一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法及所得到的產品的製作方法

2023-06-05 17:57:26

專利名稱：一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法及所得到的產品的製作方法
一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法及所得到的產品
技術領域：
本發明屬於食品技術領域。更具體地，本發明涉及一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法，還涉及採用所述方法得到的酸溶性膠原蛋白產品。
背景技術：
膠原蛋白(Collagen)是一種具有三螺旋結構的結構蛋白，並廣泛用於食品、藥品、生物醫藥和化妝品行業中。傳統上，牛和豬的皮、骨是膠原蛋白的主要來源，但隨著狂牛症(Bovine spongiform encephalopathy,BSE)和口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)的爆發，使人們對這些大型陸生動物來源的膠原蛋白及其相關產品的安全性產生擔憂。另夕卜，從豬和非宗教性宰殺牛獲得的膠原蛋白在伊斯蘭教傳統上也是不可接受的。由於這種安全性和宗教性上的考慮，人們開始將目光投向水生動物，從魚皮、魚鱗、魚骨和魚鰾中提取膠原蛋白，從而克服上述缺點，並滿足食品、化妝品等行業對膠原蛋白的需求。 例如，CN 200510047408公開一種酸溶性魚皮膠原蛋白，其提取方法是以海魚皮為原料，經切碎、NaCl溶液浸泡去雜質、乙醇丙酮脫脂的處理，進而用檸檬酸和醋酸混合液浸泡提取後離心分離得酸溶性魚皮膠原溶液，再經NaCl固體鹽析得酸溶性魚皮膠原蛋白沉澱，最後將酸溶性魚皮膠原蛋白沉澱溶解於醋酸溶液中，在Na2HPO4(pH8. 6)中透析，或經分子量大於6萬的醋酸纖維中空纖維膜進行超濾處理，透析或超濾得到的固體真空冷凍乾燥得到其產品。膠原蛋白製品純度達>97%。膠原蛋白中含有豐富的甘氨酸、脯氨酸及羥脯氨酸，其水解產物中還有生理活性肽，膠原蛋白分子量大於60000。CN 200710024384開了一種淡水魚皮膠原蛋白的製備方法。該方法包括用含有0.005%-2%(V/V)雙氧水的0. 001-0. 2M鹼液浸泡3-48h ;再用有機試劑清洗、浸泡；然後用含有0. 01%_2%(M/V)胃蛋白酶的pHl. 0-5. 0酸液提取12-64h,再用30_100mm膜過濾,接著用l_30mm膜過濾；最後向濾液中加入5M NaCl溶液至0. 8-2. 0M,離心所得沉澱用0. 001-0. IM乙酸溶解，蒸餾水透析，冷凍乾燥，得到膠原蛋白固體。CN 200910131265以魚皮為原料料，並利用生物酶切技術用脂肪酶脫脂，並利用生物酶切技術用蛋白酶酶解從魚皮中提取魚膠原蛋白。該方法在除脂和提取時將溫度升到70°C和90°C，這樣會導致膠原蛋白降解，生成膠原蛋白肽。CN201010513190公開了一種利用魚皮提取膠原蛋白的方法，該方法包括原料處理，異丙醇脫月旨，氯化鈉去除非膠原蛋白，醋酸浸提同時加酸性蛋白酶酶解，離心濃縮，乾燥，得到魚皮膠原蛋白。CN 201010170443公開了一種從魚皮中提取魚膠原蛋白的方法，該方法包括(I)膠原蛋白提取將魚皮加入蛋白酶進行酶解，然後滅酶，得到膠原蛋白粗提取液；(2)脫色在得到的膠原蛋白粗提取液中，加入淨活性炭攪拌進行脫色脫腥，過濾得到膠原蛋白清液；
(3)除重金屬將得到的膠原蛋白清液流過除砷樹脂，然後用純化水衝除砷樹脂交換柱，收集洗脫液；(4)成品將洗脫液蒸發濃縮，噴霧乾燥，得到分子量為2000 3000道爾頓的魚皮膠原蛋白，它應該是膠原蛋白肽。CN201010248083公開了一種低溫提取高品質膠原蛋白的方法，該方法包括取新鮮或乾燥的魚鱗等，在溫度4 49°C下用酶解液進行酶解處理，然後將酶解液過濾得到膠原蛋白液體，經乾燥得到膠原蛋白粉末。該方法使用各種酶混合物，各種酶的酶切位點必然不一樣，而且酶解處理時溫度達到49°C，得到的產物應該是膠原蛋白片段。這些方法都採用了酶處理方法，如果在提取過程中只加入ー種酶，例如胃蛋白酶，也可以得到具有較完整空間結構和一級結構的膠原蛋白大分子，但與酸溶性膠原蛋白相比，將會缺少端肽，也就是酶會有輕微的降解作用。CN 200910036677公開了ー種鱘魚皮膠原蛋白的提取方法，其步驟如下(I)取鱘魚皮切塊，先用鹼溶液浸泡，漂洗後再用酸溶液浸泡，然後取出漂洗；(2)經前處理的鱘魚皮加水在45°C 55°C下浸提，過濾，去除雜質，得膠原蛋白提取液。(3)膠原蛋白提取液經冷凍離心得鱘魚皮膠原蛋白粉末。該鱘魚皮膠原蛋白粉末應該是明膠，不是膠原蛋白。因此，本發明人在總結現有技術的基礎上，經過大量實驗研究，終於完成了本發明。

發明內容[要解決的技術問題]本發明的目的是提供一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法。本發明的另ー個目的是由所述方法得到的酸溶性膠原蛋白。[技術方案]本發明是通過下述技術方案實現的。本發明涉及一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法。該提取方法的步驟如下步驟A 除去魚皮雜蛋白按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比I 5 :20 40,所述魚皮用O. 05 O. 5M氫氧化鈉水溶液在溫度4 20°C下處理32 40小時，得到除去雜蛋白的魚皮；步驟B 除去魚皮脂肪按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比I 5 :10 20，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度4 20°C下使用選自O. 05 O. 2M氫氧化鈉水溶液、正己烷、以體積計8 12%正丁醇水溶液、無水こ醇或無水こ醚的除脂溶液處理20 28小時，得到除脂肪魚皮；步驟C :提取酸溶性膠原蛋白按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比I 5 :40 80，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度4 20°C下用O. I I. OM醋酸水溶液處理魚皮65-80小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析，靜置過夜，離心得到酸溶性膠原蛋白；步驟D :透析步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用O. 4 O. 8M醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :4 6，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入透析袋，分別用O. 05 O. 2M醋酸與超純水進行透析8 12小時；步驟E :冷凍乾燥將步驟D)得到的透析液進行冷凍乾燥，得到酸溶性膠原蛋白產品。
根據本發明的一種優選實施方式，在步驟A)用氫氧化鈉水溶液處理過程中，每處理11 13小時就更換一次氫氧化鈉水溶液。根據本發明的另一種優選實施方式，在步驟B)用除脂溶液處理過程中，每處理11 13小時就更換一次所述的除脂溶液。根據本發明的另一種優選實施方式，在步驟C)，使用氯化鈉晶體進行鹽析至2. 0M。根據本發明的另一種優選實施方式，在步驟C)，在鹽析後得到的鹽析液再在溫度4°C與離心力IOOOOg的條件下離心18 25分鐘，得到一種粗酸溶性膠原蛋白。根據本發明的另一種優選實施方式，在步驟D)，所述的醋酸與超純水透析分別進行3 6次。
根據本發明的另一種優選實施方式，在步驟E)，在步驟D)得到的透析液在溫度-10°C -32°c的條件下進行冷凍乾燥。本發明還涉及採用所述方法得到的酸溶性膠原蛋白產品。所述產品的酸溶性膠原蛋白含量是以所述產品總重量計97%以上，所述酸溶性膠原蛋白的分子量是390，000^400, 000 道爾頓。下面將更詳細地描述本發明。本發明涉及一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法。該提取方法的步驟如下新鮮草魚、鯉魚、鯰魚、鰱魚或鯽魚等魚在冷室內宰殺並剝皮，並將皮上殘留的魚肉剔除乾淨。然後，用冰水將魚皮洗淨，剪成小塊並置於冰箱內備用。步驟A 除去魚皮雜蛋白按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比I 5 :20 40,所述魚皮用0. 05 0. 5M氫氧化鈉水溶液在溫度4 20°C下處理32 40小時，得到除去雜蛋白的魚皮。在處理過程中應該不斷地攪拌其氫氧化鈉水溶液，其攪拌速度一般控制在100 150rpmo以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比優選地是I 4 :25 35。更優選地，以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比是2 3 :28 32。如果使用低於0. 05M氫氧化鈉水溶液處理所述魚皮時,則無法有效地除去魚皮雜蛋白；如果使用高於0. 5M氫氧化鈉水溶液處理所述魚皮時，則會使膠原蛋白降解。因此，氫氧化鈉水溶液濃度0. 05 0. 5M是合適的。在用氫氧化鈉水溶液處理的過程中，每處理11 13小時就需要更換一次氫氧化鈉水溶液，其目的在於有效地除去魚皮雜蛋白。本發明人採用十二燒基硫酸鈉-聚丙烯胺凝膠電泳(Laemml i, U. K.,Cleavage of structural proteins during assembly of head of bacteriophageT4.《Naure》，227，680-685 (1970))檢測鹼處理液中是否有膠原蛋白降解物，雙縮脲法(Gornall, A. G.，Bardawillj C. J.，&David, M. M.，Determination of serum proteinby means of the biuret reaction, ((Jounal of biological Chemistry〉〉，177 (2)，751-766 (1949))和 Woessner法(Woessner J. F. , The determination of hydroxyprolinein tissue and protein samples containing small proportions of this imino acid，((Archives of biochemistry and biophysics》，93，440-447 (1961))檢測減處理液中蛋白質含量和羥脯氨酸含量；同時，我們也使用同樣的方法檢測按照上述條件處理後提取得到的膠原蛋白，觀察其是否有降解，並確定純度。步驟B 除去魚皮脂 肪在用氫氧化鈉水溶液處理之後接著需要除去魚皮脂肪。按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比I 5 :10 20，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度4 20°C下使用選自0. 05 0. 2M氫氧化鈉水溶液、正己烷、以體積計8 12%正丁醇水溶液、無水こ醇或無水こ醚的除脂溶液處理20 28小時，得到除脂肪魚皮。魚皮的脂肪一般是由棕櫚酸、油酸、二十碳五烯酸(EPA)組成的。針對魚皮脂肪的特性，本發明可以採用多種除脂溶液進行處理，使其魚皮脂肪含量明顯降低。這樣處理既有助於實現提取酸溶性膠原蛋白，又能夠克服在現有技術中因使用各種酶除脂帶來的ー些技術缺陷。使用上述除脂溶液進行處理的時間可以是2 4小吋。在這個步驟用除脂溶液處理過程中，每處理11 13小時就需要更換一次所述的除脂溶液。在本發明中，所述的魚皮脂肪含量是採用索氏抽提方法(A0ACMethod963. 15, Association of Official Chemists, USA, 1990)測定。步驟C :提取酸溶性膠原蛋白按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比I 5 :40 80，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度4 20°C下用0. I I. OM醋酸水溶液處理魚皮65-80小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析，靜置過夜，離心得到酸溶性膠原蛋白。使用醋酸水溶液處理魚皮的作用在於使魚皮中的酸溶性膠原蛋白溶解,游離於其醋酸水溶液中，同時魚皮中的其它成分，例如色素、酶或前期可能未除淨的雜蛋白等也被溶解於醋酸水溶液中，因此，醋酸水溶液處理魚皮得到的膠原蛋白粗提取液需要進行鹽祈。鹽析技術是化工化學技術領域裡通常採用的ー種分離技術，本發明使用氯化鈉晶體進行鹽祈，使用氯化鈉晶體在低溫攪拌條件下進行鹽析至2. OM0鹽析液靜置過夜後，再在溫度4°C與離心カIOOOOg的條件下離心18 25分鐘，得到一種粗酸溶性膠原蛋白。步驟D :透析步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用0. 4 0. 8M醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :4 6，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入透析袋，分別用0. 05 0. 2M醋酸與超純水進行透析8 12小時。所述的透析袋是目前市場上銷售的產品，為上海綠鳥科技發展有限公司銷售的型號為RS-34-7K的透析袋。所述的透析是在低溫攪拌的條件下分別用0. 05 0. 2M醋酸與超純水進行的。優選地，所述的醋酸與超純水透析分別進行3 6次。步驟E :冷凍乾燥
將步驟D)得到的透析液進行冷凍乾燥，得到酸溶性膠原蛋白產品。使用目前市場上銷售的冷凍乾燥箱對所述透析液在溫度-10°C _32°C的條件下進行冷凍乾燥，乾燥直至其酸溶性膠原蛋白產品恆重。本發明還涉及採用本發明方法所得到的酸溶性膠原蛋白產品。採用十二烷基硫 酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳的方法，測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的分子量是390，000^400, 000道爾頓。採用Wossener法測定了所述產品的羥脯氨酸含量從而換算出膠原蛋白含量，再使用雙縮脲法測定產品中總蛋白含量，從而確定產品濃度。通過計算，本發明提取酸溶性膠原蛋白產品的純度高達97%以上。根據下述公式計算得率=最終凍乾產品重/魚皮重(溼基)X 100%採用本發明方法提取酸溶性膠原蛋白的提取率是達到18-20%。比現有技術的提取率一般高3-5%。本發明產品酸溶性膠原蛋白可以用作絮凝劑、粘合劑、膠原蛋白海綿、膠原蛋白纖維、固定化酶材料和人工皮膚。[有益效果]本發明是提供一種從淡水魚魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的技術方案。此方案能夠更安全，更經濟地從魚皮中提取膠原蛋白以用於食品、化妝品和生物醫藥領域，為淡水魚資源的綜合利用提供一種新的途徑。
具體實施方式
通過下述實施例將會更好地理解本發明。實施例I :從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白新鮮草魚在冷室內宰殺並剝皮，並將皮上殘留的魚肉剔除乾淨。然後，用冰水將魚皮洗淨，剪成小塊並置於冰箱內備用。該實施步驟如下步驟A 除去魚皮雜蛋白按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比I : 20，所述魚皮用0. 05M氫氧化鈉水溶液在溫度4°C下處理35小時，得到除去雜蛋白的魚皮。步驟B 除去魚皮脂肪按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比I :10，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度4°C下用正己烷除脂溶液處理20小時，得到除脂肪魚皮。步驟C :提取酸溶性膠原蛋白按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比I :40，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度4°C下用0. IM醋酸水溶液處理魚皮65小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析至2. 0M，鹽析液靜置過夜，在溫度4°C與離心力IOOOOg的條件下離心18分鐘，得到酸溶性膠原蛋白。步驟D :透析步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用0. 4M醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :4，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入上海綠鳥科技發展有限公司型號為RS-34-7K的透析袋，分別用O. 05M醋酸與超純水在低溫(4°C )攪拌條件下進行透析8小吋。步驟E :冷凍乾燥使用目前市場上銷售的冷凍乾燥箱對將步驟D)得到的透析液進行冷凍乾燥，乾燥直至其酸溶性膠原蛋白產品恆重。得到酸溶性膠原蛋白產品採用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳法，測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的分子量是390，000道爾頓。採用雙縮脲法和Woessner法測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的含量是以所述產品總重量計的98. 02%。
根據下述公式計算得率=最終凍乾產品重/魚皮重(溼基)X 100%採用本發明方法提取酸溶性膠原蛋白的提取率是18. 76%。實施例2 :從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白新鮮鯉魚在冷室內宰殺並剝皮，並將皮上殘留的魚肉剔除乾淨。然後，用冰水將魚皮洗浄，剪成小塊並置於冰箱內備用。該實施步驟如下 步驟A 除去魚皮雜蛋白按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比4 :35，所述魚皮用O. IM氫氧化鈉水溶液在溫度10°c下處理32小時，得到除去雜蛋白的魚皮。步驟B 除去魚皮脂肪按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比4:16，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度10°c下用無水こ醇除脂溶液處理26小時，得到除脂肪魚皮。步驟C :提取酸溶性膠原蛋白按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比4 :60，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度10°c下用O. 6M醋酸水溶液處理魚皮75小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析至2. 0M，鹽析液靜置過夜，在溫度4°C與離心カIOOOOg的條件下離心25分鐘，得到酸溶性膠原蛋白。步驟D :透析步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用O. 5M醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :5，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入上海綠鳥科技發展有限公司型號為RS-34-7K的透析袋，分別用O. 16M醋酸與超純水在低溫(4°C )攪拌條件下進行透析10小吋。步驟E :冷凍乾燥使用目前市場上銷售的冷凍乾燥箱對將步驟D)得到的透析液進行冷凍乾燥，乾燥直至其酸溶性膠原蛋白產品恆重。得到酸溶性膠原蛋白產品採用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳法，測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的分子量是396，000道爾頓。採用雙縮脲法和Woessner法,測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的含量是以所述產品總重量計的97. 92%。根據下述計算公式得率=最終凍乾產品重/魚皮重(溼基)X 100%採用本發明方法提取酸溶性膠原蛋白的提取率是19. 32%。實施例3 :從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白新鮮草魚在冷室內宰殺並剝皮，並將皮上殘留的魚肉剔除乾淨。然後，用冰水將魚 皮洗淨，剪成小塊並置於冰箱內備用。該實施步驟如下步驟A 除去魚皮雜蛋白按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比2 :32，所述魚皮用0. 2M氫氧化鈉水溶液在溫度15°C下處理38小時，得到除去雜蛋白的魚皮。步驟B :除去魚皮脂肪按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比2 :12，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度15°C下使用無水乙醚除脂溶液處理24小時，得到除脂肪魚皮。步驟C :提取酸溶性膠原蛋白按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比2 :50，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度15°C下用0. 4M醋酸水溶液處理魚皮70小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析至2. 0M，鹽析液靜置過夜，在溫度4°C與離心力IOOOOg的條件下離心20分鐘，得到酸溶性膠原蛋白。步驟D :透析步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用0. 6M醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :6，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入上海綠鳥科技發展有限公司型號為RS-34-7K透析袋，分別用0. 2M醋酸與超純水在低溫(4°C )攪拌條件下進行透析9小時。步驟E :冷凍乾燥使用目前市場上銷售的冷凍乾燥箱對將步驟D)得到的透析液在溫度進行冷凍乾燥，乾燥直至其酸溶性膠原蛋白產品恆重。得到酸溶性膠原蛋白產品採用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳法，測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的分子量是393，000道爾頓。採用雙縮脲法和Woessner法,測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的含量是以所述產品總重量計的98. 06%。根據下述公式計算得率=最終凍乾產品重/魚皮重(溼基)X 100%採用本發明方法提取酸溶性膠原蛋白的提取率是20. 06%。實施例4 :從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白新鮮鯽魚在冷室內宰殺並剝皮，並將皮上殘留的魚肉剔除乾淨。然後，用冰水將魚皮洗淨，剪成小塊並置於冰箱內備用。該實施步驟如下步驟A 除去魚皮雜蛋白
按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比5 :40，所述魚皮用0. 5M氫氧化鈉水溶液在溫度20°C下處理40小時，得到除去雜蛋白的魚皮。步驟B 除去魚皮脂肪按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比5 :20，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度20°C下用以體積計12%正丁醇水溶液除脂溶液處理28小時，得到除脂肪魚皮。步驟C :提取酸溶性膠原蛋白按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比5 :80，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度20°C下用I. OM醋酸水溶液處理魚皮80小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析至2. 0M，鹽析液靜置過夜，在溫度4°C與離心力IOOOOg的條件下離心24分鐘，得到酸溶性膠原蛋白。步驟D :透析 步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用0. SM醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :6，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入上海綠鳥科技發展有限公司型號為RS-34-7K透析袋，分別用0. 2M醋酸與超純水在低溫(4°C )攪拌條件下進行透析12小時。步驟E :冷凍乾燥使用目前市場上銷售的冷凍乾燥箱對將步驟D)得到的透析液在溫度進行冷凍乾燥，乾燥直至其酸溶性膠原蛋白產品恆重。得到酸溶性膠原蛋白產品採用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳法，測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的分子量是395，000道爾頓。採用雙縮脲法和Woessner法,測定了所述產品酸溶性膠原蛋白的含量是以所述產品總重量計的98. 49%。根據下述公式計算得率=最終凍乾產品重/魚皮重(溼基)X 100%採用本發明方法提取酸溶性膠原蛋白的提取率是19. 33%。
權利要求
1.一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法，其特徵在於該方法的步驟如下 步驟A :除去魚皮雜蛋白 按照以克計魚皮與以毫升計氫氧化鈉水溶液的比I 5 :20 40，所述魚皮用O. 05 O. 5M氫氧化鈉水溶液在溫度4 20°C下處理32 40小時，得到除去雜蛋白的魚皮； 步驟B:除去魚皮脂肪 按照以克計除雜蛋白魚皮與以毫升計除脂溶液的比I 5 :10 20，將步驟A)得到的魚皮接著在溫度4 20°C下使用選自O. 05 O. 2M氫氧化鈉水溶液、正己烷、以體積計8 12%正丁醇水溶液、無水こ醇或無水こ醚的除脂溶液處理20 28小時，得到除脂肪魚皮； 步驟C :提取酸溶性膠原蛋白 按照以克計除脂肪魚皮與以毫升計醋酸水溶液的比I 5 :40 80，將步驟B)得到的除脂肪魚皮在溫度4 20°C下用O. I I. OM醋酸水溶液處理魚皮65-80小時，然後進行離心得到膠原蛋白粗提取液；接著，該提取液在攪拌下用氯化鈉晶體進行鹽析，靜置過夜，離心得到酸溶性膠原蛋白； 步驟D :透析 步驟C得到的酸溶性膠原蛋白用O. 4 O. SM醋酸水溶液溶解，其以克計酸溶性膠原蛋白與以毫升計醋酸水溶液的比I :4 6，得到一種酸溶性膠原蛋白溶液，然後裝入透析袋，分別用O. 05 O. 2M醋酸與超純水進行透析8 12小時； 步驟E :冷凍乾燥 將步驟D)得到的透析液進行冷凍乾燥，得到酸溶性膠原蛋白產品。
2.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於在步驟A)用氫氧化鈉水溶液處理過程中，姆處理11 13小時就更換一次氫氧化鈉水溶液。
3.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於在步驟B)用除脂溶液處理過程中，每處理11 13小時就更換一次所述的除脂溶液。
4.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於在步驟C)，使用氯化鈉晶體進行鹽析至2.0M。
5.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於在步驟C)，在鹽析後得到的鹽析液再在溫度4°C與離心カIOOOOg的條件下離心18 25分鐘，得到一種粗酸溶性膠原蛋白。
6.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於在步驟D)，所述的醋酸與超純水透析分別進行3 6次。
7.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於在步驟E)，在步驟D)得到的透析液在溫度-10°c -32°C的條件下進行冷凍乾燥。
8.根據權利要求1-7中任一項權利要求所述方法得到的酸溶性膠原蛋白產品，其特徵在於所述產品的酸溶性膠原蛋白含量是以所述產品總重量計97%以上，所述酸溶性膠原蛋白的分子量是390，000^400, 000道爾頓。
全文摘要
本發明涉及一種從魚皮中提取酸溶性膠原蛋白的方法以及採用所述方法得到的酸溶性膠原蛋白產品。該方法包括除去魚皮雜蛋白、除去魚皮脂肪、提取酸溶性膠原蛋白、透析與冷凍乾燥等步驟。採用本發明方法得到的酸溶性膠原蛋白保持了完整結構，無降解；變性溫度與大型陸生動物來源的膠原蛋白相近，可以作為其替代品，具有潛在的應用價值。
文檔編號C07K1/14GK102702346SQ20121020556
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月20日 優先權日2012年6月20日
發明者劉小鳴, 區楊, 周鵬, 李天成, 梁麗 申請人:江南大學