一種細柱五加藥材的質量控制方法
2023-06-05 03:59:16
一種細柱五加藥材的質量控制方法
【專利摘要】本發明提供一種細柱五加藥材的質量控制方法，有效解決五加皮規範化質量控制的需要，其步驟包括：a.紫丁香苷的測定，b.總黃酮的測定，c.總三萜的測定，d.確定藥材中總黃酮含量與紫丁香苷含量的比及總三萜含量與紫丁香苷含量的比。採用組分結構來控制細柱五加藥材的質量，體現中醫藥中配伍配比特色，避免了因測定一、二個化學成分而判斷藥材整體質量的片面性，為完整、準確評價細柱五加藥材的質量提供了新的控制方法。這種方法簡便、穩定、精密度高、易於掌握。
【專利說明】一種細柱五加藥材的質量控制方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種中藥材的質量控制方法，特別是涉及細柱五加藥材的質量控制方 法，屬於中藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 五加始載於本草學著作《神農本草經》，稱之為"五加皮"，列為上品。"氣味辛，溫。 主心腹疝氣腹痛，益氣療甓，小兒不能行，疽瘡陰蝕。"此後在《名醫別錄》、《東華真人煮石 經》等歷代醫藥著作中均有五加的記載和描述。但是由於古代文獻對五加原植物的描述不 甚詳細，而且五加屬植物形態較為相似，經前人考證，五加皮來源於五加科（Araliaceae) 五加屬（Acanthopanax Miq.)植物。
[0003] 經中國藥典確定細柱五加 （Acanthopanax gracilistylus W. W. Smith)的乾燥根 皮是中國藥典中"五加皮"的唯一正品來源。五加皮為一味名貴滋補強壯藥，具祛風溼，補 肝腎，強筋骨的特異功效。近三十年，國內外對細柱五加植物進行了較多的化學成分和藥理 的研究。在化學成分方面，細柱五加含有五加屬植物共有的木脂素類成分紫丁香甙，還含有 揮髮油，豆留醇、β-谷留醇、異貝殼杉烯酸、羽扇豆烷型三萜等萜類以及多種微量元素、氨 基酸。此外還從根中分離出生物鹼、多糖、強心苷。目前雖有文獻針對細柱五加果實、葉等 部位中某一成分的測定方法，但未有對其真正藥用部位（根皮）質量控制方法，各版藥典也 未有對"五加皮"中成分測定方法，這嚴重製約了"五加皮"的規範化研究，因此，制定細柱 五加質量控制方法勢在必行。
[0004] 中藥質量評價的現行標準是利用光譜或色譜手段鑑別和測定某一種或幾種有效 成分、活性或指標成分，以及藥典規定的常規檢查項目。如中國藥典2010年版[一部]共 收載2165種藥材及成藥品種，均為一般檢查項目，大部分為薄層色譜鑑別，其餘為含量測 定（容量法、光譜法、液相色譜法、氣相色譜法及薄層色譜掃描法）。顯然，這些質量標準的 設置是模仿了化學藥品的模式，其他國家如英國、印度、美國草藥典，日本藥局方中的漢藥 及德國Commission Ε編輯的德國草藥專論等也採用了基本相同的內容。對於化學藥品而 言，其藥效成分為結構清晰的單一化合物，結構關係明確，其含量和純度直接表達其有效及 安全性。然而，中醫用藥的特點是配伍，同樣越來越多的研究顯示，道地藥材中的化學成分 並不含有某一特有成分，亦不是某一成分含量越高越好，而是在組分與組分之間、組分內各 成分之間具有穩定有序的整體特徵，即配伍配比，這一研究並未體現在細柱五加藥材質量 控制中。
【發明內容】
[0005] 針對以上情況，為克服現有技術的缺陷，本發明的目的在於提供一種細柱五加質 量控制方法，可有效解決五加皮規範化質量控制的需要，以保證五加皮臨床用藥的安全有 效和在醫藥領域其他方面的合理應用問題。
[0006] 本發明的技術方案如下，該種細柱五加質量控制方法的主要特點是：
[0007] a)細柱五加藥材中紫丁香苷的測定：
[0008] ①對照品溶液製備：精密稱取紫丁香苷對照品適量，加甲醇使溶解，0. 45 μ m微孔 濾膜濾過；
[0009] ②供試品溶液製備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，0. 45 μ m微孔 濾膜濾過；
[0010] ③測定：吸取上述供試品及對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進 行測定，得到色譜圖，按峰面積換算成藥材中紫丁香苷含量，色譜條件：色譜柱以十八烷基 矽烷鍵合矽膠為填料；流動相為乙腈水溶液，檢測波長265nm。
[0011] b)細柱五加藥材中總黃酮的測定：
[0012] ①對照品溶液製備：精密稱取蘆丁對照品適量，加一定體積分數的甲醇溶液使溶 解；
[0013] ②供試品溶液製備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，過濾後取一定 量續濾液揮幹後用一定體積分數的甲醇溶解後，加一定質量分數的A1C1 3溶液，用一定體積 分數的甲醇定容；
[0014] ③測定：上述供試品及對照品溶液於273nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材 中總黃酮含量。
[0015] c)細柱五加藥材中總三萜的測定：
[0016] ①對照品溶液製備：精密稱取齊墩果酸對照品適量，加無水乙醇使溶解；
[0017] ②供試品溶液製備：精密稱取樣品粉末，加入90 %乙醇溶液，超聲處理，過濾後取 一定量續濾液待用；
[0018] ③測定：取一定量上述對照品溶液及一定量供試品溶液，水浴揮幹溶劑後，準確 加入新配製的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水浴中加熱 15min，取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，於547nm處測定吸收度，按吸 收度換算成藥材中總三萜含量。
[0019] d)藥材中總黃酮含量與紫丁香苷含量的比為10?100 : 1，總三萜含量與紫丁香 苷含量的比為200?900 : 1。
[0020] 所述的細柱五加質量控制方法的延伸技術方案包括：步驟a中的流動相的流速 0.500?1.500ml/min，流動相為乙腈-水（20 : 80)，柱溫20?40°C。
[0021] 所述的細柱五加質量控制方法的延伸技術方案包括：步驟a中供試品溶液製備 為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，0. 45 μ m微孔濾膜濾過。
[0022] 所述的細柱五加質量控制方法的延伸技術方案包括：步驟b中一定體積分數的甲 醇為體積分數30%的甲醇，一定質量分數的A1C1 3溶液為質量分數0. 8%的A1C13溶液。
[0023] 所述的細柱五加質量控制方法的延伸技術方案包括：步驟b中供試品溶液製備 為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液0. 5mL揮幹後用體積分數 30 %的甲醇lmL溶解並轉移至5mL量瓶中，加質量分數0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積 分數30%的甲醇定容。
[0024] 所述的細柱五加質量控制方法的延伸技術方案包括：步驟c中供試品溶液製備為 精密稱取樣品粉末約0. lg，精密加入90%乙醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液0. 5mL備用。
[0025] 所述的細柱五加質量控制方法的延伸技術方案包括：步驟d中總黃酮含量與紫丁 香苷含量的比為15?40 : 1，總三萜含量與紫丁香苷含量的比為200?900 : 1。
[0026] 本發明把細柱五加藥材中的紫丁香苷含量、總黃酮含量、總三萜含量作為一個整 體看待，注重三個指標的相互關係，避免了因測定一、二個化學成分而判斷藥材整體質量的 片面性，為完整、準確評價細柱五加藥材的質量提供了新的控制方法。
[0027] 本發明具有方法簡便、穩定、精密度高、易於掌握的特點。
[0028] 以下便結合實施例並附圖，對本發明的【具體實施方式】作進一步的詳述。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0029] 圖1紫丁香苷標準品265nm色譜圖
[0030] 圖2細柱五加樣品265nm色譜圖
【具體實施方式】
[0031] 下面結合細柱五加質量控制方法的實例說明本發明的【具體實施方式】。
[0032] 實施例1紫丁香苷測定方法的建立
[0033] 1材料及儀器
[0034] Agilent 1100 Series 高效液相色譜儀（G1311A Quaternary Pump，G1379A Degasser,G1313A Autosampler,G1314A photodiode array Detector) ；HP ChemSation工 作站（美國 Agilent 公司）；Kromasil C18(5ym，4.6X250nm)色譜柱；KQ-250DE 型醫用數 控超聲波清洗器（崑山超聲波儀器有限公司）jartorius電子分析天平（北京賽多利斯儀 器系統有限公司）；乙腈（色譜純，南京化學試劑有限公司）；甲醇（色譜純，山東禹王實業 有限公司禹城化工廠）；其餘試劑均為化學純。紫丁香苷（111574-200201)購自中國藥品 生物製品檢定所。
[0035] 2測定方法的確立及樣品的測定
[0036] 2. 1對照品溶液製備
[0037] 精密稱取紫丁香苷對照品1.60mg，置10mL量瓶中，加甲醇使溶解，並稀釋至刻度， 製成0. 16mg/mL紫丁香苷對照品溶液。
[0038] 2. 2供試品溶液製備
[0039] 精密稱取樣品粉末約1. 0g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液備用。
[0040] 2. 3色譜條件
[0041] 色譜柱：0DS_C18 (4. 6mm X250mm，5 μ m);流動相：乙腈-水（20 : 80);體積流量： lmL/min ;柱溫：室溫；檢測波長：265nm ;靈敏度：0. 5AUFS ;按紫丁香苷峰計算，理論塔板數 在1500以上。
[0042] 2. 4方法學考察
[0043] 2. 4. 1線性關係考察
[0044] 取紫丁香苷對照品溶液（0· 16mg/mL)。分別進樣1，5,10,15, 20 μ L。按上述色譜 條件測定峰面積。以紫丁香苷進樣量X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標繪製標準曲線，計算得 回歸方程為Υ= 1204. 6Χ-0. 06, R = 0. 9994。結果表明紫丁香苷在0. 16yg?3. 2yg與 峰面積具有良好的線性關係。
[0045] 2. 4. 2精密度試驗
[0046] 精密吸取紫丁香苷對照品溶液（0. 16mg/mL) 10 μ L，重複進樣5次，測定紫丁香苷 峰面積，得其RSD為1.07%。
[0047] 2. 4. 3重複性試驗
[0048] 取同一樣品，平行5次取樣，製備供試品溶液，進樣測定，結果紫丁香苷峰面積的 RSD 為 1. 91%。
[0049] 2.4.4回收率試驗
[0050] 採取加樣回收法。取已知質量分數（含紫丁香苷為0. 096mg/g)樣品約1. 0g，精密 加入紫丁香苷對照品溶液（〇. 16mg/mL)0. 6mL，製備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算 回收率，結果平均回收率為98. 75%，RSD為1.98% (η = 5)。
[0051] 2.5樣品測定
[0052] 在上述色譜條件下，分別進樣測定不同樣品中紫丁香苷的含量。
[0053] 實施例2總黃酮測定方法的建立
[0054] 1 材料
[0055] KQ-250DE型醫用數控超聲波清洗器（崑山超聲波儀器有限公司）Jartorius電 子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；UV-2501PC紫外分光光度計（SHIMADZU); 甲醇（色譜純，山東禹王實業有限公司禹城化工廠）；其餘試劑均為化學純。蘆丁 (100080-200707)購自中國藥品生物製品檢定所。
[0056] 2對照品溶液製備
[0057] 稱取經五氧化二磷減壓乾燥24h的蘆丁對照品約1. Omg，精密稱定，置於20mL量瓶 中，加入體積分數30%的甲醇溶解並稀釋至刻度，作為測定總黃酮的對照儲備液。
[0058] 3供試品溶液製備
[0059] 精密稱取樣品粉末約1. 0g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液0. 5mL揮幹後用體積分數 30 %的甲醇lmL溶解並轉移至5mL量瓶中，加質量分數0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積 分數30%的甲醇定容，即為測定總黃酮用供試反應液。
[0060] 4線性關係考察
[0061] 精密量取蘆丁對照儲備液0,0. 5,1. 0, 2. 0, 3. 0,4. OmL，分別置於5mL量瓶中，加質 量分數0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積分數30 %的甲醇定容，搖勻，即為各質量濃度蘆丁 對照反應液。各濃度反應液於273nm處測定吸收度，以蘆丁濃度X為橫坐標，273nm處吸收 度Y為縱坐標繪製標準曲線，計算得回歸方程為Y = 38. 44X-0. 0002, R = 0. 9998。結果表 明總黃酮含量在〇mg?0. 2mg與吸收度具有良好的線性關係。
[0062] 5樣品測定
[0063] 各樣品的供試反應液於273nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材中總黃酮含 量。
[0064] 實施例3總三萜測定方法的建立
[0065] 1 材料
[0066] KQ-250DE型醫用數控超聲波清洗器（崑山超聲波儀器有限公司）；Sartorius電 子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；UV-2501PC紫外分光光度計（SHIMADZU); 甲醇（色譜純，山東禹王實業有限公司禹城化工廠）；其餘試劑均為化學純。齊墩果酸 (110709-200304)購自中國藥品生物製品檢定所。
[0067] 2對照品溶液製備
[0068] 稱取經五氧化二磷減壓乾燥24h的齊墩果酸對照品約1. 6mg，精密稱定，置於20mL 量瓶中，加入無水乙醇溶解並稀釋至刻度，作為測定總三萜的對照儲備液。
[0069] 3供試品溶液製備
[0070] 精密稱取樣品粉末約0. lg，精密加入90%乙醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超 聲處理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液0. 5mL，水浴揮幹溶 劑後，準確加入新配製的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水 浴中加熱15min，取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，即為測定總三萜用 供試反應液。
[0071] 4線性關係考察
[0072] 精密量取齊墩果酸對照儲備液0,0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. OmL，水浴揮幹後，準確加入 新配製的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水浴中加熱15min， 取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，即為各質量濃度齊墩果酸對照反應 液。各濃度反應液於547nm處測定吸收度，以齊墩果酸濃度X為橫坐標，547nm處吸收度Y 為縱坐標繪製標準曲線，計算得回歸方程為Y = 37. 33X+0. 0785, R = 0. 9991。結果表明總 三萜含量在〇mg?0. 08mg與吸收度具有良好的線性關係。
[0073] 5樣品測定
[0074] 各樣品的供試反應液於547nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材中總三萜含 量。
[0075] 實施例4細柱五加含量測定
[0076] 取不同產地產地細柱五加藥材按實施例1、實施例2、實施例3的方法分別測定紫 丁香苷、總黃酮、總三萜含量，結果如下表所示：
[0077]
【權利要求】
1. 一種細柱五加藥材的質量控制方法，其特徵在於包括如下步驟： a) 細柱五加藥材中紫丁香苷的測定： ① 對照品溶液製備：精密稱取紫丁香苷對照品適量，加甲醇使溶解，〇. 45 μ m微孔濾膜 濾過； ② 供試品溶液製備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，〇. 45 μ m微孔濾膜 濾過； ③ 測定：吸取上述供試品及對照品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測 定，得到色譜圖，按峰面積換算成藥材中紫丁香苷含量，色譜條件：色譜柱以十八烷基矽烷 鍵合矽膠為填料；流動相為乙腈水溶液，檢測波長265nm。 b) 細柱五加藥材中總黃酮的測定： ① 對照品溶液製備：精密稱取蘆丁對照品適量，加一定體積分數的甲醇溶液使溶解； ② 供試品溶液製備：精密稱取樣品粉末，加入甲醇溶液，超聲處理，過濾後取一定量續 濾液揮幹後用一定體積分數的甲醇溶解後，加一定質量分數的A1C1 3溶液，用一定體積分數 的甲醇定容； ③ 測定：上述供試品及對照品溶液於273nm處測定吸收度，按吸收度換算成藥材中總 黃酮含量。 c) 細柱五加藥材中總三萜的測定： ① 對照品溶液製備：精密稱取齊墩果酸對照品適量，加無水乙醇使溶解； ② 供試品溶液製備：精密稱取樣品粉末，加入90%乙醇溶液，超聲處理，過濾後取一定 量續濾液待用； ③ 測定：取一定量上述對照品溶液及一定量供試品溶液，水浴揮幹溶劑後，準確加入新 配製的5%香草醛-冰醋酸溶液0. 2mL、高氯酸0. 8mL，振搖；在60°C的水浴中加熱15min， 取出，流水冷卻至室溫；再準確加入4mL冰醋酸，振搖，於547nm處測定吸收度，按吸收度換 算成藥材中總三萜含量。 d) 藥材中總黃酮含量與紫丁香苷含量的比為10?100 : 1，總三萜含量與紫丁香苷含 量的比為200?900 : 1。
2. 如權利要求1所述的細柱五加的質量控制方法，其特徵在於步驟a中的流動相的流 速0. 500?1.500ml/min，流動相為乙腈-水（20 : 80)，柱溫20?40°C。
3. 如權利要求1所述的細柱五加的質量控制方法，其特徵在於步驟a中供試品溶液制 備為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處理 (250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，0. 45 μ m微孔濾膜濾過。
4. 如權利要求1所述的細柱五加的質量控制方法，其特徵在於步驟b中一定體積分數 的甲醇為體積分數30 %的甲醇，一定質量分數的A1C13溶液為質量分數0. 8%的A1C13溶 液。
5. 如權利要求1所述的細柱五加的質量控制方法，其特徵在於步驟b中供試品溶液 製備為精密稱取樣品粉末約1. 〇g，精密加入甲醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液0. 5mL揮幹後用體積分數 30 %的甲醇lmL溶解並轉移至5mL量瓶中，加質量分數0. 8 %的A1C13溶液0. 5mL，用體積 分數30%的甲醇定容。
6. 如權利要求1所述的細柱五加的質量控制方法，其特徵在於步驟c中供試品溶液制 備為精密稱取樣品粉末約〇. lg，精密加入90%乙醇20mL，稱重，記錄重量，浸12h後，超聲處 理（250kw，36kHz) 30min，靜置至室溫，補足重量，過濾後取續濾液0. 5mL備用。
7. 如權利要求1所述的細柱五加的質量控制方法，其特徵在於步驟d中總黃酮含量與 紫丁香苷含量的比為15?40 : 1，總三萜含量與紫丁香苷含量的比為200?900 : 1。
【文檔編號】G01N30/06GK104090046SQ201410352833
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月22日 優先權日:2014年7月22日
【發明者】韋敏, 鄭生智, 呂曄, 張貴君 申請人:江蘇省中國科學院植物研究所