具有鄰位絡合官能度的螯合劑及其複合物的製備方法

2023-06-05 16:42:41

>金屬／配位體摩爾比％複合量實例XVI實例XVIIABDTPAEDTA199959798109493958610084909278250--90874850075797016實施例ⅩⅧ在pH6.5，0.5M乙酸鈉緩衝溶液中製得了0.18M/L1-(對氨基苄基)二亞乙基三胺五乙酸(ABDTPA)溶液和同為0.18M/L的實施例12配位體溶液。然後，用1.5當量釔-90(0.03M/L氯化釔)處理上述溶液。所得複合物的pH為5-6。使該複合物通過1ml體積的ChelexTm樹酯(Bio-RadLaboratories)床除去過量的Y-90。經過純化的複合物濃度為0.0013M。將適量的該溶液加到含有1.7×109摩爾醛的CC-46單克隆抗體上，得到40∶1複合物-抗體。暴光1小時後，加入過量236摩爾(相對於抗體)NaCNBH3，將該溶液放置約1小時。此後，通過SephadexTmG-25膠過濾從未鍵合的複合物中分離出抗體(和任何以共價鍵連接的複合物)。該方法製得了每個抗體平均含5.0分子1-(對氨基苄基)-二亞乙基三胺五乙酸的複合物，和每個抗體平均含5.4分子實施例12配位體的複合物。實施例ⅩⅨ為證實實施例ⅩⅧ抗體-複合物結合物的惰性，按下列方法採用過量的二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)激發上述結合物。將經過純化的抗體-複合物加到pH7.4的HEPES緩衝液(N-2-羥乙基哌嗪-N′-2-乙磺酸)中，用適量的0.1DTPA溶液(pH7.4)處理之，以保證與連接到抗體上的複合物相比，DTPA的摩爾數過量1000倍。1小時後，移出一等份，並通過膠濾使抗體-複合物結合物與低分子物質分開。結果表明ABDTPA系統失去大於98%的釔，而採用實施例12的配位體系統則失去約39%的釔。實施例ⅩⅩ2，6-雙｛〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(氨基)苯酚，複合物的製備在1ml的小瓶中，將放射153Sm(200μl3×104M溶液，溶劑是0.1MHCl，6×105mmole)和「冷」SmCl3·6H2O(4.8mg，1.31×102mmole)合併，由此製得溶液。將該溶液加到由實施例11方法製得的2，6-雙〔(2-〔雙(羧甲基)〕氨基乙基)(羧甲基)〕氨基甲基-4-(乙醯氨基)苯酚(3.2mg，5.31×103mmole)中。然後，加入NaOH(40μl，1.0M溶液)將pH調至7。採用SephadexTmC-25方法測得百分複合量為68%。採用陰離子交換層析(Q-SepharoseTm，1.5cm×21cm，0至1MNaCl洗脫，時間30分鐘，速度2ml/分，在285nm處檢測)，使上述複合物純化。合併含複合物的洗脫液(每份1ml，共6ml)，經測定，百分複合量為95%。實施例ⅩⅪ2，6-雙｛〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(氨基)苯酚，複合物與CC-46單克隆抗體結合。將碳酸氫鈉(60mg，7.14×101mmole)置於1打蘭玻璃小瓶中，加入由實施例ⅩⅩ製得的複合物溶液(1ml，約8.8×104mmole)。加入置於氯仿(1ml)中的二氯硫化碳(10μl，1.31×101mmole)，並將該小瓶密封。將該混合物振蕩15分鐘，此後，用氯仿(每次1ml)將該水層洗滌兩次。經測定百分複合量為96%。將上述硫代異氰酸複合物(100μl，約8.8×105mmole)與CC-46單克隆抗體(100μl，8mg/ml溶液，約5.3×106mmole)混合，放置24小時。通過篩析色譜法測定結合在抗體上的複合物量為46%。實施例ⅩⅫ2-〔雙(2-｛〔(雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸和2-〔2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基(羧甲基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，複合物的製備。將266mg冷凍乾燥的固體溶解在1ml水中，製成實施例7配位體的溶液。取出33.85μl該溶液，用1ml濃度為3×104M的SmCl3溶液溶劑是含有痕量放射性153Sm的0.1NHCl)處理前述溶液。用50(w/w)的NaOH溶液將該複合物溶液的pH調至13左右，然後再用1.0NHCl調至pH7.5左右。按實施例16至33所述方法測定，被複合的Sm百分含量為100%。為證實複合物的惰性，將2個500μl等份的複合物溶液置於兩個小瓶中。用1-2μl0.1NHCl處理一個樣品直到pH降低為止，用0.1NNaOH處理另一樣品，以使其pH升高。在每個pH變化點，將該複合物放置5-10分鐘，然後將它們作為樣品，按照實施例16至33所述方法在該pH值測定其百分複合量。表5實施例ⅩⅩⅢ2-〔｛2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基｝(羧甲基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，複合物的製備將13.9mg帶棕色的固體溶解在772μl水中，製成實施例8配位體的溶液。將500μl該配位體溶液溶解在1ml事先用放射性153Sm處理過的濃度為3×104M的SmCl3溶液中(溶劑是0.1NHCl)，製得複合物。加入1.0NNaOH，將該複合物溶液調至pH7左右。按實施例16至33方法測得百分複合量為96%。為證實該複合物的惰性，將2個500μl等份的複合物溶液分置於小瓶中。用1-2μl1.0NHCl處理其中的一份，直到pH降低為止，用0.1N，1.0N和50%(w/w)NaOH處理另一份，以使pH上升。在每一pH變化點將該複合物放置約5分鐘，然後將它們作為樣品，按實施例16至33方法測定百分複合量。結果列於下表。表6生物分布數據實施例將配位體和金屬溶液混合，然後調至pH7-8，由此製得複合物。採用陽離子交換層析法確定複合於配位體上的金屬量。游離金屬留在樹酯上，而複合物金屬則不會留下。給3隻SpragueDawley鼠經尾靜脈注射100μl複合物，注射後兩小時，採用頸脫臼法處死大鼠，採集組織樣品，將該組織稱重，採用NaI井計數儀測定每一組織的放射量，並將它們與標準品比較，按照血液重量佔動物體重6.5%測定血液中的百分劑量。肌肉佔體重46%，骨骼中的量是股骨中百分劑量的25倍。下列實施例的不同之處在於配位體，配位體的量和所採用的金屬量。採用非放射性金屬得到所期望的配位體/金屬比，採用痕量放射性金屬得到生物分布。實施例ⅩⅩⅣ將實施例10的配位體與Sm-153溶液混合。Sm的濃度是3×104M，所採用的配位體過量300倍摩爾。生物分布表明骨骼中52.7%，肝臟中0.12%，脾臟中0.005%，肌肉中0.23%，血液中0.05%。實施例ⅩⅩⅤ將實施例10配位體與Ho-166複合。Ho的濃度是3×104M，製劑中含有過量300倍摩爾的配位體。生物分布表明骨骼中52.9%，肝臟中0.26%，脾臟中0.007%，肌肉中1.1%，血液中0.09%。實施例ⅩⅩⅥ將實施例10配位體與Sm-153複合，所採用Sm的濃度是3×104M，配位體過量10倍摩爾。生物分布表明骨骼中48.5%，肝臟中1.3%，脾臟中0.01%，肌肉中0.73%，血液中0.18%。實施例ⅩⅩⅦ按照與大鼠相同的方法，給兔子注射含有Y-90(Y濃度為3×104M)，實施例10配位體(摩爾量過量10倍)的製劑。測定其活性表明最小吸收為骨骼中59%，肝臟中1.1%，脾臟中0.19%，肌肉中1.5%，血液中0.68%。實施例ⅩⅩⅤⅢ將實施例1配位體與劑量的Y-90複合。Y濃度是3×104M加入的配位體摩爾過量10倍。大鼠生物分布(兩隻大鼠的平均值)表明骨骼中56.1%，肝臟中0.87%，脾臟中0.03%，肌肉中0.78%，血液中0.57%。實施例ⅩⅩⅨ採用在右側鄰近骨處患有骨肉瘤，並且行走有明顯殘疾的狗。採用實施例10配位體和Sm-153溶液製備複合物。Sm的濃度是3×104M，所採用的配位體過量300倍摩爾。Sm-153的放射性比度是30mCi/ml。按照每公斤體重0.95mCiSm-153的劑量給狗靜脈注射這一複合物。注射1星期後，狗的步態明顯改善。權利要求1.製備式(Ⅰ)所示具有鄰位絡合官能度的雙官能度螯合劑或其藥物上可接受的鹽的方法，式(Ⅰ)為式中，Z是能以共價鍵與抗體片段或合成連接體相連的親電或親核性殘基，上述合成連接體不應紡礙Z與放射性核素形成複合物，同時還可以連接在抗體或抗體片段上，X是氫，C13烷基或CR3R4COOH；R1，R2，R3和R4各自獨立為氫，羥基，CO2H，或C13烷基；R5是氫或(CR1R2)nCR3R4B；B是線型或支鏈胺或聚亞烷基按，上述胺中至少有一個氨基氫被CR3R4COOH基團取代；n是0或1；該方法的特徵在於，A)在苛性鹼和適宜溶劑的存在下，於20℃(或更低)，由式(A)化合物或其藥物上可接受的鹽與化合物B及醛或醛的等價前體反應，然後加熱並分離所期式Ⅰ產物，式(A)為式中，Z的定義如前，X′是氫；R5是氫或(CR1R2)nCR3R4T，式中R1，R2，R3和R4各自獨立為氫，羥基，CO2H或C13烷基，n是0或1，T代表線型或支鏈胺或聚亞烷基胺，其中至少有一個氨基氫被CR3R4CO2H基團取代；在化合物B中，B代表線型或支鏈胺或聚亞烷基胺，其中至少存有一個氨基氫；B)在pH9(或更高)，在苛性鹼存在下，於20℃(或更低)，由步驟(A)所得產物與滷代(CR1R2)nCR3R4酸反應，得到式Ⅰ化合物，其中，R1，R2，R3和R4中至少有一個是CO2H；C)用NaOH/H2O，將式中Z是NHC(O)CH3的步驟(B)產物水解，得到式中Z是NH2的式Ⅰ產物；D)在苛性鹼中，在pH9(或更高)，於20℃(或更低)，由步驟(A)所得產物與乙醇腈反應，然後用HCl/H2O使氰基水解，得到式中R1，R2，R3和R4中至少有一個是CO2H的式Ⅰ產物；E)用DCl/D2O，通過加熱，使式中Z是NHC(O)CH3的步驟(A)產物水解，得到式中Z是NH2的式Ⅰ產物；或F)由式中Z是NH2的，從步驟(A)至(E)中任一步驟所得產物與二氯硫化碳反應，得到式中Z是硫代異氰酸基的式Ⅰ產物。2.權利要求1方法，其中，n是0。3.權利要求1方法，其中，R4是CO2H。4.權利要求1方法，其中，X是氫。5.權利要求1方法，其中，R1，R2和R3各自為氫。6.權利要求1方法，其中，Z是氨基，硫代異氰酸基，氨基脲，硫代氨基脲，羧基，溴代乙醯氨基或馬來醯亞胺基。7.權利要求1方法，其中，苛性鹼是氫氧化鈉。8.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-〔(2-｛雙(羧甲基)〕氨基｝乙基〕-2-(5-乙醯氨基-2-羥苯基)乙醇酸，其特徵在於，使4-乙醯氨基苯酚，二羥乙酸與不對稱乙二胺二乙酸反應。9.權利要求1方法，步驟(B)，用於製備2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-(5-乙醯氨基-2-羥苯基)乙醇酸與溴乙酸反應。10.權利要求1方法，步驟(C)，用於製備2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸與NaOH/H2O反應。11.權利要求1方法，步驟(D)，用於製備2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕-2-(5-氨基-2-羥苯基)乙醇酸，其特徵在於，使2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-(5-乙醯氨基-2-羥苯基)乙醇酸與羥基乙腈和NaOH反應，形成2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(氰基甲基)氨基〕-2-(5-乙醯氨基-2-羥苯基)乙醇酸，然後再用HCl/H2O水解。12.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-〔雙(2-｛〔(雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使4-乙醯氨基苯酚，二羥乙酸與二亞乙基三胺反應。13.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-〔｛2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基｝(羧甲基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使4-乙醯氨基苯酚，二羥乙酸與二亞乙基三胺反應。14.權利要求1方法，步驟(E)，用於製備2-〔雙(2-｛〔(雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使2-〔雙(2-｛〔(雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸與DCl/D2O反應。15.權利要求1方法，步驟(E)，用於製備2-〔｛2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基｝(羧甲基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使2-〔｛2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基｝(羧甲基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸與DCl/D2O反應。16.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-〔｛2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基｝(羧甲基)氨基〕-2-〔5-氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇羧，其特徵在於，使二亞乙基三胺乙酸和4-乙醯氨基苯酚與二羥乙酸反應。17.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-〔(2-〔(2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基)(羧甲基)氨基)乙基)(羧甲基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙酸，其特徵在於，使4-乙醯氨基苯酚和二羥乙酸與線型三亞乙基四胺反應。18.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-〔(2-〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕乙基)(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)氨基〕-2-〔5-乙醯氨基-2-(羧甲氧基)苯基〕乙醇酸，其特徵在於，使4-乙醯氨基苯酚和二羥乙酸與線型三亞乙基四胺反應。19.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2，6-雙｛〔雙(羧甲基)氨基)(羧基)甲基｝-4-(乙醯氨基)苯酚，其特徵在於，使4-乙醯氨基苯酚和亞氨基二乙酸與二羥乙酸反應。20.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2，6-雙｛〔(2-｛〔(羧甲基)〕氨基｝-乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(乙醯氨基)苯酚，其特徵在於，使乙二胺三乙酸三鈉鹽和甲醛水溶液與4-乙醯氨基苯酚反應。21.權利要求1方法，步驟(E)，用於製備2，6-雙｛〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(氨基)苯酚，其特徵在於，使2，6-雙｛〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(乙醯氨基)苯酚與DCl/D2O反應。22.權利要求1方法，步驟(F)，用於製備2，6-雙｛〔(2-〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(硫代異氰酸基)苯酚，其特徵在於，使2，6-雙｛〔(2-｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)〕氨基甲基｝-4-(氨基)苯酚與二氯硫化碳反應。23.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-(｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝甲基〕-6-｛〔(｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝乙基)(羧甲基)氨基〕甲基｝-4-(乙醯氨基)苯酚，其特徵在於，使亞氨基二乙酸和甲醛與4-乙醯氨基苯酚反應。24.權利要求1方法，步驟(A)，用於製備2-(｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝甲基)-6-｛〔｛〔雙(羧甲基)〕氨基乙基)(羧甲基)〕氨基｝甲基｝-4-(乙醯氨基)苯酚，其特徵在於，使乙二胺三乙酸和甲醛與2-(｛〔雙(羧甲基)〕氨基｝甲基-4-(乙醯氨基)苯酚反應。25.一種製備權利要求1至24中任一權項所述化合物，或其藥物上可接受的鹽，與選自下述金屬離子複合而成複合物的方法，所選金屬離子包括La，Ce，Pr，Nd，Pm，Sm，Eu，Gd，Tb，Dy，Ho，Er，Tm，Yb，Lu，Y或Sc，其特徵在於，使所述化合物與所述金屬離子反應。26.一種製備權利要求25所述複合物的方法，其中，金屬離子是153Sm，166Ho，90Y，149Pm，159Gd，140La，177Lu，175Yb，47Sc或142Pr。27.一種製備結合物的方法，該結合物包括以共價鍵與抗體或抗體片段相連的權利要求25或26所述複合物，該方法的特徵在於，使所述複合物與抗體或抗體片段反應。28.一種製備權利要求27所述結合物的方法，其中，所述抗體或片段是單克隆抗體或其片段。29.一種製備權利要求28所述結合物的方法，其中，所述抗體或抗體片段是CC-46，CC-49，CC-49F(ab′)2，CC-83，CC-83F(ab′)2或B72.3。30.一種製備包括權利要求25或26所述複合物的藥物製劑的方法，該方法的特徵在於，使所述複合物與生理上可以接受的載體反應。31.一種製備包括權利要求27至29中任一權項所述結合物的藥用製劑的方法，該方法的特徵在於，使所述結合物與生理上可以接受的載體反應。全文摘要本文公開了具有鄰位絡合官能度的官能化胺螯合劑的製備方法，該螯合劑與稀土金屬離子形成複合物。該複合物可以以共價鍵與抗體或抗體片段連接，並用於治療和/或診斷目的。另外，在組合中可使用某些螯合劑—放射性核素複合物用作鈣化瘤和/或緩解骨痛的治療劑和/或診斷劑。文檔編號C07C255/25GK1042536SQ89108398公開日1990年5月30日申請日期1989年10月30日優先權日1988年10月31日發明者戴維·A·威爾遜,約瑟夫·R·加裡希,理察·K·弗蘭克,肯尼思·麥米蘭,賈米·西蒙申請人:唐化學原料公司