一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法

2023-06-06 21:28:01 2

一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法
【專利摘要】本發明公開了一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法，該方法建立氣相色譜法來測定淫羊藿總黃酮中有機溶劑乙酸乙酯和正丁醇殘留量,該方法中以甲醇為溶劑，異戊醇為內標,本發明採用毛細管氣相色譜法，以甲醇為溶劑，異戊醇為內標，對淫羊藿總黃酮中的乙酸乙酯和正丁醇殘留量進行測定，結果表明，該方法操作簡便、靈敏度高，準確度好，可作為淫羊藿總黃酮提取物中有機溶劑殘留量的測定方法。
【專利說明】
—種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量
方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法，屬於生物醫藥檢測【技術領域】。

【背景技術】
[0002]淫羊藿為小檗科植物淫羊藿E P imed i umb rev 1- c O rnuMaX i m、箭葉淫羊藿 Epimedium.sagittatum(Seb.etZucc.)M a X i m、柔毛淫羊藿 Epimedium pu-bescens Maxim或朝鮮淫羊藿E pimedium koreanum Nakai的乾燥葉,其主要有效成分為總黃酮，淫羊藿苷，多糖等，淫羊藿總黃酮在提取純化的工藝中使用了乙酸乙酯和正丁醇兩種有機溶劑，為保證用藥的安全性，有必要對乙酸乙酯、正丁醇有機溶劑殘留量進行研究和控制。


【發明內容】

[0003]本發明的目的是:提供一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法，該方法簡單可行，檢測精度高，符合相關國家標準，以克服現有技術的不足。
[0004]本發明的技術方案
一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法，該方法建立氣相色譜法來測定淫羊藿總黃酮中有機溶劑乙酸乙酯和正丁醇殘留量，該方法中以甲醇為溶劑，異戊醇為內標。
[0005]前述的一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法中，具體方法為採用毛細管氣相色譜法，以S E 5 4毛細管柱為色譜柱，程序升溫，氮氣為載氣，進樣口溫度為2 3 (TC，F I D檢測器溫度為2 4 (TC。
[0006]由於採用上述技術方案，與現有技術相比，本發明採用毛細管氣相色譜法，以甲醇為溶劑，異戊醇為內標，對淫羊藿總黃酮中的乙酸乙酯和正丁醇殘留量進行測定，結果表明，該方法操作簡便、靈敏度高，準確度好，可作為淫羊藿總黃酮提取物中有機溶劑殘留量的測定方法。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0007]附圖1為淫羊藿總黃酮在對照組溶液的氣相色譜圖；
附圖2為淫羊藿總黃酮在正丁醇溶液的氣相色譜圖；
附圖3為淫羊藿總黃酮在陰性對照溶液的氣相色譜圖；
附圖4為樣品中溶劑殘留量測定結果示意圖；
附圖5為正丁醇回收率實驗結果示意圖；
附圖6為樣品中溶劑殘留量測定結果示意圖。

【具體實施方式】
[0008]下面結合附圖對本發明作進一步的詳細說明，但不作為對本發明的任何限制。
[0009]本發明的實施例:
I儀器與試劑
1.1儀器
GC -1 4 B氣相色譜儀(日本島津)，氫火焰離子檢測器、WML色譜工作站(南寧威瑪龍色譜科技公司)，超聲波清洗機(2 5 O W，2 9?3 4 k H z，北京醫療設備二廠)及微量進樣器(上海安亭微量進樣器廠)。
[0010]1.2 試劑
正丁醇、乙酸乙酯、異戊醇均為色譜純，甲醇為分析純；淫羊藿總黃酮(批號20100912,20100916 ,20100921)由貴陽醫學院藥學院分析化學教研室提供。
[0011]2 方法與結果
2.1色譜條件
S E - 5 4 毛細管柱(3 O m X O 5 3 mm, I μ m);進樣口溫度 2 3 (TC，F ID檢測器溫度2 4 (TC，高純氮氣作為載氣，柱前壓為2 5 k P a，分流比10:1 ;氫氣
5O m I / m i η，空氣流速4 5 O m I / m i η ;採用程序升溫，起始溫度3 5 °C (室溫
35 0C以下進行)維持3mi η,以2°C/mi η速率升溫至5 O °C,維持2 m i η，進樣量1.0 μ I，理論塔板數按乙酸乙酯計不低於3 O O O，按正丁醇計不低於6 0 0 0。
[0012]2.2 溶液的配製
2.2.1標準溶液配製
吸取乙酸乙酯、正丁醇適量，加甲醇製成每I m I中含乙酸乙酯0.0 8 O 3mg，正丁醇0.0 8 I I m g的儲備液，分別吸取儲備液0.2、0.6、1.0、1.2、2.0m1，置於I O m I量瓶中，再吸取內標溶液0.1 m I至各量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，SP得系列標準溶液。
[0013]2.2.2 內標溶液的配製
稱取異戊醇0.0 I 8 2 g，置5 Om I量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻即得。
[0014]2.2.3 供試品溶液的配製
精密稱取三批淫羊藿總黃酮約3 O m g，置I Oml量瓶中，精密吸取內標溶液0.1m I，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.2.4陰性對照溶液的製備
稱取未經乙酸乙酯、正丁醇純化的淫羊藿總黃酮3 Omg，置I Om I量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻使溶解，即得。
[0015]2.3 專屬性試驗
精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各I μ I，並按照「2.1」色譜條件下進樣分析，結果見附圖1、2和3，表明陰性對照溶液在4?I 2mi η處幹擾很低，不影響目標物的定量，且內標物與各待測物峰分離理想。
[0016]2.4 線性關係考察分別精密吸取各標準溶液I μ I，進樣分析，記錄峰面積，以待測成分的濃度為橫坐標(X)，待測成分與內標物峰面積比為縱坐標(Y)，繪製標準曲線，進行回歸分析，得回歸方程，乙酸乙酯:Υ=0.0 O 2 3 X+ 0.0 7 3 9 ( r = 0.9 9 9 1,1.606 ?
I6.0 6 m g / L);正丁醇:Υ=0.0 O 3 2 X + 0.0 2 7 I ( r =0.9 9 9 3,1.622?16.2 2mg / L),結果表明，各待測物線性關係良好。
[0017]2.5 最低檢出限
將標準溶液逐步稀釋，測得溶液中乙酸乙酯和正丁醇的最低檢出限分別為0.5mg/L和0.3mg/L，分別為供試品溶液的0.0 I 5 %和0.0 I I %( S / N = 3 )。
[0018]2.6 最低定量限
將標準溶液逐步稀釋，測得溶液中乙酸乙酯和正丁醇的最低定量限分別為1.7mg/L和1.0mg/L，分別為供試品溶液的0.0 5%和0.0 37%(S/N=10)。
[0019]2.7 精密度試驗
取標準溶液(乙酸乙酯4.8 I 8 m g / L、正丁醇4.8 6 6 m g / L、異戊醇
3.6 4 Omg / L)連續進樣6次，計算待測成分與內標的峰面積比，結果乙酸乙酯、正丁醇的R S D分別為4.6 %、3.2 %。
[0020]2.8 供試品穩定性試驗
精密稱定淫羊藿總黃酮3 O m g，置I Oml量瓶中，精密吸取內標溶液0.1ml,加甲醇溶解至刻度，分別於O、1、2、5、8 h進樣分析，結果各組分含量的R S D分別為乙酸乙酯3.6 %，正丁醇3.9%，表明供試品溶液在8 h內穩定。
[0021]2.9 重複性試驗
取淫羊藿總黃酮樣品按照供試品溶液方法製備，一式6份進樣測定，帶入標準曲線，計算正丁醇、乙酸乙酯含量，結果6份中乙酸乙酯和正丁醇的平均含量分別為0.0 6 I %和
0.0 6 6 %，R S D分別為3.7%和4.9 %，表明該方法重複性好。
[0022]2.1 O 加樣回收率試驗
精密稱定淫羊藿總黃酮3 O mg，分別加入對照品溶液(乙酸乙酯4.8 I Smg /L、正丁醇4.866mg/L)lml、2ml、3ml ,按擬定方法測量含量,計算回收率，結果見附圖4、附圖5。
[0023]2.1 I 樣品測定
取三個批號的淫羊藿總黃酮樣品各3 O mg，精密稱定置I Om I量瓶中，加入內標溶液0.1 m I，加甲醇定容，搖勻，精密吸取I μ I進樣分析，結果見附圖6。
[0024]3.討論
由於淫羊藿總黃酮易溶於甲醇，且甲醇沸點與乙酸乙酯相比較小，在氣相色譜中分離良好，所以選擇甲醇為樣品溶劑。氣相色譜法含量測定有內標法和外標法，內標法較為常用，在實驗中可減少進樣量、色譜條件及操作對結果的影響，準確度、精確度較高，較外標法更適合微量組分的含量測定。所以實驗決定採用內標法測定目標溶劑殘留量。在內標物選擇時，本研究選取N，N 二甲基乙醯胺、異丙醇和異戊醇分別與目標溶劑同時進樣，結果發現，異丙醇與目標溶劑峰之間有幹擾，N，N 二甲基乙醯胺則有拖尾現象且出峰時間較晚，而異戊醇出峰時間及分離度較好，因此，選用異戊醇為內標溶液，甲醇為溶解介質效果好。
[0025]實驗中考察了不同柱溫對樣品溶液中乙酸乙酯、正丁醇和異戊醇出峰時間的影響，綜合檢驗靈敏度、測定誤差及供試品分析時間等因素，本研究選擇程序升溫法，起始溫度3 5 °C維持3 m i η (室溫3 5 °C以下)，以2 °C / m i η速率升溫至5 O °C，維持2 m
in，結果良好，溶劑殘留測定結果表明三批樣品中乙酸乙酯、正丁醇殘留均小於中國藥典2 O I O版二部附錄珊P附表I中有機溶劑殘留的限度，符合藥典規定。
【權利要求】
1.一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法，其特徵在於:該方法建立氣相色譜法來測定淫羊藿總黃酮中有機溶劑乙酸乙酯和正丁醇殘留量，該方法中以甲醇為溶劑，異戊醇為內標。
2.根據權利要求1所述的一種淫羊藿總黃酮中乙酸乙酯、正丁醇溶劑殘留量的測量方法，其特徵在於:具體方法為採用毛細管氣相色譜法，以S E 5 4毛細管柱為色譜柱，程序升溫，氮氣為載氣，進樣口溫度為2 3 (TC，F I D檢測器溫度為2 4 (TC。
【文檔編號】G01N30/02GK104458952SQ201410740031
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月8日 優先權日:2014年12月8日
【發明者】敖雲霞 申請人:敖雲霞