新硫酸氫鹽的製作方法

2023-06-05 18:37:01 1

專利名稱：：新硫酸氫鹽的製作方法
技術領域：
：本發明涉及新的鹽，更具體地，涉及6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯銜以下稱為"化合物l")的新鹽，它是用於治療和/或預防哺乳動物中的增殖性疾病狀態例如癌症的MEK抑制劑。更具體地，本發明涉及化合物1的硫酸氫鹽和用於製備所述鹽的方法。還提供了包含化合物1的硫酸氫鹽的藥物組合物，和所述鹽在製備用於治療和/或預防人或動物體內的增殖性疾病狀態例如癌症的藥物中的應用，和通過給藥治療有效量的化合物1的硫酸氫鹽來治療哺乳動物中的增殖性疾病狀態例如癌症的方法。
背景技術：
：通過生長因子受體和蛋白激酶的細胞信號傳導(cellsignaling)是細胞生長、增殖和分化的重要的調節劑。在正常的細胞生長中，生長因子通過受體活化(即，PDGF或EGF及其他)激活MAP激酶途徑。涉及正常和無控細胞生長的一個最重要和最為公知的MAP激酶途徑是Ras/Raf激酶途徑。活性GTP結合的Ras導致Raf激酶的活化和間接磷酸化。然後，Raf在兩個絲氨酸殘基上(MEK1的S218和S222，MEK2的S222和S226)磷酸化MEK1和2(Ahn等，MethodsinEnzymology,2001，332:417-431)。然後，活化的MEK使其僅有的己知底物MAP激酶ERK1和2磷酸化。通過MEK的ERK磷酸化對於ERK1發生在Y204和T202上，對於ERK2發生在Y185和T183上(Ahn等，MethodsinEnzymology，2001,332:417-431)。磷酸化的ERK二聚並隨後移位至其聚集的核(Khokhlatchev等，Cell1998，93:605-615)。在核中，ERK參與若干重要的細胞功能，包括但不限於核轉運、信號轉導、DNA修復、核小體組裝和移位、和mRNA加工和翻譯(Ahn等，M/ecw/arCe//，2000，6:1343-1354)。總之，用生長因子處理細胞導致ERK1和2的活化，這導致增殖並且在某些情況下導致分化(Lewis等，A^.Omc^i仏1998,74:49-139)。在增殖性疾病中，ERK激酶途徑中涉及的生長因子受體、下遊信號傳導蛋白、或蛋白激酶的基因突變和/或過表達導致不受控制的細胞增殖，並最終形成腫瘤。例如，某些癌症包含導致由於生長因子的連續生成而使得此途徑連續活化的突變。其它突變可以導致活化的GTP結合的Ras複合物的失活中的缺陷，再次導致MAP激酶途徑的活化。Ras的變異的、致癌形態見於50。/。的結腸癌和〉90。/。的胰腺癌以及許多其它類型的癌症中(Kohl等，Sc/e騰,1993,260:1834-1837)。近來，已在多於60%的惡性黑素瘤中識別bRaf突變(Davies,H.，等，A^we2002,417:949-954)。這些bRaf突變導致組成型活性MAP激酶級聯。對原發腫瘤樣品和細胞系的研究也顯示在胰腺癌、結腸癌、肺癌、卵巢癌和腎癌中MAP激酶途徑的組成型或過度活化(Hoshino，R.,等，O"coge"e1999,18:813-822)。因此，在癌症和由遺傳突變導致的過度活化的MAP激酶途徑之間存在強的相關性。由於MAP激酶級聯的組成型或過度活化在細胞增殖和分化中起關鍵的作用，因此認為此途徑的抑制在過度增殖性(hyperprolifemtive)疾病中是有益的。由於MEK是Ras和Raf的下遊，因此其在此途徑中是關鍵的角色。另外，由於僅有的用於MEK磷酸化的已知底物是MAP激酶，ERK1和2，因此其是引人注目的治療目標。已經在若干研究中顯示MEK的抑制具有潛在的治療益處。例如，已顯示小分子MEK抑制劑在裸小鼠異種移植中抑制人類腫瘤生長(Sebolt-Leopold等，A^MW-Me^cz'"e1999，5(7):810-816;Trachet等，AACR2002年4月6誦10日，Poster#5426;Tecle,H.，IBC2ndInternationalConferenceofProteinKinases,2002年9月9-10日)，在動物中阻滯靜態痛覺超敏(allodynia)(WO01/05390)和抑制急性髓性白血病細胞的生長(Milella等，J!C7z'"./"ve".2001,108(6):851-859)。己公幵了一些MEK的小分子抑制劑。最近幾年中至少已出現十三個專禾[J申請US5,525,625、WO98/43960、WO99/01421、WO99/01426、WO00/41505、WO00/42002、WO00/42003、WO00/41994、WO00/42022、WO00/42029、WO00/68201、WO01/68619、和WO02/06213。MEK的抑制劑也描述於WO03/077914中。6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-S-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺(或"化合物1")示例於WO03/077914中，並具有下列結構式formulaseeoriginaldocumentpage6已顯示化合物1對MEK具有抑制活性，並因此可用於治療過度增殖性疾病例如癌症。WO03/077914概括地公開了其中公開的化合物的藥學上可接受的鹽。具體地，WO03/077914中聲稱，其中所公開的具有足夠鹼性的部分的化合物的藥學上可接受的鹽可以形成包含藥學上可接受的陰離子的酸加成鹽，並列出了一系列這種陰離子。同樣地，通過用鹼性化合物、特別是無機鹼處理具有酸性部分的化合物而形成所述化合物的適合的鹽。用於藥物的藥學活性化合物的形式適合是提供適當的處理性能使其可以被加工和配製的形式。然而，還必須確保優化最終製劑的生物學性質例如片劑的溶出速率和活性成分的生物利用度，並經常在選擇最好地滿足所有這些不同要求的特定形式時進行折衷。然而，有時，鹽不容易形成和/或不穩定，這可能是由於低pKa值。pKa值表示酸和鹼的強度，即酸失質子或鹼得質子的傾向(BronstedJ.N.,iec.!Trav.On'm.(1923)47:718)。化合物1更是如此。本發明提供化合物1的硫酸氫鹽(l:l藥物:H2S04)及其各種形式，它們都包括在本發明範圍內。鹽可以為各種形式，它們都包括在本發明範圍內。這些形式包括無水形式以及溶劑化物。其他形式可通過將溶劑化物脫溶劑來製備。在具體的實施方案中，鹽為無水形式。化合物l
發明內容另一方面，本發明提供將化合物1的硫酸氫鹽用作藥物治療過度增殖性疾病或病症的方法。本發明的另一方面是化合物1的硫酸氫鹽在製備用於治療或預防過度增殖性疾病或病症的藥物中的應用。本發明的其它優點和新特徵部分將在下述的說明書中闡述，而部分將通過本領域技術人員對下列說明書的研究而變得明顯或可以通過實施本發明而了解。本發明的優點可以通過在所附權利要求書中具體指出的手段、組合、組合物、和方法來實現和獲得。附圖簡述在此引入附圖並形成本說明書的一部分，所述本發明的非限制性實施方案，並與說明書一起用於說明本發明的原理。在圖中圖1顯示化合物1的硫酸氫鹽的XRPD;圖2顯示採用DRIFTS取樣技術得到的化合物1的硫酸氫鹽的紅外光譜；和圖3顯示在向禁食的狗給藥150mg游離鹼當量的口服分散劑劑量的化合物l(x)和所述硫酸氫鹽(A)後，化合物1的血槳濃度水平的結果。具體實施例方式現在將詳細參考本發明的某些實施方案，其實例在所附結構和式中進行說明。儘管本發明將連同列舉的實施方案進行描述，應當理解它們並不意圖將本發明限制於那些實施方案。相反，本發明意圖包括所有可包括在如權利要求所定義的本發明範圍內的可選方案、修改、和等價物。本領域技術人員將辨認出類似或等效於那些在此描述的，可用於實施本發明的許多方法和物質。本發明決不限於所述方法和物質。在一篇或多篇引入的文獻、專利、和類似材料與本申請不同或矛盾的情況下(包括但不限於定義的術語、術語用法、描述的技術等)以本申請為準D本發明提供化合物1的硫酸氫鹽(l:l藥物:H2S04)及其各種形式，它們都包括在本發明範圍內。鹽可以為各種形式，它們都包括在本發明範圍內。這些形式包括無水形式以及溶劑化物。其他形式可通過將溶劑化物脫溶劑而製備。在具體的實施方案中，鹽是化合物1的無水硫酸氫鹽。此外，本發明提供顯示獨特物理和藥學性質的化合物1的硫酸氫鹽，這些性能使其特別適合在藥物中應用。在某些實施方案中，化合物1的鹽是晶體。從製備的觀點來看，在處理性能方面，尤其是靜態和流動性質方面，發現結晶鹽勝過游離鹼。由於可以分離過程雜質並且鹽通常比游離鹼易於分離，因此鹽的形成可提供純化方法。在本發明的一個實施方案中，化合物1的硫酸氫鹽是結晶鹽，出人意料地發現當與化合物1的游離鹼和化合物1的某些其它鹽形式相比時，其具有改善的藥學性質。特別地，如以下實施例中說明的，與游離鹼和其它鹽相比，發現該結晶鹽的溶出速率及其生物利用度特別高。已顯示化合物1的硫酸氫鹽與游離鹼相比提高的生物利用度與用於給藥的製劑無關。本文是將以相同的分散劑製劑形式給藥時游離鹼和硫酸氫鹽形式的生物利用度進行比較，但對於簡單的片劑製劑來說，同樣觀察到了生物利用度的相似差異。當談到本發明涉及化合物1的結晶鹽時，結晶度適合大於約60%，更適合大於約80%，優選大於約90%，更優選大於約95%。最優選地，結晶度大於約98%。由於化合物1的游離鹼分類為BCS4級化合物，因此由硫酸氫鹽提供的生物利用度提高的程度出人意料，並且是特別有利的。由於低溶出速率和滲透性，因此BCS4級化合物一般具有低的生物利用度，並且吸收上的滲透性限制意味著通常不能期望該鹽在吸收上顯示出明顯的作用(參見例如Dressman等，(2001)P/zarmrech.July:68)。化合物1的硫酸氫鹽的適合的溶劑化物由多種溶劑形成，所述溶劑特別是有機溶劑例如四氫呋喃(THF)、乙腈(ACN)、乙醇(EtOH)和甲醇(MeOH)。適合的有機溶劑包括酯例如C卜6烷基酯，例如乙酸乙酯，和酮例如C卜6烷基酮，例如甲基乙基酮(2-丁酮)。鹽的製備可以通過化合物1在有機溶劑和水中的漿液與硫酸反應而進行。對於1:1鹽的製備，使用約1當量的硫酸。因此在另一方面，本發明提供用於製備化合物1的硫酸氫鹽的方法，所述方法包括(i)使化合物1在有機液體和水中的漿液與約1當量的硫酸反應；(ii)從生成的溶液中回收鹽；和(iii)隨後，如果期望或必需，形成其溶劑化物。硫酸與化合物1的量的摩爾比適合地在1.00:1-2:1的範圍內，例如在1.05:1-1.15:1的範圍內。所用的硫酸適合為濃硫酸的形式。在具體的實施方案中，硫酸與化合物1的摩爾比是UO:l.O。適合地，步驟(i)中添加的水的量限於確保鹽形成所必須的量。所用的精確量取決於溶劑的特性、硫酸的濃度等。但通常地，水含量為小於存在的總液體量的20體積％，例如13-17體積％。在具體的實施方案中，步驟(i)中所用的有機溶劑是2-丁酮(甲基乙基酮)，水佔液體體積的約15%，所用液體總量相對於化合物1為每克化合物1約8mL液體。適合±也，步驟(i)中硫酸的添加在受控的方式下進行，例如在低於10。C的溫度下進行，步驟(i)的其餘步驟隨後在較高的溫度例如30-卯。C下進行，如其它的實施例在55-75°C下進行，如其它的實施例在約65°C下進行。適合的有機液體包括化合物1及其鹽微溶於其中的有機溶劑。本文中使用的表述"微溶"指溶解度小於每克溶質100mL溶劑，例如每克溶質30-100mL溶劑。這些溶劑包括垸基酮，例如C卜6烷基酮例如2-丁酮；醇例如d—6醇，例如甲醇或乙醇；和酯例如C卜6垸基酯，例如乙酸乙酯。在一個實施方案中，有機溶劑是甲基乙基酮(2-丁酮)。適合地，在步驟(i)和(ii)之間過濾反應混合物以除去任何外來雜質。任選地將濾渣進行洗滌，例如用有機液體和水的混合物洗滌，期望的鹽從濾液中結晶出來，所述濾液可任選地與洗滌溶液混合。在某些實施方案中，在步驟(ii)中通過冷卻反應混合物回收硫酸氫鹽，任選地添加其它有機液體，使得硫酸氫鹽沉澱。其它有機液體可以與步驟(i)中所用的有機液體相同，或可以是不同的有機液體，只要其對化合物1的硫酸氫鹽起反溶劑作用即可。用化合物1的硫酸氫鹽晶體對溶液進行引晶(seeding)可有助於沉澱過程。在一個實施方案中，在冷卻前，首先使濾液進行蒸餾步驟以除去水，並確保鹽以可接受的收率進行回收。在具體的實施方案中，溶劑是2-丁酮，濾液在大氣壓下進行蒸餾。在冷卻中，可以例如通過過濾從生成的漿液中回收鹽。回收的物質隨後可以例如在升高的溫度下乾燥直至恆重，所述升高的溫度例如為40-60°C，如另一實施例為約50。C。如果產物是與有機液體例如甲醇的溶劑化物，如果需要，在此時可以通過加熱使其脫溶劑。研究了硫酸氫鹽的物理性質，並在實施例中進一步描述。本發明還包括同位素標記的化合物，除了一個或多個原子被原子量或質量數與通常在自然界中發現的原子量或質量數不同的原子代替以外，其等同於在本發明中列舉的那些化合物。可引入到本發明化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如分別為211、3H、13C、14C、15N、180、170、31P、32P、35S、18F和36C1。包含上述同位素和/或其它原子的其它同位素的化合物1的硫酸氫鹽及其多晶型物在本發明範圍內。本發明的某些同位素標記的化合物，例如引入放射性同位素例如SH和"C的那些化合物，可用於藥物和/或底物組織分布試驗。由於易於製備和可檢測性，因此氚化的(即3印和C-14(即"C)同位素特別廣泛地應用。此外，用較重的同位素例如氖(即2H)取代可提供某些由較大代謝穩定性得到的治療的優勢，例如增加體內半衰期或降低劑量要求，因此可在某些特殊的環境下應用。本發明的同位素標記的鹽通常可以通過WO03/077914中公開的過程，通過在製備過程中用易於獲得的同位素標記的試劑代替非同位素標記的試劑來製備，或如果需要，在鹽的製備中使用同位素標記的硫酸來製備。組合物可以為適於口服給藥(例如為片劑、錠劑、硬或軟膠囊劑、乳劑、可分散粉劑或顆粒劑、糖漿、酏劑或油混懸劑或即時製備的水混懸劑)、通過吸入給藥(例如為細分散的粉劑或液體噴霧劑)、通過吹入給藥(例如作為細分散的粉劑)、胃腸外注射(例如作為用於靜脈、皮下、肌肉內、血管內或輸液給藥的無菌溶液、混懸劑或乳劑)、局部給藥(例如作為乳膏劑、軟膏劑、凝膠劑、油溶液劑或混懸劑或即時製備的水混懸劑)、或直腸給藥(例如作為栓劑)的形式。在一個實施方案中，化合物1的硫酸氫鹽口服給藥。一般而言，上述組合物可以常規方式使用常規賦形劑製備。給藥的活性物質的數量取決與待治療的對象、病症或病症的嚴重禾呈度、給藥速率、化合物的分布和處方醫師的判斷。然而，有效劑量為約0.01-約100mg每kg體重每日，優選為約l一約35mg/kg/日，以單次或分次劑量給藥。對於70kg的人，所述量為約0.7-7000mg/日，優選為約70-約2500mg/曰。在某些情況下，低於上述範圍下限的劑量水平可能是足夠的，而在其它情況下，在不產生任何有害副作用的條件下可能釆用更大的劑量，只要首先將所述更大劑量分成若干小劑量用於全天給藥即可。單位劑型例如片劑或膠囊劑通常包含例如1-1000mg的有效成分，優選5-420mg的有效成分。優選採用0.03-6mg/kg的每日劑量。根據本發明的另一方面，提供了如本文定義的化合物1的硫酸氫鹽通過治療在人或動物體的治療或預防的方法中的應用。本發明的其他特徵是如本文定義的化合物1的硫酸氫鹽作為藥物的應用。另一方面，本發明提供了如本文定義的化合物的硫酸氫鹽作為用於治療恆溫哺乳動物例如人中由MEK介導的疾病狀態，特別是增殖性疾病或異常的細胞生長例如癌症的藥物的應用。因此，本發明的另一方面提供了如本文定義的化合物1的硫酸氫鹽在製備用於治療恆溫哺乳動物例如人中由MEK介導的疾病狀態，特別是增殖性疾病或異常的細胞生長例如癌症的藥物中的應用。根據本發明的其他特徵，提供了用於治療需要所述治療的恆溫哺乳動物例如人中由MEK介導的疾病狀態，特別是增殖性疾病或異常的細胞生長例如癌症的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給藥有效量的此處所述的化合物1的硫酸氫鹽，或如本文定義的藥物組合物。可使用本發明的鹽或組合物治療的增殖性疾病的具體實例包括哺乳動物中的過度增殖性疾病。具體的癌症有腦癌、肺癌、鱗狀細胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、頭部癌症、頸部癌症、腎(renal，kidney)癌、卵巢癌、前列腺癌、大腸癌、食管癌、睪丸癌、婦科癌或甲狀腺癌。然而，本發明的化合物和組合物還可用於治療非癌性的過度增殖性疾病例如皮膚(例如銀屑病)、再狹窄、或前列腺(例如良性前列腺肥大(BPH))的良性增生。可使用本發明化合物或組合物治療的MEK介導的疾病的其它實例包括胰腺炎或腎臟疾病(包括增生性腎小球腎炎和糖尿病誘導的腎臟疾病)或哺乳動物中疼痛的治療。所述化合物和組合物也可用於防治哺乳動物中胚泡著床，或用於治療哺乳動物中涉及血管發生(vasculogenesis)或血管生成(angiogenesis)的疾病。所述疾病可包括腫瘤血管生成、慢性炎性疾病例如風溼性關節炎、動脈硬化、炎性腸病、皮膚病例如銀屑病、溼疹、和硬皮病、糖尿病、糖尿病性視網膜病、早產兒視網膜病變、老年性黃斑變性、血管瘤、神經膠質瘤、黑素瘤、Kaposi肉瘤和卵巢癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、結腸癌和類上皮癌。術語"異常的細胞生長"和"過度增殖性疾病"在此申請中可交換使用，指與正常調節機制無關的生長(例如接觸抑制的喪失)。這包括例如以下的異常生長(l)通過表達變異的酪氨酸激酶或受體酪氨酸激酶的過表達而增殖的腫瘤細胞(腫瘤)；(2)其中發生異常的酪氨酸激酶活化的其它增殖性疾病的良性和惡性細胞；(3)任何通過受體酪氨酸激酶增殖的腫瘤；(4)任何通過異常的絲氨酸/蘇氨酸激酶活化增殖的腫瘤；和(5)其中發生異常的絲氨酸/蘇氨酸激酶活化的其它增殖性疾病的良性和惡性細胞。除非另有說明，本文中使用的術語"治療(treating)"指逆轉、減輕、抑制應用所述術語的疾病或病症的進程或所述疾病或病症的一個或多個症狀，或其預防。除非另有說明，本文中使用的術語"治療(treataient)"指進行治療的行動。而"治療(treating)"如上面的定義。因此可使用本發明化合物或組合物治療的患者包括，例如，已確診患有銀屑病、再狹窄、動脈硬化、BPH、肺癌、非小細胞肺癌、骨癌、CMML、胰腺癌、大腸癌、皮膚癌、頭頸部癌症、黑素瘤(特別是皮膚或眼內黑素瘤)、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門部的癌症、胃癌、結腸癌、乳腺癌、睪丸癌、婦科腫瘤(例如子宮肉瘤、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌或外陰癌)、卵巢癌、多發性骨髓瘤、肝細胞癌、Hodgkin病、食道癌、小腸癌、內分泌系統的癌症(例如，甲狀腺癌、副甲狀腺癌、或腎上腺癌)、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、慢性或急性白血病，特別是幼兒急性骨髓性白血病實體瘤、淋巴細胞性淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管的癌症(例如，腎細胞癌、腎盂癌)、或中樞神經系統的贅生物瘤(例如，初級CNS淋巴瘤、脊軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤或腦下垂體腺瘤)的患者。化合物1的硫酸氫鹽可作為單一治療進行施用，或除了化合物1的硫酸氫鹽之外，可包括一種或多種其它物質和/或治療。所述聯合治療可通過由同時、依次或分別給藥單獨的治療成分實現。在腫瘤內科領域中，使用各種治療形式的組合來治療各癌症病人是通常的實踐。在腫瘤內科中，除化合物1硫酸氫鹽以外，所述聯合治療的其他成分可以是外科手術、放療或化療。所述化療可涵蓋各類治療劑例如(i)抗血管生成劑例如抑制血管內皮生長因子作用的抗血管生成劑(例如抗血管內皮細胞生長因子抗體貝伐單抗(bevacizumab)[Avastin]，和VEGF受體酪氨酸激酶抑制劑例如4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(l-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉(ZD6474;WO01/32651中的實施例2)、4-(4-氟-2-甲基吲哚-5-基氧基)-6-甲氧基-7-(3-吡咯垸-l-基丙氧基)喹唑啉(AZD2171;WO00/47212中的實施例240)、瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787;WO98/35985)和SU11248(舒尼替尼(sunitinib);WO01/60814)，化合物例如公開於國際專利申請WO97/22596,WO97/30035、WO97/32856和WO98/13354的化合物和與本文中定義的化合物作用機制不同的化合物(例如利諾胺(linomide)、整聯蛋白avP3功能抑制劑、血管抑制素(angiostatin)、雷佐生(razoxin)、沙利度胺(thalidomide)、MMP-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質金屬蛋白酶9)抑制劑、和COX-II(環加氧酶II)抑制劑)，禾口(ii)血管耙向劑(例如磷酸考布他汀(combretastatin)和公開於WO00/40529、WO00/41669、WO01/92224、WO02/04434和WO02/08213中的化合物，和描述於國際專利申請公開第WO99/02166號的血管損傷劑，(例如N-乙醯基秋水仙醇-O-磷酸酯))；(iii)細胞抑制劑例如抗雌激素作用藥(例如他莫昔芬、託瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、和k)doxyfene)、雌激素受體下調劑(例如氟維司群fUlvestrant)、孕激素(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑(anastrozole)、來曲唑(letrazole)、伏氯唑(vorazole)、禾O依西美坦(exemestane))、抗孕激素、抗雄激素(例如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、和醋酸環丙氯地孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如醋酸戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、5cc-還原酶抑制劑(例如非那甾胺finasteride);(iv)抗侵襲劑(例如金屬蛋白酶抑制劑如馬立馬司他(marimastat)和尿激酶型纖溶酶原激活物受體功能抑制劑或肝素酶(Heparanese)抗體；(v)生長因子功能抑制劑(所述生長因子包括例如血小板衍生的生長因子和肝細胞生長因子)，所述抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體，(例如抗erbb2抗體曲妥珠單抗(trastuzumab)[HerceptinTM]、抗-EGFR抗體帕尼單抗(panitumumab)、抗erbBl抗體西妥昔單抗(cetuximab)[C225])，禾口由Stern等，Criticalreviewsinoncology/haematology,2005，Vol.54，ppll-29公開的任何生長因子或生長因子受體抗體)；所述抑制劑還包括酪氨酸激酶抑制劑例如表皮生長因子家族的抑制劑(例如EGFR族酪氨酸激酶抑制劑例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(吉非替尼(gefitinib)，AZD1839)、>4-(3-乙炔基苯基)-6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(埃羅替尼(eriotinib)，OSI-774)和6-丙烯醯氨基-^(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI1033))和erbB2酪氨酸激酶抑制劑例如拉帕替尼(lapatinib)、肝細胞生長因子族抑制劑、血小板衍生的生長因子族抑制劑例如伊馬替尼(imatinib)、絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑(例如Ras/Raf信號抑制劑例如法呢基轉移酶抑制劑，例如索拉非尼(sorafenib)(BAY43-9006))、通過MEK禾口/或AKT激酶的細胞信號傳導抑制劑、c-kit抑制齊U、abl激酶抑制劑、IGF受體(胰島素樣生長因子)激酶抑制劑；極光激酶抑制劑(例如AZD1152、PH739358、VX-680、ML觸54、R763、MP235、MP529、VX-528和AX39459)和細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑例如CDK2禾n/或CDK4抑制劑；(vi)用於腫瘤內科的抗增殖/抗腫瘤藥及其組合，例如抗代謝物(例如抗葉酸劑例如甲氨蝶呤、氟嘧啶例如5-氟脲嘧啶、替加氟(tegaflir)、嘌呤和腺苷類似物、和阿糖胞苷、羥基脲或例如，特別地公開於歐洲專利申請第239362號中的抗代謝物之一例如N-(5-[N-(3，4-二氫-2-甲基-4-氧代喹唑啉-6-基甲基)-^甲基氨基-2-噻吩甲醯基)丄-穀氨酸；抗腫瘤抗生素(例如蒽環類抗生素例如阿黴素、博萊黴素、多柔比星、道諾黴素、表柔比星和伊達比星、絲裂黴素-C、放線菌素、和光神黴素)；鉑衍生物(例如順鉑、和卡鉑);烷基化試劑(例如氮芥、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、白消安、環磷醯胺、異環磷醯胺、亞硝基脲、和噻替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物鹼例如長春新鹼、長春花鹼、長春地辛、和長春瑞濱，以及紫杉類例如紫杉醇和多烯紫杉醇)；拓撲異構酶抑制劑(例如表鬼臼毒素例如依託泊苷和替尼泊苷、安吖啶、託泊替康、喜樹鹼和依利替康)；酶(例如天冬醯胺酶)；和胸苷酸合成酶抑制劑(例如雷替曲塞)；和其它類型的化療劑，包括(vii)生物應答調節劑(例如幹擾素)；(viii)抗體(例如依決洛單抗edrecolomab);(ix)反義療法，例如定向於上述靶的反義療法，例如ISIS2503，抗-ras反義療法；(x)基因治療方法，包括例如置換異常基因例如異常p53或異常BRCA1或BRCA2的方法、GDEPT(基因定向酶前體藥物療法)方法例如使用胞嘧啶脫氨酶、胸苷激酶或細菌的硝基還原酶的方法，和提高病人對化療或放射治療耐性的方法例如多藥物耐藥基因治療；和(xi)免疫療法，包括例如提高患者腫瘤細胞免疫原性的體外和體內方法，例如用細胞因子例如白介素2、白介素4或粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子轉染，降低T細胞無能的方法，使用轉染的免疫細胞例如細胞因子轉染的樹狀細胞的方法，使用細胞因子轉染的腫瘤細胞系的方法和使用抗個體遺傳型抗體的方法。例如，化合物1的硫酸氫鹽可與有效量的一種或多種選自抗血管生成劑、信號轉導抑制劑、和抗增殖劑的物質組合使用。在具體的實施方案中，抗血管生成劑，例如MMP-2(基質金屬蛋白酶2)抑制劑、MMP-9(基質金屬蛋白酶9)抑制劑、和COX-II(環加氧酶II)抑制劑，可與本發明的化合物1的硫酸氫鹽和本文所述的藥物組合物組合使用。可用的COX-II抑制劑的實例包括CELEBREX(alecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)、和羅非考昔(rofecoxib)。可用的基質金屬蛋白酶抑制劑的實例描述於WO96/33172、WO96/27583、WO98/07697、WO98/03516、WO98/34918、WO98/34915、WO98/33768、WO98/30566、WO90/05719、WO99/52910、WO99/52889、WO99/29667、美國專利5,863,949、和美國專利5,861,510，其全部在此引入作為參考。適合的MMP-2和MMP-9抑制劑是幾乎不或完全不抑制MMP-l活性的MMP-2和MMP-9抑制劑。特別地，使用相對於其他基質金屬蛋白酶(即，MMP-1、MMP-3、MMP-4、MMP-5、MMP-6、MMP-7、MMP畫8、MMP-IO、MMP-ll、MMP-12、和MMP-13)選擇性抑制MMP-2禾卩/或MMP-9的MMP-2和MMP-9抑制劑。可用於本發明的MMP抑制劑的具體實例為AG-3340、R032-3555、和RS13-0830。因此，本發明的另一方面，化合物1的硫酸氫鹽與在上述(i)-(xi)中列舉的抗腫瘤劑之一的組合。本發明的另一方面提供化合物1的硫酸氫鹽與一種或多種在上述(i)-(xi)中列舉的抗腫瘤劑的組合。本發明的另一方面提供化合物1的硫酸氫鹽與上述(i)-(xi)中列舉的抗腫瘤劑中的任一類的組合。在本文中，使用術語"組合"時，應當理解為是指同時、分別或依次給藥。在本發明的一個方面中，"組合"指同時給藥。在本發明的另一個方面中，"組合"指分別給藥。在本發明的另一個方面中，"組合"指依次給藥。當依次或分別給藥時，第二成分給藥的延遲應不會導致失去組合的有利效果。根據本發明的另一方面，提供了包含化合物1的硫酸氫鹽以及選自上述(i)-(xi)中列舉的抗腫瘤劑之一的組合的藥包(kit)。根據本發明的另一方面，提供了包含下述的藥包a)第一單元劑型的形式的化合物1的硫酸氫鹽；b)選自上述(i)-(xi)中列舉的抗腫瘤劑之一；其為第二單元劑型的形式；禾口c)用於容納所述第一和第二劑型的容納裝置。已發現化合物1在下列試驗中具有活性。在大腸桿菌中表達N-端6His-標記、組成型活性MEK1(2-393)並且通過常規方法純化蛋白質(Ahn等,Scz'^ce1994,265:966-970)。MEK1的活性通過在MEK1存在下，測定"y-33P-磷酸從y-"P-ATP到在大腸桿菌中表達並通過常規方法純化的N-端His標記的ERK2上的引入進行評價。試驗在96-孔聚丙烯板中進行。溫育混合物(100pL)包含25mMHepes、pH7.4、10mMMgCl2、5mM卩-甘油磷酸酯、100piM原釩酸鈉、5mMDTT、5nMMEKl、禾tU^MERK2。將抑制劑懸浮在DMSO中，在1%DMS0的最終濃度下進行所有反應，包括對照。通過添加10pMATP(含0.5KiCi，"P-ATP/孔)引發反應並在室溫溫育45分鐘。添加等體積的25%TCA以停止反應並沉澱蛋白質。將沉澱的蛋白質收集到玻璃纖維B過濾板上，並用TomtecMACHIII收集器(harvestor)洗掉過量標記的ATP。在添加30(iL/孔的PackardMicroscint20前，將板進行風乾，並用PackardTopCount對板計數。在此試驗中，化合物1顯示小於50微摩爾的IC50。實施例為了對本發明進行說明，將下列實施例包括在內。然而，應當理解這些實施例不限制本發明，並且僅旨在建議實施本發明的方法。給出了所做實施例的收率，其可能通過進一步的改進而提高。HNMR譜(400MHz)以TMS(0.00ppm)為標準、13CNMR譜(IOOMHz)以NMR溶劑(39.5ppm)為標準，WFNMR譜以三氯氟甲烷(O.OOppm)為標準。採用DRIFTS取樣技術，在整個4,000-400cm—1的中紅外光譜區內以多種方式(包括自所述物質在粉末狀KBr中的2重量％分散體中)在NicoletMagna860ESPFTIR光譜儀上獲得FTIR光譜。實施例l化合物1的硫酸氫鹽的製備formulaseeoriginaldocumentpage17在0-5°C下，將硫酸(12.3mL,0.226mol)添加到攪拌的6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺(100g，0.206mol)(可以如WO03/077914的實施例10中所述得到，其在此引入作為參考，並可如下所述得到)在2-丁酮(680mL)和7jC(115mL)的混懸液中，隨後添加水(5mL)，將溫度保持在10。C或以下。將攪拌的混合物加熱到65。C，並在過濾除去任何雜質前保持30分鐘。過濾器用2-丁酮(85mL)和水(15mL)的混合液洗滌。將合併的濾液加熱到72。C，加入2-丁酮(500mL)，將溫度保持在60-72°C。在大氣壓下將生成的混合物進行蒸餾(大概的蒸餾溫度73-74。C)直至收集到500mL餾出物。添加另一等份的2-丁酮(500mL)，將混合物的溫度保持在70°C以上。將生成的混合物再次蒸餾直至收集到250mL的餾出物。在約1小時內將混合物冷卻到0-5。C。將生成的漿液過濾、用2-丁酮(240mL)洗滌並在減壓和50°C下乾燥直至達到恆重，得到呈米色的結晶固體6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺硫酸氫鹽(103.5g、0.186mol，90%收率)。畫R(400MHz,D6DMSO)53.58(2H,t,CH2OH)、3.89(2H,t,CH2ON)、3.99(3H,s,CH3)、6.47(1H，dd，ArH)、7.29(1H,dd,ArH)、7.63(1H，d，ArH)、7.91(1H，s,ArH)、7.96(3H,br，ROH，NH，SOH)、8.10(1H，br,ArNH)、8.94(1H,s,NCHN)、11.79(1H，s，ONH)。13CNMR(100MHz,D6DMSO)S32.1(CH3)、58.5(CH2OH)、77.3(CH2ON)、跳2(CH)、109.6(CBr)、115.8(CH)、120.6(CCl)、122.0(C)、125.0(CC=0)、129.4(C)、130.5(CH)、131.1(CH)、132.3(C)、140.6(C)、145.8(CF)、146.5(CH)、164.2(C=0)。紅外分析的結果示於圖2。光譜歸屬總結於表l。__波數(cm'1)歸屬_15^包括伯醇基團的O-H伸縮振動以及芳香仲胺和仲醯胺基團的N-H伸縮振動3,200-2,700包括芳環和苯並咪唑基團的-C-H伸縮振動以及脂肪族C-H伸縮振動2，700-2，300包括苯並咪唑l:l硫酸鹽基團的多種NHT伸縮振動1,673仲醯胺基團的OO伸縮振動其中羰基受不同環境例如氫1,653鍵影響1,640-1,370包括OC芳環伸縮振動、苯並咪唑基團的OC和ON伸縮振動、伯醇基團的O-H形變振動和脂肪族C-H形變振動1，570仲醯胺基團的CNH組合譜帶波數(cm'1)歸屬包括芳香仲胺基團的CNH彎曲振動芳基C-F伸縮振動苯並咪唑1:1硫酸鹽基團的不對稱SCV伸縮振動包括伯醇基團的C-O伸縮振動和芳基C-Br伸縮振動苯並咪唑1:1硫酸鹽基團的不對稱S03'伸縮振動包括1，2,4-三取代芳環和苯並咪唑基團的C-H搖擺振動和C-C環彎曲振動包括苯並咪唑l:l硫酸鹽基團的S-O(H)伸縮振動實施例1A化合物1的硫酸氫鹽的製備將硫酸(1.52mL、27.86mmol)添加到攪拌的6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基乙氧基)-醯胺(10g、0.0214mol)(可以如WO03/077914的實施例10所述得到，其在此引入作為參考並如下所述)在四氫呋喃(THF)(62mL)和水(8mL)的混懸液中，同時將溫度保持在10°C或以下。將攪拌的混合物加熱到65°C，並在過濾除去任何雜質前保持30分鐘。然後，將THF(150mL)添加到混合物中，將溫度保持在60°C以上。隨後在約2小時內將混合物冷卻到0-5。C。將生成的漿液過濾，用THF(30mL)洗滌並在減壓及50°C下乾燥直至達到恆重，得到呈米色的結晶固體6-(4-溴-2-氯苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基)-醯胺硫酸氫鹽(9.81g、0.17mol，收率82%)。所述物質與上述實施例1中製備的物質相同。實施例1B6-(4-溴-2-氯-苯基氨基V7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基乙氧基)-醯胺的製備步驟A:2丄4-三氟-5-硝基-苯甲酸:將125mLH2S04裝入3升三頸圓底燒瓶。添加發煙硝酸(8.4mL,199mmol)並輕輕地攪拌混合物。在90分鐘內將2，3,4-三氟苯甲酸(25g,142mmol)以5g每份進行添加。將暗褐色黃色溶液攪拌60分鐘，此時反應完全。將反應混合物傾入l升冰水混合物中1，5061,2131,189l,層-1,000l，Oll920-600888並用乙醚提取(3x600mL)。將合併的提取物乾燥(MgS04)並在減壓下濃縮而得到黃色固體。將固體懸浮於己烷中並攪拌30分鐘，此後，將其過濾得到29g(92。/。)純淨的、呈類黃色固體的期望產物MSAPCI(-)m/z220(M-l)檢出。步驟B:2.3-二氟-4-氨基-5-硝基-苯甲酸:在0。C及攪拌下，將氫氧化銨溶液(~30%水溶液)(35mL、271mmol)添加到2，3，4-三氟-5-硝基-苯甲酸(15g、67.8mmol)在30ml水中的溶液中。一旦完成氫氧化銨添加，就在攪拌下將反應混合物升溫到室溫。2.5小時後，將反應混合物冷卻到0°C並小心地添加濃HC1直至反應混合物的pH為0。將反應混合物用水(30mL)稀釋並用乙醚(3x50mL)提取。將合併的有機提取物乾燥(MgS04)並在減壓下濃縮，得到14g(95。/。)的純期望產物MSAPCI(-)m/z217(M-l)檢出。步驟C:4-氨基-2，3-二氟-5-硝基苯甲酸甲酯:在0°C和氮氣氛下，將四甲基矽垸(TMS)重氮甲烷在己烷(6.88mL、13.75mmol)中的2M溶液添加到4-氨基-2,3-二氟-5-硝基苯甲酸(2.00g、9.17mmol)在25mL的4:1四氫呋喃(THF):MeOH的混懸液中。一旦添加結束，就將反應混合物升溫到室溫。0.5小時後，通過小心地添加乙酸將過量的TMS重氮甲烷破壞。然後將反應物在減壓下濃縮並真空乾燥，1.95g(92%)的純期望產物MSAPCI(-)m/z231(M-l)檢出。步驟D:4-氨基-3-氟-5-硝基-2-苯基氨基-苯甲酸甲酯:將4-氨基-2，3-二氟-5-硝基苯甲酸甲酯(23.48g、101.1mmol)懸浮於二甲苯(125ml)中並添加苯胺(92ml、1011mmo1)。在！^下，將反應混合物在125°C下攪拌16小時。將反應混合物冷卻到室溫，固體從溶液中沉澱出來。通過過濾收集固體並用二甲苯洗滌，隨後用乙醚洗滌。回收22.22g(72.78mmol)純期望產物的黃色固體。將濾液在減壓下濃縮，再次溶解在二氯甲烷中並經由矽膠塞用二氯甲烷洗脫。將期望的組分在減壓下濃縮，得到棕色固體，用乙醚研磨(triturated)，得到5.47g(17.91mmol)純期望產物的黃色固體。合併的產物收率為27.69g(卯。/。)。MSAPCI(-)m/z304(M-l)檢出。步驟E:7-氟-6-苯基氨基-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯:在40。C和N2下將4-氨基-3-氟-5-硝基-2-苯基氨基-苯甲酸甲酯(16.70g、54.71mmol)、甲酸(250ml、6.63mol)和20%Pd(OH)2/C(9.00g、16,91匪ol)在乙醇(250mL)中攪拌2小時，隨後在95°C下攪拌16小時。將反應混合物冷卻到室溫並經由Cdite過濾，用乙酸乙酯漂洗。將濾液在減壓下濃縮，得到黃色固體。將固體用乙醚研磨，得到13.47g(86。/。)呈棕褐色固體的期望產物。MSAPCI(+)m/z286(M+l)檢出；MSAPCI(-)m/z(M-l)檢出。步驟F:6-(4-溴-苯基氨基)-7-氟-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯:將7-氟-6-苯基氨基-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯(4.99g、17.51mmol)溶於A^V-二甲基甲醯胺(275mL)中。以固體形式添加N-溴代丁二醯亞胺(3.15g、17.70mmol)並將反應混合物在室溫和N2下攪拌。30分鐘後，通過添加飽和亞硫酸氫鈉水溶液終止反應混合物。然後，將反應混合物倒入分離漏鬥，用水和乙酸乙酯稀釋並分層。水層用乙酸乙酯提取。將合併的有機提取液用水洗滌三次，用鹽水洗滌一次，然後進行乾燥(Na2S04)並在減壓下濃縮，生成6.38g(100%)呈棕褐色固體的純的期望產物。MSESI(+)m/z364、366(M+Br模式)檢出。步驟G:6-(4-溴-2-氯-苯基氨基V7-氟-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯:將6-(4-溴-苯基氨基)-7-氟-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯(6.38g、17.51mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(275mL)中。以固體形式添加N-氯代丁二醯亞胺(2.36g、17.70mmol)，將反應混合物在室溫及N2下攪拌直至反應完全(5-6天)。通過添加飽和亞硫酸氫鈉水溶液終止反應混合物，得到混懸液。通過過濾收集生成的固體，用水和乙醚洗滌並在減壓下乾燥，生成6.07g(87。/。)呈米色固體的純的期望產物。MSESI(+)w/z398,400(M+Br模式)檢出。步驟H:6-(4-溴-2-氯苯基氨基V7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯和6-(4-溴-2-氯苯基氨基)-7-氟-1-甲基-1H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯:將6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3&苯並咪唑-5-羧酸甲酯(15011^、0.38mmo1)、碘代甲垸(28nL、0.45mmol)和碳酸鉀(78mg、0.56mmol)的二甲基甲醯胺(1.5mL)溶液在75。C下攪拌1小時。用乙酸乙酯稀釋反應混合物，用飽和碳酸鉀水溶液(2x)、鹽水洗滌並乾燥(Na2S04)。快速柱色譜(20:1二氯甲烷/乙酸乙酯)得到56mg(36。/。)較易流動的呈白色固體的6-(4-溴-2-氯苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯。9FNMR(376MHz,CD3OD)-133.5(s)。MSAPCI(+)m/z412，414(M+,Br模式)檢出。還分離了54mg(35%)呈白色固體的6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-l-甲基-lH-苯並咪唑-5-羧酸甲酯。19FNMR(376MHz，CD3OD)—139.9(s).MSAPCI(+)附/z412，414(M+，Br模式)檢出。步驟L6-(4-溴-2-氯-苯基氨基V7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸:將6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸甲酯(56mg、0.14mmol)溶於2:1THF/水(3mL)中並加入NaOH(0.55ml，1,0M水溶液，0.55mmol)。攪拌2小時後，通過旋轉蒸發將反應物減少到初始體積的四分之一，並將剩餘物用水稀釋到50mL。通過加入1.0MHCI水溶液將水溶液酸化到pH2，用1:1四氫呋喃/乙酸乙酯(3x)提取，乾燥(Na2S04)並在減壓下濃縮，得到43mg(79°/。)呈米色固體的純的羧酸。MSESI(+);w/z397,398(M+，Br模式)檢出。步驟j:6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-31^苯並咪唑-5-羧酸(2-乙烯氧基-乙氧基V醯胺:將6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2.00g、5.0mmol)、0-(2-乙烯氧基-乙基)-羥胺(0.776g、7.5mmol)、HOBt(0.88g、6.5mmol)、三乙胺(1.61mL、2.3mmol)和EDC1(1.3g、6.5mmol)溶於二甲基甲醯胺(52mL)中，並在室溫下攪拌48小時。用乙酸乙酯稀釋反應混合物，用水(3x)、飽和碳酸鉀(2x)、飽和氯化銨(2x)、鹽水洗滌，乾燥(Na2S04)，在減壓下濃縮至米色固體。用乙醚研磨固體，得到2.18g(90y。)呈米色固體的期望產物。MSESI(=)m/z483，485(M+Br模式)檢出。步驟K:6-(4-溴-2-氯-苯基氨基V7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基-乙氧基V醯胺:將鹽酸(14mL，1.0M水溶液，14mmol)添加到6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-乙烯氧基乙氧基)-醯胺(2.18g、4.50mmol)在乙醇(50mL)中的混懸液中，並將反應混合物攪拌24小時。通過旋轉蒸發將反應混合物濃縮至幹，並將固在3:1乙酸乙酯/四氫呋喃和飽和碳酸鉀間進行分配。將水相用3:1乙酸乙酯/四氫呋喃(3x)提取，乾燥合併的有機物(Na2S04)，並濃縮，得到2.11g(100。/。)呈米色固體的6-(4-溴-2-氯苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯並咪唑-5-羧酸(2-羥基乙氧基)-醯胺。MSESI(+)m/z457，459(M+，Br模式)檢出。！HNMR(400MHz,MeOH-d4)58.26(s，1H)、7.78(s，1H)、7.57(d,1H)、7.24(dd,1H)、6.40(dd,1H)、3.86(s，3H)、3.79(m，2H)、3.49(m,2H)。19FNMR(376MHz,MeOH-d4)-133.68(s)。實施例2硫酸氫鹽物理性質的研究將實施例1的產物進行下列試驗以測定其物理性質。粉末X-射線衍射(PXRD)全部樣品在BrukerD5000衍射儀上試驗。X-射線3^末衍射光譜通過將結晶鹽樣品置於Siemens矽單晶(SSC)晶片載片上，並藉助於顯微鏡載玻片將樣品展開為薄層進行測定。將樣品以30轉每分進行旋轉(以便改進計數統計)，並用由在40kV和40mA下用波長1.5406埃操作的銅長細聚焦管產生的X-射線照射。將校準的X-射線源穿過設定在V20的自動變化的發散狹縫，反射的輻射定向穿過2111111防散射狹縫和0.2111111探測器狹縫。在6-6模式中，在2度-40度29的範圍內，每0.02度的20增量(連續掃描模式)將樣品曝露1秒。運行時間為31分鐘41秒。所述裝置裝有閃爍計數器作為檢測器。通過DellOptiplex686NT4.0Workstations，使用Diffract+軟體操作進行控制和數據收集。在292—40。的範圍內，以260.02。的增量，每增量4s的方式收集數據，並在表2中按源自用固定狹縫測定的衍射圖的相對強度進行分類。表2tableseeoriginaldocumentpage23掃描結果示於圖1，其中上面的灰線表示化合物1的硫酸氫鹽的XRPD，下面的黑線表示游離形式。最強峰(從最大強度開始)列於表3。24.59°處的峰特別強。表3tableseeoriginaldocumentpage24x-射線粉末衍射領域的技術人員將認識到峰的相對強度可受例如尺寸大於30微米的顆粒和非單一長徑比的影響，其可影響樣品分析。技術人員還將認識到反射的位置可受樣品安裝在衍射儀中的精確高度和衍射儀的零點校準的影響。樣品的表面平面度也可能具有小的影響。因此，給出的衍射圖數據不能視作絕對值(更多信息參見Jenkins,R.&Snyder,R丄.,"IntroductiontoX畫RayPowderDiffiactometry",JohnWiley&Sons,1996)。體內研究在分散製劑中鹽與游離鹼對比的研究在狗體內進行研究，在各種分散製劑的藥學可接受的分散劑中含有游離態或硫酸氫鹽形式的化合物1，繼給藥7.5mL的各種分散製劑中的150mg游離鹼當量口服劑量之後，測定在禁食的狗內化合物1的血漿水平。在三個給藥日中的每一個，以150mg的單次劑量向體重12-17kg，約2-6歲的beagle犬口服給藥。各給藥日相隔1周。所有製劑在給藥前即時製備通過經由10mL—次性注射器將7.5mL適合的分散溶液添加到包含150mg游離鹼當量的適合的藥物形式的小瓶中，壓蓋並旋混30秒以形成分散劑。使用一次性注射器將分散液從小瓶移出，並經由通入胃中的強飼管給動物服藥。將小瓶漂洗兩次，對於兩次漂洗中的每次，通過經由20mL—次性注射器添加單獨的15mL等份的水(總漂洗體積二30mL)進行漂洗，加蓋，旋混5秒，使用一次性注射器將洗滌液從小瓶移出，並經由強飼管給動物服藥。每天給狗餵食約400g的SpecialDietServicesLaboratoryDietA，並且水不限量。在給藥前的即刻及第0.5、1、2、3、4、5、6、8、12、18、24、36和48小時自頸靜脈取肝素鋰試管中的全血(2mL)。將血液以3000rpm離心15分鐘，並將血漿移入普通血液試管並在-20。C下儲藏直至分析。將血漿(50mcL)進行化合物1濃度分析。由於兩隻狗在給藥後立即嘔吐，因此將其從分析中排除。口服給藥後的化合物1的平均血漿濃度曲線示於圖3，其中由A表示的線說明包括化合物1的硫酸氫鹽的製劑，而由x表示的線顯示在相同製劑中化合物1游離鹼的結果。看起來製劑的改變在對暴露具有相對小的影響(結果未顯示)。然而，當化合物1以硫酸氫鹽的形式給藥時，在暴露中產生約4-8倍的顯著提高。上述說明僅視為說明本發明的原理。而且，由於許多的修改和改變對本領域的技術人員而言是顯而易見的，所以不應該將本發明限制為如上述所示的確切結構和方法。因此，所有適合的修改和等價物可歸為(resort)落在如所附權利要求書所定義的本發明範圍內。當用於本說明書及所附的權利要求中時，單詞"包含"、"包括"指表示所述特徵、整體、組分、或步驟的存在，但不排除存在或添加一種或多種其它特徵、整體、組分、步驟、或其組合。權利要求1.化合物1的硫酸氫鹽。2.如權利要求1所述的化合物1的硫酸氫鹽，其為無水形式。3.如權利要求1所述的化合物1的硫酸氫鹽，其為溶劑化物的形式。4.如前述權利要求之一所述的化合物1的硫酸氫鹽，其為晶體。5.如權利要求4所述的化合物1的硫酸氫鹽，其中所述化合物1的硫酸氫鹽的X-射線粉末衍射圖具有至少一個在約24.59°處的特徵峰。6.如權利要求5所述的化合物1的硫酸氫鹽，其中所述化合物1的硫酸氫鹽的X-射線粉末衍射圖在約20等於24.59。、20.97°、23.99°、27.65。、12.24。、23.49°、24.30°、17.02。、25,91,22.50。處具有特徵峰。7.如權利要求1所述的化合物1的硫酸氫鹽，其粉末X-射線衍射圖基本上與圖1中所示的X-射線粉末衍射圖相同。8.如權利要求1或2所述的化合物1的硫酸氫鹽，其為非晶體形式。9.用於製備如權利要求1-8之一所述的化合物1的硫酸氫鹽的方法，所述方法包括(i)使化合物1在有機液體中的漿液與至少化學計量量的硫酸和水反應；(ii)從生成的溶液中回收鹽；禾口(m)隨後，如果期望或必需，形成其溶劑化物。10.如權利要求9所述的方法，其中步驟(i)中添加的水的量限於確保鹽形成所必需的量。11.如權利要求9或10所述的方法，其中步驟(i)在40-80°C的溫度下進行。12.如權利要求9-ll之一所述的方法，其中所述有機液體是C,-6烷基酮。13.如權利要求9-12之一所述的方法，其中在步驟(ii)中通過冷卻反應混合物，任選地添加其它有機液體以使得硫酸氫鹽沉澱來回收硫酸氫鹽。14.如權利要求1-8之一所述的化合物1的硫酸氫鹽作為治療由MEK介導的疾病狀態的藥物的應用。15.如權利要求l-8之一所述的化合物1的硫酸氫鹽在製備用於治療由MEK介導的疾病狀態的藥物中的應用。16.用於治療需要所述治療的恆溫哺乳動物中由MEK介導的疾病狀態的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給藥有效量的如權利要求1-8之一所述的化合物1的硫酸氫鹽。全文摘要本發明涉及化合物1的硫酸氫鹽及其溶劑化物、晶體形式和非晶體形式，以及它們的製備方法。文檔編號A61P35/00GK101360718SQ200680051479公開日2009年2月4日申請日期2006年12月12日優先權日2005年12月21日發明者C·J·斯誇爾,G·夏爾馬-辛格,J·G·福特,J·德馬泰,M·佩爾韋茲,P·A·迪金森,R·A·斯託裡,R·J·羅伯茨,莊宗勳申請人:陣列生物製藥公司;阿斯利康公司