治療心腦血管疾病的藥物組合物的製作方法

2023-06-07 00:04:31

專利名稱：治療心腦血管疾病的藥物組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用於心腦血管疾病治療的藥物組合物，特別是以天然藥物中的有效成分為藥用活性成分的藥物組合物。
背景技術：
心腦血管疾病是一種常見和多發性病，尤以中老年人群的發病率高，嚴重危害人們的身體健康和生活質量。傳統的單味中藥及相應的複方藥物對心腦血管疾病有一定的預防和治療作用。如川芎注射液，主要有效成分為川芎揮髮油，其中的藁本內酯含量最高(王淑琦，《中成藥研究》1981，1031；賴福生等，《上海醫學》1995，18(3)157)，臨床及動物實驗證明，川芎注射液能抑制血小板活化、改善血微循環、降低血管阻力，對缺血性疾病有明顯療效(吏蔭綿等，《解放軍醫學雜誌》1979，498)。川芎揮髮油中的多種苯酞類化合物被證明是川芎中起心腦血管作用的主要有效成分(Natio T，et al.，《Nat Med》1995，49288)。川芎揮髮油具有改善微循環，增加腦血流量的作用，可使微血管解痙，增加毛細血管開放數目，加快血流速度，使聚集的紅細胞解聚，川芎揮髮油中的藁本內酯分解後，其藥理作用則明顯下降甚至消失，表明藁本內酯是其揮髮油中的主要有效成分(石力夫等，《中國藥理學與毒理學雜誌》1995，9(2)157；張勇等，《河北中醫》2003，25(6)471)。藁本內酯在川芎藥材和揮髮油中的重量含量分別約為1.5％(晃真真等，《華西藥學雜誌》2004，19(3)197)和20％-50％(林燕芝等，《中國中藥雜誌》2004，29(2)154)。
石菖蒲為天南星科植物石菖蒲(Acorus tatarinowii Schott)的乾燥根莖，具有化溼開胃，開竅豁痰，醒神益智，中國藥典記載其中的揮髮油含量大於1.0％(ml/g)。石菖蒲揮髮油可顯著抑制由缺血-再灌注誘導的腦神經細胞凋亡，其中的主要有效成分β-細辛醚能改善腦水腫，提高小鼠血腦通透性和耐缺氧能力，明顯抑制大鼠腦皮質和海馬神經細胞凋亡，抑制BAX基因表達等(吳宏斌等，《中醫藥學刊》2004，22(1)127)。
冰片，即合成龍腦，含龍腦(C10H18O)大於55.0％，具有開竅醒神，清熱止痛的功效，常用於對熱病神昏，驚厥，中風痰厥，中惡昏迷等的救治。麝香，是中國藥典中收載的一味名貴藥材，具有開竅醒神，活血通經的功效，常用於熱病神昏，中風痰厥，中惡昏迷等的救治，主要有效成分為麝香酮，目前廣泛使用的是人工麝香。文獻報導，麝香、冰片能迅速透過血腦屏障並直接作用於中樞神經系統，對抗缺血性腦損害，具有抗驚厥及腦水腫的作用；冰片還能增加血腦屏障的通透性，提高治療藥物在腦中的濃度(劉亞敏等，《中藥新藥與臨床藥理》2002，13(4)23)。
心腦血管疾病是一類複雜系統的疾病，發病原因複雜，影響因素眾多，單一有效成分或單靶點作用的藥物難以取得滿意的療效。目前中藥複方藥物多以藥材配伍入藥，藥物製劑的體積和服用量大，有效成分不明確，其吸收與生物利用度也不理想，影響了藥物療效的發揮。此外，藥材質量不穩定易引起藥物質量不穩定，也使得對藥物質量的可控性不高。
對由不同的芳香性藥材揮髮油提取成分組合用於治療中風後遺症，缺氧、缺血所致的腦損傷，老年性痴呆等腦血管疾病的研究已有報導。如柯雪紅等在「HPLC法測定醒腦滴鼻液中β-細辛醚、α-細辛醚的含量」(《中藥新藥與臨床藥理》2002，13(6))涉及了由石菖蒲、麝香、冰片組成的「醒腦滴鼻液」藥物。蔣紅蘭等在「石菖蒲冰片對神經細胞缺氧性損傷的保護作用」(《廣州中醫藥大學學報》2003，20(1))報導了不同比例組成的冰片/石菖蒲揮髮油對神經細胞缺氧性損傷的保護作用的研究。劉亞敏等在「麝香、冰片對全腦缺血再灌注大鼠腦組織胺基酸類神經遞質的影響」(《中藥新藥與臨床藥理》2002，13(4))中，研究探討了芳香開竅藥治療缺血性腦血管疾病機理。

發明內容
針對上述情況，本發明根據中醫藥的理論，選用藁本內酯活血化瘀，行氣止痛為君藥，以石菖蒲揮髮油行氣開竅、益智為臣藥，二者共湊行氣活血，化瘀開竅之功效，並還可以進一步輔以冰片通竅開閉，和/或麝香開竅醒神，為佐使藥，進一步增強藥物的療效，從而達到不僅具有更為理想和滿意的行氣化瘀、開竅醒神和益智作用的藥物組合物，而且該藥物組合物的有效成分明確，便於加工製成各種更為優越的藥物製劑，並能大大減少治療用量，方便使用。
本發明治療心腦血管疾病的藥物組合物，基本的有效藥用成分組成為藁本內酯和石菖蒲揮髮油，在此基礎上還可以同時再含有冰片和麝香兩有效成分，與藥物中可以接受的輔助添加成分共同組成。所說有效藥用成分中的藁本內酯/石菖蒲揮髮油的重量份比例為1/0.5～20，進一步的優選比例為1/5～10；冰片的重量份比例為石菖蒲揮髮油重量的0～300％，進一步的優選比例範圍是100～200％；麝香的重量份比例為石菖蒲揮髮油重量0～100％，進一步的優選比例範圍是10～50％。
在上述所說藥物組合物的有效藥用成分中，藁本內酯成分允許使用含有所說相當比例量的藁本內酯的川芎揮髮油成分替換。
作為本發明上述藥物組合物有效藥用成分的藁本內酯(ligustilide)或允許用作替換的川芎揮髮油，以及石菖蒲揮髮油等有效藥用成分，可以購自於市售的商品原料，也可以按目前已有文獻報導的方法提取或製備。例如，藁本內酯可以通過已有報導的全化學合成方式或是由其它相關化合物經化學改造和/或修飾後得到(李紹白等，《高等學校化學學報》1995，16(9)1420)，也可以採用由含有這一成分的適當天然藥用原料中提取，後者的提取方式通常可以更為簡便和常用。所說的含有該成分的天然藥用原料除可直接採用的川芎外，還包括同樣也含有藁本內酯成分的中藥當歸、藁本等其它多種天然藥用原料，經提取和分離後得到(馬建龍等《藥品評價》2005，2(3)214)。
川芎揮髮油的提取通常可採用的方法有常規的直接蒸餾或水蒸氣蒸餾方式，或者採用超臨界CO2萃取等方式。這些方法提取得到的揮髮油經分析顯示，其主要成分相同，為藁本內酯、蛇床內酯(川芎內酯)、丁烯基苯酞、3-正丁基苯酞、新蛇床內酯等，其中藁本內酯的重量含量一般可大於20％。在這些方法中尤以超臨界CO2萃取揮髮油的化學成分較完全，收率高(原永芳等，《中國藥學雜誌》2000，35(2)84；洪鷹等，《中國藥業》2003，12(6)31)。石菖蒲揮髮油也可採用常規的蒸餾法提取或超臨界CO2萃取，所得的揮髮油主要成分為β-細辛醚、α-細辛醚、γ-細辛醚，甲基丁香酚，順式、反式-甲基異丁香酚等，其中β-細辛醚的重量含量一般可大於30％(湯道權等，《時珍國醫國藥》2001，12(4)34；戴箭等，《精細化工》2005，22(5)359)。
採用由天然藥用原料提取方式得到藁本內酯成分時，作為本發明上述藥物組合物的有效藥用成分，除可以採用相應方法進行純化後得到的單一純淨形式的藁本內酯外，允許採用在含有上述所說相當比例量的藁本內酯的同時，還含有主要存在於其提取物中的蛇床內酯(川芎內酯)、丁基苯酞、丁烯基苯酞及其它苯酞類化合物和/或其它揮髮油成分的混合物。試驗顯示，在本發明的上述藥物組合物中，採用以含有所說相當比例量藁本內酯的川芎揮髮油提取物進行替換，一般不會對藥物有效成分的藥效作用有明顯的幹擾或不利影響。
由此可以理解，本申請上述藥物組合物中所說的有效藥物成分，除可以採用其單一純淨化合物的組成形式外，根據其來源、方式和/或不同製劑及其過程、以及綜合成本考慮等不同需要，可以允許含有其它無法避免的雜質和/或不會對所說有效成分的藥效作用造成幹擾和/或不利影響的成分。
除上述分別以藁本內酯或川芎揮髮油與石菖蒲揮髮油配製方式外，本發明藥物組合物的另一製備方法是以川芎和石菖蒲混合藥材粗粉經超臨界二氧化碳萃取。試驗結果表明川芎超臨界二氧化碳萃取收率約為3％，其中的藁本內酯含量約為25％，石菖蒲揮髮油的超臨界二氧化碳萃取收率約為3％。因此，以川芎/石菖蒲藥材重量比為4/1～4/10的混合藥材粗粉經超臨界二氧化碳萃取可得到本發明藥物組合物。具體方法為川芎和石菖蒲粉碎過20目篩，採用超臨界二氧化碳循環逆流萃取、分離，萃取壓力8～40Mpa，溫度30～60℃，川芎和石菖蒲物料用量與二氧化碳每小時循環用量的重量配比為1∶5～1∶30，萃取時間1～6小時；在上述條件下進行萃取操作，所獲富含川芎和石菖蒲揮髮油的二氧化碳由萃取器引入分離器進行減壓分離，即得川芎揮髮油和石菖揮髮油，平均收率約為3％。
以上述的兩基本有效藥用成分藁本內酯和石菖蒲揮髮油，以及進一步可同時含有的冰片和/或麝香等有效成分，與藥物中可接受的輔助添加成分按相應的製藥方法和工藝加工處理，即可製成為相應的口服型、注射型或其它可用形式的藥物製劑。例如，與在口服製劑中可以被接受的崩解劑、賦形劑、潤滑劑、粘合劑、填充劑等常用的輔助添加成份混合後，按相應的常規工藝方法處理，即可製成為片劑、滴丸劑、膠囊劑或適當形式的緩釋劑、控釋劑等固體製劑形式的口服藥物；與常用的增溶劑、助溶劑、乳化劑、潤溼劑等表面活性劑、pH調節劑、稀釋劑、穩定劑、增稠劑等混合，按相應的常規工藝方法處理，即可製成為乳劑、噴霧劑、滴鼻劑、氣霧劑等相應的藥物製劑。按注射藥物製劑中允許使用的適當溶劑和附加劑配合及相應的工藝操作處理後，可以製備成相應的乳劑或粉針等肌肉或靜脈形式的注射製劑藥物。
以下通過實施例的具體實施方式
再對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。在不脫離本發明上述技術思想情況下，根據本領域普通技術知識和慣用手段做出的各種替換或變更，均應包括在本發明的範圍內。
具體實施例方式
實施例1分別由川芎揮髮油分離純化得到單一的藁本內酯純品，由石菖蒲藥材經水蒸氣蒸餾得到石菖蒲揮髮油。取藁本內酯2g、石菖蒲揮髮油10g(其中含β-細辛醚39.6％)，加注射用大豆油120g，作為油相預熱至55℃，備用。另取注射用大豆磷脂12g，加注射用水500ml分散，再加入注射用甘油25g，攪拌使溶解，加熱至55℃，並繼續攪拌，同時緩慢加入油相，高速均質6分鐘製得初乳，將初乳過高壓乳勻機循環4次，即得亞微乳。低速攪拌下將亞微乳加注射用水至1000ml，過濾、分裝，滅菌，即得乳劑型注射液。
實施例2分別由川芎藥材經水蒸氣蒸餾方式得到川芎揮髮油；由石菖蒲藥材經超臨界CO2萃取得到石菖蒲揮髮油。取川芎揮髮油6g(含藁本內酯35.1％)、石菖蒲揮髮油20g(其中含β-細辛醚53.1％)，加入到PEG-6000熔融液中，攪拌混勻，在滴丸機中製成5000粒滴丸，即為所述的丸劑型藥物。
實施例3取藁本內酯15g、石菖蒲揮髮油15g，加入大豆油40g，作為油相備用。取蛋黃卵磷脂3g、甘油12g、西黃芪膠5g、尼泊金乙酯0.5g和食用香精適量，加蒸餾水250ml，攪拌使溶解，加熱至70℃，並繼續攪拌，同時緩慢加入油相，高速均質8分鐘製得初乳，將初乳過高壓乳勻機循環6次，在低速攪拌下加蒸餾水至500ml，過濾、分裝，置專用滴鼻瓶中或噴霧瓶中，即得滴鼻劑和噴霧劑。
實施例4取人工麝香20g，微粉化，加入由川芎藥材經超臨界CO2萃取方式得到的川芎揮髮油10g(其中含藁本內酯25.6％)、石菖蒲揮髮油40g、冰片80g、和大豆油1050g，乳化均質製成藥液備用。按體積比3∶1.2∶3取藥用明膠、甘油和水，製成囊材後，將上述備用藥液和囊材在常規製劑使用的軟膠囊壓製機上壓製成軟膠囊4000粒，即為所述的膠囊劑。
實施例5將川芎/石菖蒲重量比為2∶1的生藥原料粉碎分級過篩，取20～80目粗粉100kg，超臨界流體CO2循環逆流萃取和分離，萃取壓力20MPa，萃取溫度45℃，萃取劑CO2用量1000公斤/時，萃取時間2小時，分離器解析壓力10Mpa，解析溫度40℃，獲得川芎和石菖蒲揮髮油3.1kg。按體積比3∶1.2∶3取藥用明膠、甘油和水，製成囊材後，將上述揮髮油和囊材在常規製劑使用的軟膠囊壓製機上壓製成軟膠囊，0.3g/粒，即為所述的膠囊劑。
在上述提取方法的基礎上，通過選擇相應的參數條件，可以製備得到不同比例的川芎和石菖蒲揮髮油提取物。
對本發明上述形式藥物組合物的試驗藥物進行了以下的相關藥效學試驗。
一、對栓線法大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的治療作用1、藥物配製藁本內酯(由川芎揮髮油中分離純化得到的單一純品)，石菖蒲揮髮油(由石菖蒲藥材經水蒸氣蒸餾得到的揮髮油，含β-細辛醚39.6％)。將其用4％Tween-80混勻，再用純淨水配製成如表1所示濃度形式的試驗藥物。
2、試驗方法SD大鼠，雌雄混用，體重250-300g，隨機分為假手術組(I)、模型組(II)、給以不同組成比例形式藁本內酯/石菖蒲揮髮油的試驗藥物組(III～XIII)，每組30隻。各試驗藥物組按表1方式灌胃分別給予相應比例的藁本內酯/石菖蒲揮髮油懸濁液10ml·kg-1·d-1，假手術組及模型組灌胃給予4％ Tween 80的純淨水10ml·kg-1·d-1，連續給予7天，末次給藥後2小時按下述方法進行手術。
將大鼠用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離並結紮右側頸總動脈近心端、頸外動脈及其分支動脈。分離右側頸內動脈，沿頸內動脈向下分離翼顎動脈，根部結紮該分枝。在頸內動脈近端備線、遠端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，插入4-0尼龍線，其深度為17～20mm，栓線進入頸內動脈，入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。撤掉動脈夾，紮緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚。缺血2小時後再灌注，勿需再次麻醉和切開皮膚，輕輕提拉所留線頭至有阻力時提示尼龍線頭端已至頸總動脈切口處，使血流再通。假手術組除不插線外，其餘步驟同上。
存活鼠再灌注24後，觀察大鼠行為變化，進行行為評分。參考Zea Longa的五分制評分標準0分，正常，無神經損傷症狀；1分，不能完全伸展對側前爪；2分，向外側轉圈；3分，向對側傾倒；4分，不能自發行走，意識喪失。
然後快速斷頭取實驗鼠大腦，一部分分別稱量左、右大腦半球溼重，置160℃烤箱內24小時後稱乾重，按以下公式計算腦組織含水量腦組織含水量(％)＝(溼重-乾重)/溼重×100％；另一部分在前連合平面切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置於2％TTC溶液中，37℃孵育30分鐘。梗塞區呈現白色，非梗塞區呈現紅色。數位相機拍攝記錄，用Medbrain2.0軟體(南京美易科技公司)測出腦片總體積及梗塞區體積，並計算梗塞區佔整個腦組織的百分比(％)；再有一部分作組織形態學觀察腦組織經固定後，冠狀切取大腦，常規脫水，石蠟包埋製片，HE染色，光鏡檢驗。
3、觀察指標及觀察時間觀察大鼠行為、腦梗塞體積、組織形態學的變化。觀察時間為再灌注24小時。
4、試驗結果(1)對行為的影響假手術組大鼠均無異常行為，神經行為評分為0；模型組大鼠出現不能完全伸展、對側前爪向外側轉圈或向對側傾倒的神經損傷症狀，行為評分處方1高劑量組生物鹼∶葛根素(1∶1)4mg/100g；中劑量組生物鹼∶葛根素(1∶1)2mg/100g；低劑量組生物鹼∶葛根素(1∶1)1mg/100g；處方2生物鹼∶葛根素(1∶2)2mg/100g；處方3生物鹼∶葛根素(2∶1)2mg/100g；試驗結果及統計學處理實驗結果見下表13。
表13 川芎總生物鹼和葛根總黃酮不同配比及用量對血瘀證模型大鼠血流變性的影響(X±s)

注模型組與空白對照組相比，*P＜0.05；**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05；△△P＜0.01從表13可見，模型組大鼠血流變性各指標與空白組指標比較，全血粘度、血漿粘度以及紅細胞壓積均顯著升高，其中全血粘度(切變率1/200s)，全血粘度(切變率1/30s)極顯著升高(p＜0.01＝，說明「血瘀」證大鼠造模成功。與模型組比較，在試驗給藥劑量下，川芎總生物鹼提取物和葛根總黃酮提取物對「血瘀」證大鼠全血粘胞和神經纖維的損傷，且優於相同劑量單一組分形式的藁本內酯和石菖蒲揮髮油，表明其具有明顯的協同增效作用，其中優選的比例藁本內酯/石菖蒲揮髮油為1/5～10(VII組～IX組)。此外，表1的結果還清楚顯示，以含有相當比例量藁本內酯的川芎揮髮油作為有效藥物成分，對本發明藥物組合物的藥效作用不會產生幹擾或不利影響。
二、對小鼠耐缺氧能力的影響1、藥物配製試驗藥物用4％ Tween-80混勻，再用純淨水配製成所需濃度(表2)。
2、實驗方法取ICR小鼠80隻，體重為18-22g，隨機分為模型組(I)和給以上述藥物的試驗藥物組(II～IX)，每組10隻，雌雄各半。於實驗前6天，II～IX組按表2灌胃給予試驗藥物懸濁液10ml·kg-1·d-1，I組灌胃給予4％ Tween 80的純淨水10ml·kg-1·d-1，第7天最後一次給藥後30分鐘，將小鼠置於裝有25g鈉石灰的60ml密閉廣口瓶中，記錄小鼠的死亡時間。
3、觀察指標及觀察時間觀察小鼠在缺氧環境下生存的時間。
表2 對小鼠耐缺氧能力的影響

注a為藁本內酯，b為石菖蒲揮髮油，c為冰片，d為人工麝香，▲為含有相當比例量藁本內酯的川芎揮髮油；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001表2的結果進一步顯示，本發明試驗藥物組(II～V組)均可顯著延長小鼠在缺氧狀態下的存活時間，與模型組比較有顯著差異(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)，且優於相同劑量單獨使用形式的藁本內酯、石菖蒲揮髮油、冰片和麝香，具有明顯的協同增效作用。表2的結果同樣清楚顯示，以含有相當比例量藁本內酯成分的川芎揮髮油提取物作為有效藥物成分，對本發明藥物組合物的藥效作用不會產生幹擾或不利影響。
上述試驗結果表明，本發明有效藥用成分組成形式的藥物組合物在抗腦缺血再灌注損傷和抗缺氧作用方面的效果，均明顯優於其中有效藥用成分的單獨作用，具有顯著的協同增效作用，可具有令人滿意的開發前景和價值。
權利要求
1.治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵是基本有效藥用成分為藁本內酯和石菖蒲揮髮油，以及還可以含有的冰片和麝香，與藥物中可以接受的輔助添加成分共同組成，所說有效藥用成分中藁本內酯/石菖蒲揮髮油的重量份比例為1/0.5～20，冰片的重量份比例為石菖蒲揮髮油重量的0～300％，麝香的重量份比例為石菖蒲揮髮油重量0～100％。
2.如權利要求1所述的治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵是所說有效藥物成分藁本內酯/石菖蒲揮髮油的重量份比例為1/5～10。
3.如權利要求1所述的治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵是所說有效藥物成分中的藁本內酯為含有所說相當比例量的藁本內酯的川芎揮髮油。
4.如權利要求1所述的治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵是所說有效藥物成分中冰片的重量優選為石菖蒲揮髮油重量的100～200％。
5.如權利要求1所述的治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵是所說有效藥物成分中麝香的重量優選為石菖蒲揮髮油重量的10～50％。
6.如權利要求1至5之一所述的治療心腦血管疾病的藥物組合物，其特徵是為口服劑、注射劑、滴鼻劑、噴霧劑或氣霧劑中至少一種。
全文摘要
治療心腦血管疾病的藥物組合物，其基本有效藥用成分為藁本內酯和石菖蒲揮髮油，以及還可以含有的冰片和麝香，與藥物中可以接受的輔助添加成分共同組成。有效藥用成分中藁本內酯/石菖蒲揮髮油的重量份比例為1/0.5～20，冰片的重量份比例為石菖蒲揮髮油重量的0～300％，麝香的重量份比例為石菖蒲揮髮油重量0～100％。試驗表明，上述兩基本有效藥用成分的組合，在抗腦缺血再灌注損傷和抗缺氧作用方面可具有顯著的協同增效作用，結果明顯優於其中有效藥用成分的單獨作用；進一步加用冰片、麝香成分後，同樣優於相同劑量單獨使用形式的藁本內酯、石菖蒲揮髮油、冰片和麝香，也具有明顯的協同增效作用。
文檔編號A61K35/55GK1857534SQ200610020509
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月17日 優先權日2006年3月17日
發明者易進海, 陳燕, 劉雲華, 劉玉紅, 黃志芳 申請人:四川省中藥研究所