重組人血管內皮抑制素緩釋注射油製劑及其製備工藝的製作方法
2023-06-19 08:05:21
專利名稱：重組人血管內皮抑制素緩釋注射油製劑及其製備工藝的製作方法
技術領域：
本發明屬於藥物製劑技術領域，確切的說是將一具有抑制腫瘤血管生長活性的生物蛋白藥物一重組人血管內皮抑制素(Endostar)製備成具有長效作用的緩釋注射油製劑。 本發明涉及到重組人血管內皮抑制素緩釋注射油製劑及其製備工藝和使用方法。
背景技術：
0』 Reilly教授於1997年從小鼠內皮細胞系EOMAD的培養液中分離得到的一種具有抑制血管內皮細胞生長的物質(血管內皮抑制素，Endostatin)，其通過抑制腫瘤血管的生成能夠顯著地抑制多種原發性腫瘤的生長。但是，由於血管內皮抑制素難以大規模進行復性因而無法真正應用於大規模生產，為此羅永章教授等人通過修飾人血管內皮抑制素的核苷酸編碼序列，生產出N末端帶有9個附加胺基酸序列的重組人血管內皮抑制素—— Endostar，大大簡化了純化步驟，提高了產物的純度(ZL 00107569. 1)，並成功解決了大規模復性的問題。Endostar由192個胺基酸構成，分子量為21kDa，其生物活性與血管內皮抑制素(Endostatin)完全相同，並且沒有因為附加N端序列而導致體內免疫原性。目前， Endostar已經中國國家藥品食品監督管理局批准為一類新藥而獲準銷售，成為全世界獨家上市的重組人血管內皮抑制素產品。目前市場上銷售的重組人血管內皮抑制素為普通注射液，商品名為恩度；規格為15mg/;3ml/支，臨床使用中患者需每天注射一次，連續14天為一個療程，休息一周後，再繼續下一療程。由於頻繁的注射給藥，在生理上給患者帶來了巨大的痛苦，同時給患者帶來了巨大的經濟壓力，因此，將其開發成注射一次可以持續釋藥多日的長效製劑非常必要。目前將半衰期短，分子量大，質量不穩定的蛋白藥物或多肽藥物製成長效製劑通常採用將藥物製成緩釋微球的形式，通過組成微球的聚合物材料在體內的緩慢降解從而達到藥物在體內緩慢釋放、吸收的目的，但由於緩釋微球的製備技術難度較高，工藝複雜，對製備微球所需材料的質量要求極高，且價格昂貴不易獲得，因而在實際的開發過程中面臨著諸多困難。
發明內容
本發明目的是克服上述製劑的不足之處，研製一種重組人血管內皮抑制素的緩釋長效製劑。本發明提供了含重組人血管內皮抑制素的緩釋注射油製劑及其製備工藝和使用方法，目的在於克服目前臨床上使用的重組人血管內皮抑制素普通注射液一天給藥一次， 患者需要天天注射給藥的缺點。
本發明的製劑所含的活性成分為重組人血管內皮抑制素，優選Endostar。 Endostar的分子量為21kDa，由192個胺基酸構成，胺基酸序列為
MGGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQDLYSIVRR ADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWPQKSVffHGSDPNGRRLTESYCETWRT EAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCIENSFMTASK
本發明中的油製劑包括油混懸劑、油包水型乳劑和油溶液劑，其主要特徵是以注射用油為主要溶媒，通過混懸法、乳化法、凍幹復溶法等不同方法將重組人血管內皮抑制素均勻分散在油性溶媒中，形成油狀混懸液或油包水型乳液或油狀溶液，其皮下或肌內注射後能自動形成油性藥物貯庫，延緩重組人血管內皮抑制素的釋放，用於腫瘤方面的持續治療。本發明中的油混懸劑其處方組成為按重量體積比每IOOml油混懸劑含有0. 5 IOg的重組人血管內皮抑制素，0 5g的單硬脂酸鹽，其餘為注射用油。單硬脂酸鹽包括單硬脂酸鋁、單硬脂酸鎂、單硬脂酸鋅等鹽；注射用油包括芝麻油、大豆油、蓖麻油、花生油、甘油單酯、甘油二酯、甘油三酯、橄欖油、中鏈油、魚油等。本發明中的油包水型乳劑其處方組成為按重量體積比每IOOml油包水型乳劑中含有0. 5 IOg的重組人血管內皮抑制素、0. 2 5g表面活性劑，0 5g的單硬脂酸鹽，5 40g的水，其餘為注射用油。單硬脂酸鹽包括單硬脂酸鋁、單硬脂酸鎂、單硬脂酸鋅等鹽；表面活性劑包括卵磷酯、司盤、脂肪酸甘油脂、吐溫和泊洛沙姆等；注射用油包括芝麻油、大豆油、蓖麻油、花生油、甘油單酯、甘油二酯、甘油三酯、橄欖油、中鏈油、魚油等。本發明中的油性溶液劑其處方組成為按重量體積比每IOOml油性溶液劑中含有 1 20g重組人血管內皮抑制素一磷酯複合物，0 5g的單硬脂酸鹽，其餘為注射用油。磷酯包括大豆磷酯和卵磷酯；單硬脂酸鹽包括單硬脂酸鋁、單硬脂酸鎂、單硬脂酸鋅等鹽；注射用油包括芝麻油、大豆油、蓖麻油、花生油、甘油單酯、甘油二酯、甘油三酯、橄欖油、中鏈油、魚油等。本發明中的油混懸劑，主要是通過以下製備工藝得到的
將重組人血管內皮抑制素用注射用水配置成濃度2 10%的溶液，進行冷凍乾燥，得到重組人血管內皮抑制素粉末，將藥粉微粉化過300目以上篩，控制粒徑小於100微米的藥物微粒比例大於90%;將重組人血管內皮抑制素微粒按重量體積比(1 10 200)加入到注射用油或經單硬脂酸鹽凝膠化的注射用油中，攪拌均勻，得到含重組人血管內皮抑制素的油混懸劑，控制油液中藥物粒徑分布在10 100微米的不少於80% ； 本發明中的油包水型乳劑，主要是通過以下製備工藝得到的 將重組人血管內皮抑制素用處方量的注射用水溶解，按處方加入表面活性劑，攪拌均勻；將含有表面活性劑的重組人血管內皮抑制素溶液按體積比(1 :1. 5 20)加入到注射用油或經單硬脂酸鹽凝膠化的注射用油中，攪拌(2000轉/分鐘範圍？)30分鐘，形成水/油型乳液，通過均質機，得到含重組人血管內皮抑制素的油包水型乳劑，控制藥液中乳粒粒徑分布在5 50微米不少於80% ；
本發明中的油溶液劑，主要是通過以下製備工藝得到的
將重組人血管內皮抑制素、磷脂、水叔丁醇(1 0. 1 9)混合溶劑按重量體積比(1 1 9 :5 300)混合，待重組人血管內皮抑制素和磷脂全部溶解後，繼續攪拌30分鐘，冷凍乾燥，除去水和叔丁醇，得到重組人血管內皮抑制素一磷酯複合物；將重組人血管內皮抑制素一磷酯複合物按重量體積比(1 5 100)加入到注射用油或經單硬脂酸鹽凝膠化的注射用油中，攪拌30分鐘以上，得到重組人血管內皮抑制素緩釋注射油溶液； 本發明中凝膠化注射用油的製備，主要是採用以下方法加於實現 將單硬脂酸鹽按重量體積比1 :20 90的比例加入到注射用油中，浸潤0.5小後將油溫升至110 °C 120 °C，攪拌至油液澄清透明，油液繼續於115 °C保溫0. 5小時，自然冷卻至室溫，0. 22微米濾膜過濾，得到凝膠化的注射用大豆油；控制凝膠化後的油液的黏度為 0. 2Pa · S 20 Pa · S。本發明中製劑的體外釋放度的測定是採用以下方法加於實現
將重組人血管內皮抑制素緩釋注射油製劑樣品0. 5 2ml裝入截留分子量為300000， 邊長為1釐米的透析袋中，兩端用夾子加緊。盛有樣品的透析袋置於裝有50ml pH 7. 4的磷酸鹽緩衝溶液的具口容器中，容器放入裝有37°C水浴的搖床中，持續振搖。前7日每日從具口容器中取樣一次，每次lml，同時補充相同體積的新鮮pH 7.4的磷酸鹽緩衝溶液。7天後，每隔7天取樣一次，直至觀天，取樣方法同前。樣品中重組人血管內皮抑制素的含量用 HPLC法或BCA試劑盒法測定。以藥物的累計釋放百分率與釋藥時間作圖。本發明的益處有
1、技術工藝簡便，成本低廉，穩定性好；
2、降低患者生理上的痛苦，並減輕少其用藥成本。
圖1、實施例1的油混懸液樣品體外釋放曲線2、實施例2的油混懸液樣品體外釋放曲線3、實施例3的油混懸液樣品體外釋放曲線4、實施例4的油包水型乳劑體外釋放曲線5、實施例5的油包水型乳劑體外釋放曲線6、實施例6的油包水型乳劑體外釋放曲線7、實施例7的緩釋注射油溶液體外釋放曲線8、實施例8的緩釋注射油溶液體外釋放曲線9、實施例9的緩釋注射油溶液體外釋放曲線圖
具體實施例方式實施例1
處方
Endostar40g
單硬脂酸鋁5g
注射用大豆油_約IOOOml_
共製成IOOOml
製備將Endostar用注射用水配置成濃度H的溶液，進行冷凍乾燥，得到Endostar粉末，將藥粉微粉化過300目篩；將Endostar按重量體積比(1 :25)加入到含單硬脂酸鋁0. 5% 經凝膠化的注射用大豆油中，攪拌均勻，得到含Endostar的油混懸液樣品，檢查樣品中固體顆粒粒徑分布在10 100微米之間的比例為97. 2%，樣品黏度為0. 236Pa · S ；
體外釋放度的測定將以上製備所得的樣品Iml裝入截留分子量為300000，邊長為1 釐米的透析袋中，兩端用夾子加緊。盛有樣品的透析袋置於裝有50ml pH 7. 4的磷酸鹽緩衝溶液的具口容器中，容器放入裝有37°C水浴的搖床中，持續振搖。前7日每日從具口容器中取樣一次，每次lml，同時補充相同體積的新鮮pH 7. 4的磷酸鹽緩衝溶液。7天後，每隔7 天取樣一次，直至觀天，取樣方法同前。樣品中Endostar的含量用BCA試劑盒法測定，以藥物的累計釋放百分率與釋藥時間作圖，測定結果見附表中實施例1及圖1。實施例2: 處方
權利要求
1.一種含重組人血管內皮抑制素的緩釋注射油溶液劑。
2.根據權利要求1的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於以注射用油為主要溶媒，採用凍幹復溶法將重組人血管內皮抑制素分散在注射用油或經單硬脂酸鹽凝膠化的注射用油， 其性狀為油狀溶液。
3.根據權利要求1的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於以注射用油為主要溶媒，採用凍幹復溶法將重組人血管內皮抑制素分散在注射用油，其性狀為油狀溶液。
4.根據權利要求1的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於以注射用油為主要溶媒，採用凍幹復溶法將重組人血管內皮抑制素分散在經單硬脂酸鹽凝膠化的注射用油，其性狀為油狀溶液。
5.根據權利要求1的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於所述的緩釋油溶液劑中每 IOOml含有1 20g重組人血管內皮抑制素一磷酯複合物，0 5g的單硬脂酸鹽，其餘為注射用油。
6.根據權利要求2至5中任一項的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於所述的注射用油為芝麻油、大豆油、蓖麻油、花生油、甘油單酯、甘油二酯、甘油三酯、橄欖油、中鏈油、魚油中的一種或多種；單硬脂酸鹽包括單硬脂酸鋁、單硬脂酸鎂、單硬脂酸鋅。
7.根據權利要求2至5中任一項的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於所述的注射用油為芝麻油、大豆油中的一種。
8.根據權利要求2至5中任一項的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於所述單硬脂酸鹽為單硬脂酸鋁。
9.根據權利要求5的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於所述的磷酯包括大豆磷酯和卵磷酯。
10.根據權利要求1至5中任一項的緩釋注射油溶液劑，其特徵在於所述的重組人血管內皮抑制素為Endostar。
全文摘要
本發明屬於藥物製劑技術領域。本發明提供了含重組人血管內皮抑制素的緩釋注射油製劑及其製備工藝。本發明中的製劑其主要特徵是以注射用油為主要溶媒，通過凍幹復溶法等不同方法將重組人血管內皮抑制素均勻分散在油性溶媒中，形成油溶液，其皮下或肌內注射後能自動形成油性藥物貯庫，延緩重組人血管內皮抑制素的釋放，用於腫瘤方面的持續治療。體外釋放度結果顯示，本發明中的重組人血管內皮抑制素緩釋注射油製劑能使製劑中的藥物持續釋藥3～28天。該製劑克服了目前臨床上使用的重組人血管內皮抑制素注射液一天給藥一次，患者需要天天注射給藥的缺點，能大大降低患者生理上的痛苦，並減輕其經濟負擔。
文檔編號A61K38/17GK102166187SQ20111010186
公開日2011年8月31日 申請日期2007年11月8日 優先權日2007年11月8日
發明者劉春暉, 李曉強, 殷曉進, 許向陽, 談穎 申請人:江蘇先聲藥物研究有限公司