一種治療結腸癌的藥物及其製備方法

2023-06-06 19:43:56

專利名稱：：一種治療結腸癌的藥物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及藥品，是一種治療結腸癌的藥物及其製備方法。
背景技術：
：據報導的統計數據表明，結腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，發病率逐年以2%左右遞長率增加，同時治療結腸癌的藥物也在不斷推向市場。西藥常用藥物主要有氟尿嘧啶、絲裂黴素、亞硝脲素及呋喃氟尿嘧啶等，中藥常用藥主要有消癌平片、珍香膠囊、西黃丸、抗癌平丸、華蟾素口服液、複方斑蝥膠囊等。臨床表明，有些西藥雖然療效較好，但對胃腸黏膜有較強的刺激作用，並對肝腎有較大損傷，特別是長期服用對患者自身免疫力的損害也較大；中藥的副作用雖然少了很多，但是，療效欠佳；無論是治療結腸癌未轉移症、還是結腸癌多發轉移症，其臨床效果甚微，所以，手術治療為患者的主要選擇，但是，手術後的化療期一般均聯合使用治療結腸癌的西藥，因此，給患者帶來較大痛苦。
發明內容本發明的目的是，提供一種治療結腸癌的藥物及其製備方法，主要治療結腸癌未轉移症狀，無毒副作用，配合手術後的化療期使用，從而減輕患者痛苦。本發明為實現上述目的，通過以下技術方案實現一種治療結腸癌的藥物，包括藥物有效成份和藥用輔料製成的藥劑，藥物有效成份為3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷，其結構式為μ30八HC29H46O2423本發明所述藥劑劑型為片劑或膠囊。本發明所述藥劑劑型為水針劑或凍乾粉劑。本發明所述藥劑劑型為散劑或顆粒劑。本發明的一種治療結腸癌的藥物的製備方法，包括以下步驟①取地榆炭粉碎後為藥物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇類，常溫或加熱至60°C-90°C，提取1-24小時，重複提取1-3次，過濾，濾液在常壓或減壓下濃縮得到流浸膏；②將步驟①中流浸膏用5-10倍於流浸膏重量的水分散，取加水量1/3體積的氯仿進行萃取，重複萃取5-8次，將萃取液常壓或減壓回收溶劑，得浸膏；③將步驟②的浸膏進行矽膠柱層析分離，採用石油醚_丙酮系統梯度洗脫，將石油醚-丙酮體積比為8020部分合併，回收溶劑，放置後析出白色粉末，抽濾得到3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷；④按重量比取3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷為2090%，其餘為藥用輔助料，按照藥劑的常規製備方法製成藥劑。本發明藥物的有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷為單體物質，呈白色粉末狀。本發明藥物有效成份的結構式用高分辨快原子轟擊質譜給出準分子離子峰m/z為409.3474[M-H]+(C29H45O,計算值409.3465)，分子式為C29H44O15紅外光譜(溴化鉀)cnT13464(OH)，2938(飽和C-H)，1452、1386(CH3)。無畸變極化轉移增強譜(DEPT譜)顯示分子中含有7個甲基(CH3),9個亞甲基(CH2),6個次甲基(CH)和7個季炭。核磁共振-氫譜(1H-NMR譜)顯示5個甲基單峰信號δ0.95(Η-26)，1.02(Η-25)，1.05(Η-27)，1.08(Η-24)，1.27(Η-23)和2個甲基雙峰信號0.88(H_29，3H，d,J=6.9Hz),0.96(H_30，3H，d,J=7.9Hz)；—個連氧碳上的氫信號δ3·50(Η-12，1Η，dd，J=10.8，5.2Hz)和一個烯氫信號δ5.71(Η-12，m)。核磁共振-炭譜(13C-NMR)譜顯示4個烯碳特徵信號δ117.5(C-12)、δ128.9(C-17)、δ133.5(C-18)和137.6(C-13)以及1個連氧碳信號78.2(C-3)，本發明藥物有效成份為28位缺失的烏蘇烷型化合物。經DEPT譜、異核多重鍵相關譜(HMBC譜)、異核多量子相干譜(HMQCHf)使本發明藥物的有效成份C、H歸屬得以確認，其名稱為3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷(3β-hydroxy-28-norurs-12,17(18)-dien)。本發明藥物有效成份來源於地榆炭，地榆炭有較好的凝血止血作用、斂瘡作用。申請人研究發現，地榆炭中的3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷對結腸腫瘤細胞有顯著的抑制其生長的作用，並且還能抑制結腸腫瘤新生血管的形成，從而為治療結腸癌未轉移症狀提供了極好的基礎。實驗表明3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷具有顯著的藥理作用。1、抗腫瘤本發明藥物的有效成份為烏蘇烷型五環三萜化合物，熊果酸(烏蘇酸)是該類化合物的代表性成分。熊果酸為一廣譜的抗腫瘤化合物，在體外對多種腫瘤細胞有毒性作用。熊果酸不但能抑制腫瘤細胞生長，而且還能抑制腫瘤新生血管的形成。1.1材料人結腸癌細胞系ΗΤ29(ΗΤΒ_38，購自美國標準菌種收藏所，美國馬裡蘭州羅克韋爾市)置於RPMI-1640(Hyclone，美國猶他州洛根市)培養液中進行培養，培養液中含有10%小牛血清(Hyclone，美國猶他州洛根市)及抗生素(100單位/毫升青黴素，及100毫克/毫升鏈黴素)(Hyclone，美國猶他州洛根市)。細胞在37°C，5%二氧化碳培養箱中進行孵育。受試樣品為3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷，臨用時以二甲亞碸(dimethylsulfoxide,DMS0)溶解，加培養液稀釋至所需濃度，使DMSO終濃度為1%。1.2.實驗方法取處於指數生長期的HT-29細胞，應用0.25%胰酶和3毫摩爾/升乙二胺四乙酸混合消化液進行消化，調整細胞濃度為每毫升ιχIO4,按每孔0.1毫升接種於96孔細胞培養板中。無血清RPMI-1640同步化後24小時，細胞繼續在不同藥物作用濃度下培養48小時，每濃度組設3個復孔，實驗重複3次。培養後進行噻唑蘭(MTT)比色(MTT5毫克/毫升，37攝氏度，4小時)並繪製藥物濃度與540納米吸光度之間的關係曲線。細胞存活率(%)=實驗組吸光度/正常組吸光度X100%。1.3.實驗結果實驗結果tableseeoriginaldocumentpage5本發明藥物有效成份對人結腸癌細胞HT29的抑制作用由附圖9可知，本發明藥物有效成份對人結腸癌細胞HT29的生長具有較強的抑制作用，並且顯示一定的劑量依賴關係，在最高劑量(20微克/毫升)時，對細胞的抑制作用最強，達到93.93%。本發明所述藥物經動物實驗表明對結腸症具有極顯著的治療作用；本發明藥物對結腸癌細胞HT29荷瘤小鼠的治療作用動物實驗如下1、實驗材料人結腸癌細胞系HT29(HTB_38，購自美國標準菌種收藏所，美國馬裡蘭州羅克韋爾市)。ICR小鼠，雌性，體重20士2克(山東大學動物中心，實驗動物許可號SCXK魯20030004)；小鼠白介素_2、腫瘤壞死因子-α酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒均購自晶美生物工程有限公司。受試藥物3β-輕基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷注射液，生理鹽水稀釋至所需濃度。2、實驗方法將人結腸癌細胞株接種於正常小鼠腹腔內，讓其大量繁殖，7天後抽取腹水(無血性)，用滅菌生理鹽水稀釋成細胞濃度為5XIO6個/毫升的接種液，於小鼠腹背側部皮下注射含5XIO6癌細胞的懸液0.5毫升，成瘤後用組織塊套管針法皮下移植為實體瘤。將結腸癌皮下移植的小鼠隨機分為5組，各組於移植後第6天開始給藥，陽性組為環磷醯胺，空白組和模型組為生理鹽水，每天給藥1次，共用7天後停藥。末次給藥24小時後摘眼球取血，收集血液，取血清-20°C備用。臨用前平衡至室溫，按照ELISA試劑盒說明書步驟進行操作，測定細胞因子白介素-2、腫瘤壞死因子-α的水平；頸椎脫白處死小鼠，剝取瘤塊、胸腺，計算抑瘤率、胸腺指數。formulaseeoriginaldocumentpage6tableseeoriginaldocumentpage6與模型組相比*P<0.05#P<0.01與正常組相比#P<0.05##P<0.01受試本發明藥物可抑制小鼠移植性腫瘤的生長，高、中劑量組抑瘤率分別為51.52%,46.09%，與模型組相比P<0.01或P<0.05；陽性對照環磷醯胺可明顯抑制小鼠腫瘤的生長，但小鼠體重明顯偏小，胸腺指數明顯偏低，本發明藥物各劑量組不會降低小鼠體重和胸腺指數，本發明藥物對正常機體影響較小，無明顯毒副作用。tableseeoriginaldocumentpage6與正常組相比:#Ρ<0.05##Ρ<0.01與模型組相比:*Ρ<0.05**Ρ<0.01與正常組比較，模型組和陽性組荷瘤小鼠細胞因子水平明顯降低(P<0.01)，與模型組比較，化合物高、中劑量組小鼠細胞因子明顯升高(P<0.01或0.05)，從而調節淋巴細胞的生長分化、激活巨噬細胞，在抗腫瘤免疫中起著重要的調節作用。動物實驗表明，本發明藥物具有極好的結腸癌腫瘤抑制作用，不會明顯降低小鼠胸腺指數；還可升高小鼠細胞因子白介素_2、腫瘤壞死因子-α水平，從而可通過調節荷瘤小鼠的免疫功能而發揮抗腫瘤的作用。實驗表明由於本發明藥物對治療結腸癌有顯著的效果，因此，患者可以在結腸癌治療中使用本發明所述的各種藥物劑型。本發明藥物還可以替代手術後的化療期聯合使用的西藥，從而徹底消除西藥的毒副作用。附圖1本發明藥物有效成份紫外圖譜；附圖2為本發明藥物有效成份紅外圖譜；附圖3為本發明藥物有效成份高分辨快原子轟擊質譜；附圖4為本發明藥物有效成份核磁共振氫譜；附圖5為本發明藥物有效成份核磁共振炭譜；附圖6為本發明藥物有效成份無畸變極化轉移增強譜；附圖7為本發明藥物有效成份異核多量子相干譜；附圖8為本發明藥物有效成份異核多重鍵相關譜；附圖9為本發明藥物有效成份對人結腸癌細胞ΗΤ29的抑制作用效果圖。具體實施例方式實施例本發明藥物包括藥物有效成份和藥用輔料製成的藥劑，藥物有效成份為3β_羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷，其結構式為μ30,J22/ψκΧiδ!HJ27八HC29H46O2423藥物有效成份的重量百分比為20-90%，其餘為藥用輔料。本發明藥物可以製成各種劑型，如注射劑水針劑、凍乾粉劑，片劑、膠囊、顆粒劑、散劑或口服液。本發明藥物的製備方法是先採用地榆炭提取藥物有效成份，然後按照常規製藥方法製備成所需藥劑，包括以下步驟①取地榆炭粉碎後為藥物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇類，常溫或加熱至60°C-90°C，提取1-24小時，重複提取1-3次，過濾，濾液在常壓或減壓下濃縮得到流浸膏；②將步驟①中流浸膏見5-10倍於流浸膏重量的zRiM，取加水量1/3體積的氯仿進行萃取，重複萃取5-8次，將萃取液常壓或減壓回收溶劑，得浸膏；③將步驟②的浸膏進行矽膠柱層析分離，採用石油醚_丙酮系統梯度洗脫，將石油醚-丙酮體積比為8020部分合併，回收溶劑，放置後析出白色粉末，抽濾得到3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷；④按重量比取3β-輕基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷為2090%，其餘為藥用輔助料，按照藥劑的常規製備方法製成藥劑。本發明藥物在製備注射液時，其藥物有效成份的重量比取30-60%為佳，其他藥物劑型有效成份取30-90%為佳，本發明藥物的有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷為單體物質，呈白色粉末狀。舉例說明幾種劑型①水針劑1000毫升藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷25克，吐溫8010毫升，氯化鈉8克。取藥物有效成份3β-輕基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷25克，加吐溫8010毫升，注射用水250毫升，加熱溶解，濾過，加10%碳酸鈉調酸鹼度至7.0-7.5，加入氯化鈉，加注射用水至1000毫升，G3垂熔漏鬥(玻璃)濾過，分裝，灌封，100攝氏度流通蒸汽滅菌30分鐘，分裝於1毫升安瓿瓶中，每支含有含3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷25毫克。②膠囊劑1000粒藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50克，微晶纖維素50克，硬脂酸鎂1克。取藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50克，微晶纖維素50克，硬脂酸鎂1克，混勻，裝膠囊，每粒重0.1克，含3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50毫克。③散劑1000包藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50克，乳糖450克。取藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50克、乳糖450克，研細，混勻，過篩，分包，每包重0.5克，含3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50毫克。④片劑1000片藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50克，羥丙甲纖維素20克，糊精30克，硬脂酸鎂1克。藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷、羥丙甲纖維素、糊精混合，以75%乙醇為粘合劑制溼顆粒，過22目篩，50攝氏度乾燥3小時，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻壓片，每片重0.1克，含藥物有效成份3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷50毫克。權利要求一種治療結腸癌的藥物，其特徵在於包括藥物有效成份為3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷和藥用輔料製成的藥劑，3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷的結構式為F2009102313298C00011.tif2.根據權利要求1所述的一種治療結腸癌的藥物，其特徵在於所述藥劑劑型為片劑或膠囊。3.根據權利要求1所述的一種治療結腸癌的藥物，其特徵在於所述藥劑劑型為水針劑或凍乾粉劑。4.根據權利要求1所述的一種治療結腸癌的藥物，其特徵在於所述藥劑劑型為散劑或顆粒劑。5.一種治療結腸癌的藥物的製備方法，其特徵在於包括以下步驟①取地榆炭粉碎後為藥物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇類，常溫或加熱至60°C-90°C，提取1-24小時，重複提取1-3次，過濾，濾液在常壓或減壓下濃縮得到流浸膏；②將步驟①中流浸膏用5-10倍於流浸膏重量的水分散，取加水量1/3體積的氯仿進行萃取，重複萃取5-8次，將萃取液常壓或減壓回收溶劑，得浸膏；③將步驟②的浸膏進行矽膠柱層析分離，採用石油醚-丙酮系統梯度洗脫，將石油醚-丙酮體積比為8020部分合併，回收溶劑，放置後析出白色粉末，抽濾得到3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷；④按重量比取3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷為20-90%，其餘為藥用輔助料，按照藥劑的常規製備方法製成藥劑。全文摘要本發明公開了一種治療結腸癌的藥物及其製備方法，包括藥物有效成份和藥用輔料製成的藥劑，藥物有效成份為3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷，其製備方法步驟①取地榆炭粉碎後為藥物原料，加入甲醇或乙醇，過濾，濾液在常壓或減壓下濃縮得到流浸膏；②將步驟①中流浸膏水分散，氯仿進行萃取，得浸膏；③將步驟②的浸膏進行矽膠柱層析分離，回收溶劑，放置後析出白色粉末，抽濾得到3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷；④按重量比取3β-羥基-28-缺失-12，17(18)-二烯烏蘇烷為20-90％，其餘為藥用輔助料，按常規製備方法製成藥劑。本發明主要治療結腸癌未轉移症狀，無毒副作用，配合手術後的化療期使用，從而減輕患者痛苦。文檔編號A61P35/00GK101810624SQ200910231329公開日2010年8月25日申請日期2009年12月2日優先權日2009年12月2日發明者仲英,孫立立,施祖榮,楊書斌,袁振海申請人:山東省中醫藥研究院