一種糖敏靈製劑中8種化學成分的檢測方法
2023-06-05 08:59:46 1
一種糖敏靈製劑中8種化學成分的檢測方法
【專利摘要】本發明提供了一種糖敏靈製劑中化學成分的檢測方法，該方法包括，將被檢測的糖敏靈製劑樣品用甲醇提取，然後用高效液相色譜進行檢測，色譜條件為採用C18色譜柱，流動相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為甲酸或乙酸或磷酸水溶液，檢測器為二極體陣列檢測器。本發明具有很好的線性、重複性、重現性和回收率，有助於更加全面控制糖敏靈的質量。
【專利說明】一種糖敏靈製劑中8種化學成分的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於現代中藥應用領域，特別涉及一種對糖敏靈製劑中8種化學成分同時進行含量測定的方法。
【背景技術】
[0002]糖敏靈丸是在臨床驗證的有效方開鬱清胃顆粒基礎上加減變化與劑型改革而成。糖敏靈丸由黃連、大黃、黃芩、白芍、柴胡、枳實、山楂、烏梅、半夏、天花粉共十味常用中藥組成，具有開鬱清胃、滋陰降火、通腑瀉濁之功效。臨床觀察證實其對II型糖尿病的血糖有明顯的改善作用，尤其是對體型偏胖的早中期II型糖尿病患者效果更加顯著。同時，藥理實驗揭示糖敏靈能顯著增強高熱量飼料誘導的胰島素抵抗模型糖尿病大鼠和自發性II型糖尿病大鼠的胰島素敏感性。
[0003]為使糖敏靈藥物生產標準化，達到療效確切，質量穩定的目的，需要準確檢測糖敏靈製劑的化學成分。糖敏靈丸所含的藥物成分中，可以確定的藥物活性物質包括:肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷h、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚。這些物質均屬於已知物質。為更加全面控制糖敏靈製劑的質量，建立滿足中藥現代化的質量控制標準，需要一種可以同時檢測糖敏靈製劑中多種化學成分的分析方法。
【發明內容】
[0004]為使糖敏靈藥物生產標準化，達到療效確切，質量穩定的目的。本發明提供了一種檢測本發明製劑中8種藥物活性物質的方法，該方法採用HPLC法對其中的藥物活性物質同時進行含量測定。該方法精密度、靈敏度、穩定性均好，確保產品質量的「安全、均一、穩定、有效、可控」。
[0005]本發明提供了一種糖敏靈製劑中化學成分的測定方法，技術解決方案如下:
[0006]檢測樣品用甲醇提取，然後用高效液相色譜進行檢測，色譜條件為採用C18色譜柱，流動相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為甲酸或乙酸或磷酸水溶液，檢測器為二極體陣列檢測器。
[0007]根據本發明實施方式之一，檢測樣品採用甲醇超聲提取。
[0008]根據本發明的實施方式之一，流動相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為0.01%-0.1%磷酸水溶液。
[0009]優選地，採用梯度洗脫，採用梯度洗脫，洗脫梯度為:
[0010]O ?IOmin, 12%A 相—20%A 相，25%B 相—35%B 相，63%C 相—45%C 相；
[0011]10 ?35min, 20%A 相—15%A 相，35%B 相—65%B 相，45%C 相—20%C 相；
[0012]35 ?40min, 15%A 相—15%A 相，65%B 相—75%B 相，20%C 相—10%C 相；
[0013]40 ?50min, 15%A 相—15%A 相，75%B 相—75%B 相，10%C 相—10%C 相。
[0014]分別考察了甲醇-0.05%磷酸水、乙腈-0.05%磷酸水和乙腈-甲醇-0.05%磷酸水三種流動相系統。在甲醇-0.05%磷酸水系統中，蒽醌類成分可以實現分離，但色譜峰較寬，峰高和峰面積值都較小，由於製劑中此類成分含量較少，因此難以定量分析；在乙腈-0.05%磷酸水系統中，各指標成分色譜峰峰形銳，響應強度明顯增加，但同時幹擾成分也多於甲醇-0.05%磷酸水系統，部分指標成分無法到達理想的分離效果。綜合上述兩種溶劑系統的特點，選擇乙腈-甲醇-0.05%磷酸水為流動相系統，通過優化流動相比例，獲得分離度好、響應強度高的色譜條件。
[0015]實驗表明，流動相初始比例對各成分色譜行為影響較大，當初始時甲醇比例大於50%,乙腈比例小於10%時，色譜行為與甲醇-0.05%磷酸水系統相似，通過降低甲醇比例、增加乙腈比例進行改善，當初始時甲醇比例小於25%，乙腈比例大於25%時，各成分分離度好，峰形銳且峰強度較大，基線平穩，進一步考察確定最佳流動相洗脫梯度。
[0016]根據本發明的另一實施方式,色譜流動相流速為0.8-1.2mL/min。
[0017]根據本發明的再一實施方式，色譜柱溫為25_35°C。
[0018]根據本發明的再一實施方式，檢測器波長為210_300nm。
[0019]優選地，檢測器波長為0~25min，288nm ;25~33min，224nm ;33~38min，254nm ；38~50min，224nm。
[0020]實驗表明，肉桂酸、柚皮素和橙皮素的最大吸收波長是288nm，蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的最大吸收波長是224nm，柴胡皂苷1^的最大吸收波長是254nm。為提高各成分的檢測靈敏度和準確度，分別在25min，33min，38min時，將檢測波長由288nm轉換至224nm，254nm，224nm，各成分均以最大吸收波長作為檢測波長。儘量選擇色譜峰較少的保留時間進行波長轉換，以避免基線波動。
[0021]根據本發明，檢測到的糖敏靈製劑中的化學成分為:肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡 皂苷h、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚。它們的含量分別為 0.1145-0.1727mg.g'0.1090-0.3207mg.g'0.1099-0.2528mg.g'1.714X 10_2-5.108X 10_2mg.g'0.1855-0.5537mg.g'3.026X 10_2_6.120X 10_2mg.g—1、
3.882X10_2-5.092X 10_2mg.g'l.506 X IO^2-L 935X10_2mg.g—1。
[0022]本發明利用HPLC測定了糖敏靈中8種化學成分的含量，具有很好的線性、重複性、重現性和回收率，有助於更加全面控制糖敏靈的質量。
[0023]本發明所述糖敏靈製劑包括:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口含劑、顆粒劑、衝劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉針劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、滴劑、貼劑、滴丸。因為藥物活性成分相同，所以本發明提供的方法可以用於多種不同製劑的檢測。
[0024]本發明所述糖敏靈丸由下列重量份的原料製成:
[0025]天花粉10~30份，柴胡10~30份，枳實3~15份，大黃I~6份，半夏I~12份，黃芩3~15份，黃連f 12份，白芍3~15份，烏梅5~20份，山楂3~15份。
[0026]製備方法如下:所述的黃芩加水提取兩次，每次I小時，提取液加濃鹽酸調pH值至
1.5~2.0，80°C保溫I小時，抽濾，濾餅乾燥，得黃芩提取物；所述的黃連加75%乙醇提取2次每次2小時，提取液減壓回收乙醇，加入濃鹽酸調pH值至1.0~2.0，抽濾，濾餅乾燥，得黃連提取物；其餘8味藥用水回流提取2次，每次I小時，提取液減壓濃縮至1:1，加入95%乙醇至含醇量70%，濾過，濾液減壓濃縮至稠膏加入黃連提取物與黃芩提取物，即得糖敏靈製劑的藥物活性成分。藥物活性成分與微晶纖維素按適當比例混合，按照常規方法製備成濃縮丸。
[0027]本發明附加的方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發明的實踐了解到。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0028]圖1對照品色譜圖。1-肉桂酸、2-柚皮素、3-橙皮素、4-蘆薈大黃素、5-柴胡皂苷bl、6-大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
[0029]圖2糖敏靈丸色譜圖。1-肉桂酸、2-柚皮素、3-橙皮素、4-蘆薈大黃素、5-柴胡皂苷bl、6-大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
[0030]圖3大黃陰性對照色譜圖。2-柚皮素、3-橙皮素、5-柴胡皂苷bl。
[0031]圖4積實陰性對照色譜圖。1-肉桂酸、4-蘆薈大黃素、5-柴胡阜苷bl、6_大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
[0032]圖5柴胡陰性對照色譜圖。1-肉桂酸、2-柚皮素、3-橙皮素、4-蘆薈大黃素、6_大黃素、7-大黃酚、8-大黃素甲醚。
【具體實施方式】:
[0033]以下通過實施例進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。
[0034]試驗例方法學考察與樣品測定
[0035]對照品溶液和供試品溶液的製備
[0036]( I)對照品溶液的製備
[0037]取肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷Id1 (SS匕)、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品各適量，精密稱定，分別製成濃度為7.161mg.ml/1, 5.502mg.ml/1,5.252mg.mL \ 0.760mg.mL \ 2.08 Img.mL \ 0.772mg.mL S 0.956mg.mL S 0.624mg.mL 1的對照品溶液。
[0038]分別精密量取上述對照品溶液0.5,0.6,0.6，1.0, 3.0, 1.0, 1.2，1.0mL置於同一IOmL量瓶中，甲醇稀釋至刻度，製成濃度為肉桂酸358.0yg-mL—1，柚皮素330.1 μ g.mL—1，橙皮素315.1 μ g.mL'蘆薈大黃素76.00 μ g.ml/1,柴胡阜苷b1624.3 μ g.ml/1,大黃素77.20 μ g.ηι?Λ大黃酌.114.7 μ g.ηι?Λ大黃素甲醚62.40 μ g.mL-1的混合對照品儲備液。
[0039](2)供試品溶液的製備取糖敏靈丸2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱重，超聲(180W，35±5%kHz)處理30min，放冷至室溫，甲醇補足減失的重量，搖勻，離心(3000r ^mirT1) lOmin，取上清液經0.45 μ m微孔濾膜過濾，取續濾液作為供試溶液。
[0040](3)陰性對照溶液的製備按糖敏靈丸處方與製備工藝，分別製備不含大黃、柴胡和枳實的陰性對照缺味製劑，按「供試品溶液的製備」項下方法操作，製備陰性對照溶液。
[0041]色譜條件
[0042]色譜柱:PhenomenexSynergi C18 (250mmX 4.6mm, 4 μ m)；
[0043]流動相:甲醇(A)-乙腈(B) -0.05%磷酸水溶液(C)，按如下梯度進行梯度洗脫:
[0044]O ~lOmin, 12%A 相—20%A 相，25%B 相—35%B 相，63%C 相—45%C 相；
[0045]10 ~35min, 20%A 相—15%A 相，35%B 相—65%B 相，45%C 相—20%C 相；
[0046]35 ~40min, 15%A 相—15%A 相，65%B 相—75%B 相，20%C 相—10%C 相；[0047]40 ~50min, 15%A 相—15%A 相，75%B 相—75%B 相，10%C 相—10%C 相。
[0048]流速:1.0mT,.mirT1 ；
[0049]檢測波長:(T25min，288nm;25~33min，224nm ;33~38min，254nm ;38~50min，224nm ；
[0050]柱溫:30°C；
[0051]進樣量:10μ L。
[0052]在上述色譜條件下，分別取對照品、樣品及陰性對照溶液進樣分析，結果表明，各成分之間分離效果良好，陰性無幹擾。
[0053]系統適用性試驗
[0054]取供試溶液10 μ L進樣，記錄色譜圖，肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷匕、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚色譜峰的保留時間分別為13.7，14.6，16.2,27.1，34.0,39.6，45.5，48.8min。供試、對照與陰性對照色譜圖見圖1_圖5。
[0055]標準曲線的繪製
[0056]精密量取混合對照儲備液0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL,分別置於IOmL量瓶
中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，得標準系列溶液。分別精密吸取各混合對照品溶液IOyL,注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以對照品峰面積為縱坐標(y)，以對照品溶液的濃度(μ g.mL-1)為橫坐標(X)，繪製標準工作曲線，回歸方程和濃度範圍如表1所示，各待測成分在濃度範圍內呈良好線性關係。
[0057]表1標準曲線與檢測限(n=6).[0058]
【權利要求】
1.一種糖敏靈製劑中化學成分的檢測方法，其特徵在於，檢測樣品採用甲醇提取，然後採用高效液相色譜進行檢測，色譜條件為採用C18色譜柱，流動相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為甲酸或乙酸或磷酸水溶液，檢測器為二極體陣列檢測器。
2.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，檢測樣品採用甲醇超聲提取。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵在於色譜流動相A相為甲醇，B相為乙腈，C相為0.01%-0.1%磷酸水溶液。
4.如權利要求1所述的方法，其特徵在於採用梯度洗脫，洗脫梯度為: O ~IOmin, 12%A 相—20%A 相，25%B 相—35%B 相，63%C 相—45%C 相； 10 ~35min, 20%A 相—15%A 相，35%B 相—65%B 相，45%C 相—20%C 相； 35 ~40min, 15%A 相—15%A 相，65%B 相—75%B 相，20%C 相—10%C 相； 40 ~50min, 15%A 相—15%A 相，75%B 相—75%B 相，10%C 相—10%C 相。
5.如權利要求1所述的方法，其特徵在於色譜流動相流速為0.8-1.2mL/min。
6.如權利要求1所述的方法，其特徵在於色譜柱溫為25-35°C。
7.如權利要求1所述的方法，其特徵在於檢測器波長為210-300nm。
8.如權利要求7所述的方法，其特徵在於檢測器波長為(T25min，288nm；25^33min,224nm ;33~38min，254nm ;38~50min，224nm。
9.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，檢測糖敏靈製劑中的肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷h、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚。
10.如權利要求9所述的方法，其特徵在於，糖敏靈製劑中肉桂酸、柚皮素、橙皮素、蘆薈大黃素、柴胡皂苷K、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量分別為0.1145-0.1727mg`0.1090-0.3207mg.g'0.1099-0.2528mg.g'l.714X 10-2-5.108X l(T2mg.g'`0.1855-0.5537mg.g'3.026X 10_2_6.120X 10_2mg.g'3.882X 10_2_5.092X 10_2mg.g—1、`1.506X10_2-L 935X10_2mg.g—1。
【文檔編號】G01N30/02GK103575823SQ201210281597
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年8月8日 優先權日:2012年8月8日
【發明者】佟玲, 朱永宏, 周水平, 馬曉慧, 張瀛, 靳元鵬 申請人:天士力製藥集團股份有限公司