Tt1基因在提高植物抗寒性中的用途的製作方法
2023-06-07 04:59:31
專利名稱：Tt1基因在提高植物抗寒性中的用途的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，具體涉及TTl基因在提高植物抗寒性中的用途。
背景技術：
植物對環境變遷及不良環境有足夠的適應性和抵抗能力，這種抗逆性既受系統發 育的遺傳基因所控制，又受個體發育中的生理生態所制約。溫度作為重要的環境因子之一， 在植物遺傳背景限制的前提下，對植物某些生長發育過程起著決定性作用。低溫使植物受 到不同程度的傷害，以至引起死亡。植物抵抗低溫傷害的能力就是植物的抗寒性。植物種類繁多，分布區域廣泛，常受到低溫的為害。但是不同種類或同一種類不同 品種的植物對低溫的抵抗能力不同。生產上，常用抗寒劑來提高抗寒性，但由於抗寒劑對植 物幼苗生長有一定的影響，同時在土壤和植物體內有一定的殘留，長久使用會影響生態環 境。因此，研究植物的抗寒性，利用生物技術手段篩選和培育抗寒品種，不但有利於生態環 境的保護，對於培育和栽培那些受低溫限制而分布區域窄小的，而經濟價值又高的植物也 具有重大意義。作為農業生產中一種嚴重的自然災害，低溫寒害涉及面廣，主要包括糧食作物、蔬 菜、果樹及其它許多經濟作物，全世界每年受此災害造成的損失十分巨大水稻起源於熱帶，屬喜溫作物，是我國的主要糧食作物，種植面積居各種作物之首 位，達5億多畝。適宜的溫度是水稻生長必需的環境條件，由於水稻分布地區極廣，寒害現 象也特別突出。據統計，全國每年因低溫損失的稻穀達30億 50億公斤。早春育秧中的 低溫爛秧問題，幾乎年年都有發生，不僅造成稻種的巨大損失，延誤農時，嚴重影響水稻的 高產、穩產，而且限制水稻生產面積的擴大。小麥是我國重要的糧食作物，主要分布在北緯30°以北。根據生長習性可分為冬 小麥和春小麥，冬小麥相對春小麥來說營養期長，從營養期到生殖期生長緩慢，其間經歷一 個冬天漫長的低溫階段。北方冬麥區佔全國麥田總面積的59%，該麥區北部冷空氣活動頻 繁，冬季絕對溫度低，氣候嚴寒減小了冬小麥適宜種植的地理分布區域，使農業生產遭受很 大的損失。除此之外，早春低溫冷害是玉米農業生產上主要的氣象災害之一。北方春玉米區 時常發生，災害發生時減產15%以上，玉米質量也大受影響。黃瓜、西瓜、番茄等蔬菜作物， 生長前期遭受寒潮襲擊，其綠色組織被破壞，分枝出芽受阻，生長遲緩或停止，甚至植株死亡。近幾十年來，分子生物學的迅猛發展，從一定程度上揭示了植物抗寒機理。1、脯氨酸與植物抗寒脯氨酸廣泛存在於植物體內。許多植物在低溫、乾旱、和高鹽等生物脅迫下，體內 游離脯氨酸含量都增加。根據目前的研究，脯氨酸提高植物抗寒力的作用體現在第一，脯 氨酸作為水溶性最大的胺基酸(溶解度162. 3g，25°C )，是理想的有機滲透調節物質。植物 在低溫脅迫下通過提高體內脯氨酸含量，增加了細胞液的濃度，對細胞起保護作用。第二，由於脯氨酸在水溶液中可以形成親水膠體，產生一個可與蛋白質相互作用的疏水骨架，對 蛋白質形成保護。第三，脯氨酸可以激發體內過氧化氫酶、超氧化物酶的活性，其自身也可 以鰲合單線態氧，高效地清除低溫脅迫下產生的羥自由基，從而穩定蛋白質、DNA和膜。第 四，植物從脅迫條件下恢復時，脯氨酸還可以作為氮、碳以及還原力的一種快速補償來源。Deirdre Gleeson等人把脯氨酸合成途徑中的關鍵酶-Δ 1-吡咯啉-5-羧酸合成 酶(P5CQ基因超量表達轉入落葉松，使脯氨酸超量表達，將轉基因落葉松和對照同時放在 4°C下，對照生長受到抑制，而轉基因植株能較好的生長；Nanjo等人把脯氨酸降解途徑中 的關鍵酶-脯氨酸脫氫酶的反義基因AtproDH的cDNA轉到擬南芥中，很好地抑制了此酶的 產量，從而抑制脯氨酸的降解，提高了胞內脯氨酸水平，增強了植株的抗滲透性，結果顯著 提高轉基因植株對低溫的耐受性。低溫脅迫下，植物體內游離脯氨酸積累作為一種普遍現象，其積累量已被廣泛應 用於抗寒力鑑定。許多學者都通過測定低溫下植物體內脯氨酸含量的方法，鑑定不同品種 的抗寒性的強弱。脯氨酸的積累對植物抗寒的作用也逐漸被揭示，但是關於低溫對脯氨酸 代謝的調節機理了解很少。2、質膜透性與植物抗寒細胞膜不僅是分隔細胞質和胞外環境的屏障，而且也是細胞與環境發生物質交換 的主要通道，又是細胞感受環境變化刺激的部位。細胞膜的選擇透性是其維持生理功能的 最重要的條件之一。各種逆境傷害都會造成質膜選擇透性的改變或喪失，例如低溫、冰凍、 乾旱脫水等導致的細胞膜機械損傷以及逆境和衰老過程中的膜脂過氧化作用，都可以增大 細胞膜通透性。因此，細胞質膜透性的測定常作為植物抗性研究中的一個重要生理指標。當質膜的選擇透性因逆境傷害而明顯改變或喪失時，細胞內的物質(尤其是電解 質)大量外滲，從而引起組織浸泡液的電導率發生變化，通過測定外滲液電導率的變化，就 可反映出質膜的傷害程度和所測材料抗逆性的大小。Dexter首先用電導法測定了植物的抗 寒性，經過不斷地改進和完善，目前已得到廣泛應用。綜上可知，寒害已成為世界各國共同關注的問題。對於植物抗寒機制的研究和抗 寒基因工程方面的工作已有表明通過生物技術手段，將抗寒機制中相關基因導入植物體內 得到抗寒轉基因植株可能會成為植物抗寒改良的一種新的育種途徑，對於作物的生產和抗 寒種質的篩選具有重要的意義。但是，目前本領域很少有可供選用的抗寒基因。
發明內容
本發明要解決的技術問題是為提高植物抗寒性的轉基因技術領域提供一種新的 有效選擇。本發明解決該技術問題的技術方案是提供了 TTl基因在提高植物抗寒性中的用 途。其中，上述TTl基因的核苷酸序列(1)如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；或⑵在⑴限定的核苷酸序列中經過取代、缺失或添加至少一個核苷酸衍生所 得的核苷酸序列，且與SEQ ID NO. 1的序列編碼功能相同或相似的多肽。也能提高植物抗寒性。
本發明同時提供了 TTl基因編碼的多肽在提高植物抗寒性中的用途。上述TTl基因具有如下核苷酸序列(1)如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；或O)在⑴限定的核苷酸序列中經過取代、缺失或添加至少一個核苷酸衍生所 得的核苷酸序列，且與SEQ ID NO. 1的序列編碼功能相同或相似的多肽。本發明還提供了一種培育抗寒植物的方法。該方法包括以下步驟(1)將TTl基因可操作地連於載體上的表達調控序列後，形成所述TTl基因的重組 載體；(2)將步驟(1)中的重組載體轉入植物細胞；(3)經篩選獲得轉化細胞，然後將轉化細胞培育成轉基因抗寒植株及其後代，所述 後代包括植物種子及植物組織。其中，上述植物可為一般的各種農作物，如常見禾本科或十字花科植物。本發明中所述的TTl基因，其基本核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 1所示，該 基因來源於十字花科(Brassicaceae，也名Cruciferae)中芥屬(Brassica)的植物油菜 (Brassicanapus)，以油菜中的atp6基因為誘餌蛋白，根據酵母雙雜交方法，篩選到油菜中 的一個EST序列，再根據這段篩選到的序列，通過5』RACE的方法獲得序列表中SEQ ID NO. 1 所示的核苷酸序列。然後根據SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列設計一對PCR引物，從油菜 cDNA中擴增SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列。在本發明中，「在SEQ ID NO. 1中的核苷酸序列經過取代、缺失或添加至少一個核 苷酸衍生序列」的TTl基因序列一般是指編碼具有SEQ ID NO. 1所編碼的蛋白活性的多肽 的核苷酸序列及其簡併序列。該簡併序列是指所述序列中有一個或多個密碼子被編碼相同 胺基酸的簡併密碼子所取代後而產生的序列。由於密碼子的簡併性，所以與SEQ ID NO. 1同 源性低至約89%的簡併序列也能編碼出SEQ ID NO. 1所述的序列。另外，「在SEQ ID NO. 1 中的核苷酸序列經過取代、缺失或添加至少一個核苷酸衍生序列」的含義還包括能在中度 嚴謹條件下，更佳的在高度嚴謹條件下與SEQ ID NO. 1核苷酸序列雜交的核苷酸序列。該 術語還包括與SEQ IDN0. 1中的核苷酸序列的同源性至少80 %，較佳地至少89 %，更佳地至 少90%，最佳地至少95%的核苷酸序列。在本發明中的相同功能是指提高植物的抗寒性。該術語還包括能編碼具有與天然的SEQ ID NO. 1相同功能的蛋白的SEQ ID NO. 1 中開放閱讀框序列的變異形式。這些變異形式包括(但並不限於)若干個(通常為1 90個，較佳地1 60個，更佳地1 20個，最佳地1 10個)核苷酸的缺失、插入和/或 取代，以及在5』和/或3』端添加數個(通常為60個以內，較佳地為30個以內，更佳地為 10個以內，最佳地為5個以內)核苷酸。比如SEQ ID NO :3所示的核苷酸序列，其編碼的 多肽也能提高植物的抗寒性。本發明所述重組載體，是將TTl基因插入到載體中獲得，上述載體可選用本領域 已知的各種載體，尤其是真核表達載體(如PBI121或pCAMBIA2301)。本發明用上述重組載 體轉化宿主植物細胞，篩選獲得轉化細胞。然後將轉化細胞培育成轉基因抗寒植株及其後 代，所述後代包括植物種子及植物組織。本發明中所述的「可操作地連於」表示如下情況即線性DNA序列的某些部分能夠 影響同一線性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信號肽DNA作為前體表達並參與多肽的分泌，那麼信號肽(分泌前導序列)DNA就是可操作地連於多肽DNA ；如果啟動子控制序 列的轉錄，那麼它是可操作地連於編碼序列；如果核糖體結合位點被置於能使其翻譯的位 置時，那麼它是可操作地連於編碼序列。一般，「可操作地連於」意味著相鄰，而對於分泌前 導序列則意味著在閱讀框中相鄰。本發明的有益效果在於本發明提供了 TTl基因在提高植物抗寒性方面的用途， 在本發明的實施例中也通過實驗證明轉入了 TTl基因並過表達的植物經低溫處理後較野 生型的電導率明顯更低，脯氨酸含量更高，表明其抗寒性有了顯著的提高。本發明培育出抗 寒植物的方法也簡便而有效，為提高植物抗寒性提供了新的有效選擇，具有好的應用前景。
圖1、轉基因水稻植株中潮黴素hpt基因的PCR電泳檢測結果。從左至右依次為分 子量 Maker (Μ,片段從上到下依次為 2000bp, IOOObp, 750bp, 500bp, 250bp, IOObp)，陽性對 照(+)，野生型陰性對照(_)，待檢測植株1 6號。圖2、轉基因水稻植株中TTl基因的PCR電泳檢測結果。從左至右依次為分子 量 Maker (Μ,片段從上到下依次為 2000bp, 1000bp, 750bp, 500bp, 250bp, IOObp)，陽性對照 (+)，野生型陰性對照(_)，待檢測植株1 5號)。圖3、轉基因水稻植株中TTl基因的RT-PCR電泳檢測結果。從左至右依次為分子 量Maker (M，片段大小依次為2000bp ； 1000 ；750bp ；500bp ；250bp ；IOObp)，野生型陰性對照 1，待檢測植株2 5。圖4、低溫處理24h後，水稻生長情況。左圖為水稻低溫處理前(左為野生型，右為 轉TTl型)；右圖為低溫處理後(左為野生型，右為轉TTl型)。圖5、水稻的電導率檢測結果。圖6、水稻的脯氨酸含量檢測結果。圖7、轉基因油菜植株中TTl基因的PCR電泳檢測結果。從左至右依次為分子量 Maker (Μ,片段從上到下依次為 2000bp, 1000bp, 750bp, 500bp, 250bp, IOObp)，待檢測植株
1 4號)。圖8、TT1基因過量表達甘藍型油菜的半定量RT-PCR檢測結果，Zn-OE為TTl基因 過量表達甘藍型油菜，WT為野生型油菜。圖9、油菜的脯氨酸含量檢測結果。圖10、油菜的電導率檢測結果。
具體實施例方式下面通過實施例並結合附圖，進一步說明而不限定本發明。下述實施例中，凡未註明具體實驗條件的，均為按照本領域技術人員熟知的 常規條件，例如Sambrook，Russell的分子克隆實驗室手冊(New York Co Id Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。下述實施 例中，所用農桿菌(Agrobacterium tumefaciensp)採用章魚鹼型菌系的LBA4404菌株；大 腸桿菌(E. coli)採用Dffia菌株，菌株均購自於Qiagen公司。載體pBI 121購自於Clontech 公司。其餘化學實際均為市售分析純。下述實施例中，「SEQ ID N0. 1」單獨出現時，本領域技術人員可理解1其為「SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列」的簡稱。實施例一、使用TTl基因提高水稻抗寒性一、TTl基因的克隆及獲取以油菜中的atp6(genebank gi :89279377)基因為誘餌蛋白，根據酵母雙雜交方 法(見Clontech公司所公開的資料)，篩選到油菜中的一個EST序列(SEQ ID N0:2所示)， 再根據這段篩選到的序列，通過5』 RACE(見Takara公司所公開的資料)的方法獲得本發 明所述提高植物抗寒性的基因，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO. 1所示。根據SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列設計引物，上遊引物(SEQID NO. 3) :5，-ATGTCGGATCATTTGAGTTTATG-3，，下遊引物(SEQID NO. 4) :5，-TCAGACTGGTGTTGGGTTGGATAT-3，。然後經PCR從油菜cDNA中擴增SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列。PCR程序如下1.95 °C4min(預變性)
2.95 °C30s(變性)
3.53 °C30s(復性)
4.72 °C50s(延伸)
5.2 4步驟循環30次
6.72 0C5min(終延伸)
7.4 0C保存。對PCR產物純化(見Qiagen公司所公開的PCR產物純化資料)，經測序驗證，得到 SEQ IDN0. 1的基因序列。二、過表達TTl基因的水稻植株製備1、採用的水稻材料(Oryza sativa L.)為粳稻日本晴，為四川農業大學水稻研究 所保存。農桿菌(Agrobacterium tumefaciensp)採用章魚鹼型菌系的LBA4404菌株；大腸 桿菌(E. coli)採用Dffia菌株。根據SEQ ID NO. 1所示核苷酸序列設計引物，構建目的基因過量表達重組質粒上遊引物(SEQID N0. 5) :5，-CGC GGATCCATGTCGGATCATTTGAGTTTATG-3，，下遊引物(SEQID N0. 6) :5，-CCGGAGC TCTCAGACTGGTGTTGGGTTGGATAT-3，。經PCR，從油菜cDNA中擴增完整的SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列，PCR程序如 下1.95 0C4min (預變性)
2.95 0C30s (變性)
3.53 0C30s (復性)
4.72 0C50s (延伸)
5.2 4步驟循環30次
6.72 0C5min (終延伸)
7.4 0C保存。 對PCR產物純化(見Qiagen公司所公開的資料)，然後用BamHl與Mcl酶切，膠 回收，與載體PBI121連接(連接位點=BamHl與Sacl)，獲含SEQ ID NO. 1的過量表達重組 質粒。在大腸桿菌Dffia中繁殖後，提取質粒(見Qiagen公司公開資料)，將含SEQ ID NO. 1的過量表達重組質粒轉入農桿菌LBA4404中。2、外植體培養方法幼胚愈傷組織的誘導和繼代取田間開花後12-15天的水稻未成熟穎果，剝殼後 在75%酒精中浸泡1分鐘，用無菌水衝洗乾淨後，0. 升汞滅菌20分鐘，再用無菌水衝洗 乾淨。在超淨工作檯上晾乾，用鑷子剝取幼胚接種在誘導培養基(NB+2，4-D 2. 5mg/L)上， 於^TC下暗培養。一周後統計愈傷組織的誘導情況並進行繼代，以後每2周繼代一次。成熟胚愈傷組織的誘導和繼代選取外觀健康，飽滿，無病斑的成熟種子脫去穎 殼，75%酒精中浸泡1分鐘，用無菌水衝洗乾淨後，0. 1 %升汞滅菌20分鐘，再用無菌水衝洗 乾淨。在超淨工作檯上晾乾，接種到誘導培養基(NB+2，4-D 2. 5mg/L)上，於^TC下暗培養。 2周後統計愈傷組織的誘導情況並進行繼代，以後每2周繼代一次。3、水稻基因轉化實驗方法3. 1、工程菌的活化用無菌牙籤在平板上挑取農桿菌單菌落，放在IOmlYEP培養液(酵母提取物IOg+ 胰蛋白腖5g+氯化鈉IOg+加水至IL+利福平50 μ g/mL+潮黴素25 μ g/mL)中培養；或著 取保存於-20°C冰箱無菌農桿菌菌液50-100 μ 1於2ml的含相應抗生素的YEP培養基上， 250r/min, 培養過夜。取過夜培養液300 μ 1於3ml的含相應抗生素的YEP液體培養基 中，在250r/min，28°C的條件下遮光振動培養，至菌液達0D600 = 0. 5左右，即可用於轉化。上述含目的基因的菌液在無菌的50ml的離心管中以5000r/min離心5分鐘後回 收菌體，用30ml的NBC0(NB+2，4-D 2. Omg/L+乙醯丁香酮100 μ mol/L)液體培養基重懸含 目的基因的菌體。選擇生長狀態良好的，顆粒狀胚性愈傷組織用無菌鑷子將其適當夾小，創 造傷口，然後放在菌液中浸泡，一般浸染時間為10 30min，之後放入有濾紙的平皿中吸乾 多餘菌液。3. 2、共培養將吸乾菌液的愈傷置於NBC0(NB+2，4-D 2. Omg/L+乙醯丁香酮100 μ mol/L)固體 培養基上，共培養培養基上放1層濾紙，濾紙上放愈傷組織。22 25°C暗培養2 3天，直 至愈傷組織上出現少量菌斑為止。3. 3、脫菌與篩選共培養的愈傷組織放在廣口瓶中，用無菌水清洗至清澈，再浸泡於含頭孢黴素 500mg/lNBC0液體培養基中，在搖床上中速振蕩30-60min，棄液，將愈傷組織用無菌濾紙吸 幹或在超淨工作檯上吹乾後接放在一篩培養基上暗培養三周，再轉入二篩培養基上暗培養 三周，溫度控制在25 27°C。3. 4、分化與生根選擇將兩次篩選後新長出的抗性愈傷組織接種到預分化培養基(NB+KTlmg/ L+NAAO. 25mg/L)上，暗培養 10 天。再轉到分化培養基(NB+KTlmg/L+NAAO. 25mg/L+6-BAlmg/ L+潮黴素25mg/L)上光照培養，用日光燈每天照明12小時，溫度控制在25 27°C。約1 2個月，可獲得2cm左右高的幼苗。將幼苗轉到生根培養基上培養，當根長到2cm左右高時 取出，洗淨根部的培養基，移栽於大田。3. 5、轉基因水稻的檢測3. 5. 1、取一小片轉基因水稻植株新鮮葉片，抽提總DNA(見Qiagen公司所公開的資料)，以提取的DNA做模板，分別進行檢測。轉基因水稻植株中潮黴素hpt基因的PCR檢測hpt基因的PCR引物序列為上遊引物(SEQID NO. 7) :5，-TAGGAGGGCGTGGATATGTC-3，下遊引物(SEQID NO. 8) :5，-TACACAGCCATCGGTCCAGA-3，
0096]PCR程序如下0097]1.95 °C4min(預變性)0098]2.95 °C30s(變性)0099]3.53 °C30s(復性)0100]4.72 °C50s(延伸)0101]5.2 4步驟循環37次0102]6.72 °C5min(終延伸)0103]7.4 °C保存
0104]以上PCR反應完成，在瓊脂糖凝膠上電泳檢測，目的基因已轉入水稻中，見圖1。
0105]轉基因水稻植株中TTl基因的PCR檢測
0106]TTl基因的PCR引物序列為
0107]上遊引物(SEQID NO. 9) :5，-ATTTCATTTGGAGAGAACACGG-3，
0108]下遊引物(SEQID NO. 10) :5，-TCAGACTGGTGTTGGGTTGGATATTG-3，
0109]PCR程序如下0110]1.95 0C4min(預變性)0111]2.95 0C30s(變性)0112]3.53 0C30s(復性)0113]4.72 0C50s(延伸)0114]5.2 4步驟循環37次0115]6.72 0C5min(終延伸)0116]7.4 0C保存以上PCR反應完成，在瓊脂糖凝膠上電泳檢測，有目標條帶出現，表明目的基因已 轉入水稻中，見圖2。3. 5. 2、RT-PCR 檢測提取了經PCR檢測為陽性的植株和野生型植株，抽提植株的總RNA(見Qiagen公 司所公開的資料)，進行RT-PCR檢測。檢測轉基因植株是否在RNA水平上得到了表達。One 乂印 RT-PCR 的方法在RNase-free 0. 2ml PCR 管中加入(50 μ 1 體系)
0122]IOXOne Step RT-PCR buffer5μ 1
0123]MgC12(25mM)10 μ 1
0124]dNTP Mixture(IOmM)5μ 1
0125]RNase Inhibitor (40U/μ 1)1 μ 1
0126]AMV Rtase XL (5U/μ 1)1 μ 1
0127]AMV-Optimized Taq(5U/yl)1 μ 1
上遊特異引物QO μ M)1 μ 1下遊特異引物(20 μ Μ)1 μ 1Total RNA ( ^ lug)1 μ 1RNase Free ddH2024 μ 1Total50 μ 1/Sample RT-PCR的反應程序為1.50 0C30min
2.94 0C3min
3.94 0C40s
4.58 0C30s
5.72 0C40s
6.3 5步驟循環40次
7.72 0C5min
8.4 0C保存在陰性對照植株中沒有擴增出特異條帶，而在待檢測植株中擴增出與目的片段大 小一致條帶，證明在顯示條帶的植株中，轉入的TTl基因發生了轉錄，在RNA水平上得到了 表達，參見圖3。將檢測確定的轉基因植株及未檢測出的陰性對照移至溫室大棚中，使其自交結 實，以備單株收種。三、過量表達TTl水稻抗寒性實驗1、試驗材料的培養隨機選取健壯飽滿的轉基因型和野生型水稻種子，用5%甲醛溶液消毒10分鐘， 洗淨後分別浸入盛有IOOmL滅菌水的燒杯中，在下浸泡40h。將不同種類的種子分別 播於盛有3cm厚泥土的發芽盒中，每盒播50粒，每組播2盒。置於人工氣候箱中栽培，光強 為40001x，每天光照12h，溫度保持在25士 1°C。當水稻苗長至5葉1心期時，將不同組的幼 苗分為2組，一組繼續在原有條件下培養，作為對照(CK)，一組置於另一人工氣候箱中，將 溫度設置為3 士 1°C進行低溫脅迫處理Mh，再移回原培養箱恢復生長Id。然後進行生理指 標的檢測。2、秧苗冷害調查低溫處理後，以卷葉、白尖、倒伏為典型受害症狀(參見圖4)，調查經低溫處理的 每盒受害株數，計算受害率。受害率(％)=受害株數/調查總株數X100%。結果見表1。表1低溫處理對水稻的影響
權利要求
1.TTl基因在提高植物抗寒性中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於所述TTl基因具有如下核苷酸序列 (1)如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；或O)在(1)限定的核苷酸序列中經過取代、缺失或添加至少一個核苷酸衍生所得的 核苷酸序列，且與SEQ ID NO. 1的序列編碼功能相同或相似的多肽。
3.TTl基因編碼的多肽在提高植物抗寒性中的用途。
4.根據權利要求3所述的用途，其特徵在於所述TTl基因具有如下核苷酸序列 (1)如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；或O)在(1)限定的核苷酸序列中經過取代、缺失或添加至少一個核苷酸衍生所得的 核苷酸序列，且與SEQ ID NO. 1的序列編碼功能相同或相似的多肽。
5.根據權利要求1或3所述的用途，其特徵在於所述的植物為禾本科或十字花科的植物。
6.一種培育抗寒植物的方法，其特徵在於包括以下步驟(1)將TTl基因可操作地連於載體上的表達調控序列後，形成所述TTl基因的重組載體；(2)將步驟(1)中的重組載體轉入植物細胞；(3)經篩選獲得轉化細胞，然後將轉化細胞培育成轉基因抗寒植株及其後代，所述後代 包括植物種子及植物組織。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於所述TTl基因具有如下核苷酸序列 (1)如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列；或O)在(1)限定的核苷酸序列中經過取代、缺失或添加至少一個核苷酸衍生所得的 核苷酸序列，且與SEQ ID NO. 1的序列編碼功能相同或相似的多肽。
全文摘要
本發明屬於生物技術領域，具體涉及TT1基因在提高植物抗寒性中的用途。本發明要解決的技術問題是為提高植物抗寒性的轉基因技術領域提供一種新的有效選擇。本發明解決技術問題的技術方案是提供了TT1基因在提高植物抗寒性方面的用途，經實驗證明轉入了TT1基因並過表達的植物對寒冷逆境表現出了良好的抗性。本發明培育出抗寒植物的方法也簡便而有效，為本領域提供了新的有效選擇。
文檔編號A01H5/10GK102115749SQ20091031259
公開日2011年7月6日 申請日期2009年12月30日 優先權日2009年12月30日
發明者楊毅 申請人:四川貝安迪生物基因工程有限公司