艾納香的快速繁殖與移栽方法

2023-06-09 01:15:41

專利名稱：艾納香的快速繁殖與移栽方法
技術領域：
本發明涉及艾納香的快速繁殖與移栽方法。
背景技術：
菊科Compositae艾納香屬Blumea DC.植物全世界.約80餘種，分布於熱帶和亞熱帶的亞洲、非洲及大洋洲；我國30種，分布於長江流域以南各省區；貴州有14種，羅甸有艾納香屬植物8種，其中艾納香財.balsamifera (L.)DC、千頭艾納香
7a/ c<9o7ar7aRoxb、柔毛艾納香 mollis (D.Don)Merr.、見霜黃Iacera (Burm.f.) DC.、六耳鈴財.Zacifliaia (Roxb.) DC均有較好的藥用價值。艾納香為多年生草本植物,全草入藥,主治感冒、風溼性關節炎、產後風痛、痛經；外用治跌打損傷、瘡癤痛腫、溼疹、皮炎等，是重要中藥材冰片的原材料。艾納香人工種植有較長的歷史，早在1938年前後，羅甸、望謨兩縣民間就有種植艾納香提取艾粉的習俗，歷史上羅甸是中國艾納香人工種植原產地，有豐富的艾納香植物資源，目前，種苗繁殖困難是制約艾納香植物規模化種植髮展利用的主要原因。艾納香植物為頭狀花序，花序外圍的雌花多層，能育，中央的兩性花多數或較少數，能育或極少不完全發育。外圍種子育性好，但成熟後易隨風飄逝，不易採集；內層種子易採集，但育性差，有休眠現象。何元農等(2007)對艾納香種子進行人工育苗試驗發現，艾納香種子有一定的休眠期，低溫有助於打破種子休眠，但發芽率低於5.8%,難於人工育苗為生產上提供大量的種子實生苗。艾納香種植長期以枝幹、根系的萌生苗分生繁殖為主。何元農等(2004)對艾納香分生苗的類 型和移栽性能進行系統研究，發現艾納香無性繁殖以根生苗為主要苗源，苗質參差不齊導致苗源地點、供苗量和時間以及種苗群體統一標準的可控性有限，是艾納香GAP規模化基地建設的一大障礙；通過對羅甸、荔波地區1995年-2003年多個艾納香規模化種植基地種苗移栽成活率較低的原因進行探討，發現莖腐病是導致分生苗移栽死亡的主要病因；分生苗根系弱，遠距離運輸易失水萎蔫也是導致移栽死亡的主要原因(何元農等，2005)。艾納香屬植物組培快繁育苗技術研究目前有少量報導。姚紹嫦等(2012)對馥芳艾納香QBl.Aromatica)種用帶腋芽莖段採用常規氯化萊消毒後接種在MS+2.0mg/L6_BA+0.2mg/LNAA 培養基上誘導產生叢生芽，用 MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.2mg/LNAA 進行繼代增殖，最適生根培養基為1/2MS+0.3mg/LNAA ;並對該方法申報專利保護(申請號:20120051539.0)。張明珍(2007)在碩士學位論文「滇桂艾納香組織培養體系建立的研究」中，認為不同外植體需用不同比例的次氯酸鈉、氯化汞和雙氧水溶液組合後才能達到較好的消毒效果；初誘導和繼代增殖最佳培養基為MS培養基，最佳激素組合為6-BA+NAA，最佳生根培養為1/2MS+NAA。包國慶等(2007)在「滇桂艾納香藥材的快速繁殖方法」專利申請說明書中做了與張明珍碩士論文相似的論述。菲律賓國家農業部的Thelma L.(2009)博士用艾納香種幼嫩莖尖用MS+1.0mg/L6-BA進行莖段培養，用MS+0.5-1.0mg/LNAA可從莖段誘導生根。

發明內容
本發明要解決的技術問題是:提供一種能在短時間內培育出遺傳性狀與優質母本相同的大量優質種苗的方法。本發明的技術方案是:
一種艾納香的快速繁殖方法，包含以下步驟:
(O外植體抗褐化及消毒處理:將從野外採集的艾納香帶葉柄的嫩葉或帶腋芽的幼嫩莖段外植體衝洗乾淨後，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大黴素的蒸懼水溶液浸泡60min，然後用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水衝洗3_5次，再用1000mg/L氯化汞水溶液常規消毒；
(2)初誘導培養: 將消毒後的外植體接種在基本培養基+0.5mg/LTDZ+1.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IBA的初誘導培養基上進行培養；
(3)繼代增殖培養:將初誘導培養產生的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片後接種於基本培養基+0.2mg/L TDZ +0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的繼代增殖培養基上進行培養；
(4)生根誘導培養:將繼代增殖形成的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片後接種於基本培養基 +1000mg/L 花寶 I 號 + 1000mg/L 活性炭 +0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA 的生根培養基上進行培養。一種艾納香的移栽方法，包含以下步驟:
(1)煉苗方法:將權利要求1中生根誘導培養的艾納香，生根培養50天，苗高3-5cm，根系5-10根，長度l-5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環境溫度20_30°C的條件下煉苗培養7-10天；
(2)基質處理:將蛭石+砂質黃壤按體積比1:1混合成混合基質，然後用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理後裝入5cmX8cm的營養袋中；
(3)幼苗移栽及管理方法:將煉苗後的瓶苗取出，用水清洗乾淨根系，置於有少量水分的磁碟中，將幼苗植入步驟(2)中已消毒裝袋的基質中，每袋I株，然後澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內，每天噴霧2-3次，半月後噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對溼度在85%以上，溫度20-30°C。本發明提供的整套艾納香種苗快速繁殖與移栽方法，能在短時間內培育質量整齊的大量種苗，成本低廉。該方法育苗不僅能使選育出的優質種源得到快速繁殖利用，而且沒有莖腐病的危害，同時採用營養袋育苗的方法，可隨時上山定植，且保障上山定植的成活率。該方法適用於工廠化育苗生產。
具體實施例方式實施例1
①外植體抗褐化、消毒處理:3-4月份採取萌發5-10天的幼嫩葉片，將葉片衝洗乾淨後，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大黴素的蒸餾水溶液浸泡60min，然後用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水衝洗3_5次，將嫩葉在超淨工作檯上修剪成葉柄長0.2-0.5cm,葉面積大小0.5-1.0cm2的外植體,再用1000mg/L氯化萊水溶液常規消毒lOmin，取出清水衝洗4-5次。
②各階段均採用相同基本培養基:l/2MS+12g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值6.0 ; 各階段培養條件為:溫度24-26°C，光照為1500-2000Lux，光照時間為12_14hr/d。③外植體初誘導培養:將消毒後的葉片外植體葉柄基部植入基本培養基(1/21^+128/1瓊脂+308/1蔗糖，？!1值5.8。下同)+0.5mg/L TDZ (噻苯隆)+1.0mg/L 6-BA(6苄氨基嘌呤)+0.5 mg/L IBA (吲哚丁酸)的初誘導培養基中。每瓶接種5片，接種10瓶。接種3d後，92%外植體成活，8%褐化死亡；接種25天後，葉柄基部產生1_3株叢生芽，每株芽2-3片葉，誘導率70%。外植體分泌的黃色次生代謝物質是使接種成活外植體褐化死亡的主要原因。④叢生芽繼代增殖培養:初誘導45-50天後，叢生芽高度約l-2cm，每芽2_4葉，將叢生芽取出剪切成葉柄基部帶l_2mm長莖段的完整葉片後接種於基本培養基+0.2mg/L TDZ+0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的繼代增殖培養基上，繼代培養7_10d後，在葉柄與莖段交接處產生高0.5cm的腋芽，培養35天左右，腋芽長成高2-3cm的有6_8葉的單株幼苗，重複剪取每片嫩葉作為繼代增殖材料，反覆繼代6-8次，幼苗品質均未退化，繼代增殖誘導率達100%，增殖倍數6.0以上。
⑤叢生芽生根誘導培養:將繼代增殖形成的叢生芽剪切成葉柄基部帶l_2mm長莖段的完整葉片後接種於基本培養基+1000mg/L花寶I號+ 1000mg/L活性炭+0.3 mg/L 6-BA+1.0mg/L IBA的生根培養基上，培養30天後，腋芽長成高2-3cm的有3_4葉的單株幼苗，產生5-10條根系，長度0.5-1.0cm,培養50天後，苗高3_5cm，根系長l_5cm，生根率達100%。⑥瓶苗煉苗:將生根培養50天，苗高3_5cm，根系5_10根，長度l_5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環境溫度20-30°C的條件下煉苗培養7-10d。⑦基質處理:將體積比為1:1的蛭石+砂質黃壤混合基質提前7-10d用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理後裝入5cmX8cm的營養袋中。⑧幼苗移栽及管理方法:將煉苗後的瓶苗取出，用水清洗乾淨根系，置於有少量水分的磁碟中，將幼苗植入已消毒裝袋的基質中，每袋I株，然後澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內，每天噴霧2-3次，半月後噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對溼度在85%以上，溫度20-30°C，移栽成活率可達90%以上。實施例2
①外植體抗褐化、消毒處理:3-4月份採取有5-6片嫩葉的幼嫩莖段，將莖段衝洗乾淨後，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大黴素的蒸餾水溶液浸泡60min，然後用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水衝洗3_5次，將莖段在超淨工作檯上修剪成長0.5-1.0cm帶I個腋芽的莖段外植體,再用1000mg/L氯化汞水溶液常規消毒lOmin，取出清水衝洗4-5次。②各階段均採用相同基本培養基:l/2MS+12g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值5.8 ; 各階段培養條件為:溫度24-26°C，光照為1500-2000Lux，光照時間為12_14hr/d。③外植體初誘導培養:將消毒後的莖段外植體按照莖段極性生長方向下端植入基本培養基(l/2MS+12g/L 瓊脂 +30g/L 蔗糖，pH 值 5.8。下同)+0.5mg/L TDZ(噻苯隆)+1.0mg/L 6-BA (6苄氨基嘌呤)+0.5 mg/L IBA (吲哚丁酸)的初誘導培養基中。每瓶接種5個，接種10瓶。接種3d後 ，90%外植體成活，10%褐化死亡；接種15天後，腋芽萌動，每個株芽1-3片葉，誘導率76%。外植體染菌、褐化是使接種成活外植體死亡的主要原因。
④叢生芽繼代增殖培養:初誘導35-45天後，腋芽高度約2-3cm，每芽3_5葉，將腋芽取出剪切成葉柄基部帶l_2mm長莖段的完整葉片後接種於基本培養基+0.2mg/L TDZ+0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的繼代增殖培養基上，繼代培養7_10d後，在葉柄與莖段交接處產生高0.5cm的腋芽，培養35天左右，腋芽長成高2-3cm的有6_8葉的單株幼苗，重複剪取每片嫩葉作為繼代增殖材料，反覆繼代6-8次，幼苗品質均未退化，繼代增殖誘導率達100%，增殖倍數6.0以上。
⑤叢生芽生根誘導培養:將繼代增殖形成的叢生芽剪切成葉柄基部帶l_2mm長莖段的完整葉片後接種於基本培養基+1000mg/L花寶I號+ 1000mg/L活性炭+0.3 mg/L 6-BA+1.0mg/L IBA的生根培養基上，培養30天後，腋芽長成高2-3cm的有3_5葉的單株幼苗，產生5-10條根系，長度0.5-1.0cm,培養50天後，苗高3_5cm，根系長l_5cm，生根率達100%。⑥瓶苗煉苗:將生根培養50天，苗高3_5cm，根系5-10根，長度l_5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環境溫度20-30°C的條件下煉苗培養7-10d。 ⑦基質處理:將體積比為1:1的蛭石+砂質黃壤混合基質提前7-10d用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理後裝入5cmX8cm的營養袋中。 ⑧幼苗移栽及管理方法:將煉苗後的瓶苗取出，用水清洗乾淨根系，置於有少量水分的磁碟中，將幼苗植入已消毒裝袋的基質中，每袋I株，然後澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內，每天噴霧2-3次，半月後噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對溼度在85%以上，溫度20-30°C，移栽成活率可達90%以`上。
權利要求
1.一種艾納香的快速繁殖方法，其特徵在於包含以下步驟 (1)外植體抗褐化及消毒處理將從野外採集的艾納香帶葉柄的嫩葉或帶腋芽的幼嫩莖段外植體衝洗乾淨後，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大黴素的蒸懼水溶液浸泡60min，然後用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水衝洗3_5次，再用1000mg/L氯化汞水溶液常規消毒； (2)初誘導培養將消毒後的外植體接種在基本培養基+0.5mg/LTDZ+1. Omg/L6-BA+O. 5 mg/L IBA的初誘導培養基上進行培養，且基本培養基為l/2MS+12g/L瓊脂+30g/L 蔗糖，pH 值 5.8 ; (3)繼代增殖培養將初誘導培養產生的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片後接種於基本培養基+0. 2mg/L TDZ +0. 8mg/L 6-BA+O. 2 mg/L IBA的繼代增殖培養基上進行培養； (4)生根誘導培養將繼代增殖形成的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片後接種於基本培養基 +1000mg/L 花寶 I 號 + 1000mg/L 活性炭 +0. 3 mg/L 6-BA+1. O mg/L IBA 的生根培養基上進行培養。
2.一種艾納香的移栽方法，其特徵在於包含以下步驟 (1)煉苗方法將權利要求I中生根誘導培養的艾納香，生根培養50天，苗高3-5cm，根系5-10根，長度l-5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環境溫度20_30°C的條件下煉苗培養7-10天； (2)基質處理將蛭石+砂質黃壤按體積比1:1混合成混合基質，然後用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理後裝入5cmX8cm的營養袋中； (3)幼苗移栽及管理方法將煉苗後的瓶苗取出，用水清洗乾淨根系，置於有少量水分的磁碟中，將幼苗植入步驟(2)中已消毒裝袋的基質中，每袋I株，然後澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內，每天噴霧2-3次，半月後噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對溼度在85%以上，溫度20-30°C。
全文摘要
本發明公開了一種艾納香的種苗快速繁殖與移栽方法，包括外植體抗褐化、消毒、初代誘導、繼代增殖、生根誘導及瓶苗移栽等技術環節，是以艾納香帶葉柄的嫩葉或帶腋芽的幼嫩莖段為外植體誘導叢生芽，然後用叢生芽帶莖段的完整葉片為繼代增殖材料，或直接生根誘導材料，提供了整套艾納香種苗快速繁殖及瓶苗移栽方法。本方法能顯著降低外植體的褐化率和汙染率，外植體初誘導接種成活率達90%以上，繼代增殖周期為35天，能直接用叢生芽帶莖段的完整葉片進行生根誘導，生根率達100%，瓶苗移栽方法簡便易行，成活率達90%以上，可為解決艾納香規模化種植種苗奇缺提供技術保障。
文檔編號A01G1/00GK103250645SQ201310194018
公開日2013年8月21日 申請日期2013年5月23日 優先權日2013年5月23日
發明者謝丙質, 王濟紅, 歐國騰, 劉燕 申請人:貴州一合生物技術有限公司