毛囊重建系統及其載體動物的製作方法
2023-06-04 09:00:31
專利名稱：毛囊重建系統及其載體動物的製作方法
技術領域：
本發明涉及承載毛囊重建系統的實驗動物、製備該系統的細胞系以及該系統的應用。
背景技術：
可使針對特定目的的動物反應穩定再現的多種多樣的嵌合動物或轉基因動物主要是作為特定疾病的模型、或者為了闡明特定疾病的病因而開發的。例如為了測定毛髮的重建，開發了一起移植了毛芽(作為特殊的角質形成細胞簇存在於新生幼小鼠皮膚中的毛囊前身細胞)和毛髮誘生性毛乳頭細胞(來自大鼠的鬚毛)的裸鼠(Lichti等，J.InvestDermatol 101124-129，1993)。
在移植了來自新生幼小鼠毛芽的培養角質形成細胞和毛乳頭細胞的小鼠中，通過對其移植區域的組織學分析，檢測出完全組織化了的上皮以及毛囊的重建(Kamimura等，J.Invest Dermatol 109534-540，1997)。顯示所述重建毛囊可用於對體內誘生毛髮可信性的功能性測定。
另一方面，與誘生毛髮可以相提並論的有毛色。多數情況下，毛色被視為由黑素導致，該黑素由存在於毛母質附近的黑素細胞產生、再轉運到形成毛的細胞中。變成白髮的主要原因可能是上述黑素細胞不再產生黑素，或即使產生黑素也只是極少量，或者黑素細胞減少甚至消失。但是，考慮到毛髮周期，經過過渡期(毛生長停止，毛囊縮短以及形成杵狀毛)和休止期，毛囊中劇減或消失的黑素細胞在下一個生長期如何補充並恢復毛色(來自哪裡)等問題尚未明確。
因此，提供評價恢復毛色的手段，換言之，提供對某種特定的手段能否發揮防止白髮或抗白髮作用的體內評價系統，這是有價值的。本發明的目的就在於提供所述評價系統。本說明書中所述「抗白髮性」或「抗白髮作用」是可對例如以選自促進黑素細胞生長、促進遊走能力、促進分化能力、增進生存能力、黑素產生能力等中的一種以上活性來評價的白髮化進行抑制的特性，是通過毛色顯示這些活性的性質。
發明的公開本發明人為了實現上述目的進行了研究，證實上述毛囊得到重建，並發現所述重建的毛囊加入同種或不同種任意的外源黑素細胞都可重建，且這樣重建的毛囊的黑素細胞可保持活性狀態。
從而，本發明提供用於重建毛囊的系統，所述毛囊由毛乳頭細胞和表皮細胞、以及相對於這些細胞的外源黑素細胞組合構成。
本發明的一個實施形式可提供將上述系統移植到受體動物，使其承載上述重建毛囊的嵌合動物。
本發明的另一個實施形式還提供某種特定手段活化黑素細胞的能力進行評價的方法，其特徵在於以上述嵌合動物為受試動物，將該受試動物用某種特定手段處理，監測這樣處理過的受試動物重建毛囊中黑素細胞的活性，將相對於未經處理的對象的該活性變化程度與該手段活化黑素細胞的能力之間建立相關關係。
附圖簡述
圖1是顯示例II-2中製備的嵌合小鼠的背部狀態的照片，以該照片作為附圖。圖中的數字分別表示試驗編號。
圖2表示在例III的幾種因子作用下，本發明的嵌合小鼠的再生毛中黑素含量變化的圖表。
實施發明的最佳形式本說明書中，「毛乳頭細胞(真皮乳頭dermal papillae)」(以下可稱為DP)只要遵循本發明的目的，可作為表示包含毛囊最下部的毛乳頭細胞及其周圍的細胞和組織的廣泛概念的細胞使用。這樣的組織有含有毛乳頭細胞的真皮。以來自小鼠的細胞為例，將多能聚糖啟動子的下遊連接適當的報導基因(例如LacZ基因、綠色螢光蛋白(GFP)的結構基因)構成表達載體，導入小鼠，生成轉基因小鼠(Ver-LacZ)，該轉基因小鼠生出的新生幼小鼠(在出生後4天以內使用)中，以報導基因的表達為標誌可獲得上述細胞。另外按照常規方法從皮膚中獲得的真皮通常含有毛乳頭細胞，因此含有毛乳頭細胞的真皮可直接作為本發明的毛乳頭細胞使用。但並不局限於此。
而「表皮細胞」是構成皮膚的表皮或上皮的大部分的細胞，由鄰接真皮的一層基底細胞產生。以小鼠為例，所述表皮細胞可優選使用來自新生幼鼠(或胎鼠)的表皮細胞，也可以是角質形成細胞形式的細胞培養物。所述細胞可以按照公知的方法由所需供體動物的皮膚製備。
上述毛乳頭細胞或含毛乳頭細胞的真皮細胞和表皮細胞只要可移植到受體動物上即可，無關供體動物的種類，均可使用，但優選來自與受體動物同種的動物。受體動物為小鼠時，上述兩種細胞可以均來自小鼠，也可來自不相同的小鼠系，對此並無特別限定。因此，毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞可以由容易確認的上述任意的轉基因小鼠(Ver-LacZ系統)中獲得，而表皮細胞可使用從例如選自具白化病(具有酪氨酸酶遺傳性缺陷)性質的ICR系和黑素細胞缺損系(例如Wsh/Wsh小鼠)的小鼠中獲得的細胞。根據本發明，由於使用來自所述具白化或黑素細胞缺損性的動物的表皮細胞，可更容易地監測後述的外源黑素細胞的動向，因而優選。另外，上述轉基因小鼠也可以是來自選自ICR系和黑素細胞缺損系的小鼠。
本說明書的「外源黑素細胞」中的「外源」是指來源與毛乳頭細胞或表皮細胞的來源不同。因此，黑素細胞不僅包含來自與毛乳頭細胞或表皮細胞的來源不同的不同種動物的細胞，還包含即使是同種同系，但來自與採集毛乳頭細胞或表皮細胞的個體不同的個體的細胞。這意味著，即使毛乳頭細胞或表皮細胞製備物中混有原有的黑素細胞，在該黑素細胞以外追加的黑素細胞必須包含在目標系中。
但是，毛乳頭細胞或表皮細胞來自小鼠時，黑素細胞優選小鼠以外的動物，例如來自人，但並不局限於此。使用上述優選的組合，則可以在重建毛囊中無關黑素細胞的分化狀態而追蹤黑素細胞的分布(例如使用抗人黑素細胞抗體或人的特異性抗體或人的特異性基因序列或人黑素細胞的特異性基因序列)。本發明的特徵在於在由毛乳頭細胞(小鼠)、表皮細胞(小鼠)和黑素細胞(人)構成的所謂嵌合重建毛囊中，黑素細胞可保持其活性(例如黑素產生活性)。另外，本發明還具備的特徵是在後述的評價方法中，可對可作用於人黑素細胞的手段進行研究。
本發明中可使用的黑素細胞只要是遵循本發明的目的，具有黑色素產生能力即可，可以是來自任意種的動物，但如上所述，為了發揮上述特徵，優選來自人的黑素細胞。黑素細胞可以按照公知的方法從適當的組織例如表皮、包皮等中製備。還可以使用市售的商品細胞。例如來自人的培養黑素細胞可以從Cascade公司或kurabo公司購入NHEM細胞。
如上所述，上述毛乳頭細胞和表皮細胞優選來自與受體動物同種的動物，可達到本發明目的的所述動物具體有小鼠、大鼠。
本發明的「用於重建毛囊的系統」由上述毛乳頭細胞和表皮細胞以及外源黑素細胞組合構成。所述「組合構成的……系統」不僅指含有全套上述各細胞的情況，也包含以今後成套使用為目的、各細胞分別保存的情況，例如分別裝入不同容器的形式。因此只要是為了重建上述系統的目的而使用，均在本發明的範圍內。另外，「重建毛囊」是指在受體動物中，可作為支持生毛或育毛的器官發揮作用的重建毛囊(或嵌合毛囊)。這樣的器官包含毛乳頭細胞、毛母細胞、毛囊上皮類細胞·組織(例如根鞘)、脂腺、包被毛囊的結締組織等。
本發明可提供將上述系統移植到適當的受體動物時承載重建毛囊的嵌合動物。由於所述嵌合動物的毛囊內具有活性的(優選來自不同種動物)的黑素細胞，因此可用於對影響黑素細胞的機能或黑素細胞的活性的手段(包括藥物和環境等)進行評價。受體動物的來源並不局限於移植到該動物的系統中所含各細胞的來源，優選免疫系統受到抑制的動物。另外，只要是可用作實驗動物的種，並遵循本發明的目的，可以是任何動物，優選小鼠、大鼠等。上述動物中，以小鼠為例，免疫系統受到抑制的動物有如裸鼠那樣具有胸腺缺損特徵的小鼠。如果考慮本發明的目的，特別優選的受體動物有市售的裸鼠(例如Balb-c nu/nu系)、嚴重聯合免疫缺陷小鼠(スキッドマウス)(例如Balb/c-SCID)、裸大鼠(例如F344/N Jcl-rnu)。由於使用這樣的受體動物，再使用來自具有白化病性質的小鼠(例如ICR系)或黑素細胞缺損小鼠(例如Wsh/Wsh)的表皮細胞而得到的重建毛囊，容易跟蹤該毛囊中包含的黑素細胞的活性，因此特別優選。
根據本發明，即使上述黑素細胞來自人，通過使用上述特別優選的受體動物、表皮細胞，也可以使含有黑色素的毛從重建毛囊中誘生出來並發育。另外在毛囊的周圍區域也可觀察到黑色素的產生。進一步通過立體顯微鏡觀察移植後第6周的毛，觀察到其間毛色並不由例如灰色變為白色，產生黑素的黑素細胞長時間地存在於重建毛囊。移植時，來自人的黑素細胞的混合量越多，則通常可見毛色越深，由此可認為再生的毛色依賴於毛乳頭細胞周圍來自人的黑素細胞產生黑素的量。
所述將本發明的用於重建毛囊的系統移植到受體動物的方法可以採用公知的移植方法。例如將該系統移植到裸鼠的背部時，相對於其背部直徑約1cm的圓，可使用約50萬-1000萬個毛乳頭細胞，優選約100萬-約400萬個；使用約100萬-4000萬個小鼠表皮細胞，優選約1000萬-約2000萬個；使用約50萬-1000萬個人培養黑素細胞(深色)，優選約100萬-500萬個。
承載上述重建毛囊的嵌合動物可長期地從重建毛囊誘生含有黑素的毛，並使其發育，因此可視為與毛的生長和使毛色變深有關的細胞或組織或器官例如黑素細胞、毛乳頭、毛母細胞等正常發揮功能。因此本發明的嵌合動物可用於1)篩選通過活化黑素起到使毛色變深作用的藥物；2)篩選通過活化毛乳頭起到促進毛的生長，使毛整體顏色變深作用的藥物；3)篩選通過刺激毛母細胞起到促進毛的生長、使毛整體顏色變深作用的藥物；4)篩選通過刺激毛乳頭起到活化毛囊內黑素細胞、使毛色變深作用的藥物；5)篩選通過刺激毛母細胞起到活化毛囊內的黑素細胞、使毛色變深作用的藥物；6)篩選通過上述作用中的任一項或全體的組合起到使毛色變深作用的藥物以及具有上述組合作用的藥物等。本發明的活化黑素細胞的藥物或化學物質的範圍中包含下述的藥物和物質所述藥物具有通過刺激並活化黑素細胞的生長、分化、增殖、存活、運動能力中的任意一項或任意活性中幾項或全部使毛色變深的作用，所述藥物或化學物質通過毛色顯示其活性。
涉及上述使用形式的發明的一個形式有包含下述步驟的黑素細胞活化能力的評價方法(A)以上述嵌合動物作為受試動物的步驟；(B)將該受試動物以某種特定的手段處理，監測這樣處理的受試動物的重建毛囊中黑素細胞的活性的步驟；(C)將相對於未處理對象(例如未進行步驟(B)處理的受試動物重建毛囊中黑素細胞的活性)的步驟(B)的活性變化程度與通過該手段獲得的黑素細胞的活化能力建立相關關係的步驟。
在上述評價方法中，可以由重建毛囊生出的毛的黑色素的多少評價黑素細胞的活化能力。另外，也可以通過生毛和毛的生長程度，評價步驟(B)的手段是如何影響毛乳頭、毛母細胞其中之一或兩者的。所述手段有受試動物所處環境例如應激環境、創造的與此相對的鬆弛環境等、以及塗布於受試動物的重建毛囊系統或皮下注射的藥物、或預先對黑素細胞進行處理的藥物、或經口給予的藥物。可以在製備承載重建毛囊的嵌合動物時，將藥物加入用於重建上述毛囊的系統中。
在使用來自人的黑素細胞建立重建毛囊時，可以使用公知的測試技術，對黑素生物合成途徑中任意的酶或編碼這些酶的DNA、mRNA等進行檢測，從而對上述黑素細胞活性進行監測。也可以在拔去或剪去嵌合動物的毛後，測定新生出或生長起來的毛、或因毛髮周期重複而新產生的毛中的黑素含量。
以下例舉具體例子更具體地說明本發明，但這些說明的目的在於便於理解本發明，並不限定本發明的範圍。
I.各種細胞的製備例例1來自小鼠的毛乳頭細胞(1-1)將多能聚糖啟動子下遊連接適當的標誌蛋白(例如LacZ)的結構基因構成的表達載體，導入小鼠生成轉基因小鼠，從該小鼠生產的新生幼鼠(在出生後4天內使用)中篩選LacZ陽性個體。
(1-2)用乙醇和適當的洗滌液(例如磷酸緩衝生理鹽水，稱為PBS)洗滌各個體後，將背部皮膚剝離，在0.25％胰蛋白酶/PBS中、在4℃下靜置過夜。
(1-3)第二天，用鑷子等將表皮與真皮分離，用0.35％膠原酶/DMEM(Dulbecco改良的Eagle’s基本培養基，以下稱為DMEM。)等在37℃下對真皮處理約1小時。
(1-4)小心地對(1-3)進行懸浮操作，之後將其通過70μm孔徑的細胞篩(セルストレ-ナ-)，然後通過離心儀收集細胞。
(1-5)使用適當的細胞分選儀，從收集的細胞中只回收LacZ基因表達的細胞，在適當的培養液(例如DMEM中加入10％胎牛血清(稱為FBS))培養，或在通常的細胞冷凍溶液中冷凍保存，直至使用前一天。
(1-6)將細胞置於適當的培養條件(例如在DMEM+10％中、在5％CO2存在下、在37℃下等)，直至使用前一天，第二天手術之前用胰蛋白酶等製備。
例2來自小鼠的表皮細胞(2-1)手術前一天，按照(1-1)、(1-2)同樣的方法用胰蛋白酶處理來自具有白化病性質的小鼠(例如ICR系)新生幼鼠的皮膚。
(2-2)用鑷子等只將表皮部分剝離，切碎後在適當的培養液中(例如角質形成細胞用培養液，以下稱為KGM。)、在4℃下懸浮處理約1小時。
(2-3)將通過70μm孔徑細胞篩的(2-2)裝入離心儀，回收表皮細胞。
(2-4)對每隻受體動物使用相當於來自2隻新生幼小鼠的表皮細胞進行手術。將相當量的細胞懸浮於KGM中，靜置於冰上，直至使用。另外也可將回收的細胞冷凍保存，然後在使用前解凍使用。
例3來自小鼠的真皮細胞(3-1)手術前一天，按照(1-1)、(1-2)同樣的方法用胰蛋白酶處理來自具白化病性質的小鼠(例如ICR系)新生幼鼠的皮膚。
(3-2)用鑷子等將表皮部分剝離，將留下的真皮切碎後，在含0.35％膠原酶的適當的培養液中(例如DMEM+10％FBS等)中、在37℃下懸浮處理約1小時。
(3-3)將通過具100μm孔徑細胞篩的(2-2)裝入離心儀，回收真皮細胞。
對每隻受體動物使用相當於來自2隻新生幼小鼠的真皮細胞進行手術。不要將其與分離的毛乳頭細胞同時使用。將相當量的細胞懸浮於DMEM+10％FBS等中，靜置於冰上或將細胞冷凍保存，直至使用。
例4來自人的培養黑素細胞(4-1)將市售的來自包皮的黑素細胞(例如Cascade公司銷售的NHEM細胞等)在黑素細胞培養液(例如Cascade公司的M154s培養基等)中培養。使其在手術當天之前增殖到每隻受體動物相當於50萬-1000萬個細胞的量。
(4-2)在使用前，經0.05％胰蛋白酶處理，將細胞從培養器中分離並懸浮於培養液中，置於冰上，直至使用。
例5來自小鼠的黑素細胞(5-1)手術之前一周以上，按照(1-1)、(1-2)的方法，從新生幼小鼠(實施例中使用C57 Black/6系)中分離皮膚，用胰蛋白酶處理。
(5-2)剝離表皮後，使剝離的表皮懸浮於含有0.02％EDTA的PBS中。
(5-3)穩定混合後，在37℃振蕩約8分鐘。
(5-4)通過70μm細胞篩後，通過離心儀回收細胞，在黑素細胞用培養液中培養。培養條件根據細胞狀態的不同而不同。
(5-5)使用前，經0.05％胰蛋白酶處理，將細胞從培養器中分離並懸浮於培養液中，置於冰上或將細胞冷凍保存，直至使用。
II.毛囊重建方法(對動物的移植方法)例II-1使用來自小鼠的毛乳頭細胞的場合要準備的材料將適當量的下述II-(1-1)、(1-2)、(1-3)混合，作為「重建毛囊製備步驟」中的「細胞懸浮液」使用。
II-(1-1)將多能聚糖啟動子的下遊連接適當的標誌蛋白(例如LacZ)的結構基因，構成表達載體，導入小鼠生成轉基因小鼠，從該小鼠的新生幼鼠的真皮中製備毛乳頭細胞(真皮乳頭；以下稱為DP)。該製備要在施行重建手術的前一天之前進行，在手術當天通過胰蛋白酶處理進行回收。
II-(1-2)來自小鼠的表皮細胞。手術前一天，從具白化病性質的小鼠(例如ICR系)的新生幼鼠中採集皮膚，在手術當天通過胰蛋白酶處理進行製備。這樣製備的細胞可在冷凍保存後使用。
II-(1-3)培養黑素細胞。(使用A或B)A.來自人的黑素細胞。將來自市售包皮的黑素細胞傳代培養獲得的細胞(例如Cascade公司銷售的NHEM細胞等)。在手術當天通過胰蛋白酶處理來製備。這樣製備的細胞可冷凍保存後使用。
B.來自小鼠的黑素細胞。手術之前一周以上，從新生幼小鼠(實施例中使用C57 Black/6系)中分離，移到培養系統上傳代培養而獲得的細胞。在手術當天通過胰蛋白酶處理來製備。這樣製備的細胞可冷凍保存後使用。
例II-2使用小鼠真皮的場合取代上述II-(1-1)，在手術前一天從具白化病性質的小鼠(例如ICR系)的新生幼鼠上採集皮膚，在手術當天，使用經膠原酶處理而製備的細胞製備「細胞懸浮液」。這樣製備的細胞懸浮液可冷凍保存後使用。
重建毛囊的製備步驟
要準備的材料受體動物(例如Balb-c nu/un系裸鼠。5周齡以上)、矽膠製直徑約1釐米的圓弧狀罩(以下稱為瓣膜)、麻醉藥、手術用剪刀、鑷子、縫合器、微量加液器「細胞懸浮液」由黑素細胞、表皮細胞、真皮細胞或毛乳頭細胞構成。各細胞的製備方法參照上面所述。使用懸浮於約150μl培養液(DMEM+10％FBS等)並靜置於冰上的細胞或冷凍保存的細胞，在手術之前製備。
步驟
(i)麻醉裸鼠。
(ii)切取約直徑1釐米的背部皮膚。
(iii)將瓣膜插入傷口，用縫合器固定。
(iv)用加液器將細胞懸浮液注入瓣膜內。
(v)就這樣培養約1周，移去瓣膜。
(vi)1-2周後，沿著瘡痂脫落的痕跡可觀察到重建毛囊的生長，將黑素細胞中加入懸浮液時，可觀察到原本白化病的純白毛色變為灰色。
(vii)通過組織學觀察可以明確該毛色來自黑色素。
結果以上，將上述各細胞和依照上述步驟製備的重建毛囊載體動物的具體條件(用於重建毛囊的系統；+表示含有的細胞)以及毛色和移植皮膚顏色匯總為下表-1。另外還附有表示試驗編號2、5、6、7、8和10中製備的動物背部的狀態的照片，作為圖1。
表-1
例III抗白髮性藥物的評價依照例II-2的步驟，將試驗編號7的用於重建毛囊的系統移植到裸鼠上，約3-4周後拔掉重建的毛。拔去後，分別將含有幹細胞因子(以下簡稱為SCF)、α-黑素細胞促激素(以下簡稱為MSH)和p-氨基苯甲酸(以下簡稱為PABA)的溶液(1g動物體重分別為30ng SCF、1pmolMSH和50ng PABA)或磷酸緩衝溶液(PBS對照)每天注射到動物的皮下，持續1周。
之後，待再生的毛再次充分生長後(約3周後)，用剪刀剪掉並收集再生毛。溶解毛後，通過吸光度對黑色素含量進行定量。結果如圖2所示。從圖中可知通過加入各種因子，再生毛中黑素含量顯著增加。因此本發明的嵌合動物至少可用於抗白髮性藥物的篩選。
產業上的利用可能性本發明可提供適合篩選抗白髮性藥物、具有穩定表現型的嵌合動物。因此本發明可用於實驗動物供應產業；使用該動物例如開發有效的抗白髮性藥物的醫療行業；化妝品製造業等。
權利要求
1.用於重建毛囊的系統，該系統由毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞和表皮細胞、相對於這些細胞的外源黑素細胞的組合而構成。
2.權利要求1的系統，其中外源黑素細胞與毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞和表皮細胞為不同種來源。
3.權利要求1的系統，其中外源黑素細胞來自人，毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞和表皮細胞來自相同種的相同或不同動物系，且該動物選自小鼠、大鼠。
4.權利要求1的系統，其中外源黑素細胞來自人，含有毛乳頭細胞的真皮細胞來自選自ICR系白化病小鼠和黑素缺損系小鼠的小鼠，表皮細胞來自選自ICR系白化病小鼠和黑素細胞缺損系小鼠的小鼠。
5.權利要求1的系統，其中外源的黑素細胞是人皮膚培養色素細胞，毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞選自小鼠分離毛乳頭細胞、來自ICR白化病小鼠的真皮細胞和來自Wsh/Wsh小鼠的真皮細胞，表皮細胞選自來自ICR白化病小鼠的表皮細胞和來自Wsh/Wsh小鼠的表皮細胞。
6.承載重建毛囊的嵌合動物，所述重建毛囊是將用於重建毛囊的系統移植到受體動物而獲得的，所述毛囊由毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞和表皮細胞、相對於這些細胞的外源黑素細胞的組合構成的。
7.權利要求6的嵌合動物，其中受體動物是免疫系統受到抑制的動物，外源黑素細胞來自人。
8.權利要求6的嵌合動物，其中受體動物是選自裸鼠、嚴重聯合免疫缺陷小鼠(スキツドマウス)、裸大鼠的免疫系統受到抑制的動物。
9.權利要求6的嵌合動物，其中受體動物是裸鼠，外源的黑素細胞來自人，含有毛乳頭細胞的真皮細胞來自選自ICR系白化病小鼠和黑細胞缺損系小鼠的小鼠。
10.權利要求6的嵌合動物，其中受體動物是裸鼠，外源的黑素細胞是人皮膚培養色素細胞，毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞選自小鼠分離毛乳頭細胞、來自ICR白化病小鼠的真皮細胞和來自Wsh/Wsh小鼠的真皮細胞，表皮細胞選自來自ICR白化病小鼠的表皮細胞和來自Wsh/Wsh小鼠的表皮細胞。
11.對某種特定手段活化黑素細胞的能力進行評價的方法，其特徵在於向受體動物移植用於重建由毛乳頭細胞或含有毛乳頭細胞的真皮細胞和表皮細胞、相對於這些細胞的外源黑素細胞組合構成的毛囊的系統，將這樣承載重建毛囊的嵌合動物作為受試動物，將該受試動物用某種特定的手段處理，監測這樣處理的受試動物的重建毛囊中黑素細胞的活性，將相對於未經處理對象的該活性變化程度(或差異)與通過該手段獲得的黑素細胞活化能力之間建立相關關係。
12.權利要求11的評價方法，其中黑素細胞來自人，黑素細胞活性的變化程度由重建毛囊生出的毛髮或該毛囊附近表皮中黑色素量的多少決定。
13.權利要求11的評價方法，其中為了評價抗白髮性而檢測黑素細胞的活化能力。
14.權利要求11的評價方法，其中所述手段是化學物質或藥物。
15.抗白髮劑，該白髮劑含有被權利要求11的評價方法評價為可提高黑素細胞活化能力的藥物作為有效成分。
全文摘要
本發明提供一種實驗動物，該實驗動物承載使用毛乳頭細胞和表皮細胞、相對於這些細胞的外源黑素細胞重建的毛囊。這樣的實驗動物可用於評價對生毛和毛色的深淺產生影響的因素。
文檔編號C12N15/85GK1551726SQ0281724
公開日2004年12月1日 申請日期2002年9月6日 優先權日2001年9月6日
發明者出田立郎, 常長城 申請人:株式會社資生堂