一種柏子或柏子提取物及其用途

2023-06-07 02:01:01 1

一種柏子或柏子提取物及其用途
【專利摘要】本發明提供了一種柏子或柏子提取物的用途。具體地，本發明柏子或柏子提取物用於具有良好的抗疲勞效果，可用於製備抗疲勞的組合物，其中，所述的柏子提取物具有以下一個或多個特徵：(a)所述提取物的分子量分布為280-310；(b)所述提取物中不飽和脂肪酸總含量≥80wt％；和/或(c)所述提取物中來源於柏子的二萜類物質總含量≤0.5wt％。本發明柏子或柏子提取物在食品及保健品領域具有廣泛應用。
【專利說明】一種柏子或柏子提取物及其用途

【技術領域】
[0001] 本發明涉及中藥提取物領域，具體地，涉及一種從柏子中提取的高活性成分，作為 提高認知能力、改善認知功能障礙、抗疲勞藥物及功能食品的用途。

【背景技術】
[0002] 認知功能是指人腦加工、儲存和提取信息的能力，包括記憶、語言、視空間、執行、 計算和理解判斷等方面的能力 [1]。認知功能障礙是指上述一項或多項能力受損，常見於各 種類型的痴呆患者，其中最高發的是阿爾茨海默病（Alzheimer's disease，AD)和血管性痴 呆（vascular Dementia, VaDX
[0003] AD是發生於老年前期或老年期，以進行性痴呆、認知障礙為主要症狀，同時伴有精 神行為異常的神經退行性疾病。其特徵性臨床表現為嚴重的學習記憶功能下降、分析判斷 能力衰退、情緒改變、行為失常、甚至意識模糊。隨著人類社會年齡結構老齡化，老年性痴呆 症發病率日趨上升，已成為僅次於心腦血管疾病和腫瘤的第三大健康殺手。據報導，65歲以 上老年人口中，AD的患病率佔總人口的4wt% -7wt%，80歲以上的老年人可達20wt% ;至 2015年，我國老年人口將超過2億，本世紀40年代後期可能突破4億。AD發病率隨著人口 老齡化的進展呈逐年上升的趨勢，尋找治療AD的有效藥物已成為醫藥領域的研究熱點之 〇
[0004] AD的臨床表現主要為智能和認知功能障礙，屬於中醫呆病、善忘、痴呆、文痴等範 疇。中藥具有效性確切和安全低毒的特點，在以AD為代表的認知功能障礙病症的預防和治 療方面具有更大的潛力。
[0005] 柏子仁（arboruitae seed)，又稱柏實，為裸子植物柏科側柏（Platycladus orientalis(L. )Franco)的乾燥成熟種仁。主產於山東、河南、河北等地。柏子仁味甘、性 平，有養心安神、斂汗、潤腸通便之功效。柏子仁應用歷史悠久，始載於《神農本草經》，列為 上品。《神農本草經》記載"主驚悸、安五臟、益氣、除風溼搏，久服令人潤澤美色、耳目聰明、 不飢不勞、輕身延年";《本草綱目》記載：柏子仁具有"養心氣，潤腎燥，安魂定魄，益智寧神， 燒浙，澤頭髮，治疥癬"功效，用於驚悸怔忡，失眠健忘，盜汗，腸燥便秘。明代倪朱漠在《本 草匯言》中提到，"柏子仁味甘氣平……，此藥氣極蜂芬芳，則脾胃所喜；質及潤澤，則肝腎所 宜。故前古謂安養五臟、主驚悸、定心神、悅顏色、聰耳目，為延年卻痛之上劑也。"
[0006] 近年化學研究表明，柏子仁含脂肪酸、柏木醇、谷留醇和二萜類成分，其中二萜 類成分主要紅松內脂（pinusolide)、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8(17) -烯-19 酸（15, 16_bisnor-13-〇x〇-8 (17)-labdene-19-oic acid)、15, 16-雙去甲-13-氧代半 日花-8(17) ; IlE-二烯-19-酸、二輕基半日花三烯酸（12R, 13RS_dihydroxyconmunic acid)。另有α -雪松醇（a -cedrol)，柏子仁雙醇（platydiol)，5-輕基松柏酸 (5-hydroxypinusolidie acid)。酚酸性化合物包括：（+)-兒茶精[(+)-Catechin]、 (-)-表兒茶精[(-)-epicatechin]及其聚合體丙氰定 BI, B3 (Proeyanidin BI, B3)、5-輕 基-7,4-二甲氧基黃酮（5-117(11'(?7-7,4-(1;[11161:11(?7；1^13￥0116)和木質素等。
[0007] 近年藥理研究表明，柏子仁具有促智、鎮靜、潤暢通便的作用。1992年日本學者 西山信好[西山信好等，國外醫學中醫藥分冊，1992, 14(4)，53-54.]通過小鼠被動學習回 避試驗探討了柏子仁對破壞杏仁核小鼠學習障礙的作用，明暗室法試驗中表明，柏子仁乙 醇提取物250, 500mg/kg 口服給藥對對杏仁核破壞後小鼠的學習障礙無效，但在跳臺試驗 中能明顯改善、保持、恢復記憶，但對大腦皮層、海馬、丘腦下部的乙醯膽鹼酯酶活性未見 影響。日本學者楮鵬江[楮鵬江等，國外醫學中醫藥分冊，1993，15(2)，40-41.]研究柏 子仁對前腦基底核破壞小鼠被動迴避學習障礙的影響時發現，避暗法和跳臺試驗表明，柏 子仁乙醇提取物250, 500mg/kg 口服給藥後對前腦基底核破壞小鼠的被動學習障礙有改 善作用，但對運動低下無拮抗作用。Nishiyama等[Nishiyama N，et al. ,Phytotherapy Research, 1992, 6, 289-293. ]〇
[0008] 研究表明，柏子仁乙醇提取物250, 500mg/kg 口服給藥對扁桃體損傷引起的記憶 獲得障礙有改善作用，但未能改善記憶保持，對皮質、海馬和下丘腦中的膽鹼乙酸基轉移酶 的活性未見作用，對扁桃體損傷引起的顯微病理改變未見影響。
[0009] 因此，本領域迫切需要開發一種對提高認知能力、改善認知功能障礙有良好效果、 活性成分高且易獲得的提取物及其組合物。


【發明內容】

[0010] 本發明提供了的柏子提取物，具有活性劑量高、提高認知能力、改善認知功能障 礙、抗疲勞效果明顯的優點。
[0011] 本發明提供了一種柏子或柏子提取物的用途，，用於製備抗疲勞的組合物。
[0012] 在另一優選例中，所述的組合物包括藥物組合物、食品組合物和/或保健品組合 物。
[0013] 在另一優選例中，所述的柏子提取物具有以下一個或多個特徵：
[0014] (a)所述提取物的分子量分布為280-310 ;
[0015] (b)所述提取物中不飽和脂肪酸總含量彡80wt% ;和/或
[0016] (c)所述提取物中來源於柏子的二萜類物質總彡0· 5wt%。
[0017] 在另一優選例中，所述的柏子提取物還具有以下一個或多個特徵：
[0018] (d)所述的提取物中的二萜類含量小於0. 5wt%或無；
[0019] (e)所述的提取物還含有IO-Hwt%的飽和脂肪酸。
[0020] 在另一優選例中，所述提取物同時具有所述特徵（a)、（b)、（c)、（d)和（e)。
[0021] 在另一優選例中，所述的提取物還用於製備促智的組合物。
[0022] 在另一優選例中，所述的柏子提取物的含量被配製成每日施用劑量為0. 01_50mg/ kg體重；更佳地，為30-40mg/kg體重（小鼠），約為0· 3-45mg/kg體重（人），。
[0023] 在另一優選例中，所述的二萜類物質包括紅松內脂、15, 16-雙去甲-13-氧代半日 花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8 (17) ; IIE-二烯-19-酸、二羥基半 日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid);
[0024] 在另一優選例中，所述的提取物中，南洋杉酸的含量彡0. 5wt%，13_表柏酸 (13-epicupressic acid)的含量<0· 5wt%。
[0025] 在另一優選例中，其中，所述的飽和脂肪酸包括棕櫚酸、硬脂酸；
[0026] 所述的不飽和脂肪酸包括油酸、亞油酸、亞麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、 5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸、5, 11，14, 17-花生四 烯酸。
[0027] 在另一優選例中，所述的亞麻酸含量為25wt% ;
[0028] 在另一優選例中，所述的柏子提取物是用以下方法製備的：
[0029] (i)獲得成熟柏子粉碎，從而形成柏子粉；
[0030] (ii)將步驟（i)中獲得的柏子粉經提取形成柏子提取物。
[0031] 在另一優選例中，所述的提取包括超臨界萃取和石油醚提取。
[0032] 在另一優選例中，所述的組合物包括：（i )作為活性成分的柏子提取物，和（ii )藥 學上或食品上可接受的載體。
[0033] 在另一優選例中，所述的作為活性成分的柏子提取物具有以下一個或多個特徵：
[0034] (a)所述提取物的分子量分布為280-310 ;
[0035] (b)所述提取物中不飽和脂肪酸總含量彡80wt% ;
[0036] (c)所述提取物中來源於柏子的二萜類物質總含量彡0. 5wt%。
[0037] 在另一優選例中，所述的組合物的劑型為口服劑型（片劑、顆粒劑、膠囊、口服 液）。
[0038] 本發明第二方面，提供了一種抗疲勞的方法，給需要的對象施用有效劑量的柏子 或柏子提取物。
[0039] 在另一優選例中，所述的施用量為每日施用劑量為0. 01_50mg/kg體重；更佳地， 為30-40mg/kg體重（小鼠），約為0· 3-50mg/kg體重（人），。
[0040] 在另一優選例中，所述的對象是哺乳動物，更佳地包括小鼠、大鼠、人。
[0041] 在另一優選例中，所述的對象包括幼兒、兒童、青少年、老年人、易疲勞者。
[0042] 應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在 此不再一一累述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0043] 圖IA-B顯示了柏子經不同提取方法得到的活性部位以及市售魚油對東莨菪鹼致 小鼠記憶障礙均有不同程度記憶改善作用，其中，帶殼柏子的提取物BZ-I-SFC的效果優於 其他方法獲得的提取物，與其效果相當的為乙醇柏子仁提取物BZR-E，但BZR-E的劑量為 BZ-I-SFC 的 10 倍。
[0044] 圖2A顯示了柏子提取物BZ-I-SFC多個劑量下均能不同程度的縮短小鼠到達逃脫 平臺的時間，而6mg/kg表現出最佳改善作用；圖2B顯示了 BZ-I-SFC多個劑量下均能減少 小鼠進入盲端的錯誤次數，在6mg/kg時作用也最明顯。其作用強度與陽性對照石杉鹼甲相 當。
[0045] 圖3顯示了 BZ-I-SFC隨著測試濃度的增加，抗疲勞作用效果也隨之增強。其中 36mg/kg能明顯改善小鼠體力疲勞現象，有顯著性統計意義。

【具體實施方式】
[0046] 本發明人通過廣泛而深入的研究，首次發現了對帶殼柏子進行提取，所獲得的提 取物在很低的劑量下即對提高認知能力、改善認知功能障礙有良好的作用，本發明人同時 通過實驗證明，本發明提取物還能夠有效地產生抗疲勞作用，在食品及保健品領域中有著 廣泛的應用前景。在此基礎上，完成了本發明。
[0047] 術語
[0048] 如本文所用，術語"本發明柏子提取物"、"本發明柏子有效部位"、"本發明柏子活 性部位"、"BZ-1-SFC"可互換使用，均指將帶殼柏子通過提取後獲得的柏子提取物，且所述 的柏子提取物均具有不飽和脂肪酸含量> 80wt%，二萜類物質< 0. 5wt%，並在低劑量下 具有提高認知能力、改善認知功能障礙的特性。
[0049] 術語"促智"、"促智活性"可以互換使用，均指對人體或動物施用藥物後，具備提高 認知能力、改善認知功能障礙的效果。
[0050] 柏子提取物
[0051] 本發明提供的柏子提取物為一種通過將帶殼柏子經過超臨界萃取、石油醚提取等 方法獲得的高活性提取物。柏子提取物具有極高含量(大於80wt%)的不飽和脂肪酸，且 對提高認知能力、改善認知功能障礙無活性的物質等物質含量極小，其中二萜類物質含量 彡0. 5wt %。由此，本發明柏子提取物可以在極低的劑量下（0. 01-50mg/kg體重，較佳地， 2-10mg/kg體重（小鼠），0· 02-llmg/kg體重（人），更佳地，為4-6mg/kg體重（小鼠）， 0· 04-6. 6mg/kg體重（人）），對提高認知能力、改善認知功能障礙有良好作用。
[0052] 本發明柏子提取物可通過超臨界萃取、石油醚提取等方法進行提取。
[0053] 其中，超臨界萃取的方法如下：帶殼或去殼柏子仁粉碎後，置於超臨界萃取裝置的 萃取釜(設備：江蘇南通華安超臨界萃取有限公司，HA221-40-11型超臨界萃取裝置）中，在 萃取釜溫度為32°C、壓力為25MPa、CO 2流速為30-341711的條件下萃取1.5小時，萃取完畢 後提取液轉移至分離釜，在分離釜溫度為38°C、壓力為6MPa條件下分離出柏子仁SFC提取 物。
[0054] 石油醚萃取的方法如下：帶殼或去殼柏子仁粉碎後，至於3000ml的錐形瓶中，力口 等量的石油醚(沸點60-90°C )超聲提取3次，每次Ih ;提取液合併減壓蒸乾即得柏子仁石 油醚提取物。
[0055] 在本發明柏子提取物中，不飽和脂肪酸含量佔> SOwt %，所述不飽和脂肪酸包括 油酸、亞油酸、亞麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷 二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸I、5, 11，14, 17-花生四烯酸；
[0056] 本發明柏子提取物中所述的二萜類物質含量<0. 5wt%，包括紅松內脂、15, 16-雙 去甲-13-氧代半日花-8 (17)-烯-19酸、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8(17) ; IlE-二 烯-19-酸、二輕基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid);其中，代 表性的二廠類物質包括南洋杉酸、13-表柏酸（13-epicupressic acid)。
[0057] 本發明柏子提取物中，還包括10-15wt%的飽和脂肪酸，所述的飽和脂肪酸包括棕 櫚酸、硬脂酸。
[0058] 本發明柏子提取物在低劑量下（0. 01_50mg/kg，較佳地2-10mg(小鼠）， 0· 02-llmg/kg(人）；更佳地4-6mg/kg(小鼠），0· 04-6. 6mg/kg(人））具有改善記憶、促智 的作用，且還具有一定的抗疲勞效果。因此，本發明也提供了通過給需要的受試者施加有效 量的所述柏子提取物來預防、改善或治療所述疾病的方法。
[0059] 組合物
[0060] 本發明提供一種組合物，以所述組合物總重量計，它含有重量百分比為l-99wt% 的本發明提供的柏子提取物作為活性成分和藥學上或食品學上可接受的載體。
[0061] 在本發明中，各種組合物可以按本領域熟知的方法配製，可以將柏子提取物與藥 學上或食品學上可接受的載體混合配製。藥學上或食品學上可接受的載體的成分是適用於 人和/或動物而無過度不良副反應（如毒性、刺激和變態反應）的，即有合理的效益/風險 比的物質。所述的有藥學上或食品學上可接受的載體中還可以包含甘草提取物等天然提取 物、維生素和微量元素等營養強化劑及膳食纖維、糊精。
[0062] "藥學上可接受的載體"指用於治療劑給藥的載體，包括各種賦型劑和稀釋劑。該 術語指這樣一些藥劑載體：它們本身並不是必要的活性成分，且施用後沒有過分的毒性。合 適的載體是本領域普通技術人員所熟知的，可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，這 些載體中還可能存在輔助性的物質，如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、潤溼劑或 乳化劑、矯味劑、pH緩衝物質等。
[0063] 在本發明的另一優選方式中，所述的食品學上可接受的載體或賦形劑可含有：填 充劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑、泡騰劑、矯味劑、包覆材料、膳食製品、或緩釋劑。
[0064] 對於本發明所述的組合物的劑型沒有特別的限制，可以是任何適用於哺乳動物服 用的劑型；優選的，所述的劑型可選自膠囊、軟膠囊、粉劑、片劑、顆粒劑、口服液、噴霧劑、霜 劑、乳劑、水劑或膏體等。
[0065] 本發明的組合物包括藥物組合物、食品組合物、保健品組合物、食品配料組合物、 膳食補充劑組合物、天然藥物原料組合物、或化妝品功能成分組合物；也可以是保健飲料、 酒類等。只要它們含有或基本上由柏子提取物組成即可。
[0066] 本發明提到的上述特徵，或實施例提到的特徵可以任意組合。本案說明書所揭示 的所有特徵可與任何組合物形式並用，說明書中所揭示的各個特徵，可以任何可提供相同、 均等或相似目的的替代性特徵取代。因此除有特別說明，所揭示的特徵僅為均等或相似特 徵的一般性例子。
[0067] 柏子提取物BZ-I-SFC促智活性總結與成人劑量換算
[0068] 按照《藥理試驗方法學》（人民衛生出版社，第四版）中附表資料，小鼠和人的體表 面折算的等效劑量比值為387. 9。以小鼠 lmg/kg劑量為例，計算人給藥劑量=1*0. 02kg(小 鼠平均體重）*387. 9/70kg (人平均體重）=0· llmg/kg。
[0069] 在另一優選例中，根據本發明示範例數據，帶殼柏子提取物有效劑量範圍為 l-50mg/kg，折算成人的劑量為0. l-5mg/kg。然而，由於藥物在不同種屬動物代謝的差異以 及不同種屬動物分子生物學的差異可能導致藥物效應的浮動。因此在上述計算劑量下上下 各浮動10倍，折算成人的劑量應為〇. 01_50mg/kg。
[0070] 同理，在確定了應用於小鼠的最佳劑量後，通過此方法同樣能夠方便地推算的應 用於成人的最佳劑量。
[0071] 本發明的有益效果：
[0072] 1.柏子提取物活性高，施用劑量小：本發明提供的帶殼柏子提取物在低劑量 下（0· 01-50mg/kg，較佳地 2-10mg/kg(鼠），0· 02-llmg(人），更佳地 4-6mg/kg(小鼠）， 0. 04-6. 6mg/kg (人））即有提高認知能力、改善認知功能障礙的作用，活性較傳統柏子仁提 取物大幅上升（250、500mg/kg體重（小鼠）），更易於施用，從而有助於改善施用對象的服用 依從性。
[0073] 3.提取方法來源充足、經濟、方便：本發明採用對帶殼柏子的提取，取代了傳統去 殼柏子仁提取，效果優於去殼柏子仁的同時，大幅提升了原料獲得的便利性、經濟性，從而 降低了生產成本，更有利於工業生產推廣。
[0074] 實施例1 :柏子提取物的製備
[0075] I. ISFC提取：取帶殼柏子288g粉碎後至於SFC中（SFC儀器型號HA221-40-11，江 蘇南通華安超臨界萃取有限公司），萃取條件：萃取釜溫度：32°C，萃取釜溫度壓力：25MPa ; 分離釜溫度：38°C，分離釜溫度壓力：6MPa ;超臨界CO2流速；30-40L/h ;萃取時間：1. 5h。得 柏子提取物BZ-1-SFC23. 2g，得率為8. Owt %。
[0076] 1. 2石油醚提取：取帶殼柏子5. 2g粉碎後至於500ml的錐形瓶中，加入250ml石 油醚，超聲提取3次，每次lh。石油醚提取液合併，減壓蒸餾得活性部位BZR-1-PE1. 2g，得 率為 23. Iwt%。
[0077] 對比例1柏子仁提取物的製備
[0078] I. Ic SFC提取：取去殼柏子仁270g粉碎後至於SFC中（SFC儀器型號 HA221-40-11，江蘇南通華安超臨界萃取有限公司），萃取條件：萃取釜溫度：32°C，萃取釜溫 度壓力：25MPa ;分離釜溫度：38°C，分離釜溫度壓力：6MPa ;超臨界CO2流速；30-40L/h ;萃 取時間：1. 5h。得柏子仁提取物BZR-SFC23. 0g，得率為8. 5wt%。
[0079] I. 2c石油醚提取：取去殼柏子仁5g粉碎後至於500ml的錐形瓶中，加入250ml石 油醚，超聲提取3次，每次lh。石油醚提取液合併，減壓蒸餾得活性部位BZR-PE1. 2g，得率 為 24wt %。
[0080] I. 3c乙醇提取：取去殼柏子仁20. 45g按照文獻（Nishiyama N, et al. , Phytotherapy Research, 1992, 6, 289-293)提供的方法製得柏子仁提取物 BZR-E2. llg，得率為 10. 3wt%。
[0081] 實施例2 :柏子或柏子仁提取物中半日花烷型二萜南洋杉酸和13-表柏酸 (13-epicupressic acid)含量的測定
[0082] 2. L柏子仁提取物中半日花燒型二廠南洋杉酸（imbricatolic acid)和13-表柏 酸（13-epicupressic acid)的分離與純化：
[0083] 按文獻（Wang YZ. et al.，Phytochemistry, 2008, 69, 518-526.)的方法將乾燥柏 子仁（10. 2kg)碾碎後，在室溫下用95wt%工業乙醇（20LX3)提取，經過不同的柱層析手 段得化合物南洋杉酸（imbricatolic acid) 81. 8g，得率為8. 2wt% ;得化合物13-表柏酸 (13-epicupressic acid) 2. 54g。化合物南洋杉酸和 13-表柏酸（13-epicupressic acid) 的波譜數據如下：
[0084] 南洋杉酸，imbricatolic acid
[0085] 白色粉末，[a ]D(20°C )+50(cl. 5, CHC13) jH-NMlUCDCls，300MHz) : δ 〇· 60(3H，s，C H3-20)，0· 90 (3H，d，J=6. 4Hz，CH3-16)，I. 22 (3H，s，CH3-18)，3· 68 (2H，m，H-15)，4· 50 (1H，s，H -17)，4. 84 (1H，s，H-17) · 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : δ 12. 7 (q，C-20)，19. 8 (q，C-16)，19. 9 (t，C -2)，21. I (t，C-ll)，26. 0 (t，C-6)，28. 9 (q，C-18)，30. 2 (t，C-13)，36. 4 (t，C-12)，38. 0 (t，C- 3)，38. 7 (t，C-7)，39. I (t，C-l)，39. 5 (t，C-14)，40. 5 (s，C-10)，44. I (s，C-4)，56. 3 (d，C-5)， 56. 6 (d, C-9)，61. 2 (t, C-15)，106. 3 (t, C-17)，148. 2 (s, C-8)，183. 3 (s, C-19)。上述數據與文 獻報導[Su, W. C.，Fang, J. Μ·，Cheng, Y. S. Labdanes from Cryptomeria japonica. Phytoch emistry，1994, 37, 1109-1114.] -致。
[0086] 13-表柏酸（13-epicupressic acid)
[0087] 白色粉末，[a]D(2(TC )+57(c4.5，CHC13) !1H-Nmr(CdcI3JOOMHz): S〇.58(3H，s，C H3-20), I. 22 (3H, s, CH3-I8), I. 26 (3H, s, CH3-16), 4. 43 (1H, s, H-17), 4. 82 (1H, s, H-17), 5. 0 2 (1H, dd, J=IO. 7, I. 0Hz, H-15), 5. 20 (1H, dd, J=17. 3, I. 0Hz, H-15), 5. 90 (1H, dd, J=17. 3, 10 .7Hz,H-14) ; 13C-NMR (CDCl3, 75MHz) : δ 12. 7 (q, C-20), 17. 8 (t, C-I I), 19. 8 (t, C-2), 26. 0 (t ,C-6), 27. 9 (q, C-16), 28. 9 (q, C-18), 37. 9 (t, C-3), 38. 7 (t, C-7), 39. I (t, C-l), 40. 6 (s, C-10)，41. 3 (s, C-12)，44. I (s, C-4)，56. 3 (d, C-5)，56. 4 (d, C-9)，73. 8 (s, C-13)，106. 5 (t, C-I 7)，111. 7 (t，C-15)，144. 7 (d，C-14)，148. 0 (s，C-8)，183. 5 (s，C-19)。上述數據與文獻報導 [Su, ff. C. , Fang, J. Μ. , Cheng, Y. S. Labdanes from Cryptomeria japonica. Phytochemistry ，1994, 37, 1109-1114.] -致。
[0088] 2. 2.柏子提取物中南洋杉酸和13-表柏酸（13-epicupressic acid)含量測定
[0089] 柏子活性部位中半日花燒型二廠南洋杉酸和13-表柏酸（13-epicupressic acid)的含量測定採用高效液相色譜（HPLC)法，液相條件為 ：
[0090] 流動相：二氯甲烷：乙腈=30:70等梯度洗脫
[0091] 檢測器：蒸發光散射檢測器（ELSD)
[0092] 流速：lml/min
[0093] 柱色譜：Waters Acquity Column BEH RP-C18, 1. 7 μ m, 2. I X 100mm
[0094] 柱溫：40°C
[0095] 測定方法：
[0096] 供試品溶液的製備：精密稱取活性部位20. Omg，二氯甲烷溶解後轉移至100ml的 容量瓶中並定容至刻度，作為供試溶液；
[0097] 對照品溶液的製備：分別稱取半日花烷型二萜南洋杉酸和13-表柏酸 (13-epicupressic acid)各IOmg,精密稱定，加二氯甲燒製成Iml含200 μ g的溶液，即得。 [0098] 分別精密量取20μ 1對照品和供試品溶液，加入到高效液相色譜儀自動進樣器 中，測定。
[0099] 2. 3.含量測定結果如表1所示
[0100] 表1:柏子仁或柏子活性部位二萜的含量

【權利要求】
1. 一種柏子或柏子提取物的用途，其特徵在於，用於製備抗疲勞的組合物。
2. 如權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的柏子提取物具有以下一個或多個特 徵： (a) 所述提取物的分子量分布為280-310 ; (b) 所述提取物中不飽和脂肪酸總含量> 80wt% ;和/或 (c) 所述提取物中來源於柏子的二萜類物質總< 0. 5wt%。
3. 如權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的柏子提取物還具有以下一個或多個 特徵： (d) 所述的提取物中的二萜類總含量小於0. 5wt%或無； (e) 所述的提取物還含有10-14wt%的飽和脂肪酸。
4. 如權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的柏子提取物的含量被配製成每日施 用劑量為〇. 01_50mg/kg體重。
5. 如權利要求2或3所述的用途，其特徵在於，所述的二萜類物質包括紅松 內脂、15, 16-雙去甲-13-氧代半日花-8(17)-烯-19酸、15, 16-雙去甲-13-氧 代半日花-8 (17) ; 11E-二烯-19-酸、二羥基半日花三烯酸、南洋杉酸、13-表柏酸 (13-epicupressic acid)。
6. 如權利要求3所述的用途，其特徵在於，其中，所述的飽和脂肪酸包括棕櫚酸、硬脂 酸； 所述的不飽和脂肪酸包括油酸、亞油酸、亞麻酸、9-二十碳烯酸、11-二十碳烯酸、 5, 11-二十烷二烯酸、12, 17-二十烷二烯酸、8, 11，14-二十烷三烯酸、5, 11，14, 17-花生四 烯酸。
7. 如權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的柏子提取物是用以下方法製備的： (i) 獲得成熟柏子粉碎，從而形成柏子粉； (ii) 將步驟（i)中獲得的柏子粉經提取形成柏子提取物。
8. 如權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述的組合物包括：（i )作為活性成分的柏 子提取物，和（ii )藥學上或食品上可接受的載體。
9. 一種抗疲勞的方法，其特徵在於，給需要的對象施用有效劑量的柏子或柏子提取物。
10. 如權利要求9所述的方法，其特徵在於，所述的施用量為每日施用劑量為l-50mg/ kg體重。
【文檔編號】A23L1/29GK104366455SQ201310349888
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2013年8月12日 優先權日:2013年8月12日
【發明者】葉陽, 唐希燦, 章海燕, 姚勝, 王維, 季萍 申請人:中國科學院上海藥物研究所