.Mol.Endocrinol.24(3)，339-351]。此外，雄激素還可調節前列腺的細胞代謝活動如脂類的生物合成，並控制一些前列腺特異表達蛋白的產生(如前列腺特異性抗原，Prostate-specificAntigen，PSA)等。雄激素與其受體的作用機制包括一系列複雜而又精密的信號轉導過程，然而二者的特異性結合在其中扮演了不可替代的角色。很多AR相關疾病的產生，或是由於激素水平失常，或是因為受體功能紊亂，破壞了正常的相互作用平衡關係；在患病個體中，藥物通過加強或抑制受體活化水平可達到治療相關疾病的效果。因此，以AR為靶點，發現具有調節受體功能的藥物已經成為全球性研究熱點。幹擾雄激素與AR作用的藥物根據其效果，可分為雄激素激動劑和拮抗劑。雄激素拮抗劑一直是治療前列腺增生/前列腺癌的重要手段(尤其是晚期病例)，它競爭結合腫瘤發生部位的AR，阻滯細胞對雄激素的攝取，抑制雄激素對靶器官的效應，從而抑制腫瘤細胞的生長，減小腫瘤體積並延緩疾病進程[LeewansangtongS，1998，Endocrine-relatedCancer5，325-339]。相比於其他抑制雄激素的治療方法，例如睪丸切除、服用促黃體素釋放激素類似物或睪酮合成酶(如5-還原酶)抑制劑，AR拮抗劑能夠阻斷雄激素與AR的結合[Hong-Chiang，C，HiroshiM，1999，Proc.Natl.Acad.Sci.USA96，11173-11177]，彌補前者的不足。此外，AR拮抗劑還能治療婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮(禿頂)和痤瘡等常見病症。目前廣泛應用的雄激素拮抗劑可分為兩類甾體類和非甾體類。甾體類藥物有醋酸環丙孕酮(CyproteroneAcetate,CPA);非甾體類藥物包括氟他胺(Flutamide)、尼魯米特(Nilutamide)及比卡魯胺(Bicalut咖ide，Casodex)等。非甾體類抗雄激素藥物對AR具有高度選擇性，對其他甾體激素受體不會產生激素樣或抗激素作用，在臨床應用上頗受歡迎。然而，目前市售的抗雄激素藥物均存在許多有待解決的問題。首先，病人服用後會出現各種副作用如胃腸道不適、噁心、嘔吐、失眠、乏力、頭痛、焦慮、視力模糊和性慾減退等；其次，前列腺增生/前列腺癌患者單一服用某種抗雄激素藥物後會出現"抗雄激素減退綜合症"(AntiandrogenWithdrawalSyndrome,AWS)，表現為用藥一段時間後原本被抑制的PSA水平又迅速上升、腫瘤體積增大，只能停止服藥或轉用其他抗雄激素藥物[DickerAP，2003，LancetOncol.4(1)，30-36;LauferM，SinibaldiVJ，1999，Urology54(4)，745]。AWS的發生機理尚不清楚，一般認為是由於前列腺細胞的AR發生基因突變，使得原來起拮抗作用的藥物反而產生激活AR的效應[Brinkma皿A0，Tr即manJ，2000，Adv.Pharmacol.47，317-341]。因此，臨床上迫切需要研究和開發具有全新化學結構的抗雄激素新藥。
發明內容本發明通過高通量隨機篩選和後繼構效關係研究，合成並優化了一類三個系列的非甾體類小分子化合物。受體競爭結合試驗表明代表性化合物對AR的親和力小於O.2iiM，螢光素酶報告基因共轉染細胞水平檢測提示其具有AR拮抗活性，顯示了進一步開發成為新型雄激素受體調節劑的潛力。因此，本發明的目的在於提供一類具有如下通式I結構的非甾體雄激素受體調節劑化合物或其藥學上可接受的鹽；本發明的另一目的在於提供上述通式I化合物的製備方法；本發明的又一目的在於提供包含通式I化合物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物；本發明的再一目的在於提供通式I化合物或其藥學上可接受的鹽在製備預防或/和治療前列腺增生、前列腺癌、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮或痤瘡等症狀或疾病的非甾體類藥物中的用途。本發明提供的非甾體雄激素受體功能調節劑化合物或其藥學上可接受的鹽具有如下通式I的結構I其中A為N、CH、0或S;當Xi為0或S時，R4不存在；X2為0、NH或CHR;其中R為H、CI6烷基、CFp芳環或芳雜環；R丄和R2各為H、CI6烷基、節基、卣素、0R、SR、NR2、N02、CN、CF3、COOR、CONR2、CONHR或COR，其中R的定義如上所述；R3和R4各為H，CI6烷基，節基，任選被R7、R8和R9取代的C37環烷基，任選被R7、R8和R9取代的芳環，任選被R7、R8和R9取代的芳雜環，或(CHR)n，n是13的整數，其中R的定義如上所述；R5為H，CI18烷基，節基，卣素，0R，SR，NR2，N02，CN，CF3，任選被R7、R8和R9取代的C37環烷基，任選被R7、R8和R9取代的芳環，或任選被R7、R8和R9取代的芳雜環，其中R的定義如上所述；或所述的R5可與R3形成稠合環；R6為H，CI18烷基，節基，卣素，0R，SR，NR2，N02，CN，CF3，任選被R7、R8和R9取代的芳環，或任選被R7、R8和R9取代的芳雜環，其中R的定義如上所述；其中R7、R8和R9各為H、CI18烷基、節基、卣素、0R、SR、NR2、N02、CN、CF3、COOR、C0NR2、CONHR或C0R，其中R的定義如上所述；R10為C=0、CH0H、或CH=。根據R1Q的定義，在&為N時，本發明的化合物即為以下三個系列(1)(2)(3)本發明提供的通式I化合物，優選&為N;R1Q為C=0;R4為H;X2不存在；該化合物的具體結構式如下對於本發明的通式I化合物或其藥學上可接受的鹽，當分子中存在手性碳時，其為消旋體或光學活性體。本發明提供的通式I化合物，在&為N時，可用下述兩種方法來製備，其中製備方法l，包括以苯乙酮衍生物、芳香醛或脂肪醛和有機胺為原料，在極性溶劑(例如乙醇、甲醇、異丙醇等)和催化量濃鹽酸條件下，經Ma皿ich反應，得到Ma皿ich鹼鹽酸鹽，用適量鹼中和，得Mannich鹼(1);所製得的Mannich鹼經催化氫化法(例如:RaneyNi/H2)或化學還原法(例如NaBH4、LiAlH4等)將羰基還原，即得化合物(2);該化合物(2)在酸催化條件下脫水(在硫酸、對甲苯磺酸等催化下，以苯或甲苯為溶劑，回流反應)，得到化合物(3);反應流程如下其中對X2、R2、R3、R4、R5和R6的定義如上所述；製備方法2，包括以苯乙酮衍生物、芳香醛或脂肪醛、有機伯胺/仲胺為原料，在酸或鹼性(例如硫酸、鹽酸、對甲苯磺酸、無機氫氧化物、醇鈉等)條件下，苯乙酮衍生物先與芳香醛或脂肪醛縮合，生成a，e-不飽和羰基化合物，然後在催化量的鹼作用下，與有機伯胺/仲胺經Michael加成反應，得化合物(1);所得到的化合物(1)經催化氫化法或化學還原法將羰基還原，即得化合物(2);化合物(2)在酸催化條件下脫水，得到化合物(3)。(3)本發明的通式I化合物可與任何合適的酸通過藥學上常規成鹽的方法得到其藥物學上可接受的鹽，例如，所述的酸為無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等；有機酸，諸如甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸等；烷基磺酸，如甲基磺酸、乙基磺酸等；芳基磺酸，如苯磺酸、對甲苯磺酸等均可使用。本發明提供的藥物組合物包括治療有效量的一種或多種通式I化合物或其藥學上可接受的鹽，該藥物組合物可進一步含有一種或多種藥學上可接受的載體或賦形劑。本發明所提供的藥物組合物其理想的比例是，通式I化合物或其藥學上可接受的鹽作為活性成分佔總重量比50%99.5%，其餘部分為佔總重量比50%以下。本發明的通式I化合物或其藥學上可接受的鹽具有AR拮抗活性，因而可用於製備預防或/和治療前列腺增生、前列腺癌、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮或痤瘡等症狀或疾病的非甾體類藥物。圖1為說明AR蛋白三個結構域的示意圖。圖2是MWW6032化合物和比卡魯胺在轉染了報告基因的MDA-MB-453細胞中的作用對比。二氫睪酮(DHT)誘導細胞中螢光素酶的表達從而使化學發光讀數增加，化合物對雄激素受體的拮抗作用表現為抑制DHT誘導的化學發光。圖3檢測MWW6032化合物和比卡魯胺對DHT誘導的LNCaP細胞增殖的影響。結果顯示，化合物MWW6032對DHT剌激的LNCaP細胞增殖有一定的抑制作用，其IC5。值為2.28yM。圖4和圖5分別檢測化合物MWW6032和比卡魯胺對去勢大鼠在雄激素作用下前列腺和精液囊組織溼重和乾重的影響。比卡魯胺對丙酸睪酮作用下前列腺和精液囊的生長具有顯著抑制作用，化合物MWW6032對丙酸睪酮作用下上述組織的生長有一定的抑制趨勢。具體實施例方式為了闡明本
發明內容且不受其局限，對本發明分成以下幾個小節進行詳細描述。定義除非另有定義，本發明所用的技術和科學上的術語，與本發明所屬領域的通用技術的一般理解具有相同意義。本處提到的來源於基因庫和其他資料庫的所有專利、申請、公布的申請和其他出版物和序列被全面收入引用作為參考。如果本節闡明的定義與本專利參用的來源於基因庫和其他資料庫的所有專利、申請、公布的申請和其他出版物和序列被收入和引用的定義闡述相反，或不一致時，以本節闡明的定義為準。本文所用，"一"或"一個"指"至少一個"或"一個或多個"。本文所用，"前列腺增生"指一類因尿道周圍前列腺的良性腺瘤樣增生而導致不同程度的膀胱流出道梗阻性疾病或症狀，也稱為"良性前列腺肥大"。本文所用，"前列腺癌"指一類男性生殖系統常見的惡性腫瘤，以腺癌為主。本文所用，"婦女多毛症"指一類因雄性激素分泌增多的疾病而在婦女中造成的多毛症狀，即在不應該長毛的部位長出了許多又長又粗又黑的毛，或者毛髮呈男性型分布，眉毛粗而濃黑、陰毛向腹部甚至臍部發展的現象。本文所用，"重度雄激素依賴型脫髮"指一類嚴重的脂溢性脫髮，又稱男性型脫髮。本文所用，"痤瘡"指一類毛囊皮脂腺的慢性炎症，好發於顏面、胸背，表現為粉剌、丘疹、膿皰、結節、囊腫等損害，又稱青年痤瘡。本文所用的用於治療某一特定疾病的化合物的"有效量"指足夠改善或在某種程度上減輕與此病相伴的症狀的量。這一劑量可以單一劑量給藥，也可按照治療方案給藥。這一劑量可治癒疾病，但典型的是為了改善該症狀而給藥。為改善症狀重複給藥可能是需要的。本文所用，"藥物學上可接受的鹽、酯或其他衍生物"包括領域技術人員用已知方法易於製備的任何鹽、酯或衍生物。這樣衍生和生成的化合物可對動物和人給藥，不具有毒性作用。該化合物或是具有藥物活性，或是前體藥物。本文所用，"治療"指疾病和症狀用任何方式得以改善，或其他有益的改變。治療也包括本發明化合物在藥物上的應用。本文所用，給予某一特定藥物組合物"改善"某一特定疾病的症狀是指任何減輕，無論永久的、臨時的、長時期的、短暫的，都能歸因於或與該藥物組合物的施用有關。本文所用，"基本上純"是指足夠均勻，通過本領域技術人員為評價純度使用的標準分析方法探測不出雜質，所述標準分析方法有如薄層層析法(TLC)，凝膠電泳和高效液相色譜法(HPLC)。或者足夠純也指即使進一步純化也不能改變該物質可探測到的理化特性，例如酶活性和生物活性。用於純化化合物製得基本上化學純的方法，是本領域技術人員所公知的。然而基本上化學純的化合物可以是立體異構體或同分異構體的混合物。在這種情況下，進一步純化也許會增加化合物的比活性。本文所用，"前體藥物"是指一種體內給藥的化合物，該化合物可被代謝，或轉化為生物學上、藥物學上或治療學上的活性形式。為了製造前體藥物，藥物活性化合物將被修飾，使該活性化合物通過代謝過程再產生。藥物前體可被設計成改變其代謝穩定性，或運輸特性的前體，以掩蓋其副作用或毒性，改良藥物的味覺，或改變其他特性。憑藉藥代動力學及藥物體內代謝的知識，一旦藥物學上活性化合物為已知，本領域技術人員就可以設計出該化合物的前體藥物。[參見MedicinalChemistryABiochemicalApproach,OxfordUniversityPress,NewYork,1985，pages388-392]。術語"基本上"相同或均勻或相似，按照本領域技術人員對相關技術的理解可在上下文中有所改變，並且一般為至少70%，優選為至少80%，更優為至少90%，最優為至少95%相同。這裡所用的"組合物"指任何混合物。可以是溶液、混懸液、液體、粉末、油膏、水性的、非水性的或它們的任何組合。這裡所用的"聯合"指兩種或多種之間的任何聯合。這裡使用的術語"對象"包括人和動物，例如，狗，貓，牛，豬，齧齒動物等。有經驗的實施者應可理解對象為適於並願意對由雄激素和/或雄激素受體功能失調引起或伴隨的前列腺增生、前列腺癌、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮和痤瘡等疾病或症狀進行治療和預防。這裡使用的任何保護性基團，胺基酸和其他化合物的縮寫，與它們通用的、公認的縮寫或IUPAC-IUB委員會頒布生化命名一致，除非特別說明。配方和劑量根據本發明，本發明的化合物單獨或與其它藥劑、載體或賦形劑聯合，為任何合適的給藥途徑制定製劑，例如腔內注射、皮下注射、靜脈內注射、肌內注射、真皮內注射、口服或局部用藥。本方法可以使用注射給藥製劑，以單劑量的形式在安瓿，或多劑量容器中與添加的緩衝劑注射給藥。製劑可採取以下形式如混懸液、溶液或在油性或水性媒介中的乳液。製劑可以含有配方試劑如混懸劑、穩定劑和/或分散劑。此外，使用前，活性成分可以粉末形式與合適的載體，無菌無熱源水或其他溶劑構成劑型。本發明的局部用藥可採用泡沫，凝膠，軟膏，油膏，轉皮膜片，或膏狀物。本發明中可以使用的用於給藥的藥用組合物和方法包括，但不局限於，美國專利5，736，154、6，197，80皿、5，741，511、5，886，039、5，941，868、6，258，374B1和5，686，102所報導的內容。治療或預防的劑量大小會因病情的嚴重性和給藥途徑而有所變化。劑量和用藥頻度會因年齡、體重、健康狀況和病人個體反應不同而不同。需要指出的是(診治醫生也應知道)，根據毒性和副反應，必須採取必要措施終止、中斷或降低治療劑量。相反，如果臨床反應不明顯(排除毒性和副反應)，醫生應適當調整治療方案，提高劑量。任何合適的給藥途徑均可被採用。劑型包括片劑，錠劑，豆狀膠囊，分散劑，懸浮劑，溶液，膠囊，膜片及類似物等。在實際應用中，本發明的化合物，單獨或與其他製劑聯合，可以按照一般藥物學混合技術與藥物載體或賦形劑，例如P-環糊精和2-羥基-丙基-|3-環糊精緊密混和。根據投藥的需要，可採用通用載體、局部或非腸道途徑的特殊載體。製備非腸道劑型，例如靜脈內注射或灌輸的組合物，可採用類似的藥物媒質，本領域技術人員所公知的水，乙二醇，油，緩衝劑，糖，防腐劑，脂質體等。這種非腸道組合物的例子包括，但不限制於5%W/V的右旋糖，生理鹽水或其他溶液。本發明的化合物的總劑量，單獨或和其他製劑聯合給藥，可用小瓶靜脈注射液給藥，體積大約從1毫升到2000毫升。根據給藥的總劑量，稀釋液量也會不同。本發明還提供了實現治療方案的藥盒。該藥盒將有效劑量的本發明的化合物以藥物學上可接受的形式單獨或與其他試劑聯合，包含在一個或多個容器中。優選的藥物形式是與無菌鹽水，右旋糖溶液，緩衝溶液，或其他藥物學上可接受的無菌液體合用。或者，組合物可被凍幹或乾燥；在這種情況下，藥盒任選地進一步將一種藥物學上可接受的溶液，優選無菌的溶液包含在一個容器中，以重新組成複合物形成用於注射目的的溶液。典型的藥物學上可接受的溶液是鹽水溶液和右旋糖溶液。在另一個實施方案中，本發明的藥盒進一步包含用於注射組合物的優選以無菌形式包裝的針或針筒和/或包裝的酒精墊。可任選地包括供醫生或患者使用的說明書。下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但不限制本發明。實施例13-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1_(4-甲基苯基)-l-丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、4-氯苯胺12.76克(0.lmol)、無水乙醇150ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後室溫攪拌反應20小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於150ml95%乙醇中，室溫攪拌2小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，繼續攪拌1小時，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經乙醇/水混合溶劑(體積比1:1)重結晶，得針狀結晶25.61克，，收率73.2%;mp152154°C,HNMR(CDCl3):7.79(2H，d，J=8.2Hz，Ar—H)，7.127.42(7H，m，Ar-H)，7.02(2H，d，J=8.8Hz，Ar-H)，6.50(2H，d，J=8.8Hz，Ar-H)，4.92(1H，dd，J=7.4Hz，CH)，3.45(2H，t，J=7.4Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3);MS(FAB):350(M+H)。實施例23-苯基-3-(4-溴苯胺基)-1_(4-甲基苯基)-l-丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、4-溴苯胺17.20克(0.lmol)、無水乙醇150ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後室溫攪拌反應24小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於180ml95X乙醇中，室溫攪拌1.5小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經乙醇/水混合溶劑(體積比l:l)重結晶，得針狀結晶28.04克，收率71.1%;mp147149°C,HNMR(CDCl3):7.79(2H，d，J=8.2Hz，Ar—H)，7.127.42(7H，m，Ar-H)，6.79(2H，d，J=8.1Hz，Ar—H)，6.42(2H，d，J=8.1Hz，Ar—H)，4.91(1H，dd，J=7.4Hz，CH)，3.49(1H，d，J=7.4Hz，CH2)，3.42(1H，d，J=7.4Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3);MS(FAB):395(M+H)。實施例33-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4_甲基苯基)_1_丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、4-硝基苯胺13.82克(0.lmol)、無水乙醇150ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後於32t:攪拌反應24小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於160ml95X乙醇中，室溫攪拌1.5小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經乙醇/水混合溶劑(體積比1:1)重結晶，得結晶32.04克，收率88.9%;mp157159°C,HNMR(CDCl3):7.79(2H，d，J=9.1Hz，Ar—H)，7.78(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.227.40(7H，m，Ar—H)，6.50(2H，d，J=9.1Hz，p-N02C6H4NH_)，5.58(1H，brs，NH)，5.07(1H，t，J=5.8Hz，CH)，3.48(2H，d，J=5.8Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3);MS(FAB):361(M+H)。實施例43-苯基-3-(4-羧基苯胺基)-1-(4_甲基苯基)_1_丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、4-氨基苯甲酸13.72克(0.lmol)、無水乙醇140ml加入反應瓶中，室溫攪拌5分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後於32t:攪拌反應20小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於170ml95%乙醇中，室溫攪拌1.5小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經乙醇重結晶，得結晶30.59克，收率85.1%;mp208210°C一HNMR(DMS0-d6):7.86(2H，d，J=8.2Hz，Ar_H)，7.58(2H，d，J=8.6Hz，Ar-H)，6.987.46(7H，m，Ar_H)，6.51(2H，d，J=8.6Hz，Ar_H)，5.06(1H，m，CH)，3.24-3.35(2H，m，CH2)，2.37(3H，s，CH3);MS(FAB):360(M+H)。實施例53-(4-甲基苯基)-3-苯胺基-1-(4_甲基苯基)_1_丙酮的合成將4-甲基苯甲醛12.02克(0.lmol)、苯胺9.31克(0.lmol)、無水乙醇150ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後於32t:攪拌反應21小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於160ml95%乙醇中，室溫攪拌2小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經乙醇/水混合溶劑(體積比1:1)重結晶，得結晶24.05克，收率73.0%;mp131132°C一HNMR(CDCl3):7.81(2H，d，J=8.1Hz，Ar—H)，7.047.34(9H，m，Ar-H)，6.55(2H，d，J=7.8Hz，Ar-H)，4.95(1H，dd，J=6.4Hz，8.OHz，CH)，3.43(1H，d，J=6.4Hz，CH2)，3.41(1H，d，J=8.OHz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)，2.30(3H，s，CH3);MS(FAB):330(M+H)。實施例63-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-硝基苯基)-1-丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、4-氯苯胺12.76克(0.lmol)、無水乙醇180ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-硝基苯乙酮16.52克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後室溫攪拌反應26小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於200ml95%乙醇中，室溫攪拌1小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經乙醇/水混合溶劑(體積比l:1)重結晶，得結晶31.23克，收率82.0%;丄匪R(CDCl3):8.26(2H，d，J=8.6Hz，Ar-H)，7.99(2H，d，J=8.6Hz，Ar—H)，7.23-7.52(5H，m，Ar—H)，7.04(2H，d，J=6.4Hz，Ar—H)，6.52(2H，d，J=6.4Hz，Ar-H)，4.97(1H，t，J=6.2Hz，CH)，3.54(2H，d，J=6.OHz，CH2);MS(FAB):382(M+H)。實施例7123-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4_甲基苯基)-l丙醇的合成將3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-l-丙酮6.98克(0.02mol)和甲醇120ml加入反應釜中，室溫攪拌至固體全溶解後，加入催化量RaneyNi催化劑，密閉反應釜後用氫氣置換三次，然後於607(TC通氫還原12小時。反應結束後，冷卻至室溫，過濾，少量甲醇洗滌濾餅，濾液減壓蒸除溶劑，得一粉末固體，經乙醇/水混合溶劑(體積比1:1)重結晶，得結晶5.80克，收率82.6%;'HNMR(CDCl3):7.81(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.117.40(7H，m，Ar-H)，7.03(2H，d，J=8.2Hz，Ar-H)，6.49(2H，d，J=8.2Hz，Ar-H)，5.05(1H，t，J=7.1Hz，CH0H)，4.94(1H，dd，J=7.4Hz，CH)，3.51(2H，m，CH2)，2.41(3H，s，CH3);MS(FAB):351(M+)。實施例83-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙烯的合成將3-苯基-3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙醇3.51克(0.Olmol)、催化量對甲苯磺酸和甲苯80ml加入反應瓶中，升溫回流攪拌反應3小時。反應結束後，冷卻至室溫，依次用飽和NaHC03水溶液和飽和食鹽水洗滌甲苯層，有機層經無水Na2S04乾燥，減壓蒸除溶劑，殘餘物用無水乙醇重結晶，得白色固體2.50克，收率75.1%;'HNMR(CDCl3):7.82(2H，d，J=8.4Hz，Ar—H)，7.167.42(7H，m，Ar—H)，7.01(2H，d，J=8.2Hz，Ar-H)，6.63(1H，dd，J=16.2Hz，7.4Hz，CH)，6.46(2H，d，J=8.2Hz，Ar-H)，6.32(1H，d，J=16.2Hz，CH)，4.94(1H，d，J=7.4Hz，CH)，2.45(3H，s，CH3);MS(FAB):334(M+H)。實施例93-苯基-3-(1-哌啶基)-1-(4-甲基苯基)-1-丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、哌啶8.52克(0.lmol)、無水乙醇150ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後於45t:攪拌反應18小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於150ml95X乙醇中，室溫攪拌2小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，繼續攪拌1小時，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經無水乙醇重結晶，得粉末固體23.37克，收率76.0%;^NMR(CDCl3):7.76(2H，d，J=7.6Hz，Ar-H)，7.127.42(7H，m，Ar-H)，4.92(1H，dd，J=7.4Hz，CH)，3.45(2H，t，J=7.4Hz，CH2)，2.78(4H，m，CH2)，1.55(6H，m，CH2);MS(FAB):307(M+)。實施例103-苯基-3-(1-哌啶基)-1-(4-硝基苯基)-1-丙酮的合成將苯甲醛10.60克(0.lmol)、哌啶8.52克(0.lmol)、無水乙醇180ml加入反應瓶中，室溫攪拌10分鐘後，加入4-硝基苯乙酮16.52克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後於45t:攪拌反應18小時。反應結束後，將反應液冷卻過夜，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於150ml95%乙醇中，室溫攪拌2小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，繼續攪拌1小時，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經無水乙醇重結晶，得粉末固體20.31克，收率60.0%;丄匪R(CDCl3):8.27(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.96(2H，d，J=8.4Hz，Ar—H)，7.18-7.49(5H，m，Ar-H)，4.89(1H，t，J=6.2Hz，CH)，3.54(2H，d，J=6.2Hz，CH2)，2.75(4H，m，CH2)，1.58(6H，m，CH2);MS(FAB):338(M+)。實施例113-甲基_3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)-l-丙酮的合成將乙醛4.84克(0.11mol)、4-氯苯胺12.76克(0.lmol)、無水乙醇l50ml加入反應瓶中，室溫攪拌5分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後室溫攪拌反應16小時。反應結束後，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於120ml無水乙醇中，室溫攪拌1小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經無水乙醇重結晶，得粉末固體22.45克，收率78.0%。丄匪R(CDCl3):7.81(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.30(2H，d，J=8.4Hz，Ar—H)，7.05(2H，d，J=8.6Hz，Ar-H)，6.47(2H，d，J=8.6Hz，Ar-H)，4.75(1H，m，CH)，3.43(2H，t，J=7.4Hz，CH2)，2.40(3H，s，CH3)，2.26(3H，d，J=6.4Hz，CH3);MS(FAB):288(M+H)。實施例123_異丙基_3-(4-氯苯胺基)-1-(4-甲基苯基)1-丙酮的合成將異丁醛7.30克(0.lmol)、4-氯苯胺12.76克(0.lmol)、無水乙醇150ml加入反應瓶中，室溫攪拌5分鐘後，加入4-甲基苯乙酮13.42克(0.lmol)和催化量的濃鹽酸，然後室溫攪拌反應20小時。反應結束後，抽濾析出的固體，並用無水乙醇洗滌。所得固體懸浮於150ml無水乙醇中，室溫攪拌1小時，用飽和NaHC03中和溶液至鹼性，抽濾，用少量無水乙醇洗滌濾餅，粗品經無水乙醇重結晶，得粉末固體22.11克，收率70.0%;丄匪R(CDCl3):7.82(2H，d，J=8.4Hz，Ar-H)，7.28(2H，d，J=8.4Hz，Ar—H)，7.02(2H，d，J=8.8Hz，Ar—H)，6.51(2H，d，J=8.8Hz，Ar—H)，4.75(1H，m，CH)，3.43(2H，mCH2)，2.34(3H，s，CH3)，1.81(lH，mCH)，0.98(6H，d，J=6.4Hz，2CH3);MS(FAB):316(M+H)。生物活性測試1.材料設備1.1質粒和細胞株雄激素受體表達質粒和螢光素酶報告基因質粒由國家新藥篩選中心構建；人乳腺癌細胞株MDA-MB-453和人前列腺癌細胞株LNCaP均購自美國ATCC。1.2試劑胎牛血清(Fetalbovineserum，FBS，GIBCO/BRL，USA);活性炭和葡聚糖處理胎牛血清(CD-FBS，Hyclone，USA);DMEM及RPMI1640培養基(GIBCO/服L，USA);IMEM培養基(Bioresource，USA)，螢光素酶檢測試劑盒(PromegaCorporation,USA);Fugene6(RocheLtd.，USA);[3H]二氫雄酮(Dehydrotestoste皿e，DHT，Amersham，UK);閃爍液(SuperMixTM，PerkinElmer，USA);雄激素受體蛋白為該受體基因在昆蟲細胞中的表達產物。1.3儀器Envision2101MultilabelReader(PerkinElmer,USA);二氧化碳培養箱(Forma，USA);WallacMicroBetaTriLux1450(PerkinElmer,USA);VERSAmaxMicroplateReader(MolecularDevices,USA)。2.實驗方法及結果[OH2]2.1受體結合活力測試以匿SO配製表1中示出的DHT和本發明的各化合物的梯度溶液，DHT濃度依次為0、0.3、1、3、10、30、100nM，化合物濃度依次為0、0.128、0.64、3.2、16、80、400、2000nM，分別加5iU各梯度DHT或待測化合物溶液至排管各孔中。將雄激素受體蛋白加入預先配有IPg/yl抑肽酶(Aprotinin)及亮抑酶肽(Leup印tin)等蛋白酶抑制劑的緩衝液(25mMNaP04，10%甘油(Glycerol)，10mMNaMo04，10mMKF，pH7.5)中，加入終濃度為5nM的[3H]DHT，充分混勻後，迅速按每孔195iU的量加入排管中，4t:孵育過夜。孵育完畢後，在排管每孔中加入50iil羥基磷灰石(HA)溶液(25%HA，25mMNa3P04，pH7.4)，震蕩混勻，孵育10分鐘，其間每三分鐘震蕩一次。2500rpm離心3分鐘，吸走上清液，保留沉澱。每孔加200上述緩衝液，儘量避免振動沉澱，再次離心3分鐘。吸走上清液，保留沉澱，重複離心1次，吸走上清液，保留沉澱，每孔加入300u1閃爍液，震蕩混勻，用WallacMicroBetaTriLuxl450讀數。其中9個化合物對雄激素受體的親和力與陽性藥物DHT相當，其IC50值小於10nM(見表1)。表1化合物對雄激素受體的結合活力測試tableseeoriginaldocumentpage16tableseeoriginaldocumentpage172.2報告基因表達檢測MDA-MB-453細胞培養在含10%FBS和2mML型穀氨酸鹽(L-glutamine)的IMEM培養基中。轉染前一天換成含5%CD-FBS的IMEM培養基，轉染採用Fugene6試劑。將報告基因載體和Fugene6以1:3的比例混合均勻逐滴加入細胞中，在37"及5%C02條件下培養6小時。細胞消化後以20000個/100ii1/孔接入96孔培養板，以含5%CD-FBS的MEM培養基於37t:培養2小時。加入待測化合物，比卡魯胺濃度依次為0、0.256、1.28、6.4，32、160、800、4000nM，化合物麗W6032的濃度依次為0、2.56、12.8、64、320、1600、8000、40000nM。培養24小時後，應用螢光素酶檢測試劑盒檢測酶活性，以此評估化合物對雄激素受體的藥理活性。數據如圖2所示，MWW6032顯示了一定的雄激素受體拮抗活性。2.3前列腺癌細胞株增殖檢測LNCaP細胞培養在含10%FBS和2mML型穀氨酸鹽(L-glutamine)的RPMI1640培養基中。實驗前一天換成含5%CD-FBS的RPMI1640培養基，待長至90%融合，用胰酶消化後以4000/90iiL/孔加入96孔板，37。C培養過夜。將待測化合物以一定濃度稀釋後以10iiL/孔加入細胞，比卡魯胺濃度依次為0、0.64、3.2、16、80、400、2000nM，化合物MWW6032的濃度依次為0、5.12、25.6、128、640、3200、16000nM，孵育30分鐘後加入激動劑DHT(終濃度5nM)。37t:培養6天，第三天時換藥一次。培養結束前加入MTT溶液(5mg/mL)，20yL/孔，測560nm光吸收值，參比波長690nm。實驗數據如圖3所示，該化合物對DHT剌激的LNCaP細胞增殖有一定的抑制作用，其IC5。值為2.28i！M。2.4大鼠動物模型檢測化合物的雄激素受體拮抗活性取3周齡雄性SD大鼠24隻，隨機分為6組，分別為對照組(組1)，睪酮(Testosterone)組(組2)，睪酮(T)+比卡魯胺(Casodex)25組(組3)，睪酮(T)+比卡魯胺(Casodex)50組(組4)，睪酮(T)+麗6032組(組5)，假手術(Sham)組(組6)。適應1周後，假手術組施行偽手術，其他五組切除睪丸(去勢)。手術後8周，Testosterone組每天皮下注射0.25mg/kg丙酸睪酮；睪酮+比卡魯胺25組每天皮下注射0.25mg/kg丙酸睪酮及灌胃25mg/kg比卡魯胺；睪酮+比卡魯胺50組每天給予0.25mg/kg丙酸睪酮及50mg/kg比卡魯胺；睪酮+MWW6032組每天皮下給藥0.25mg/kg丙酸睪酮及腹腔注射250mg/kg化合物MWW6032。連續給藥10天後，於最後一次給藥後24小時，處死大鼠，分別摘取前列腺和精液囊，稱其溼重與乾重，經體重(BW)校正後比較各組間的差異。實驗結果如表2、表3及圖4、圖5所示，皮下給藥丙酸睪酮(0.25mg/kg)對於11周齡的去勢SD大鼠，可以產生明顯藥效；25mg/kg的比卡魯胺可以明顯拮抗丙酸睪酮的作用；化合物MWW6032作用組的前列腺重量(PW)和精液囊重量(SVW)均比丙酸睪酮組為低，顯示雄激素受體的拮抗活性。表2大鼠組織溼重數據統計tableseeoriginaldocumentpage18表3大鼠組織乾重數據統計tableseeoriginaldocumentpage19(1)化合物麗6003、6015、6016、6021、6022、6030、6031、6032和6033在雄激素受體競爭性結合活力測試中顯示較好的結合活性，其IC5。數值小於10nM，與DHT相當。(2)報告基因檢測方法表明上述化合物(如M冊6003和MWW6032)具有較好的雄激素受體拮抗活性，其IC5。數值接近市售雄激素受體拮抗劑比卡魯胺。(3)化合物MWW6032對前列腺癌細胞株LNCaP的雄激素依賴性增殖顯示一定的抑制活性，IC5。值為2.28iiM，提示其在治療前列腺癌方面的用途。(4)化合物MWW6032在去勢大鼠動物模型中，對丙酸睪酮作用下前列腺和精液囊的生長有一定的抑制趨勢。權利要求結構式如下的3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮或其藥學上可接受的鹽在製備預防或/和治療與雄激素受體相關的前列腺增生、前列腺癌、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮或痤瘡症狀或疾病的非甾體類藥物中的用途F2009102596901C0000011.tif2.根據權利要求1所述的3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-l_(4-氯苯基)-l-丙酮或其藥學上可接受的鹽，其特徵是，所述的藥學上可接受的鹽是3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-l-(4-氯苯基)-l-丙酮與鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸、甲酸、乙酸、丙酸、苯甲酸、馬來酸、富馬酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、烷基磺酸或芳基磺酸的鹽。全文摘要本發明屬於藥物化學領域，涉及結構式如下的3-苯基-3-(4-硝基苯胺基)-1-(4-氯苯基)-1-丙酮作為非甾體雄激素受體調節劑的用途，該化合物具有雄激素受體拮抗劑，用於預防或/和治療前列腺增生、前列腺癌、婦女多毛症、重度雄激素依賴型脫髮或痤瘡等症狀或疾病的藥物。文檔編號A61P17/10GK101711756SQ200910259690公開日2010年5月26日申請日期2006年5月26日優先權日2005年5月27日發明者周彩紅,惠昕,楊大成,王明偉,蘇昊然,鄧勇,高捷申請人:中國科學院上海藥物研究所;四川大學