一種由黃芪和司坦唑醇組成的治療骨質疏鬆症的藥物製劑的製作方法

2023-06-19 01:30:21 1

專利名稱：一種由黃芪和司坦唑醇組成的治療骨質疏鬆症的藥物製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於治療骨質疏鬆症的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物是由同化激素和黃芪組成。
背景技術：
原發性骨質疏鬆症(包括絕經期後骨質疏鬆和老年性骨質疏鬆)是一種以骨量減少、骨組織微細結構退化(松質骨骨小梁變細、斷裂，數量減少；皮質骨多孔、變薄)為特徵的，以致骨的脆性增加，骨折危險性增加的全身性的老年性骨骼疾病。骨質疏鬆症是一種疾病，表現為骨量減少伴有在正常身體活動下骨骼脆性增加和骨骼疼痛等臨床表徵。由於骨量減少、骨的微細結構退化和骨的脆性增加，造成骨的生物力學強度下降，難以承載原有的或相對增加的載荷，可悄然發生微細骨折或完全骨折，嚴重影響老年人的生活質量，給患者、家庭和社會帶來極大負擔。骨質疏鬆症的流行病學研究表明，女性49歲絕經，52--60歲可患骨量減少，62--76歲可患骨質疏鬆，72--86歲可患嚴重骨質疏鬆症。除原發性骨質疏鬆外，繼發性骨質疏鬆，特別是皮質類固醇性骨質疏鬆也面臨嚴峻的現實，在接受皮質類固醇治療的慢性疾病的病人中，最終也有30～50％發展為骨質疏鬆，更嚴重的是導致股骨頭壞死及股骨骨折，是不容忽視的醫原性疾病問題。隨時國民經濟的發展，人民生活水平的提高，人口壽命逐漸延長，未來的社會將成為老年性社會。我國60歲以上老年人口已增長到1.34億人，按照國際標準，我國已進入了老年社會。如果再加上60歲以下的中老年人口，其數量更為可觀。作為老年性疾病之一的骨質疏鬆症和骨質疏鬆性骨折，已使越來越多的人深受其害，並已成為世界性關注的嚴重社會問題，我國已將它列為三大重點攻關研究的老年性疾病之一。WHO已對骨質疏鬆症制訂出全球性戰略目標，改善全世界對骨質疏鬆的診斷和處理，在各大學、研究所、製藥公司已紛紛大副度增加經費以加速抗骨質疏鬆新藥的研究與開發，因此防治老年性骨質疏鬆是保證人們身體健康，提高生活質量的一項十分迫切的研究課題。
目前認為骨質疏鬆是一種多病因的疾病，其基本病理機理是在骨代謝過程中骨吸收和骨形成的平衡出現缺陷，導致人體內的鈣磷代謝失調，使骨密度逐漸減少而引起臨床症狀、其病因主要與年齡，內分泌紊亂，鈣吸收不良，肢體廢用以及免疫，營養、遺傳等因素有關。在晚近20年，骨質疏鬆的藥物治療策略和途徑主要是二大類，一為抗骨吸收的藥物，二為促成骨藥。臨床使用中90％以上為抗骨吸收藥物，如雌激素替代療法，是治療絕經後骨質疏鬆症的經典療法。但雌激素引起生殖系統腫瘤的危險性已被肯定[2]，美國已宣稱雌激素為致癌物之一；二磷酸鹽類可有效治療骨吸收所致骨量丟失，但長期應用副作用大，也不易作為預防用藥；降鈣素對溶骨性骨痛和骨質疏鬆作用顯著，但治療需個體化，也受到給藥途徑限制，且價格昂貴；目前關注的雌激素受體調節劑(ERMs)，由於保留了對骨骼的雌激素樣作用而阻斷對生殖系統的刺激作用，具有優勢，已有2-3個新藥進入臨床III期試驗(美國)。所有這些抗骨吸收劑，均抑制了因骨吸收而增加耦聯的骨形成，使舊骨和新骨的轉換率減少，長期應用影響骨的質量及力學性能[3]。目前促骨形成藥已逐漸成為研究熱點，短鏈甲狀旁腺激素(PTH)是非常明顯的促骨形成藥，在美國也進入II期臨床，但實驗研究結果發現PTH可增加皮質骨多孔性(因同時增加皮質骨哈佛氏管的吸收)，降低骨折的遠期療效並未肯定[4]；活性VitD長期應用易致高血鈣及尿鈣症；氟化物是較早用於骨質疏鬆症的促骨形成藥，但它易使類骨質增加而伴有骨礦化缺陷，限制了在臨床廣泛應用，主要源於它的安全範圍窄，副作用大，療效需進一步考證。

發明內容
我們通過大量的動物實驗研究和篩選，我們發現同化激素和黃芪組成的複方製劑有很好的預防骨質疏鬆作用。同化激素主要是司坦唑醇，其他同化激素如苯丙酸諾龍、美雄酮、羥甲烯龍、達那唑、癸酸南諾酮也有作用。司坦唑醇是一種人工合成的同化激素，因其促進蛋白合成作用較強而雄激素作用弱而臨床上曾被試用於絕經期婦女骨質疏鬆症和原發性骨質疏鬆症，我們的實驗證明，該藥對類固醇性大鼠骨質疏鬆症有一定的防治作用，是一種促進骨合成的抗骨質疏鬆藥，由於目前世界上促進骨形成且副作用少的藥物還不多，相比之下，本品可謂是本類藥物中副作用較少的藥物之一了。但由於本品已在臨床作為同化激素應用了幾十年，大量研究資料顯示本品長期應用仍會產生肝臟的不良反應，如四種轉氨酶升高、黃疸等，在心血管方面則可使高密度脂蛋白(HDL)減少，低密度脂蛋白(LDL)增加，從而增加了冠心病的危險性，另外，司坦唑醇還會造成水鈉瀦溜，水腫等，這些不良反應嚴重影響了司坦唑醇在防治骨質疏鬆方面的用途。本項目研究者發現中藥黃芪和司坦唑醇組成的複方製劑，可大大提高抗骨質疏鬆的功效，同時又可使司坦唑醇的副作用明顯減少，特別適合廣大老年患者服用，對老年男性骨質疏鬆療效更好。
解決這一任務的途徑是這樣實現的，選取豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Beg)Hsiao或膜莢黃芪A.membranaceus(Fisch.)Bge的乾燥根，即中藥稱為黃芪的藥用部份，按傳統的工藝加15倍水，分別蒸煮三次，每次2小時，過濾，合併三次濾液，濃縮至一定的濃度，作為黃芪的水提物。同時，按已知的工藝提取黃芪醇提液、黃芪多糖、黃芪總黃酮、黃芪皂苷備用。此外，選擇同化激素司坦唑醇，苯丙酸諾龍、美雄酮、羥甲烯龍、達那唑、癸酸南諾酮與上面黃芪及其提取成分組成複方，然後用本研究室建立大白鼠骨質疏鬆模型進行給藥研究，比較觀察這些受試品抗骨質疏鬆的藥效學功能。
研究方案如下(一)實驗藥物的組方與實驗分組如下1、黃芪水提液+司坦唑醇2、黃芪醇提液+司坦唑醇3、黃芪多糖+司坦唑醇4、黃芪總黃酮+司坦唑醇5、黃芪皂苷+司坦唑醇6、黃芪水提液+苯丙酸諾龍7、黃芪醇提液+苯丙酸諾龍8、黃芪水提液+美雄酮9、黃芪醇提液+美雄酮
10、黃芪水提液+羥甲烯龍11、黃芪醇提液+羥甲烯龍12、黃芪水提液+達那唑13、黃芪醇提液+達那唑14、黃芪水提液+癸酸南諾酮15、黃芪醇提液+癸酸南諾酮研究結果表明以上15個組方均有較好的預防實驗動物骨質疏鬆的作用，其中黃芪水提液+司坦唑醇，黃芪醇提液+司坦唑醇及黃芪多糖+司坦唑醇效果好，副作用較少，黃芪水提液按實驗大鼠1.25g～5g.Kg-1；司坦唑醇0.125mg0.125mg0.5mg.Kg-1組成的複方效果最佳，具有很好的開發前景。其他組方，還要進行深入的研究，調整組方比例，效果可能也很好。
以上由黃芪與同化激素組成的複方製劑，可製成臨床可接受的丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑、皮膚外用製劑中的任何一種。這些製劑可加入藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑、分散劑、粘合劑、增稠劑、潤滑劑、稀釋劑。
具體實施例方式實施例一1材料與方法1.1動物 4月齡SPF級雄性SD大鼠40隻，體重235±21g，由廣東醫學院實驗動物中心提供(廣東省實驗動物質量合格證編號2002A014)1.2方法1.2.1試劑醋酸潑尼松原料，仙居製藥股份有限公司生產，批號981220；芪康骨寶提取液GBHQKH組芪康高劑量，組方為康力龍0.5mg.Kg-1+黃芪多糖5g.Kg-1.
QKM組芪康中劑量，組方為康力龍0.25mg.Kg-1+黃芪多糖2.5g.Kg-1.
QKL組芪康高劑量，組方為康力龍0.125mg.Kg-1+黃芪多糖1.25g.Kg-1.
三種劑量製劑，由廣東醫學院科技醫藥開發中心提供。
1.2.2儀器LEICA QWIN圖象分析儀(德國萊卡)；UV-3010紫外分光光度計(日本島津)；電感偶合等離子體直讀光譜儀(日本島津)；AE240電子天平(梅特勒-託利多儀器公司上海分公司)。羥脯氨酸測定試劑盒(Hpy)購於南京建成生物試劑公司。
1.2.3給藥方法
40隻SD大鼠隨機分為5組，每組8隻，1組為正常對照組(NS組)，予NS處理；其餘4組均予潑尼松按2.7mg.kg-1灌胃後再分別予N.S、GBH、GBM和GBL灌胃，5ml.kg-1，每天1次，連續12w。實驗過程中每周稱體重，所有動物在實驗結束前13、14天頸部皮下注射鹽酸四環素(25mg/kg)作為第一次螢光標記，實驗結束前3、4天注射calcein(5mg/kg)作為第二次螢光標記。
1.2.4測定指標(1)大鼠脛骨上段松質骨形態計量學參數靜態指標的觀察採用半自動圖象數位化分析儀對大鼠脛骨上段不脫鈣骨的8μm厚的不染色切片按照文獻[2～3]測定並計算出骨的靜態參數，包括骨小梁面積百分數(％TbAr)、骨小梁數量(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁分離度(Tb.Sp)，並在5μm切片(經Masson-Goldner Trichrome染色)中測量計算出單位骨面積破骨細胞的個數(Oc.N/BV)和吸收周長百分數(％OC.Pm)，以觀察骨量和骨結構的變化及了解其可能原因。
(2)大鼠脛骨上段松質骨形態計量學動態參數的觀察採用半自動圖象數位化分析儀對大鼠脛骨上段不脫鈣骨的8μm厚切片測定骨動態參數，包括骨小梁螢光周長百分率(％L.Pm)、礦化沉積率(MAR)、骨形成率(BFR/TV)，以了解骨表面礦化的量和速率，並解釋靜態參數變化的可能原因。
(3)大鼠骨生化指標的觀察左側尺骨除淨附著肌肉和軟組織後烘烤至恆重(BW)，將骨標本置於6mol/L HCl中恆溫消化24h後取濾液。將濾液分成兩份，一份測定微量元素的含量，另一份濾液測定羥脯氨酸的含量。
(4)大鼠骨物理指標的觀察左側股骨除淨附著骨上的肌肉和軟組織後稱量溼重(BWW)後於烤箱烘至恆重(BDW)。用帶表遊標卡尺測得股骨大轉子和股骨頸匯合處最低點到股骨髁間窩的距離為股骨長度(BL)和第三轉子下行至股骨幹交接之處的股骨寬度(BD)。骨的宏觀生長包括骨的長長和長粗，因此測量這兩者可體現骨的總體生長狀況。
1.3統計學處理所有測定指標均採用均數加減標準差的形式表示(x±s)，數據分析使用SPSS 11.0進行分析，以p＜0.05，p＜0.01表示具有統計學意義。
2結果
2.1芪康骨寶對潑尼松大鼠脛骨上段松質骨形態計量學靜態參數的影響各組大鼠脛骨上段松質骨形態計量學靜態參數變化見表1表1芪康骨寶對潑尼松大鼠骨形態計量學靜態參數的影響(x±s，n＝8)

Compare with NS*P＜0.05，**P＜0.01；Compare with GC △P＜0.05，△△P＜0.01與NS組比較，GC組大鼠骨靜態參數中％Tb.Ar、Tb.N、Tb.Th分別下降41.3％、31.9％和14.2％(P＜0.01)，提示GC組大鼠松質骨有明顯丟失。與GC組比較，QKGB三組分別將潑尼松大鼠的％Tb.Ar、Tb.N和Tb.Th提高了89.6％、84.3％、70.7％；55.1％、47.5％、49.0％和15.8％、18.5％和10.7％。將Tb.SP、降低了39.4％、35.3％和34.9。
2.2芪康骨寶對潑尼松大鼠脛骨上段松質骨形態計量學動態參數的影響各組大鼠的骨形態計量學動態參數變化見表2表2 芪康骨寶對潑尼松大鼠松質骨形態計量學動態參數的影響(x±s，n＝8)

Compare with NS*P＜0.05，**P＜0.01；Compare with GC △P＜0.05，△△P＜0.01.
與NS組比較，GC組大鼠骨動態參數中％L.Pm及MAR的變化不大(P＞0.05)，但BFR/TV減少40％(P＜0.05)，提示長期超生理劑量使用潑尼松可使大鼠松質骨骨形成總量減少；同時，GC組的Oc.N/BV、％Oc.Pm比NS組分別增加了236.1％和191.4％(P＜0.01)，提示該組破骨細胞增多，骨吸收增加，骨質丟失明顯。與GC組比較，QKGB三組大鼠松質骨的骨形成率明顯上升，GBH、GBM和GBL三組分別比GC組上升了56.1％、27.5％和33.2％(P＜0.05)，而Oc.N、％Oc.Pm降低了63.4％、53.9％和62.6％，提示QKGB可顯著促進大鼠骨形成而抑制骨的吸收。
2.3芪康骨寶對潑尼松大鼠尺骨生化指標的影響各組大鼠骨生化指標的變化見表3表3 芪康骨寶對潑尼松大鼠骨生化指標的影響(x±s，n＝8)

Compare with NS*P＜0.05，**P＜0.01；Compare with GC △P＜0.05，△△P＜0.01.
與NS組比較，GC組大鼠尺骨重量明顯下降，單位骨重量的Hyp含量也下降但骨鈣、磷含量無顯著性差異(P＞0.05)。提示大鼠長期應用潑尼松後可造成骨的有機質和骨無機質同時丟失但以有機質的丟失明顯；與GC組比較，QKGB可提高骨Hyp的濃度，但單位骨質含量並不高(P＞0.05)，這可能與三組的骨重顯著升高有關。
2.4芪康骨寶對潑尼松大鼠股骨物理指標的觀察各組大鼠的骨物理指標變化見表4表4 芪康骨寶對潑尼松大鼠股骨物理指標的影響(x±s，n＝8)

Compare with NS*P＜0.05，**P＜0.01；Compare withGC △P＜0.05，△△P＜0.01.
與NS組比較，GC組大鼠股骨溼重(BWW)、股骨幹重(BDW)、股骨長度(BL)和股骨寬度(BD)明顯降低(P＜0.05)，提示潑尼松長期使用後可使大鼠骨質明顯丟失，同時可顯著抑制骨的生長，表現為骨的長長和長粗受限，尤其以長長受限明顯。QKGB治療後，三組大鼠的骨重、長度和寬度均比GC組增加(P＜0.01)，提示CD可明顯對抗潑尼松的骨生長抑制作用。
3討論本實驗研究發現，潑尼松長期超生理劑量應用可使大鼠骨量明顯丟失，骨質平衡破壞，主要表現為骨中Hyp含量顯著減少，而單位骨中鈣和磷含量變化不明顯(P＞0.05)，但單位骨中鈣/磷比值降低，骨中有機質的含量丟失程度大於無機質，造成骨質成分比例不協調，無機質含量相對較有機質含量高。羥脯氨酸(Hyp)是骨膠原中的特殊成分，在骨膠原中含量比較穩定，其含量減少是骨中有機質減少的標誌其含量的減少可造成骨的脆性增高而韌性下降，這可能是臨床上長期應用糖皮質激素患者容易發生骨折的原因。本實驗中GC組大鼠BFA/TV降低，提示單位骨組織面積的骨形成減少，骨質含量顯著降低。％Tb.Ar是反映骨量變化的重要指標，Tb.N、Tb.Th和Tb.SP是反映骨小梁顯微結構的綜合指標，實驗結果顯示潑尼松使用後大鼠以上參數發生明顯變化，呈現骨質疏鬆狀態。
芪康膠囊由黃芪多糖和康力龍(司坦唑醇)組成，在組方中，黃芪可通過抑制骨吸收而不抑制骨形成作用來對抗去勢大鼠的骨丟失[4]；研究認為[5～6]黃芪抗衰老、增強免疫力和改善血循環保護肝腎功能的作用突出，也可通過促進膠原蛋白合成而促進成骨細胞分泌類骨質[7]，可有效對抗糖皮質激素長期應用造成的成骨細胞功能抑制作用。司坦唑醇是一種人工合成的同化類激素，可促進蛋白質的合成，並可增加鈣鹽沉積，促進骨合成的作用，本課題組吳鐵等[8]曾證明其對潑尼松大鼠骨丟失有明顯的防治作用，對治療去勢性和藥物性骨質疏鬆症有一定的療效，臨床上也觀察到司坦唑醇可明顯改善患者的骨質疏鬆症狀[9]。本實驗結果也提示由這兩種中藥組成的芪康膠囊具有較好的防治糖皮質激素性骨質疏鬆的作用。
權利要求
1.用於治療骨質疏鬆症的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物是由同化激素和黃芪組成，同化激素可以是司坦唑醇、苯丙酸諾龍、美雄酮、羥甲烯龍、達那唑、癸酸南諾酮。
2.如權利要求1所述的用於治療骨質疏鬆症的藥物組合物，該組合物的黃芪可以是黃芪的水提取物、黃芪的醇提取物、黃芪多糖、黃芪總黃酮、黃芪皂苷。
3.如權利要求1所述的任一藥物組合物，其特徵在於其所製得製劑是臨床可接受的丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑、皮膚外用製劑中的任何一種。
4.根據權利要求1所述的任一藥物組合物，其特徵在於其製劑當中還可加入藥物賦形劑。
全文摘要
本發明公開了由豆科植物蒙古黃芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Beg)Hsiao或膜莢黃芪A.membranaceus(Fisch.)Bge的乾燥根與司坦唑醇製備的防治骨質疏鬆症的新藥。黃芪的水提液、黃芪醇提液、黃芪多糖、黃芪總黃酮、黃芪皂苷與同化激素司坦唑醇，苯丙酸諾龍、美雄酮、羥甲烯龍、達那唑、癸酸南諾酮組成的藥物製劑，對實驗動物骨質疏鬆模型有明顯的防治作用。以上由黃芪與同化激素組成的複方製劑，可製成臨床可接受的丸劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑、皮膚外用製劑中的任何一種。
文檔編號A61P19/00GK1718223SQ200510078238
公開日2006年1月11日 申請日期2005年6月6日 優先權日2005年6月6日
發明者吳鐵, 崔燎, 鄒麗宜, 王永東, 劉鈺瑜, 許碧蓮 申請人:廣東醫學院