3－吡咯啉－2－羧酸衍生物的製備方法
2023-06-19 03:45:01
專利名稱：3－吡咯啉－2－羧酸衍生物的製備方法
技術領域：
本發明涉及製備吡咯啉-2-羧酸衍生物的新方法。
用3,4-脫氫脯氨酸代替脯氨酸在生物學活性肽或肽模擬物方面偶爾會引起活性損失(A.M.Fellix et.al.Int.J.Pept.Prot.Res.10,(1997)299；C.R.Botos et.al.J.Med.Chem.22,(1979)926；G.H.Fisher,W.Ryan,FEBS Lett.107,(1979)273)；相反，當同時存在毒性降低時，在某些情況下上述效果會提高(G.H.Fisher,W.Ryan,FEBS Lett.107,(1979)273；S.Natarajan et al.，「肽，結構和生物學作用」，E.Gross,J.Meienhofer,Eds.,Pierce Chemical Company,1979,p.463)。
通過文獻記載的方法，以工業規模合成N-保護的3,4-脫氫脯氨酸有很詳盡的記載，例如按照Tchugaeff方法通過從羥基脯氨酸熱順式消除S-甲基黃原酸根製備，該方法的缺點是使用大量的甲基碘，產生甲硫醇和氧硫化碳(J.-R.Dormay et al.,Angew.Chem.92,(1980)761；Houben-weil,Methoden der Organischen Chemie,vol.5/1b,126(1972))。
在發煙氫碘酸中，用碘化鏻還原吡咯-2-羧酸也存在許多問題，這是因為使用大量過量的氣態碘化氫，以及產率明顯降低和在大量反應時突然開始聚合(J.W.Scott et al.,Synth.Commun.10(7),(1980)529)。另一方面，在十分溫和的條件下會發生Boc-保護的4-苯基亞硒醯基脯氨酸甲酯的消除((j.-R Dormay,Synthesis 9,(1982)753)。消除反應在室溫發生，高選擇性地產生Δ3-烯。熱順式消除得到大量的Δ4-烯異構體。但是消除氧化硒也很不利，這是因為產生有毒的含硒殘留物，在試驗工廠規模的反應情況下需要費用很高的精心處理，並且特別是在作為藥物活性成分時，預先消除硒酸(selenigenic[sic]acid)形成雙鍵是不利的，在藥物中含有甚至極微量的含硒化合物都會帶來毒性。
少量的3-吡咯啉可以從N-取代的3-甲基磺醯氧基吡咯烷得到(T.Unoet al.，J.Heterocycl.Chem.24,(1987)1025)，消除磺酸根(例如甲磺酸根)製備3-吡咯啉-2-羧酸衍生物以前還沒有記載。
文獻所述的製備3-吡咯啉-2-羧酸衍生物的上述方法對於工業規模的合成是不適用的。
本發明涉及製備式Ⅰ表示的3-吡咯啉-2-羧酸衍生物的方法
其中R1是H，C1-C6-烷基，苄基，苄基取代的苯基，烯丙氧羰基，C1-C6-烷氧羰基，苄氧羰基，其中的苄基殘基可以被OCH3取代，或C1-C4-烷基羰基；或者R1是通過C終端連接的胺基酸殘基，並且可以在氮原子上烷基化和醯基化；R2是OH,C1-C4-烷氧基，苄氧基或NR3R4；其中R3和R4彼此獨立地是H,C1-C4-烷基，苄基，苯基或吡啶基，對於R3和R4中的芳族體系可以被選自甲基，甲氧基，羥基，氰基或滷素的基團中的直到三個相同或不同的取代基取代，所述方法包括用鹼從式Ⅱ表示的磺酸酯中消除磺酸殘基，
其中R1和R2與上述含義相同，R5是C1-C6-烷基，苄基，三氟甲基，萘基或苯基，它們可以是未取代的或被選自甲基，硝基或滷素的基團取代。
優選的R1是C1-C4-烷基羰基，苄基，苄基取代的苯基，C1-C6-烷氧羰基和苄氧羰基；如果苄氧羰基被OCH3取代，優選在對位有一個甲氧基；C1-C6-烷氧羰基是特別優選的。
優選的R2是OH和C1-C4-烷氧基。
優選的R5是C1-C6-烷基，苄基，特別是C1-C4-烷基。
式Ⅰ化合物在五員環中有一個不對稱碳原子，式Ⅱ化合物在五員環中有兩個不對稱碳原子。式Ⅱ化合物可以作為外消旋體，非對映體混合物，非對映體純的及對映體純的化合物被使用，因此式Ⅰ化合物可以按照用作前體的式Ⅱ化合物的立體化學結構和反應條件，作為外消旋體或以旋光活性形式被獲得。
式Ⅱ化合物可以按照文獻所述方法製備(例如D.J.Abrahan,M.Mokotoff,L.Sheh,J.E.Simmons,J.Med.Chem.26(4),(1983)549)。
假如R2是C1-C4-烷氧基或苄氧基，從旋光活性化合物Ⅱ消除磺酸殘基(即-O-SO2-R5)會發生外消旋化作用，結果得到外消旋的3,4-脫氫脯氨酸酯，隨後通過酶法外消旋體拆分得到D-和L-3,4-脫氫脯氨酸衍生物(方法A)方法A:(R5=CH3,R2=-OCH3)
該方法的特別優選的實施方案包括使用其中R2是OH的式Ⅱ化合物，並且羧酸殘基的絕對構型是確定的，即相應於R或S構型，得到式Ⅰ的相應的羧酸而不發生外消旋化作用(方法B)方法B:(R5=CH3,R2=-OH)
非質子溶劑適用於消除反應A和B，特別是DMF，二噁烷，THF,DME,DMSO,CH3CN，溶劑中可以含有少量的水和醇。
根據上述方法，使用1.0-1.5當量的鹼(方法A)或2.0-3.0當量的鹼(方法B)。合適的鹼是氫化物，胺化物，鋰、鈉、鉀、銣、銫、鈣或鎂的醇化物，但是優選鈉或鉀的醇化物。優選使用醇鈉作為鹼。合適的醇殘基部分可以是伯醇，仲醇及叔醇，也可以使用二醇，三元醇，以及三，二或單亞乙基二醇單醚類型的醚醇或者氨基醇。優選三亞甲基二醇單甲醚，二亞乙基二醇單甲醚或亞乙基二醇單甲醚，二甲氨基乙醇或2-[2[(二甲基氨基)乙氧基]-乙醇。
甚至於-20℃下發生消除磺酸根，反應通常於-20℃到+100℃進行，優選於-10℃到60℃進行。通過方法A從相應的酯消除磺酸根甚至於-20℃在所得到的3,4-脫氫脯氨酸酯的α-碳原子上發生外消旋化作用。
驚異地發現，該方法特別是改進的方法B能夠使用其中R2是OH的式Ⅱ的前體進行，並且羧酸殘基有R或S構型，幾乎沒有外消旋化。該改進方法中優選使用的鹼是氫化物，伯醇化物，伯醚醇化物，伯氨基醇化物。2-甲氧基乙醇化物，2-(2-甲氧基乙氧基)乙醇化物或2-[2-(二甲氨基)乙氧基]乙醇化物是特別優選使用的。每當量的前體優選使用2.0-2.5當量的鹼，對於方法B優選的溫度範圍是-10℃到+25℃。
消除反應使用的鹼可以以固體形式加入到反應混合物中，但是也可以於反應前就地製備。例如，如果消除反應使用的鹼是2-甲氧基乙醇鈉，該鹼可以就地通過往強鹼如氫化鈉，叔丁醇鈉或雙(三甲基甲矽烷基)氨基鈉的溶液或懸浮液中滴加適當的醇來有利地製備。反應可以半間歇式地將鹼溶液加入到溶解的式Ⅱ前體中，或者優選地將式Ⅱ前體的溶液加入到鹼溶液或懸浮液中完成。
反應混合物可以通過蒸餾，萃取，重結晶，色譜法或將這些方法的結合來進行後處理。
所需的對映體可以通過使用(+)或(-)酒石酸從外消旋的3,4-脫氫脯氨酸分離出來(見J.W.Scott et al.,Synthetic Communication 10(1980)529和U.S.4,111,951)或者在製備Boc-保護的胺基酸以後，使用旋光活性的1-(4-硝基苯基)乙胺進行外消旋體拆分(U.S.4,066,658,J.-U.Kahl,T.Wieland,Liebigs Ann.Chem.8,(1981)1445)。
通過優選的方法B製備的沒有外消旋化的N-保護的3,4-脫氫脯氨酸能夠有利地使用手性胺作為銨鹽通過重結晶的方法提純，特別是作為二乙基銨鹽以純的形式得到L-boc-3,4-脫氫脯氨酸是可能的。
因之本發明涉及式Ⅳ化合物
其中R6是氨基保護基，並且胺是單烷基，二烷基或三烷基胺，及其旋光活性D或L形式，其中的烷基合有1-4個碳原子並且可以被C5-7環烷基取代。R6優選boc-保護基，「胺」優選二乙基胺或二環己基胺。
方法A得到的酯能夠用酶例如脂肪酶，酯酶和蛋白酶有效地部分分裂，得到游離酸的一個對映體，而另外一個對映體以酯的形式保留。
在上述方法中可以使用大量的酶作為水解酶。優選使用蛋白酶，酯酶，特別是脂肪酶。微生物的脂肪酶是特別合適的脂肪酶，並且能夠從例如酵母或細菌中分離出來；另外特別合適的水解酶是從Novo Nordisk可買到的酶(Enzyme ToolboX)；特別是脂肪酶SP523；SP 524；SP 525；SP526和Novozym 435。
按照本發明的方法，使用市場上可以買到的脂肪酶「ChirazymeL1-L8」(Boehringer Mannheim)也是有利的。還可以使用酯酶(例如豬肝酯酶)。
酶可以以天然的或固定化的形式使用。
酯分裂反應於pH6-8的緩衝條件下及優選室溫下進行。
該新方法能夠以十分簡單的方式製備化合物Ⅰ，對於製備迄今為止很難製備的，和在某些情況下產率很低的脫氫脯氨酸衍生物是十分重要的。
使用這種新方法，特別是酶法，旋光活性的N-保護的3-吡咯啉-2-羧酸衍生物能夠特別有利地以游離酸或可以游離出遊離酸的酯的形式得到。
假如旋光活性的酸通過酶法從酯得到，作為規律酯的一個對映體是不變的，例如後者能夠用鹼外消旋化，並且又受到酶法分裂。
本發明的優點是，使用簡單方法及在溫和的條件下，在環境允許的反應條件下甚至以工業規模使製備立體異構純的3,4-脫氫脯氨酸衍生物首次成為可能。使人驚異的是磺酸殘基的消除反應甚至能夠在低溫時進行。
該新方法製備的物質是很重要的，例如它們是製備低分子量肽衍生物的有價值的中間體，低分子量肽衍生物是凝血酶抑制劑(參見WO94/29336)，其中的脯氨酸殘基被脫氫脯氨酸代替。還發現3,4-脫氫脯氨酸能夠用於抑制膠原蛋白的合成(US 4,006,658)。
按照本發明的方法得到的粗產品不需要進一步提純，就可以進一步製備肽衍生物中間體，這對於進一步加工是特別有利的，而且肽衍生物又很容易提純。這些中間體具有以下結構式
其中R1有上述含義，X是
其中R6=H,CH3,OCH3,OH或滷素；它們可以是通過使式Ⅰ化合物活化，在鹼例如三乙胺，二異丙基乙基胺及縮合劑如PPA，戊醯氯或二環己基碳化二亞胺/羥基琥珀酸醯亞胺存在下，然後連接H2N-CH2-X，從式Ⅰ化合物製備，以便得到式Ⅲ化合物。反應可以方便地在溶劑如二氯甲烷，THF，二噁烷，叔丁基甲基醚，DME或乙腈中於-20℃到+30℃下進行。
實施例在實施例中使用以下縮寫Bns苄基磺醯基；Boc叔丁氧羰基；DIPEA二異丙基乙基胺；DME 二甲氧基乙烷；DMF 二甲基甲醯胺；KOtBu叔丁醇鉀；Ms 甲磺醯基；PPA 丙基膦酸酐；Pro 脯氨酸；Pyr 3,4-脫氫脯氨酸；RT 室溫；THF 四氫呋喃；A．原料的製備a)Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OCH3和Boc-(L)-(4-BnsO)-Pro-OCH3(4R)-N-Boc-4-羥基-(L)-脯氨酸甲酯和甲磺醯氯反應得到(4R)-N-Boc-甲基-磺醯氧基-(L)-脯氨酸甲酯(D.J.Abraham,M.Mokotoff,L.Sheh,J.E.Simmons,J.Med.Chem.26(4),(1983)549)。類似於和甲磺醯氯的反應，使用苄基磺醯氯，得到(4R)-N-Boc-4-苄基磺醯氧基_(L)-脯氨酸甲酯，從乙醇中重結晶以後產率為76％。1H-NMR(CDCl3,δ,ppm):
7.40和7.28(s,5H，芳族的)，4.95和4.85(m,1H,O-CH),4.40(s,2H,SO2-CH2),4.4-4.25(1H,N-CH),3.72和3.71(s,3H,CO2CH3),3.7-3.50(2H,N-CH2),2.53-1.95(2H,CH2,1.45 and 1.42(s,9H,Boc)；(2旋光體)。b)(4R)-N-Boc-(4-MsO)-Pro-OH:
186g(575mmol)甲酯Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OCH3在500ml二噁烷和1150ml 1N NaOH中於0℃水解2.5h，用乙醚萃取後水相用2N鹽酸調節到pH3，產品用乙酸乙酯萃取，用Na2SO4乾燥，完全汽提出溶劑，得到163g(92％)淡黃色油狀物，純度94％，產品慢慢固化。[α]D22=-50.0(c=1.01；MeOH)；從異丙基醚重結晶以後，1H-NMR(CDCl3,δin ppm):ca.9-8(COOH),5.35-5.20(m,1H,O-CH),4.60-4.40(1H,N-CH),3.95-3.65(2H,N-CH2),3.08(s,3H,SO2CH3),2.85-2.25(2H,CH2),1.50和1.40(s,9H,Boc)；(2旋光體)B．最終產品的製備實施例1BOc-(D/L)-Pyr-OCH3的製備a)100g(309mmol)Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OCH3溶解於160ml無水DMF中，於0-5℃滴加36.45g(325mmol)KOtBu於300ml無水DMF中的溶液，滴加1小時，於0-5℃繼續攪拌30分鐘，於室溫攪拌2小時。將混合物倒入冰水中，用乙醚/乙酸乙酯(5/1)萃取3次，有機相用水洗滌，用Na2SO4乾燥後，於35℃完全汽提出溶劑，得到68g粗酯，於1.7mbar,100-102℃蒸餾，得到固化的無色油狀物(產率56％)。1H-NMR(CDCl3,δin ppm):6.05-5.95(m,1H,-CH=CH-),5.80-5.67(m,1H,-CH=CH-),5.05和4.98(m,1H,N-CH),4.35-4.15(m,2H,N-CH2),3.75和3.74(s,3H,CO2CH3),1.47 and 1.43(s,9H,Boc)；(2旋光體)b)同樣的化合物(Boc-(D/L)-Pyr-OCH3)從苄基磺酸酯Boc-(L)-(4-BnsO)-Pro-OCH3)得到。於50ml無水DMF中的5g(12.5mmol)上述苄基磺酸酯於-10℃滴加到0.5g(12.5mmol)NaH於10ml無水DMF中的懸浮液中，室溫攪拌過夜，類似a)中消除甲磺酸酯的後處理之後，得到a)2.2g粗酯，產品用矽膠柱色譜法提純(移動相乙酸乙酯/己烷2∶3)，但是優選蒸餾，因為發色團弱。實施例2Boc-(L)-Pyr-OH的製備a)50g(161.6mmol)Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH溶解在650ml DMF中(往其中加入25ml水)，於45分鐘及室溫將其滴加到14.5g 55-65％NaH(大約364mmol)於400ml DMF中，無需進一步冷卻溫度即升高到30℃，室溫攪拌混合物15小時，再於50℃攪拌1小時，倒入冰水中，用乙醚/乙酸乙酯(2∶1)洗滌3次，水相用2N鹽酸酸化到pH2，產品用乙酸乙酯萃取，用Na2SO4乾燥後，於35℃完全汽提出溶劑，得到36g粗產品，為黃色油狀物，它含有70％的產品，發現產品/前體比是97∶3(HPLC∶水/乙腈8∶2+0.1％TFA；MerckPurospher RP-18e；於210.4nm處鑑定)。對映體比(L):(D)是90∶10。用3-吡啶甲基胺衍生物偶合酸性基團後，以Boc-3,4-脫氫脯氨醯3-吡啶甲基胺，在手性HPLC柱上鑑定對映體的比例。以前的研究表明偶合本身實質上不發生外消旋化。
類似的反應，但是使用3當量的NaH，室溫攪拌4小時得到產品(65％)(產品∶前體=94∶6；(L)∶(D)=96∶4)。1H-NMR(CDCl3,δin ppm):10.5-9.5(COOH),6.10-5.90(1H,-CH=CH-),5.88-5.70(1H,-CH=CH-),5.12-4.95(1H,N-CH),4.30-4.15(2H,N-CH2),1.55-1.35(9H,Boc)；(2旋光體)通過傳統的拆分方法，Boc-3,4-脫氫脯氨酸和(+)-脫氫松香胺以相應的銨鹽從丙酮中結晶，無需進一步重結晶，消除胺以後，游離出Boc-(L)-3,4-脫氫脯氨酸，純度85％，對映體比(L)∶(D)=96∶4。
b)46.2g叔戊醇鈉(398.5mmOl)加入到150ml THF中，於10℃加入32.9g2-甲氧基乙醇(429.5mmol)。滴加50g Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH(159.4mmol)於100ml THF中的溶液，使內部溫度不超過8-10℃。加完後，將混合物再於10℃攪拌20小時，加入5-10℃的冰水300ml後，用50ml甲基叔丁基醚萃取一次，再用鹽酸酸化到pH2。粗產品用二氯甲烷萃取，蒸出溶劑後以黃色油狀物游離。重量為40.9g，其中18g是Boc-(L)-3,4-脫氫脯氨酸，使用HPLC分析鑑定，使用內標校準(最初梯度水(0.1％H3PO4)/乙腈70∶30；柱子Prodigy(ODS3)100A；於210nm處鑑定)。同樣用HPLC分析鑑定出(L):(D)對映體比為99∶1(己烷/異丙醇8.75∶1.25,0.1％HCOOH；柱子Chiracel OD；於230nm處鑑定)。
70g Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH(224mmol)在同樣條件下反應。用二氯甲烷萃取後，粗產品通過蒸餾溶劑交換轉移到220ml甲基叔丁基醚中，然後通過加入16.5g二乙胺(224mmol)使存在的Boc-(L)-3,4-脫氫脯氨酸以二乙基銨鹽的形式沉澱，得到23.8g的上述鹽。上述HPLC分析方法指出，在以該方法沉澱出的產品中(D)對映體未發現。1H-NMR(DMSO,δin ppm):5.86-5.67(2H,-CH=CH-),4.6-4.5(N-CH),4.1-3.9(N-CH2),2.88-2.7(4H q,NCH2CH3),1.45-1.25(9H,Boc 2旋光體),1.2-1.05(6H,NCH2CH3)(α)D22[sic]=-240.1°(C=1.08,MeOH)熔點130-133℃c)10.52g雙(三甲基甲矽烷基)氨基鈉(57.4mmol)加入到25ml THF中，冷卻下於15分鐘滴加8.25g於15ml THF中的2-[2-(二甲氨基)乙氧基]乙醇(62mmol)以後，於室溫攪拌30分鐘。然後於-5℃下20分鐘內滴加溶於15ml THF中的7.1g Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH(23.0mmol)，混合物於-5℃攪拌1小時，0℃攪拌2小時，室溫攪拌過夜。倒入125g冰水中，用甲基叔丁基醚萃取4次，水相用60ml 10％的檸檬酸酸化到pH2.2，於室溫攪拌過夜。反應溶液用甲基叔丁基醚萃取3次以後，收集的有機相，連續用水，飽和食鹽水，水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，減壓濃縮，得到粗產品4.1g Boc-(L)-3,4-脫氫脯氨酸。將其溶解於20ml甲基叔丁基醚中，滴加溶於10ml甲基叔丁基醚中的1.35g二乙胺(18.52mmol)，加入石油醚以便完全沉澱上述鹽。用吸濾法過濾出產品，乾燥，得到4.0g Boc-(L)-3,4-脫氫脯氨酸。從母液中得到第二批0.3g結晶，所需產品的總產率是66％。實施例3Boc-(D,L)-Pyr-OH的製備冷卻下將13g異丙醇(215mmol)滴加到8g於150mlDME中的60％的NaH(200mmol)中。不再放出氫以後，於0℃加入於100ml DME中的25g Boc-(L)-(4-MsO)-Pro-OH(80mmol)溶液。於0℃保持1小時後，溫熱到20℃保持20小時，再加入150ml水。用甲基叔丁基醚萃取一次，用鹽酸酸化到pH2，用二氯甲烷萃取，產品重量是17g。(L):(D)對映體比例通過HPLC分析測定，是57∶43(己烷/異丙醇8.75∶1.25,0.1％HCOOH；柱子ChiracelOD；於230nm處測定)。實施例4酶法將Boc-(D/L)-Pyr-OCH3分裂為Boc-(L)-Pyr-OH
100ml磷酸鹽緩衝液(pH7)和15ml THF中的5.68g(25ml)的Boc-(D/L)-Pyr-OCH3於室溫和3.12g Novozym435一起振蕩24小時。在此期間使用1N NaOH將pH調節到最初的值，反應進程通過氫氧化鈉溶液的消耗觀察。過濾固體，用1N NaOH將濾液的pH調節到10。未反應的對映體Boc-(D)-Pyr-OCH3用乙酸乙酯/乙醚1∶1萃取，水相用1N鹽酸調節到pH1，產品Boc-(L)-Pyr-OH用乙酸乙酯萃取3次，得到2.14g產品，用甲苯/己烷或乙醚/己烷重結晶。產品的旋光為[α]D22=-273.8°(c=1.03；MeOH)；(Lit.:[α]D25=-272°(c=1.0；MeOH)J.-U.kahl,T.Wteland,LiebigsAnn.Chem.8,(1981)1445)。使用實施例1H-(L)-Pyr的(6-氨基甲醯基)-3-吡啶甲基醯胺二鹽酸鹽的製備於-10℃下將5.3ml(30.3mmol)DIPEA滴加到於30ml二氯甲烷中的1.5g實施例2得到的粗產品Boc-Pyr-OH中，5分鐘後，加入1.58g(7.0mmol)(6-氨基甲醯基)-3-吡啶甲基醯胺二鹽酸鹽，再過5分鐘後，加入於5ml二氯甲烷中的5.7ml(7.9mmol)PPA(50％乙酸乙酯溶液)，1小時內將反應混合物從-10℃溫熱到0℃，用二氯甲烷稀釋，連續用飽和碳酸氫鈉溶液，5％的檸檬酸和飽和食鹽水洗滌。用硫酸鈉乾燥有機相，完全汽提掉溶劑，得到1.8g粗產品Boc-(L)-Pyr的(6-氨基甲醯基)-3-吡啶甲基醯胺，後者於50℃在30ml 0.9摩爾異丙醇/HCL中攪拌50分鐘。通過吸濾除去該過程中產生的沉澱，溶解在少量甲醇中，用異丙醇沉澱後再除去。45℃下減壓乾燥，得到2.0g H-(L)-Pyr的(6-氨基甲醯基)-3-吡啶甲基醯胺二鹽酸鹽，為白色粉末(純度95％)；(L)∶(D)大於99∶1。1H-NMR(DMSO-d6,δin ppm):10.9和8.9(每個1H,-NH2-_),9.77(t,1H,CO-NH),8.60,8.10 and 8.00(each 1H,芳族的H),8.25和7.75(每個1H,CO-NH2),6.03(s,2H,-CH=CH-),5.10(1H,N-CH-Co)4.47(d,2H,CH2)4.00(2H,CH2)使用實施例2H-(L)-Pyr的4-CN-苄基醯胺鹽酸鹽的製備
10g粗的Boc-Pyr-OH和6.2g使用實施例1的P-氰基苄基胺反應，處理後得到14.7g粗的Boc-(L)-Pyr的4-CN-苄基醯胺，後者於50℃在230ml 1摩爾的異丙醇/HCl中攪拌2小時。將溶液冷卻到室溫，產物慢慢開始沉澱，吸濾除去固體，得到3.7g H-(L)-Pyr的4-CN-苄基醯胺鹽酸鹽，為白色粉末。(純度96％；(L)∶(D)大於99∶1)。1H-NMR(DMSO-d6,δin ppm):10.9和8.9(每個1H,-NH2-_),7.82和7.47(每個2H，芳族的H),6.02(s,2H,-CH=CH-),5.10(1H,N-CH-CO)4.45(d,2H,CH2)4.02(2H,CH2)
權利要求
1．製備式Ⅰ表示的3-吡咯啉-2-羧酸衍生物的方法
其中R1是H，C1-C6-烷基，苄基，苄基取代的苯基，烯丙氧羰基，C1-C6-烷氧羰基，苄氧羰基，其中的苄基殘基可以被OCH3取代，或C1-C4-烷基羰基；或R1是通過C終端連接的胺基酸殘基，並且可以在氮原子上烷基化和醯基化；R2是OH,C1-C4-烷氧基，苄氧基或NR3R4；其中R3和R4彼此獨立地是H,C1-C4-烷基，苄基，苯基或吡啶基，對於R3和R4中的芳族體系，可以被選自甲基，甲氧基，羥基，氰基或滷素的基團中的直到三個相同或不同的取代基取代，所述方法包括用鹼從式Ⅱ表示的化合物中消除磺酸殘基，
其中R1和R2與上述含義相同，R5是C1-C6-烷基，苄基，三氟甲基，萘基或苯基，它們可以是未取代的或被選自甲基，硝基或滷素的基團取代。
2．按照權利要求1製備旋光活性的3-吡咯啉-2-羧酸的方法，其特徵是用鹼從式Ⅱ化合物消除磺酸殘基，其中R1和R5有上述含義，R2是C1-C4-烷氧基或苄氧基，並且旋光活性的游離酸是通過酶法從上述方法中得到的外消旋酯游離出來的，並且以適宜的銨鹽形式分離出來。
3．按照權利要求1製備旋光活性的3-吡咯啉-2-羧酸的方法，其中是用鹼從式Ⅱ化合物消除磺酸殘基，其中的羧酸殘基是(R)或(S)構型，R1和R5有上述含義，R2是OH，如果需要，用該方法得到的產品被轉變成銨鹽，以便提純和分離。
4．權利要求1,2，或3製備的化合物用於製備式Ⅲ化合物的用途
其中R1有上述含義，X是
R6是H,CH3,OCH3,OH或滷素。
5．式Ⅳ表示的化合物
其中R6是氨基保護基，胺是單，二或三烷基胺，其中的烷基含有1-4個碳原子，並且可以被C5-C7的環烷基取代。
6．按照權利要求5的式Ⅳ化合物，其中的R6是Boc保護基，胺是二乙胺或二環己基胺。
7．按照權利要求5或6的化合物，其是D型。
8．按照權利要求5或6的化合物，其是L型。
全文摘要
製備式Ⅰ表示的3－吡咯啉－2－羧酸衍生物的方法:其中:R
文檔編號C12P17/04GK1226231SQ97196780
公開日1999年8月18日 申請日期1997年7月14日 優先權日1996年7月26日
發明者H·馬克, T·普菲弗, W·塞茨, T·齊爾科, F·巴爾肯赫爾, U·朗格 申請人:Basf公司