酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法及裝置與流程

2023-06-06 19:53:56 1

本發明屬於生殖醫學技術領域，具體涉及一種酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法及裝置。

背景技術：

不孕不育已經成為現代一大社會問題，各大醫院的生殖中心都人滿為患。其原因各種各樣：電腦輻射、疾病、油炸食物、和環境的改變，均可導致近年來男性的精子密度質量大幅下降。不少年輕人多數睡眠不足，不良的飲食習慣和生活習慣，高溫桑拿等，也一定程度上影響了男性性功能。

全國不孕人口達到4000萬，單純男方因素不孕佔不孕人群30％以上，全中國超過1000萬男方不孕。其中男性不孕的一個重要原因則是精子的密度達不到要求，依據精液分析結果可進一步分為無精子症、極重度少精子症、少精子症、弱精子症和不明原因的不育症等。

醫生為了鑑定男性生育能力，常囑男方做精液檢查，正常精液顏色為灰白色或乳白色。如節慾時間長者，可呈淡黃色，若出現鮮紅色、暗紅色，則提示患者有炎症或生殖道損傷。每次排精量為1.5毫升以上為正常，常受排精次數與頻率的影響。新鮮精液呈稠厚膠凍狀。正常精子數應超過1500萬個/ml。排精後1小時內活動精>＝50％。世界衛生組織推薦精子活動力分為四級：0級：不活動；1級：精子原地擺動；2級：有中等的前向運動；3級：前向運動活躍，快速直線運動。正常的精子活動力為2～3級的精子>＝40％～50％；精子形態：畸形精子小於50％。分析男性生育能力不能單從精液的一項指標定論，應對精子數量、活力、活動率、液化時間、畸形率等多方面進行綜合能力分析。正常精液標本體積應大於1.5ml，who第五版人類精子和宮頸黏液操作手冊(2009)建議的男性每次排精的精子總數大於等於39x106，這也是評估男性睪丸生精能力的重要指標之一採集精液前2～7天內必須停止性生活，並且不得有手淫、夢遺等情況，還應禁菸戒酒，忌服對生精功能有影響的藥物等。由於眾所周知的原因，男性的生精能力並非一成不變的，在一個生精周期(約60-90天)內，多次的精液檢測可以評估在該段時間內該名男性的生精功能，才能獲得最為準確的判斷結果。

在醫院標準的精液採集流程是以晨起採集為佳，採精前用溫水將雙手、陰部，尤其是龜頭洗淨。可採用手淫法或電動按摩射精法引起排精。精液的排出具有一定順序，開頭部分來自前列腺、附睪及壺腹，伴有大量精子，最後部分來自精囊，故應收集整份精液，不要遺漏任何部分，尤其是開頭部分。正因為易丟失精液的第一部分，故不能用體外射精法收集精液。盛精液的容器應乾淨、無菌、乾燥，採精前容器的溫度應與室溫相同；瓶子不應過大，但瓶口不應過小，以免將精液射出瓶外；在冷天應將精液標本保溫，放置在貼身內衣袋中，不可傾斜或倒置，儘可能在1小時內送到實驗室。正是由於標準的精液採集流程和一定的隱私性，加上患者緊張的心理情緒，病人往往在家裡都很難收集好精液，出現漏檢和射精困難等現象。同時，在醫院的排精室更是出現集體排精困難的窘況。

因此需要一種全新簡單的方法來實現病人在家庭的檢測，這樣既方便的病人多次往返醫院檢查(3次以上反覆檢驗)，同時降低了病人心理和生理的影響，更為客觀的反應出精子的真實密度有助於病人的治療。

技術實現要素：

針對現有技術存在的問題，本發明提供一種酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法及裝置，目的是根據精子細胞的壓積，結合離心和酶試劑的輔助，最終以精子細胞在特製離心管內的壓積高低來客觀反映精子的密度。

一種酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的裝置，包括無菌採集杯，500微升定量氣囊吸管，等體積的5000u透明質酸酶、5000u糜蛋白酶和枸櫞酸鈉溶液，上粗下細的附有帽塞的玻璃錐形離心管，離心管管體上附有刻度標尺1500萬個/ml，搭配有與錐形離心管尺寸形狀匹配的小型離心機以及標準精子細胞壓積比較卡。

其中，所述的上粗下細的玻璃錐形離心管全長8cm，其中細的部分長4cm，粗的部分長4cm，細的部分管內直徑為1mm，粗的部分直徑為8mm。

實現本發明目的的酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法按照以下步驟進行：

(1)使用無菌採集杯收集完整的精液；

(2)在室溫25℃條件下放置30min，或於36℃水浴20min，使精液初步液化，由膠凍狀變為液體狀；

(3)採用500微升定量氣囊吸管或實驗室移液管吸取400ul液體狀精液，加入等體積的5000u透明質酸酶、5000u糜蛋白酶和枸櫞酸鈉溶液，混合後促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色變清亮，降低了精液的粘稠度增加流動性；

(4)將完全液化的精液注入錐形離心管中，在配套的離心機中以1500rpm的轉速離心5分鐘；

(5)離心後的精子細胞通沉積到錐形離心管底層，觀察錐形離心管刻度顯示的壓積高度，與標準精子細胞壓積比較卡進行比較，低於1.0釐米的為可疑低密度精子數量，高於或等於1.0釐米為正常男性精子密度。

與現有技術相比，本發明的特點和有益效果是：

(1)精液是有精子細胞、精漿以及前列腺液等組成的，本發明中採用糜蛋白酶+透明質酸酶相結合的組合，降低了精漿液化的背景，降低了精液的粘稠度增加流動性，有利於精子細胞後續離心沉積。

(2)往往由於實驗室擁有較好的設備條件允許，但是家庭沒有較好的條件。因此我們為了實現在家庭的使用，設計出家庭裝套裝，家庭套裝裝置中涉及了上粗下細的錐形離心管，這種形狀設計與直型的玻璃管相比，更能便捷地注入精液，考慮到家庭使用者均為非專業人士，更為方便和便捷。同時精子離心下沉更好的保護細胞結構不會破幻，造成緩衝。

(3)本發明通過離心的方法將精子細胞的壓積高度來進行比較，客觀反映精子的數目和密度。

附圖說明

圖1是本發明上粗下細的玻璃錐形離心管示意圖；

圖2是本發明實施例1～3經離心處理後精子細胞壓積標註圖；

圖3是本發明實施例1中酶試劑處理前後精液樣本對比圖；

其中：(a)酶試劑處理前精液樣本；(b)酶試劑處理後精液樣本。

具體實施方式

本實施例中使用酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的裝置，是家庭套裝裝置，包括無菌採集杯，500微升定量氣囊吸管，等體積的5000u透明質酸酶、5000u糜蛋白酶和枸櫞酸鈉溶液，上粗下細的附有帽塞的玻璃錐形離心管，離心管管體上附有刻度標尺1500萬個/ml，如圖1和圖2所示，搭配有與錐形離心管尺寸形狀匹配的小型離心機以及標準精子細胞壓積比較卡。

實施例1

本實施例的酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法按照以下步驟進行：

(1)使用無菌採集杯收集完整的精液；

(2)在室溫25℃條件下放置30min，使精液初步液化，由膠凍狀變為液體狀；

(3)採用500微升定量氣囊吸管或實驗室移液管吸取400ul液體狀精液，加入等體積的5000u透明質酸酶、5000u糜蛋白酶和枸櫞酸鈉溶液，混合後促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色變清亮，降低了精液的粘稠度增加流動性，酶試劑處理前後的對比如圖3所示；

(4)將完全液化的精液注入錐形離心管中，在配套的離心機中以1500rpm的轉速離心5分鐘；

(5)離心後的精子細胞通沉積到錐形離心管底層，觀察錐形離心管刻度顯示的壓積高度，如圖2所示，與標準精子細胞壓積比較卡進行比較，低於1.0釐米的為可疑低密度精子數量，高於1.0釐米為正常男性精子密度，本實施例中樣品高度為0.5cm，屬於750萬個/ml低精子密度樣本。

實施例2

本實施例的酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法按照以下步驟進行：

(1)使用無菌採集杯收集完整的精液；

(2)於36℃水浴20min，使精液初步液化，由膠凍狀變為液體狀；

(3)採用500微升定量氣囊吸管或實驗室移液管吸取400ul液體狀精液，加入等體積的5000u透明質酸酶、5000u糜蛋白酶和枸櫞酸鈉溶液，混合後促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色變清亮，降低了精液的粘稠度增加流動性，酶試劑處理前後的對比如圖3所示；

(4)將完全液化的精液注入錐形離心管中，在配套的離心機中以1500rpm的轉速離心5分鐘；

(5)離心後的精子細胞通沉積到錐形離心管底層，觀察錐形離心管刻度顯示的壓積高度，如圖2所示，與標準精子細胞壓積比較卡進行比較，低於1.0釐米的為可疑低密度精子數量，高於1.0釐米為正常男性精子密度，本實施例中樣品高度為1cm，屬於1500萬個/ml的正常人精液。

實施例3

本實施例的酶促液化結合離心輔助半定量檢測精子密度的方法按照以下步驟進行：

(1)使用無菌採集杯收集完整的精液；

(2)在室溫25℃條件下放置30min，使精液初步液化，由膠凍狀變為液體狀；

(3)採用500微升定量氣囊吸管或實驗室移液管吸取400ul液體狀精液，加入等體積的5000u透明質酸酶、5000u糜蛋白酶和枸櫞酸鈉溶液，混合後促使精液的完全液化，完全液化的精液背景由乳白色變清亮，降低了精液的粘稠度增加流動性，酶試劑處理前後的對比如圖3所示；

(4)將完全液化的精液注入錐形離心管中，在配套的離心機中以1500rpm的轉速離心5分鐘；

(5)離心後的精子細胞通沉積到錐形離心管底層，觀察錐形離心管刻度顯示的壓積高度，如圖2所示，與標準精子細胞壓積比較卡進行比較，低於1.0釐米的為可疑低密度精子數量，高於1.0釐米為正常男性精子密度，本實施例中樣品高度為1cm，屬於3000萬個/ml高精子密度。

本發明未詳述部分為現有技術。以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。