一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑及其製備方法和應用的製作方法
2023-06-04 18:23:06
一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑及其製備方法和應用。所述玫煙色棒束孢可溼性粉劑包括如下質量百分比的組分：玫煙色棒束孢分生孢子粉5%～20%、潤溼劑3%～5%、分散劑3%～5%、紫外保護劑0.1%～0.5%，餘量為載體。所述玫煙色棒束孢為玫煙色棒束孢菌株SCAU-IFCF02，於2013年11月1日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO：M2013526。本發明所述玫煙色棒束孢可溼性粉劑主要用於防治十字花科蔬菜害蟲，對小菜蛾等害蟲有很好的防治效果。具有殺蟲活性高、效果穩定、持效期長、環境影響小、使用方便的優點。
【專利說明】一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑及其製備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及無公害農藥製劑領域。更具體地，涉及一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑及其製備方法和應用。
【背景技術】
[0002]昆蟲病原真菌是殺蟲微生物的重要組成部分，約佔昆蟲病原微生物種類的60%以上。微生物農藥的大量開發利用可有效降低和消除目前化學農藥普遍存在的殘留、毒性和抗藥性等諸多負面作用。玫煙色棒束孢(/saria /i/fflosoriosea)是一種重要的可致害蟲死亡的昆蟲病原真菌，廣泛分布於熱帶、亞熱帶和溫帶地區，寄主範圍廣，已記載的有25個不同科的昆蟲，包括同翅目、雙翅目、鱗翅目、半翅目、鞘翅目和膜翅目等多種蔬菜、果樹及茶樹害蟲，特別是小菜蛾、麥雙尾蚜和煙粉蝨等一些重要農業害蟲，是生物防治中極具開發應用潛力的種類。玫煙色棒束孢的致病力強，對人畜作物安全，對環境友好，不易產生抗藥性，是研究和應用最廣的一類微生物殺蟲劑之一。
[0003]用真菌微生物農藥防治植物病蟲害是無公害農產品可持續生產中的重要手段之一，具有廣闊的應用前景。然而真菌製劑化是其微生物農藥應用的先決條件，自20世紀60年代以來，國外已有10種玫煙色棒束孢製劑產品被研究出來並獲得註冊登記，近幾年間問世的商品製劑有分生孢子製劑Biocon (荷蘭)、AgoBiocontrol Bassiana 50 (哥倫比亞)、Pae-sin (墨西哥)、Bemisin (委內瑞拉)，芽生孢子製劑PFR-97以及芽生孢子與菌絲體的混合製劑PreFeRal。雖然這些現有的玫煙色棒束孢製劑對害蟲取得了較好的防治效果，但是，同其他生防真菌一樣，這些製劑仍然存在殺蟲速度較慢這一缺點，嚴重製約了其在田間的應用。
[0004]正因為玫煙色棒束孢的寄主範圍廣，流行性強，以及對人畜和環境安全等特點，長期以來被研究工作者作為防治害蟲的主`要手段，但是該菌在使用過程中存在侵染速度慢、防治效果受環境條件影響大、附著力不好，防治效果很不穩定等缺點。
【發明內容】
[0005]本發明要解決的技術問題是克服現有玫煙色棒束孢農藥製劑劑型存在的問題和不足，提供了一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑。
[0006]本發明另一目的是提供上述玫煙色棒束孢可溼性粉劑的製備方法。
[0007]本發明再一目的是提供上述玫煙色棒束孢可溼性粉劑的應用。
[0008]本發明上述目的通過以下技術方案予以實現:
本發明提供了一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑，包括如下質量百分比的組分:玫煙色棒束孢分生孢子粉5%~20%、潤溼劑3%~5%、分散劑3%~5%、紫外保護劑0.1%~0.5%，餘量為載體。
[0009]優選地，所述玫煙色棒束孢可溼性粉劑，包括如下質量百分比的組分:玫煙色棒束孢分生孢子粉8%~15%、潤溼劑3.5%~4.5%、分散劑3.5%~4.5%、紫外保護劑0.2%~0.4%，餘量為載體。
[0010]更優選地，所述玫煙色棒束孢可溼性粉劑，包括如下質量百分比的組分:玫煙色棒束孢分生孢子粉10%、潤溼劑3%、分散劑3%、紫外保護劑0.1%，餘量為載體。
[0011]本發明所述的玫煙色棒束孢為玫煙色棒束孢(J1Saria fumosorosea (Wize) Brown
&Smith)菌株SCAU-1FCF02，最初分離自家白蟻。該菌株於2013年11月I日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2013526，保藏地址為中國武漢市武漢大學。
[0012]優選地，本發明所述的玫煙色棒束孢分生孢子粉的孢子含量為124億/g。
[0013]優選地，所述的潤溼劑為辛烷基苯酚聚氧乙烯醚-10 (0P-10)或脂肪醇聚氧乙烯醚(AE0-9)；
所述的分散劑為亞甲基二萘磺酸鈉(分散劑ΝΝ0)；
所述的紫外保護劑為抗壞血酸或螢光素鈉；
所述的載體為滑石粉或硅藻土。
[0014]更優選地，所述的潤溼劑為辛烷基苯酚聚氧乙烯醚-10 ；
所述的分散劑為亞甲基二萘磺酸鈉(分散劑ΝΝ0)；
所述的紫外保護劑為抗壞血酸；
所述的載體為滑石粉。
[0015]本發明還提供了所述玫`煙色棒束孢可溼性粉劑在製備防治同翅目、雙翅目、鱗翅目、半翅目、鞘翅目或膜翅目害蟲藥劑方面的應用。
[0016]優選地，所述害蟲為十字花科蔬菜害蟲。
[0017]更優選地，所述害蟲為小菜蛾，紅火蟻或煙粉蝨。
[0018]本發明上述玫煙色棒束孢分生孢子粉的製備方法如下:
51.一級固體培養，將玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02塗布於SDAY固體培養基培養；
52.二級液體振蕩培養，用含有0.03% Tween-80的無菌水洗下上述固體培養基上的孢子，過濾製成I X IO7個孢子/mL的懸浮液，將懸浮液接種於薩氏培養液振蕩培養；
53.三級產孢培養。
[0019]更具體地，所述製備方法包括以下操作:
51.一級固體培養，將玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02塗布於SDAY固體培養基(SDAY培養基為最適培養基)，於24°C進行培養，最佳培養時間為15天；
52.二級液體振蕩培養，用含有0.03% Tween-80的無菌水洗下上述固體培養基上的孢子，再用滅菌紗布過濾，製成I X IO7個孢子/mL的懸浮液，IOOuL的上述懸浮液接種於200mL的薩氏培養液(簡稱SDB，為最適接種液)，24°C、170r/min振蕩培養72小時；
53.三級產孢培養，低值陳米(普通的大米，購於華南農業大學農貿市場)加等質量蒸餾水，121 °C溼熱滅菌30min後冷卻備用，將S2得到的含有大量菌絲的菌液接入經蒸汽滅菌的大米上，菌液與低值陳米充分混合後平鋪於墊有紗布的託盤中，並用保鮮膜覆蓋，24°C黑暗培養6天。待培養基表面長滿菌絲時揭去保鮮膜繼續培養4天，使菌絲大量產孢，收穫孢子粉，真空冷凍乾燥24小時，乾燥後的孢子粉貯存於無菌容器中，4°C保存備用。獲得的孢子粉孢子含量為124億/g，活孢率為97.8%，含水量為2.56%，外觀為淡玫煙色粉末。
[0020]其中，步驟SI所述SDAY固體培養基配製方法如下:
葡萄糖40g/L、蛋白腖10g/L、酵母浸膏20g/L、瓊脂15~20g/L、H2O 1L，攪拌混勻，然後分裝，滅菌，備用。
[0021 ] S2所述薩氏培養液配製方法如下:
葡萄糖40g/L、蛋白腖10g/L、酵母浸膏20g/L、H2OlL,攪拌混勻,然後分裝,滅菌,備用。
[0022]在微生物活體農藥開發研究中，其配套製劑的研究是微生物活體農藥實際開發和推廣應用的重要基礎。助劑對農藥製劑具有重要影響，其好壞直接影響到農藥藥效，尤其在真菌孢子製劑中對助劑具有更高的要求，除了要求優良的理化性能外，還必須不能影響真菌孢子的萌發，否則將嚴重影響製劑的生防效果及貯存穩定性。合適的助劑不僅可以延長真菌製劑產品貨架期，也可以降低真菌製劑對外界環境的依賴，提高對靶標害蟲的田間防效。因此，篩選與真菌具有優良生物學相容性的助劑對真菌製劑的研製相當重要。害蟲親脂性表皮和兌水使用的藥劑之間存在著很高的界面張力，讓藥劑很難與害蟲和植物表面親和。不合理的製劑，不僅造成部分菌體死亡或孢子失活，而且會將大大降低其效果發揮，從而影響持效性。製備穩定、效果好的新劑型是真菌殺蟲劑製備的關鍵。可溼性粉劑具有成本較低，市場競爭力強，應用範圍廣等優點，可溼性粉劑的研製是新型微生物農藥產業化開發的不可或缺的環節。
[0023]本專利發明人分離得到的玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02，對小菜蛾具有非常低的致死濃度和最快的致死速度，克服了普通真菌微生物農藥殺蟲速度慢這一制約因素。因此，本發明以玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的常見侵染體分生孢子為活性成分，製備成玫煙色棒束孢可溼性粉劑，能夠為玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的產業化奠定基礎，為該菌株的田間應用提供理論指導，具有良好的應用前景。
[0024]本發明具有以下有益效果:
本發明製備方法獲得了一種性能穩定的真菌微生物殺蟲製劑，得到的玫煙色棒束孢可溼性粉劑產品性能指標優良:玫煙色棒束孢孢子萌發率> 90% ;潤溼性〈lmin ;質量懸浮率為75.28% ;孢子的懸浮率為95.12%，水分含量為2.88% ;細度(過325目標準篩)≥98% ；pH值為6.20 ;所使用的助劑與玫煙色棒束孢具有很好的生物相容性，對玫煙色棒束孢分生孢子的萌發沒有影響或影響極小。
[0025]本發明玫煙色棒束孢可溼性粉劑對同翅目、雙翅目、鱗翅目、半翅目、鞘翅目或膜翅目害蟲，尤其是十字花科蔬菜害蟲具有非常好的防治效果，克服了微生物農藥速效性差、效果不穩定以及阿維菌素的抗藥性、農藥殘留嚴重等缺點，具有使用方便、速效、高活性、效果穩定、持效期長，且控制能力強、環境影響小、低毒、低殘留等優點，符合當前生物農藥研究的趨勢，是一種理想的替代高殘留農藥的新型生物農藥，對於我國開發無公害蔬菜，維護生態環境，實現可持續農業具有重要的意義，具有很好的推廣應用價值。
【具體實施方式】
[0026]以下結合具體實施例來進一步說明本發明，但實施例並不對本發明做任何形式的限定。除非特別說明，本發明採用的試劑、方法和設備為本【技術領域】常規試劑、方法和設備。
[0027]以下實施例中涉及的玫煙色棒束孢具體為玫煙色棒束孢SCAU-1FCF02菌株。以下實施例中所使用的玫煙色棒束孢分生孢子粉為玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02的分生孢子粉，孢子含量124億/克。
[0028]除特別說明以外，本發明實施例中所用百分比均為質量百分比(w/w)。[0029]實施例1玫煙色棒束孢分生孢子粉的製備
本發明實施例所用玫煙色棒束孢為玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02，該菌株於2013年11月I日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2013526。
[0030]本發明所述玫煙色棒束孢分生孢子粉的製備步驟如下:
51.一級固體培養，取50uL玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02原始菌液塗布於SDAY固體培養基上(SDAY培養基為最適培養基)，於24°C進行培養，最佳培養時間為15天；
52.二級液體振蕩培養，用含有0.03% Tween-80的無菌水洗下SDAY固體培養基上的孢子，再用紗布過濾，製成I X IO7個孢子/mL的孢子懸浮液，IOOuL的上述孢子懸浮液接種於200mL的薩氏培養液(簡稱SDB，為最適接種液)，24°C、170r/min振蕩培養72小時；
53.三級產孢培養，低值陳米(普通的大米，購於華南農業大學農貿市場)加等質量蒸餾水，121 °C溼熱滅菌30min後冷卻備用，將S2得到的含有大量菌絲的菌液接入滅菌的大米上，菌液與低值陳米充分混合後平鋪於墊有紗布的託盤中，並用保鮮膜覆蓋，24°C黑暗培養6天。待培養基表面長滿菌絲時揭去保鮮膜繼續培養4天，使菌絲大量產孢，收穫孢子粉，真空冷凍乾燥24小時，乾燥後的孢子粉貯存於無菌容器中，4°C保存備用。
[0031]獲得的孢子粉孢子含量為124億/g，活孢率為97.8%，含水量為2.56%，外觀為淡玫煙色粉末。
[0032]步驟SI所述SDAY固體培養基配製方法如下:
葡萄糖40g/L、蛋白腖10g/L、酵母浸膏20g/L、瓊脂15~20g/L、H2O 1L，攪拌混勻，然後分裝，滅菌，備用。
`[0033]步驟S2所述薩氏培養液配製方法如下:
葡萄糖40g/L、蛋白腖10g/L、酵母浸膏20g/L、H2OlL,攪拌混勻,然後分裝,滅菌,備用。
[0034]以下實施例2~7中孢子萌發率測定方法如下:將孢子懸浮液接種到真菌萌發液(葡萄糖20g/L、蛋白腖5g/L、H20 1L)中，24°C，170 r/min，震蕩培養18h後鏡檢統計活孢率。潤溼時間按照GB/T5451-2001標準方法測定。懸浮率按GB/T 14825-2006標準方法測定。pH按GB/T1600-93標準方法測定。細度通過雷射粒徑分布儀測定。數據統計分析:所有實驗數據用DPS數據處理系統進行分析，計算均值及標準誤，均值差異顯著性通過Duncan新復極差法進行多重分析比較。
[0035]實施例2玫煙色棒束孢可溼性粉劑的潤溼劑優選實驗 1、試驗材料
(O實施例1製備的分生孢子粉。
[0036](2)本實施例不能將本發明涉及的潤溼劑一一在此贅述，選擇以下幾種實驗過程中總結出的比較典型的潤溼劑進行說明=SDBS(十二烷基苯磺酸鈉)、SDS(十二烷基硫酸鈉)、0P-10 (辛烷基苯酹聚氧乙烯醚-10)、AE0-9 (脂肪醇聚氧乙烯醚)、滲透劑T (Penetratingagent T )和滲透劑JFC。
[0037]2、實驗方法
(I)潤溼力測定:將各潤溼劑按1%、3%和5%的比例、玫煙色棒束孢分生孢子粉10%的比例加入滑石粉中，混合均勻，製成潤溼劑含量不同但孢子含量相同的樣品。潤溼時間按照GB/T 5451-2001標準方法測定，即準確稱取樣品5 g，從與燒杯口齊平的位置一次均勻倒進盛有IOOmL水的250mL燒杯液面上，不擾動液面，同時立即用秒表記時，直至樣品全部潤溼為止，記下潤溼時間，每個處理重複5次，以不加潤溼劑的樣品作為對照。
[0038](2)生物相容性測定:將上述各樣品加入真菌萌發液(葡萄糖20g/L、蛋白腖5g/L、H2O 1L)中，使其終濃度為1父106個孢子/11^，241:，170 r/min振蕩培養18小時，取樣用血球計數板計算孢子萌發率。每濃度重複5次，以不加潤溼劑的樣品作為對照。
[0039]3、結果
(I)潤溼力比較:潤溼劑的潤溼力因種類和濃度的不同而異。方差分析表明，潤溼力的的極顯著差異存在於不同潤溼劑之間(F=392.0070,P < 0.01)和同種潤溼劑不同濃度之間(F=1609.9990，P < 0.01)。各潤溼劑在不同濃度下的潤溼時間如表1所示，除十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)和滲透劑T (Penetrating agent T)在1%濃度與對照無顯著差異之外,其餘潤溼劑各濃度下潤溼時間都顯著低於對照。在1%濃度下，各潤溼劑的潤溼時間都大於200S，即使ΑΕ0-9也達286.6 S。在3%濃度下，不同潤溼劑的潤溼性能表現明顯差異，0Ρ-10潤溼時間僅為21.36 s，其次是AE0-9的31.8 S。當濃度達到5%，仍是0Ρ-10的潤溼時間最短(8.2 s)，ΑΕ0-9 次之(14.6 S)。
[0040]表1不同潤溼劑在不同濃度下玫煙色棒束孢孢子可溼性粉劑潤溼時間比較
【權利要求】
1.一種玫煙色棒束孢可溼性粉劑，其特徵在於，包括如下質量百分比的組分:玫煙色棒束孢分生孢子粉5%~20%、潤溼劑3%~5%、分散劑3%~5%、紫外保護劑0.1%~0.5%，餘量為載體。
2.根據權利要求1所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑，其特徵在於，包括如下質量百分比的組分:玫煙色棒束孢分生孢子粉8%~15%、潤溼劑3.5%~4.5%、分散劑3.5%~4.5%、紫外保護劑0.2%~0.4%，餘量為載體。
3.根據權利要求1所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑，其特徵在於，包括如下質量百分比的組分:玫煙色棒束孢分生孢子粉10%、潤溼劑3%、分散劑3%、紫外保護劑0.1%，餘量為載體。
4.根據權利要求1、2或3所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑，其特徵在於，所述的玫煙色棒束孢為玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02，於2013年11月I日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO:M 2013526。
5.根據權利要求1所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑，其特徵在於，所述玫煙色棒束孢分生孢子粉的孢子含量為124億/g。
6.根據權利要求1所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑，其特徵在於，所述的潤溼劑為辛烷基苯酚聚氧乙烯醚-10或脂肪醇聚氧乙烯醚； 所述的分散劑為亞甲基二萘磺酸鈉； 所述的紫外保護劑為抗壞血酸或螢光素鈉； 所述的載體為滑石粉或硅藻土。
7.權利要求1、2、3、5或6任一所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑在製備防治同翅目、雙翅目、鱗翅目、半翅目、鞘翅 目或膜翅目害蟲藥劑方面的應用。
8.根據權利要求7所述應用，其特徵在於，所述害蟲為十字花科蔬菜害蟲，尤其是小菜蛾，紅火蟻或煙粉蝨。
9.權利要求1、2、3、5或6任一所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟: 51.一級固體培養，將玫煙色棒束孢菌株SCAU-1FCF02塗布於SDAY固體培養基培養； 52.二級液體振蕩培養，用含有0.03% Tween-80的無菌水洗下上述固體培養基上的孢子，過濾製成I X IO7個孢子/mL的懸浮液，將懸浮液接種於薩氏培養液振蕩培養； 53.三級產孢培養。
10.權利要求4所述的玫煙色棒束孢可溼性粉劑在製備防治同翅目、雙翅目、鱗翅目、半翅目、鞘翅目或膜翅目害蟲藥劑方面的應用。
【文檔編號】A01N63/04GK103749441SQ201310721138
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年12月24日 優先權日:2013年12月24日
【發明者】何餘容, 念曉歌, 呂利華, 謝梅瓊, 張偉 申請人:華南農業大學