甘蔗dⅲ家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表達載體的製作方法
2023-06-06 17:22:46 1
專利名稱：甘蔗dⅲ家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表達載體的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種植物體內控制蔗糖合成的關鍵酶基因及其編碼蛋白的序列，以及植物表達載體，屬植物基因工程領域。
背景技術：
蔗糖磷酸合成酶(以下簡稱SPS)是高等植物體內控制蔗糖合成的關鍵酶，植物體內蔗糖的積累與SPS活性正相關，此外，SPS還參與植物的生長和產量形成，並在植物抗逆性，如抗寒、抗旱和耐鹽過程中起重要作用。轉SPS基因的研究在20世紀90年代初首先在番茄上進行，將玉米SPS基因導入番茄中，轉基因番茄葉片中SPS活性增加了 6倍，葉片中澱粉含量減少而蔗糖含量增加。之後，在多種植物上進行了轉SPS基因的研究。將玉米的SPS基因轉入水稻中，轉基因水稻的 SPS活性是未轉基因水稻的3倍，使轉基因水稻的株高明顯比未轉基因的高。轉擬南芥SPS 基因的菸草莖內蔗糖含量增加，且由於節間增長和莖徑增粗，轉基因菸草的莖重明顯增加。 轉玉米SPS基因的馬鈴薯葉片中的SPS活性是對照植株的四倍，轉基因植株地上部分和地下部分的乾重也分別增加15%和20%，表明葉片中蔗糖的合成有助於促進植株的生長。導入玉米SPS基因的番茄植株葉片的SPS活性顯著提高，葉片分配向蔗糖的碳同化物提高了 50%，轉基因植株比對照的果實個數增加1.5倍，果實成熟提前，總乾重提高32%。轉玉米 SPS基因的菸草葉片中的SPS超量表達，使蔗糖合成和碳吸收能力提高，有助於整個植株的生長和發育，提高開花數目，故轉基因菸草提前開花，並且開花數目比野生型的菸草多。轉擬南芥A家族SPS基因(AtSPSA)的楊樹的木質部纖維長度增加，葉片和莖組織細胞內蔗糖含量增加，春季葉片衰老減緩而萌芽提前。表明SPS基因參與調控白楊的發育過程。此外， 轉SPS基因還能提高棉花品質。以上轉基因研究表明，將SPS基因導入作物體內，是提高作物產量和品質、增強作物抗逆性的有效途徑。甘蔗是高光合效率C4作物，它的蔗糖含量是所有植物中是最高的，表明其控制蔗糖合成的關鍵酶-SPS的作用效率也是非常高效的。用甘蔗SPS基因改良其它作物品種或通過改變甘蔗SPS表達調控途徑進一步提高甘蔗蔗糖含量和產量具有重要意義。Langenkamper等對高等植物基因組和已知的SPS基因的全長序列和其保守序列進行生物信息學分析後把SPS基因分為A、B、C三個家族。但是，Castleden等之後還對小麥等單子葉植物的SPS基因進行研究後認為，雙子葉植物中的SPS基因至少有A、B、C三個家族，而禾本科的單子葉植物中的SPS基因則可分為五個家族，分別為A、B、C、DIII和DIV。 且不同植物中SPS基因的數量不同，柑橘基因組中有三個SPS基因，分別屬於A、B、C三個家族；擬南芥基因組中有四個SPS基因，其中兩個屬於A家族，另外兩個分別屬於B、C家族。 水稻基因組中有五個SPS基因，分別屬於五個家族。而玉米基因組中至少有七個SPS基因， 其中A、C、DIII家族各有一個，而B、DIV家族各有兩個。甘蔗屬於禾本科的單子葉植物，所以甘蔗基因組中至少有5個分別屬於5個不同家族的SPS基因。但是，目前甘蔗中只克隆了一個SPS基因的完整CDNA序列，且沒有進一步研究並申請專利的報導。
發明內容
本發明的目的是研究一個新的甘蔗DIII家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表達載體，使其得到開發應用。本發明所採取的技術方案是在對所有全長序列的植物SPS基因進行進化分析的基礎上，比對植物DIII家族SPS基因的CDNA序列，並設計擴增SoSPSDIII基因核心片段的引物；提取甘蔗幼嫩葉片總RNA，並經反轉錄，用常規PCR法擴增SoSPSDIII基因核心片段；再通過RACE (Rapid Amplification ofcDNA ends, cDNA末端快速擴增)技術克隆到甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因 (SofSPSDIII)的全長cDNA序列，總長3252bp ；經VectorNTI軟體分析，該序列的ORF(Open Reading Frame，開放閱讀框)為^92bp，編碼964個胺基酸；起始密碼子(ATG)位於轉錄起始位點後60bp處，終止密碼子(TAA)後還有一段301bp的非編碼序列，並帶有真核生物典型的PolyA尾巴。以下是本發明所獲得的甘蔗SofSPSDIII基因的全長cDNA序列tcaactctcccattccgtcccccgatctcgccggattctcctcctcgccggcggcggcg ^^ gcggg caacgacaactggatcaacagctacctcgacgccatcctagacgccggaaaggccgccatcggcggcgaccggccct ccctcctcctccgcgagcgcggccatttctcccccgcgcgctacttcgtcgaggaggtcatcaccggctacgacgag accgacctctacaagacatggctacgcgcgaacgccatgcggagcccgcaggagaggaacacgcggctcgagaacat gacgtggaggatctggaaccttgcaaggaagaagaaggagttcgagaaagaagaagcttgtcgtttgtcaaaacgcc agccagaaactgagaaaacacgagctgatgctactgcagatatgtctgaagatctctttgaaggtgaaaagggagaa gatgctggtgatccatctgttgcatatggggacagcaccacagggagctcacctaagacaagttcaattgacaagct atacatagtattgatcagtttacatggtctggtccgtggtgagaatatggagcttggccgagattcagatacgggtg gccaggtcaaatatgtggttgaacttgctaaagcactaagttcatctcctggagtttaccgggttgatctgctaaca agacaaatattagcaccaaattttgatcgtagttatggtgaacctgcagaattattggtttcaacaagtggtaaaaa ttctaaacaagaaaaaggagaaaatagtggcgcatatataattcggataccatttggtccaaaagataagtatctag ctaaagaacatctatggcctttcattcaagaatttgttgatggtgcactcagccatattgtgaggatgtcaaaagcc ataggtgaagaaactggccgcgggcatccagtatggccttctgtgattcatgggcattatgccagtgcaggaattgc tgctgctttactttctggagcacttaaccttcctatggcattcacaggacattttcttgggaaagataaattggaag ggcttctcaaacaagggagacaaactagggaacagataaatatgacatacaaaataatgtgccgaattgaggcagag gagctatctcttgacgcatctgagattgtcattgcaagcactaggcaagaaatagaagagcagtggaacttgtatga tggttttgaggttatacttgcaaggaagctccgagcaagagttaaacgtggtgctaattgttatggtcgttttatgc ctcgtatggttataattcctcctggagttgaatttggtcacattattcacgattttgatatggacggtgaagaagag aatccatccccggcatctgaggatccacctatttggtctcagataatgcgcttctttacaaatcctaggaagcctat gattctagctgttgctcgcccttatcctgagaagaatattactacgcttgtaaaagcatttggtgaatgtcggccac taagggagcttgcaaaccttacattgataatgggtaaccgtgaagctatatctaagatgcacaatatgagtgctgct gtcttgacatcagtgcttacattgattgatgaatatgacttgtatggtcaagtggcataccccaagcatcataagca ctcggaagttcctgacatttatcgtttagctgcaagaacaaagggggcttttgtaaatgtagcttacttcgaacaat ttggagttactctgatagaggctgctatgaatggtttgcctataattgcgacaaaaaatggagcccctgttgaaattaatcaggtcctgaacaatggtctccttgttgatccgcacgatcagaatgccattgcggatgcactatataaacttct ttctgacaaacaactttggtcaaggtgcagagagaatggactgacaaatattcaccaattctcgtggcccgaacatt gcaagaattacctgtcaaggatattaactcttggcccaaggtctcctgctattggtaacagagaggagcggagtaat acacctatttcaggaaggagg caaatcattgttatttctgtagactctgttaacaaggaagatctagtcaggataa tcagaaatgctattgaggtcatacatacacaaaacatgtcgggttcaactggttttgtgctgtcaacttcgctgact atatcagagatacattcactgctactatctggtggcatgcttcccactgattttgatgctttcatctgcaatagtgg gagtaacatttactatccttcatattctggtgaaacgccaaacaactccaagattacatttgcattagatcaaaatc accagtcacatatcgagtatcgttggggaggagaaggactaaggaaatatcttgtgaagtgggccacttcagtggta gaaagaaagggaagaacagagaggcaaattatttttgaagatccagaacactcttcagcctattgtcttgcatttag agtggttaatcccaatcatcttcctcctttaaaggagttgaggaagttgatgagaatccaatctctccgttgcaatg cattgtataaccacagcgctaccagattatctgtagtccctatccatgcatcaagatctcaggctctaaggtacttg tgtatacgttgggggatagaggtgccaaatgttgcagtcctcgtgggtgaaagtggcgattcagattacgaggaact gctggggggtctccataggaccgttatcctgaagggcgagttcaacacccccgcaaacaggatccacacggtgagga gataccccttacaggatgtcgtcccacttgacagctcaaacatcaccggtgtcgaaggctacaccacggatgacttg aagtcggccctgcagcagatgggtatactcacacaa ^aaj taacacctccggagcttctgtttccacacccaagcca acgggaaaacgaaaggaaaggagacgaaccaagtgcaactgtttccatgctcgatggaaatgccgattttgctcgta ggctgtagaggttgtgtatgtgtgtgcgtgcgtgcggtggtggcctattcttgagctgtgaataactgccctccttt gtttgtaatgccccaaaaattttgaagtgagtaccctacaaccaaacaggaaacaggttcacatattgataatggaa aaRacRaatRcaaRaaaRRaaaacaaaaaa以下是本發明所獲得的甘蔗SofSPSDIII基因所編碼蛋白的胺基酸序列MAGNDNWINSYLDAILDAGKAAIG⑶RPSLLLRERGHFSPARYFVEEVITGYDETDLYKTWLRANAMRS PQERNTRLE匪TWRIWNLARKKKEFEKEEACRLSKRQPETEKTRADATADMSEDLFEGEKGEDA⑶PSVAYGDSTTG SSPKTSSIDKLYIVLISLHGLVRGENMELGRDSDTGGQVKYVVELAKALSSSPGVYRVDLLTRQILAPNFDRSYGEP AELLVSTSGKNSKQEKGENSGAYIIRIPFGPKDKYLAKEHLWPFIQEFVDGALSHIVRMSKAIGEETGRGHPVWPSV IHGHYASAGIAAALLSGALNLPMAFTGHFLGKDKLEGLLKQGRQTREQI匪TYKIMCRIEAEELSLDASEIVIASTR QEIEEQWNLYDGFEVILARKLRARVKRGANCYGRFMPRMVIIPPGVEFGHIIHDFDMDGEEENPSPASEDPPIWSQI MRFFTNPRKPMILAVARPYPEKNITTLVKAFGECRPLRELANLTLIMGNREAISKMHNMSAAVLTSVLTLIDEYDLY GQVAYPKHHKHSEVPDIYRLAARTKGAFVNVAYFEQFGVTLIEAAMNGLPIIATKNGAPVEINQVLNNGLLVDPHDQ NAIADALYKLLSDKQLWSRCRENGLTNIHQFSWPEHCKNYLSRILTLGPRSPAIGNREERSNTPISGRRQIIVISVD SVNKEDLVRIIRNAIEVIHTQ匪SGSTGFVLSTSLTISEIHSLLLSGGMLPTDFDAFICNSGSNIYYPSYSGETPNN SKITFALDQNHQSHIEYRWGGEGLRKYLVKWATSVVERKGRTERQIIFEDPEHSSAYCLAFRVVNPNHLPPLKELRK LMRIQSLRCNALYNHSATRLSWPIHASRSQALRYLCIRWGIEVPNVAVLVGES⑶SDYEELLGGLHRTVILKGEFN TPANRIHTVRRYPLQDVVPLDSSNITGVEGYTTDDLKSALQQMGILTQ擴增SofSPSDIII基 因ORF，連接到植物表達載體pBI121上的組成型啟動子 CaMV35S後面，構成一個新的植物表達載體，命名為pBI-SofSPSDIII。本發明的載體在轉基因提高作物的蔗糖含量、產量或增強抗逆性方面具有很好的應用前景。
圖1是本發明SofSPSDIII植物表達載體構建過程。擴增SofSPSDIII基因0RF，酶切後與相同酶切的pBI121連接， 轉化大腸桿菌 Jml09,經PCR驗證和酶切驗證獲得陽性克隆。
具體實施例方式本發明的具體實施方式
如下1.植物 SPS 基因進化分析用 「sucrose phosphate synthase」 搜索 NCBI 網站 (http //www. ncbi. nlm. nih. gov)非冗餘胺基酸資料庫，獲得所有植物SPS序列。對所獲得的所有序列進行分析，除去重複的序列。共得到植物SPS序列77條，其中全長序列43條。 用ClustalX對所有全長SPS的胺基酸序列進行比對，並將比對結果保存為PHYLIP格式； 然後用PHYLIP軟體包的kqboot，Protdist, Neighbor和Consense程序進行進化分析，將植物所有全長SPS基因分為相應的家族。2.設計擴增SoSPSDIII基因核心片段的引物比對植物DIII家族SPS基因的cDNA 序列，在保守區設計一對用於擴增SofSPSDIII部分片段的引物SofSPSDIII-F(5，-atggcgg gcaacgacaa-3')禾口 SofSPSDIII—R(5，-gaagcgcattatctgagacc-3『)。3.甘蔗總RNA的提取(1)取50 IOOmg甘蔗相應組織(如幼嫩葉鞘、葉片等)在液氮中研磨成粉末，加入ImlTrizol提取液，吹吸混勻；(2)將溶液快速轉移至1. 5ml的離心管中，室溫下放置5min，以完全溶解核蛋白體；(3) 4"C，12，OOOg,離心 15min ；(4)吸取上清液於另一個1. 5ml離心管中，以0. 2ml氯仿Iml Trizol提取液的比例加入0. 2ml新鮮的氯仿，充分振蕩混勻15sec，室溫放置2 ^iin後出現分層；(5) 40C，12，000g/min,離心 15min ；(6)吸取上清液於另一個1. 5ml離心管中，加入等體積預冷的異丙醇，室溫放置 IOmin 沉澱 RNA ；(7) 40C，12，000g/min,離心 IOmin ；(8)丟棄上清液，留沉澱，用0.5-lml 75 %的乙醇漂洗沉澱2遍(每次4 °C， 12，OOOg，離心 5min)。(9)將沉澱晾乾後溶於適量的DEPC處理水，於_70°C保存(或_20°C短期貯存備用)；(10)取1 μ 1 RNA樣品用1 %瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，另取1 μ 1 RNA樣品測濃度。
4. RT-PCR (反轉錄 PCR)RT-PCR RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas) i式齊[J 盒操作手冊進行。(1)準備一個0. 2ml的離心管，加入以下成分甘蔗總RNA :0. 1_5μ g ；oligo (dT) 18 引物(0. 5 μ g/μ 1) :1μ 1 ；加入DEPC處理的水到總體積12 μ 1 ；
短暫離心混勻。(2) 70°C溫育5min後置於冰上，短暫離心。(3)將離心管置於冰上，加入以下成分5Xreaction buffer :4μ 1 ；RiboLock Ribonuclease Inhibitor (20u/μ 1) 1μ 1 ；10mM dNTP mix :2μ 1 ；短暫離心混勻。(4)371溫育5111土11。(5)加入 1 μ 1 RevertAid M-MuLV 反轉錄酶(200u/ μ 1)；使終體積達到 20 μ L·(6)421溫育60111土11。(7)70°C溫育IOmin終止反應，將離心管置於冰上。5. SoSPSDIII基因核心片段克隆以2μ 1 RT-PCR產物為模板，用SofSPSDIII-F和 SofSPSDIII-R引物進行常規PCR擴增，PCR產物經膠回收純化後克隆到T載體並測序。測序結果表明，PCR產物長度1371bp。6. SoSPSDIII基因全長cDNA克隆根據上一步測序獲得的核心區序列，設計了 5，-RACE和3，-RACE的基因特異引物，DIII5，-GSPl (5，_cgttcgcgcgtagccatgtcttgt_3，)DII15， _GSP2(5， _ccggtgatgacctcctcgacgaagt_3，)DIII3' -GSPl (5' -gcaaggaagctccgagcaagagtt-3『)DIII3，_GSP2(5，_tcctcctggagttgaatttggtcaca_3，)。提取甘蔗幼嫩葉總RNA，按 SMART RACE cDNA Amplification Kit(Clontech)試劑盒操作手冊進行5』-RACE和3』-RACE。產物經膠回收純化後克隆到T載體並測序。測序結果表明，5，-RACE產物長度21 lbp，3，-RACE產物長度1937bp。7.甘蔗SoSPSDIII基因全長序列分析將所獲得的三個序列進行拼接，獲得了 SofSPSDIII基因全長cDNA序列，總長3252bp。經VectorNTI軟體分析，該序列的ORF為 2892bp，編碼964個胺基酸。起始密碼子(ATG)位於轉錄起始位點後60bp處，終止密碼子 (TAA)後還有一段301bp的非編碼序列，並帶有真核生物典型的polyA尾巴。8.甘蔗SofSPSDIII基因植物表達載體的構建根據SofSPSDIII全長cDNA序列，設計一對用於擴增SofSPSDIII基因ORF的引物，DIII-ORF-F(CccTCTAGAatRRcRRRcaacRacaa)和 DIII-QRF-R(RRRCCCGGGttattRtRtRaR tatacccatctgc)，並分別在5，端加上XbaI和XmaI酶切位點。用RT-PCR產物為模板，用 DIII-ORF-F和DIII-ORF-R為弓|物進行常規PCR。PCR產物經膠回收純化後，用XbaI和XmaI 進行雙酶切，同時用XbaI和XmaI 對植物表達載體pBI121進行雙酶切。酶切產物用PCR純化試劑盒純化後進行連接，轉化大腸桿菌JM109感受態細胞，在含Km的培養基上篩選。在 PBI121質粒的插入位點兩側設計各設計一條引物，pBI121-conF(cagtggtcccaaagatggaccc cca)和pBI121-conR(tccagactgaatgcccacaggccgt)，以少量菌體為模板，用該對引物行常規PCR驗證。挑選3個能擴增出預期產物的陽性克隆菌株提質粒酶切驗證，驗證正確的質粒送上海鼎安公司測序進一步確認，並命名為PBl-SofSPSDIII。甘蔗DIII家族蔗糖磷酸合成酶基因(SofSPSDIII)序列表，見後頁。
權利要求
1.甘蔗DIII家族蔗糖磷酸合成酶基因SofSPSDIII，其特徵在於它具有序列表中 SEQIDN0. 1的DNA序列，且它的編碼區從第60位核苷酸到四51位核苷酸；SofSPSDIII編碼的蛋白，是具有序列表中SEQID NO. 2胺基酸殘基序列的蛋白質，或者是將SEQID NO. 2的胺基酸殘基序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與SEQID NO. 2的胺基酸殘基序列相同活性的衍生蛋白質； 本發明所獲得的甘蔗SofSPSDIII基因的全長cDNA序列tcaactctcccattccgtcccccgatctcgccggattctcctcctcgccggcggcggcg|at^ gcgggcaacga caactggatcaacagctacctcgacgccatcctagacgccggaaaggccgccatcggcggcgaccggccctccctcc tcctccgcgagcgcggccatttctcccccgcgcgctacttcgtcgaggaggtcatcaccggctacgacgagaccgac ctctacaagacatggctacgcgcgaacgccatgcggagcccgcaggagaggaacacgcggctcgagaacatgacgtg gaggatctggaaccttgcaaggaagaagaaggagttcgagaaagaagaagcttgtcgtttgtcaaaacgccagccag aaactgagaaaacacgagctgatgctactgcagatatgtctgaagatctctttgaaggtgaaaagggagaagatgct ggtgatccatctgttgcatatggggacagcaccacagggagctcacctaagacaagttcaattgacaagctatacat agtattgatcagtttacatggtctggtccgtggtgagaatatggagcttggccgagattcagatacgggtggccagg tcaaatatgtggttgaacttgctaaagcactaagttcatctcctggagtttaccgggttgatctgctaacaagacaa atattagcaccaaattttgatcgtagttatggtgaacctgcagaattattggtttcaacaagtggtaaaaattctaa acaagaaaaaggagaaaatagtggcgcatatataattcggataccatttggtccaaaagataagtatctagctaaag aacatctatggcctttcattcaagaatttgttgatggtgcactcagccatattgtgaggatgtcaaaagccataggt gaagaaactggccgcgggcatccagtatggccttctgtgattcatgggcattatgccagtgcaggaattgctgctgc tttactttctggagcacttaaccttcctatggcattcacaggacattttcttgggaaagataaattggaagggcttc tcaaacaagggagacaaactagggaacagataaatatgacatacaaaataatgtgccgaattgaggcagaggagcta tctcttgacgcatctgagattgtcattgcaagcactaggcaagaaatagaagagcagtggaacttgtatgatggttt tgaggttatacttgcaaggaagctccgagcaagagttaaacgtggtgctaattgttatggtcgttttatgcctcgta tggttataattcctcctggagttgaatttggtcacattattcacgattttgatatggacggtgaagaagagaatcca tccccggcatctgaggatccacctatttggtctcagataatgcgcttctttacaaatcctaggaagcctatgattct agetgttgetcgcccttatcctgagaagaatattactacgcttgtaaaagcatttggtgaatgtcggccactaaggg agcttgcaaaccttacattgataatgggtaaccgtgaagctatatctaagatgcacaatatgagtgctgctgtcttg acatcagtgcttacattgattgatgaatatgacttgtatggtcaagtggcataccccaagcatcataagcactcgga agttcctgacatttatcgtttagctgcaagaacaaagggggcttttgtaaatgtagcttacttcgaacaatttggag ttactctgatagaggctgctatgaatggtttgcctataattgcgacaaaaaatggagcccctgttgaaattaatcag gtcctgaacaatggtctccttgttgatccgcacgatcagaatgccattgcggatgcactatataaacttctttctga caaacaactttggtcaaggtgcagagagaatggactgacaaatattcaccaattctcgtggcccgaacattgcaaga attacctgtcaaggatattaactcttggcccaaggtctcctgctattggtaacagagaggagcggagtaatacacct atttcaggaaggaggcaaatcattgttatttctgtagactctgttaacaaggaagatctagtcaggataatcagaaa tgctattgaggtcatacatacacaaaacatgtcgggttcaactggttttgtgctgtcaacttcgctgactatatcag agatacattcactgctactatctggtggcatgcttcccactgattttgatgctttcatctgcaatagtgggagtaac atttactatccttcatattctggtgaaacgccaaacaactccaagattacatttgcattagatcaaaatcaccagtc acatatcgagtatcgttggggaggagaaggactaaggaaatatcttgtgaagtgggccacttcagtggtagaaagaa agggaagaacagagaggcaaattatttttgaagatccagaacactcttcagcctattgtcttgcatttagagtggttaatcccaatcatcttcctcctttaaaggagttgaggaagttgatgagaatccaatctctccgttgcaatgcattgta taaccacagcgctaccagattatctgtagtccctatccatgcatcaagatctcaggctctaaggtacttgtgtatac gttgggggatagaggtgccaaatgttgcagtcctcgtgggtgaaagtggcgattcagattacgaggaactgctgggg ggtctccataggaccgttatcctgaagggcgagttcaacacccccgcaaacaggatccacacggtgaggagataccc cttacaggatgtcgtcccacttgacagctcaaacatcaccggtgtcgaaggctacaccacggatgacttgaagtegg ccctgcagcagatgggtatactcacacaa[taa|taacacct ccggagc ttctgttt ccacacccaagccaacgggaaaa cgaaaggaaaggagacgaaccaagtgcaactgtttccatgctcgatggaaatgccgattttgctcgtaggctgtaga ggttgtgtatgtgtgtgcgtgcgtgcggtggtggcctattcttgagctgtgaataactgccctcctttgtttgtaat gccccaaaaattttgaagtgagtaccctacaaccaaacaggaaacaggttcacatattgataatggaaaagacgaat gcaagaaaggaaaacaaaaaa本發明所獲得的甘蔗SofSPSDIII基因所編碼蛋白的胺基酸序列 MAGNDNWINSYLDAILDAGKAAIG⑶RPSLLLRERGHFSPARYFVEEVITGYDETDLITWLRANAMRSPQE RNTRLE匪TWRIWNLARKKKEFEKEEACRI^KRQPETEKTRADATADMSEDLFEGEKGEDA⑶PSVAYGDSTTGSSP KTSSIDKLYIVLISLHGLVRGENMELGRDSDTGGQVKYVVELAKALSSSPGVYRVDLLTRQILAPNFDRSYGEPAEL LVSTSGKNSKQEKGENSGAYIIRIPFGPKDKYLAKEHLWPFIQEFVDGALSHIVRMSKAIGEETGRGHPVWPSVIHG HYASAGIAAALLSGALNLPMAFTGHFLGKDKLEGLLKQGRQTREQI匪TYKIMCRIEAEELSLDASEIVIASTRQEI EEQWNLYDGFEVILARKLRARVKRGANCYGRFMPRMVIIPPGVEFGHIIHDFDMDGEEENPSPASEDPPIWSQIMRF FTNPRKPMILAVARPYPEKNITTLVKAFGECRPLRELANLTLIMGNREAISKMHNMSAAVLTSVLTLIDEYDLYGQV AYPKHHKHSEVPDIYRLAARTKGAFVNVAYFEQFGVTLIEAAMNGLPIIATKNGAPVEINQVLNNGLLVDPHDQNAI ADALYKLLSDKQLWSRCRENGLTNIHQFSWPEHCKNYLSRILTLGPRSPAIGNREERSNTPISGRRQIIVISVDSVN KEDLVRIIRNAIEVIHTQ匪SGSTGFVLSTSLTISEIHSLLLSGGMLPTDFDAFICNSGSNIYYPSYSGETPNNSKI TFALDQNHQSHIEYRWGGEGLRKYLVKWATSVVERKGRTERQIIFEDPEHSSAYCLAFRVVNPNHLPPLKELRKLMR IQSLRCNALYNHSATRLSWPIHASRSQALRYLCIRWGIEVPNVAVLVGES⑶SDYEELLGGLHRTVILKGEFNTPA NRIHTVRRYPLQDVVPLDSSNITGVEGYTTDDLKSALQQMGILTQ
2.甘蔗Dili家族蔗糖磷酸合成酶基因植物表達載體，其特徵在於載體中的啟動子為 CaMV35S，載體中的基因為SofSPSDIII，即含有序列表中SEQID NO. 1的第60位核苷酸到第 2954位核苷酸片段，構成一個新的植物表達載體，命名為pBI-SofSPSDIII。
全文摘要
本發明涉及一種甘蔗DⅢ家族蔗糖磷酸合成酶基因及其植物表達載體。該基因SofSPSDⅢ是下列序列之一1.序列表中的1的DNA序列；2.編碼序列表中2的蛋白質序列。該基因編碼的蛋白，是具有序列表中2的胺基酸殘基序列，或者是將2的胺基酸殘基序列經過一個或幾個胺基酸殘基的取代、缺失或添加且具有與2相同活性的衍生蛋白質。本發明的植物表達載體含有來自序列表中1的第60位核苷酸到第2954位核苷酸片段，插入到載體pBI121的組成型啟動子CaMV35S後面，構成一個新植物表達載體，命名為pBI-SofSPSDⅢ。本發明的載體在轉基因提高作物的蔗糖含量、產量或增強抗逆性方面具有很好的應用前景。
文檔編號C12N15/52GK102154333SQ20111003247
公開日2011年8月17日 申請日期2011年1月30日 優先權日2011年1月30日
發明者劉麗敏, 劉助生, 唐紅琴, 廖青, 方鋒學, 李雙喜, 李楊瑞, 遊建華, 莫磊興, 黃東亮, 黎濤 申請人:廣西壯族自治區甘蔗研究所