黑乳海參中新的抗腫瘤化合物黑乳海參皂苷辛的製作方法
2023-06-07 06:56:01 2
專利名稱：：黑乳海參中新的抗腫瘤化合物黑乳海參皂苷辛的製作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥
技術領域：
，是一種從海洋動物黑乳海參中分離到的新的抗腫瘤化合物黑乳海參皂苷辛。
背景技術：
：黑乳海參(7T^/e"oto朋a"^J.),又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動物門海參綱刺參科。其體形很大，長一般為700mm，寬約lOOmm,高約80mm，廣泛分布於我國西沙群島和臺灣南端。其體內含有豐富的蛋白質、多糖、維生素、皂苷類物質，具有補肝腎，益精，養血的功效。有關其所含的皂苷類成分的化學結構及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報導。
發明內容本發明是從生長於中國福建海域的黑乳海參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為黑乳海參皂苷辛，其化學結構如下3黑乳海參皂苷辛為無色結晶性粉末，熔點206-207T(MeOH-H20)，[a]f)-25.6°(c=0.2,MeOH)，Liebermann-Burchard反應和Molish反應均呈陽性。電噴霧質譜信號m/zll27[M+Na]+和m/zl081[M-Na]-。紅外光譜(cm4):max-3417,強寬峰(羥基)，1736(羰基)，1655(雙鍵)。iH-和nC核磁共振數據見表l。_表1黑乳海參皂苷辛的的和13C核磁共振數據_positiondH(J)dcdH(J)dcXyl:木糖，Qui:奎諾糖，Glc:葡萄糖，3-OMeGlc:3-氧甲基葡萄糖J值偶合常數tableseeoriginaldocumentpage4本發明還提供了從黑乳海參提取分離黑乳海參皂苷辛的方法，其步驟如下(1)提取將黑乳海參洗淨，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合併3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶於水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應用矽膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:14:l混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含黑乳海參皂苷辛的流份，再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為80:20為流動相洗脫，得黑乳海參皂苷辛純品。本發明對黑乳海參皂苷黑乳海參皂苷辛進行了體外抗腫瘤試驗，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗所用細胞株為國際通用的腫瘤細胞株，即A-549肺癌和IA-9卵巢癌腫瘤細胞株。試驗方法為國際通用的SRB法根據細胞生長速率，將處於對數生長期的腫瘤細胞以90pl/孔接種於96孔培養板，貼壁生長24小時再加藥10pl/孔。每個濃度設三復孔。並設相應濃度的生理鹽水溶媒對照及無細胞調零孔。腫瘤細胞在37'C、5XC02條件下培養72小時，然後傾去培養液，用10%冷TCA固定細胞，4'C放置1小時後用蒸餾水洗滌5次，空氣乾燥。最後加入150pl/孔的Tris溶液，酶標儀520nm波長下測定OD值。試驗結果見表2。表2黑乳海參皂苷辛對腫瘤細胞的抑制作用腫瘤細胞株A-549IA-9IC50(ng/ml)1.20.4ic5C:表示本發明化合物的半數有效抑制濃度上述實驗結果表明，黑乳海參皂苷辛對以上2種腫瘤細胞株顯示明顯的抑制作用。本發明為研製新的抗腫瘤藥物提供了新的先導化合物，為開發利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實施例方式以下結合實施例進一步描述黑乳海參皂苷辛的分離製備。將黑乳海參1000克洗淨，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合併乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶於3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至幹，得總皂苷5.6克。將總皂苷進行矽膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為7.3:2.7:l的溶劑洗脫，收集含黑乳海參皂苷辛的流份。再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為80:20為流動相洗脫，得黑乳海參皂苷辛純品14毫克。權利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特徵在於化學結構式如下2.權利要求l所述抑制腫瘤的化合物的製備方法，其具體步驟如下(1)提取將原料黑乳海參洗淨，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合併3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶於水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應用矽膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為8~5:1~4:i混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含權利要求i所述化合物的流份，再經ZorbaxSBC18高效液相柱層析，以甲醇水為80:20為流動相洗脫，得權利要求l所述化合物純品。3.權利要求l所述抑制腫瘤的化合物用於製備抗腫瘤藥物的用途。全文摘要本發明涉及醫藥
技術領域：
，具體為一種從黑乳海參中分離的抗癌化合物黑乳海參皂苷辛，分子式C54H88O23。經多種現代光譜分析，特別是應用先進的二維核磁共振譜和高分辨質譜的綜合解析，確定了該化合物的化學結構及立體構型。體外抗腫瘤試驗表明，該化合物對A-549肺癌和IA-9卵巢癌腫瘤細胞株有明顯的抑制作用。本發明可為研製新的抗腫瘤藥物提供先導化合物，對開發利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價值。文檔編號C07J71/00GK101544681SQ200810162020公開日2009年9月30日申請日期2008年11月13日優先權日2008年11月13日發明者丁萍月,凌慶枝,軍巫,張佳佳,朱一瑋,王忠華申請人:浙江醫藥高等專科學校