一種人胎盤組織液的製備方法

2023-06-19 21:38:21

專利名稱:一種人胎盤組織液的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種含有其有不明結構的原材料的醫用配製品及其製備方，特別涉及一種胎盤的生物製劑及其製備方法。
背景技術：
胎盤中藥名為紫河車，具有調節人體機能，增強抵抗力，大補元氣精血的作用。性溫，味甘、鹹，歸心、肺、腎經。具有溫腎補精，益氣養血的功效，用於虛勞羸瘦，骨蒸盜汗，咳嗽氣喘，食少氣短，陽痿遺精，不孕少乳。
人胎盤被譽為保健品之王，還能治療多種疾病。現代科技研究表明人胎盤是內源性生物活性物質中重要的優良的人源性藥物，是最符合人體生物學調節的藥物。人體胎盤無化學和激素等添加成分，在修復重建人體各個系統生理功能的同時，沒有任何毒、副作用、過敏反應和依賴性，不良反應少。
人胎盤的成分較複雜，功效多樣。它含有多種抗體蛋白，具有功能多樣並且高效的免疫作用；含有幹擾素，有抑制病毒對人體細胞的侵襲作用；含有與血液凝固有關的成分， 有類似凝血因子XII的纖維蛋白穩定因子；含有尿激酶抑制物(能抑制尿激酶活化纖維蛋白溶酶原的作用)和纖維蛋白溶酶原活化物。人胎盤中還含有多種激素促性腺激素A和 B，催乳素，促甲狀腺激素，催產素樣物質，多種留體激素和雌酮，雌二醇，雌三醇，孕留酮，睪丸甾酮，去氧皮質甾酮，11-去氫此質甾酮，可的松，17-羥皮質甾酮，四氫皮質甾酮，4-孕烯-20，21-二醇-3，11-二酮，絨毛膜促腺激素(一種蛋白質的多肽激素)等及促腎上腺皮質激素等；還含有多種酶，如溶菌酶，激肽酶，組胺酶，催產素酶，清蛋白酶，α -球蛋白酶， β _球蛋白酶，Y-球蛋白酶等；含有紅胞生成素，磷脂，β -內啡肽，氨基多糖體(由8分子乙醯氨葡萄糖、6分子甘露糖所組成)。胎盤乳原(多肽化合物)含多種胺基酸，並含微量維生素Β12，乙醯膽鹼及碘等。
從人胎盤的酸性抽提物中還可得到較多量的鬆弛大鼠十二指腸和降大鼠血壓的成分，其性質同前列腺素Ε1。催乳素與垂體生長激素的化學機構上相關，有免疫交叉反應， 在垂體切除的大鼠中人胎盤催乳素與生長激素有明顯的協同作用，促進生長。
人胎盤製品在臨床上應用廣泛，中醫學認為人胎盤具有滋補強壯、養血填精、滋腎壯陽、益氣健脾的功能，可用於營養不良、食欲不振、神經衰弱、血少體虛、神虛陽痿、雀斑、 面暗皮黑及一切內分泌失調等方面的治療。人胎盤製品多用於皮膚科、婦科、外科，以及更年期綜合症和多種慢性疾病。
人胎盤組織液是人胎盤製品中應用最廣泛的藥物，它含有人體生理必須的多種活性物質和人體生理必須的酶類物質，對維持人體內分泌的正常功能起到重要的調節作用。 它可以保證人體處於健康的狀態，改善各個器官的功能低下，延緩生理機能的衰退，延緩衰老；其中富含的多種胺基酸、礦物質，補充人體後天需要的各種養分，激活人體細胞；含有的拮抗黑色素因子、透明質酸保溼因子，具有強大的養顏、美白、保溼效果，從根本上延緩衰老；含有的免疫調節因子、幹擾素I幹擾素β、促紅細胞生長素、神經生長因子、白介素、類胰島素生長因子、血小板衍生因子、轉化生長因子、集落刺激因子等具有促進細胞分化、增值作用，能有效加強免疫修復；含有的豐富的蛋白質，如白蛋白、球蛋白、巨球蛋白和多種胎盤球蛋白抗體，能顯著提高人體免疫力，有效地預防疾病發生，把疾病扼殺在萌芽狀態；含有各種維生素和超氧化物歧化酶，有效維持人體各種功能的正常，保證正常的新陳代謝，及時清除衰老細胞和隨時產生的變異細胞，消除自由基對人體的損害，防治癌變，有效預防癌症的發生。
人胎盤組織液等製品的生物療法調控人體的作用活躍，針對異常細胞的靶向作用準確，調整和加強人體組織細胞的新陳代謝、調節人體免疫力和內分泌、消除自由基、修復人體基因，創建優良的人體內環境，提高集體抵抗風、寒、暑、溼和病原微生物侵襲，廣泛用於癌症、術後、婦科疾病、皮膚疾病、內分泌紊亂、更年期、不孕不育等領域。由於人胎盤及其製品的巨大的藥用價值，對胎盤及其製品的研究眾多，但是目前，人胎盤組織液的提取多採用煎煮濃縮方法，這種方法不但提取出的藥用成分含量低，而且能耗大、成本高，並且胎盤中的一些活性基因調控因子和部分代謝調控酶會因高溫作用而失活，使得胎盤組織液的利用價值明顯降低。
例如，授權公告號為CN1030528C的發明專利公開了一種製備人胎盤膠原的方法， 該製備人胎盤膠原的方法利用健康產婦的胎盤無胎糞汙染的周邊部分胎盤組織，經清洗、 打碎、加胃蛋白酶消化、提取、混勻等處理後，可以製得無菌無副作用的人胎盤膠原。該方法採用胃蛋白酶進行消化作用，使得人胎盤中的蛋白含量降低，使得人胎盤製品的藥理作用範圍縮小，藥效降低。
授權公告號為CN1289164C的發明專利公開了一種胎盤素二氧化碳超臨界萃取方法，該萃取方法依次包括如下步驟將胎盤在_5°C -6°C條件下經過冷凍乾燥5 6h，研成粉末；將胎盤粉末裝入萃取釜中，通入30 40Mpa的二氧化碳，在30 40°C條件下萃取； 進行二級減壓分離，獲得胎盤素，一級減壓分離條件為8 12Mpa，溫度為30 35°C ；二級減壓分離條件為6Mpa以下，溫度為15 25°C。該發明方法提取胎盤素工藝複雜，製備工藝條件苛刻，需要特殊的提取設備，製備的胎盤製品的生產成本高，而且容易降低產品活性， 產品中的有些病毒不能被去除或滅活，致使產品的安全性降低。
授權公告號為CN100475841C的發明專利申請公開了一種注射用胎盤多肽的製備方法，該方法包括原料收集、研磨、破碎、病毒滅活、酸化水解、離心分離、澄清過濾、超濾、除菌過濾和凍乾等步驟。該發明方法需要反覆的低溫冷凍和高溫融合交替處理，以及在PH為 2-4的條件下長時間保溫處理，不僅製備工藝繁雜，而且在酸性條件下胎盤中的活性物質的生物活性降低。
公開號CN101306018A的發明專利申請公開了一種超濃縮胎盤素組織液凍幹膠囊的生產方法，包括a)將胎盤組織原液經過二氧化碳超臨界流體萃取，得到胎盤素萃取物； b)利用生物酶處理所述胎盤素萃取物，將分子量降低到6000道爾頓以下；c)將步驟b)中得到的小分子萃取物冷凍乾燥，得到凍乾粉；以及d)採用脂質體製備方法將所述凍乾粉製成超濃縮胎盤素組織液凍幹膠囊。
公開號為CN1110128A的發明專利申請公開了一種活性胎盤粉製備方法，該製備方法包括有預處理、冷凍粉碎、乾燥、過篩等四個工藝流程，其中的乾燥工藝採用了真空冷凍乾燥技術。乾燥工藝分為預凍、升華脫水(主幹燥)、乾燥(第二階段乾燥)三個工藝步驟，其乾燥溫度低於0°c，真空度為< 13. 3Pa。
公開號為CN1235026A的發明專利申請公開了一種胎盤肽注射液的製備方法及其所制產品。製備方法包括取胎盤用水冼淨、清理後製成勻漿，置反覆凍融7-10次，在2-8°C 下離心20-30分鐘，取上清液經透析或超濾，再用0. 22或0. 3微米的微孔濾膜過濾即得。該方法需要反覆的低溫冷凍和高溫融合交替處理，特殊的透析設備，活性成分保留率低，產品的生產成本高。
授權公告號為CN1259059C的發明專利公開了一種胎盤提取物的製備方法，該方法包括取健康胎盤搗碎，用重量比1 1的20 95%乙醇浸泡1-7天，過濾，得濾液a; 加入1-5倍20-95%的乙醇，在_4°C 40°C陳化2 10天，過濾，得濾液b ；將濾液b陳化 2 5天，過濾，得濾液為胎盤提取物。該胎盤提取物的製備方法使用高濃度乙醇和長時間的高溫陳化處理，使得提取液中的活性成分含量降低，產品的生物活性減弱，影響提取液的藥理作用效果。

發明內容
本發明的目的是針對上述現有問題提供一種人胎盤生物製劑的製備方法和由該方法製備的人胎盤生物製劑。本發明方法製備的人胎盤生物製劑在低溫下進行，產品中的活性成分含量高，產品的生物活性高，而且在低溫超聲提取過程中，影響產品質量的病毒被去除、滅活，產品的安全性高。
為實現本發明的目的，本發明一方面提供一種人胎盤組織液的製備方法，包括如下步驟
1)收集健康胎盤組織，將其依次用氯化鈉溶液進行浸泡，清水漂洗，得到預處理胎盤組織；
2)對預處理胎盤組織進行烘乾處理，然後進行粉碎處理，製成粉碎胎盤；
3)粉碎胎盤與水混合後依次進行超聲提取、離心過濾，得到粗分胎盤組織液； 4)對粗分胎盤組織液進行酸水解，過濾，得到酸水解胎盤組織液；
5)首先向酸水解胎盤組織液中加入氯化鈉，調節酸水解胎盤組織液中的氯化鈉含量，然後進行鹼水解，過濾，得到鹼水解胎盤組織液；
6)調節鹼水解胎盤組織液的PH後，進行精濾，得到精濾胎盤組織液；
7)對精濾胎盤組織液進行滅菌，即得。
其中，步驟1)所述的氯化鈉溶液的質量百分比濃度為4_9%，健康胎盤組織與氯化鈉溶液的重量份之比為1 0.4-0.9。
特別是，清水漂洗後的胎盤組織用手擠壓沒有血跡。
其中，步驟2)中所述的烘乾處理的溫度為40-50°C，烘乾時間為8-10小時，烘乾處理的相對真空度為-0. 08 -0. 095MPa。
特別是，進行所述的粉碎處理時控制粉碎溫度為30-40°C，粉碎胎盤的粒度小於 20目。
其中，步驟3)中所述粉碎胎盤與水的重量份之比為1 7-12;超聲提取溫度為 30-45 °C，超聲提取時間為60-80分鐘。
特別是，所述的水為注射用水。[0031]尤其是，超聲提取時的超聲波提取設備的功率2000W，脈衝頻率200Hz。
其中，步驟3)中採用離心分離過濾後的粗分胎盤組織液中的顆粒粒度小於或等於 1. 5um。
特別是，離心過濾的濾布孔徑小於或等於1. 5um。
其中，步驟4)中所述的酸水解包括如下順序進行的步驟
A)向粗分胎盤組織液中加入鹽酸溶液，調節其pH為2. 6-3. 6 ；
B)對調節pH後的粗分胎盤組織液進行超聲處理，粗分胎盤組織液水解，其中，超聲處理溫度為40-50°C，超聲處理時間為20-40分鐘。
特別是，步驟A)中所述的鹽酸溶液的摩爾濃度為l-2mol/L，pH優選為3. 0 ；
特別是，步驟4)中所述的過濾為板框過濾，板框過濾的濾布的孔徑為0. 8-1. Oum ；
尤其是，板框過濾過程中採用加壓過濾，加壓過濾的絕對壓力為l_2MPa。
其中，步驟5)中所述酸水解胎盤組織液中的氯化鈉的質量百分比含量為 0. 8-0. 9%，優選為 0. 85%。
特別是，步驟5)中所述的鹼水解包括如下順序進行的步驟
A)向酸水解胎盤組織液中加入氫氧化鈉溶液，調節其pH為6. 8-8. 0 ；
B)對調節pH後的粗分胎盤組織液進行超聲處理，酸水解胎盤組織液水解，其中， 超聲處理溫度為40-50°C，超聲處理時間為20-40分鐘。
尤其是，步驟A)中所述的氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為l_2mol/L。
特別是，步驟5)中所述的過濾為採用微孔濾膜進行的過濾，微孔濾膜的孔徑為 0. 45-0. 65um ；
尤其是，採用減壓微孔過濾，減壓過濾的相對真空度為-0. 08 -0. 095MPa。
其中，步驟6)中將鹼水解胎盤組織液的pH調節為7. 0後，採用0. 22um微孔濾膜進行所述的精濾。
其中，步驟7)中所述的滅菌溫度為114°C，滅菌時間為20-40分鐘。
特別是，採用整體滅菌櫃進行所述的滅菌處理。
本發明另一方面提供一種按照上述方法製備而成的胎盤組織液。
本發明方法製備的胎盤組織液具有如下優點
1、本發明方法製備的胎盤組織液在低溫條件下製備而成，產品中的活性成分含量高，產品的生物活性高。
2、本發明方法製備的胎盤組織液中影響產品質量的病毒被去除、滅活，產品的安全性高。
3、本發明方法採用低溫超聲提取，生物活性成分提取完全，提取效率高，胎盤組織液中氮含量達到2-3g/L。
4、本發明方法工藝簡單，工藝控制條件溫和，生產設備普通，產品生產成本低。
具體實施方式
實施例1
1、篩選健康胎盤
收集健康產婦足月分娩的胎盤，經B肝、C肝、愛滋病、梅毒等病毒檢驗後，篩選病毒檢驗結果為陰性的胎盤作為原料，備用；
2、胎盤的浸泡、漂洗
首先將合格的胎盤組織浸入氯化鈉溶液中，浸泡去除胎盤中的血液、剔除血管、 黏膜以及臍帶，製得浸泡胎盤組織，其中，氯化鈉溶液的質量百分比濃度為4%，浸泡時間為 4小時，胎盤組織與氯化鈉溶液的重量之比為1 0.4，浸泡溫度為18°C，相對溼度為45%;
然後將浸泡胎盤組織置於清水中漂洗，漂洗後的胎盤組織用手擠壓沒有血跡，得到漂洗胎盤組織，其中，漂洗溫度為18°C，相對溼度為45% ；
3、胎盤烘乾
將漂洗胎盤組織濾幹水分後置於FZG系列低溫真空乾燥箱(南方歐制機械有限公司)內進行烘乾處理，得到烘乾胎盤組織，其中，烘乾溫度為40°C，烘乾時間為9小時，烘乾處理的相對真空度為-0. 09MPa ；
4、胎盤粉碎
將烘乾胎盤組織採用自冷式降溫粉碎機(北京環亞天元機械有限公司)進行粉碎處理，製得粉碎胎盤，其中，粉碎處理的溫度為40°C，粉碎胎盤的粒度為20目；
5、提取胎盤組織液
將粉碎胎盤與注射用水混合後，置於HSOT超聲波提取設備中(山東濟寧恆盛製藥機械有限公司)中，加熱升溫，進行超聲提取，使胎盤組織液成分流出，得到胎盤組織液和胎盤組織剩餘物，其中，粉碎胎盤與注射用水的重量之比為1 10，超生溫度為40°C，超聲提取時間為80分鐘，超聲提取設備的輸出功率2000W，脈衝頻率200Hz ；
6、胎盤組織液分離
將超聲提取後的胎盤組織液和胎盤組織剩餘物置於離心機( )中進行離心處理，離心管內設置有孔徑為1.5um的濾布，提取液置入濾布中，啟動離心機進行離心分離，使胎盤組織液與胎盤剩餘物分離，得到澄清的粗分胎盤組織液，其中，離心處理的溫度為18°C，相對溼度為45%，離心處理的轉速為5000rpm，離心時間為40分鐘，離心機的濾布孔徑為1. 5um，獲得的粗分胎盤組織液中去除了粒度大於1. 5um的顆粒；
7、酸水解
向粗分胎盤組織液中加入鹽酸溶液，調節其pH值為3. 0後，置於HSOT系列超聲波提取機(山東濟寧恆盛製藥機械有限公司)中，加熱升溫，進行水解，得到酸水解胎盤組織液，其中，鹽酸溶液的摩爾濃度為lmol/L，水解溫度為40°C，水解時間為30分鐘；
將酸水解胎盤組織液冷卻、靜置24小時後，向水解胎盤組織液加入針用活性炭並混合均勻，置於板框過濾機中進行加壓過濾，得到胎盤組織液A，其中，每IL水解胎盤組織液中加入針用活性炭20g，針用活性炭的粒度為80-100目，板框過濾機的濾布的孔徑為 1. Oum，加壓過濾的絕對壓力為IMPa ；
8、鹼水解
向胎盤組織液A中加入氯化鈉，使胎盤組織液A中的氯化鈉的質量百分比含量為 0. 85%,接著再加入氫氧化鈉溶液，調節其pH值為8. 0，然後將其置於HSOT系列超聲提取設備(山東濟寧恆盛製藥機械有限公司)中，加熱升溫，進行鹼水解，得到鹼水解胎盤組織液， 其中，氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為lmol/L，水解溫度為40°C，水解時間為40分鐘；
將鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置12小時後，將鹼水解胎盤組織液進行減壓微孔濾膜過濾，得到胎盤組織液B，其中，微孔濾膜(購自南京金日製藥裝備有限公司)的孔徑為0. 65um，微孔過濾的溫度為18°C，相對溼度為45%，減壓微孔濾膜過濾的相對真空度為-0. 09MPa ；
9、精濾
向胎盤組織液B中加入鹽酸溶液，調節其pH值至7. 0後，經過0. 22um微孔濾膜進行精濾，得到淡黃色澄明的胎盤組織液C，其中，鹽酸溶液的摩爾濃度為lmol/L，精濾的溫度為18°C，相對溼度為45%，減壓精濾的相對真空度為-0. 09MPa ；
10、分裝
將胎盤組織液C以每瓶2ml定量分裝於5ml的安瓿瓶中，然後於6小時內置於整體滅菌櫃(張家港市環宇製藥設備公司)設備中，進行滅菌處理，得胎盤組織液，其中滅菌處理溫度為114°C，滅菌時間為30分鐘。
製得的胎盤組織液的pH為7. 0，總氮含量為2. Og/L。
實施例2
1、篩選健康胎盤
收集健康產婦足月分娩的胎盤，經B肝、C肝、愛滋病、梅毒等病毒檢驗後，篩選病毒檢驗結果為陰性的胎盤作為原料，備用；
2、胎盤的浸泡、漂洗
首先將合格的胎盤組織浸入氯化鈉溶液中，浸泡去除胎盤中的血液、剔除血管、 黏膜以及臍帶，製得浸泡胎盤組織，其中，氯化鈉溶液的質量百分比濃度為6%，浸泡時間為 5小時，胎盤組織與氯化鈉溶液的重量之比為1 0.6，浸泡溫度為26°C，相對溼度為65%;
然後將浸泡胎盤組織置於清水中漂洗，漂洗後的胎盤組織用手擠壓沒有血跡，得到漂洗胎盤組織，其中，漂洗溫度為26°C，相對溼度為65% ；
3、胎盤烘乾
將漂洗胎盤組織濾幹水分後置於FZG系列低溫真空乾燥箱(南方歐制機械有限公司)內進行烘乾處理，得到烘乾胎盤組織，得到烘乾胎盤組織，其中，烘乾溫度為50°C，烘乾時間為10小時，烘乾處理的相對真空度為-0. 08MPa ；
4、胎盤粉碎
將烘乾胎盤組織採用自冷式降溫粉碎機(北京環亞天元機械有限公司)進行粉碎處理，製得粉碎胎盤，其中，粉碎處理的溫度為35°C，粉碎胎盤的粒度為50目；
5、提取胎盤組織液
將粉碎胎盤與注射用水混合後，置於HSOT系列超聲波提取設備，進行超聲提取， 使胎盤組織液成分流出，提取胎盤組織液，得到胎盤組織混合液，其中，粉碎胎盤與注射用水的重量之比為1 12，超聲提取溫度為30°C，提取時間為70分鐘，超聲提取設備的輸出功率2000W，脈衝頻率200Hz ；
6、胎盤組織液分離
將超聲提取後的胎盤組織液和胎盤組織剩餘物置於離心機中進行離心處理，離心管內設置有孔徑為1.5um的濾布，提取液置入濾布中，啟動離心機進行離心分離，使胎盤組織液與胎盤剩餘物分離，得到澄清的粗分胎盤組織液，其中，離心處理的溫度為26°C，相對溼度為65%，離心處理的轉速為lOOOOrpm，離心時間為20分鐘，離心機的濾布孔徑為1. 5um，獲得的粗分胎盤組織液中去除了粒度大於1. 5um的顆粒；
7、酸水解
向粗分胎盤組織液中加入鹽酸溶液，調節其pH值為2. 6後，置於HSOT系列超聲波提取機(山東濟寧恆盛製藥機械有限公司)中，加熱升溫加壓，進行水解，得到酸水解胎盤組織液，其中，鹽酸溶液的摩爾濃度為2mol/L，水解溫度為50°C，水解時間為20分鐘，超聲提取設備的輸出功率2000W，頻率200Hz ；
將酸水解胎盤組織液冷卻、靜置24小時後，置於板框過濾機中進行加壓過濾，得到胎盤組織液A，其中，板框過濾機的濾布的孔徑為0. 8um，加壓過濾的絕對壓力為2MPa ；
8、鹼水解
向胎盤組織液A中加入氯化鈉，使胎盤組織液A中的氯化鈉的質量百分比含量為 0. 85%,接著再加入氫氧化鈉溶液，調節其pH值為6. 8，然後將其置於HSOT系列超聲提取設備(山東濟寧恆盛製藥機械有限公司)中，加熱升溫加壓，進行鹼水解，得到鹼水解胎盤組織液，其中，氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為1. 5mol/L，水解溫度為50°C，水解時間為20分鐘；
將鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置12小時後，將鹼水解胎盤組織液進行減壓微孔濾膜過濾，得到胎盤組織液B，其中，微孔濾膜(購自南京金日製藥裝備有限公司)的孔徑為0. 45um，微孔過濾的溫度為26°C，相對溼度為65%，減壓微孔濾膜過濾的相對真空度為-0. 09MPa ；
9、精濾
向胎盤組織液B中加入氫氧化鈉溶液，調節其pH值至7. 0後，經過0. 22um微孔濾膜進行精濾，得到淡黃色澄明的胎盤組織液C，其中，氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為0. 5mol/ L，精濾的溫度為26°C，相對溼度為65%，減壓精濾的相對真空度為-0. 09MPa ；
10、分裝
將胎盤組織液C以每瓶2ml定量分裝於5ml的西林瓶中，然後於6小時內置於整體滅菌櫃(張家港市環宇製藥設備公司)設備中，進行滅菌處理，得胎盤組織液，其中滅菌處理溫度為114°C，滅菌時間為30分鐘。
製得的胎盤組織液的pH為7. 0，總氮含量為2. 5g/L。
實施例3
1、篩選健康胎盤
收集健康產婦足月分娩的胎盤，經B肝、C肝、愛滋病、梅毒等病毒檢驗後，篩選病毒檢驗結果為陰性的胎盤作為原料，備用；
2、胎盤的浸泡、漂洗
首先將合格的胎盤組織浸入氯化鈉溶液中，浸泡去除胎盤中的血液、剔除血管、 黏膜以及臍帶，製得浸泡胎盤組織，其中，氯化鈉溶液的質量百分比濃度為9%，浸泡時間為4. 5小時，胎盤組織與氯化鈉溶液的重量之比為1 0.9，浸泡溫度為22°C，相對溼度為 55% ；
然後將浸泡胎盤組織置於清水中漂洗，漂洗後的胎盤組織用手擠壓沒有血跡，得到漂洗胎盤組織，其中，漂洗溫度為22°c，相對溼度為55% ；
3、胎盤烘乾
將漂洗胎盤組織濾幹水分後置於FZG系列低溫真空乾燥箱內進行烘乾處理，得
11到烘乾胎盤組織，其中，烘乾溫度為45°C，烘乾時間為8. 5小時，烘乾處理的相對真空度為-0. 09MPa ；
4、胎盤粉碎
將烘乾胎盤組織採用自冷式降溫粉碎機進行粉碎，製得粉碎胎盤，其中，粉碎處理的溫度為30°C，粉碎胎盤的粒度為30目；
5、提取胎盤組織液
將粉碎胎盤與注射用水混合後，置於HSOT超聲波提取設備中(山東濟寧恆盛製藥機械有限公司)中，加熱升溫，進行超聲提取，使胎盤組織液成分流出，得到胎盤組織液和胎盤組織剩餘物，其中，粉碎胎盤與注射用水的重量之比為1 7，超聲提取溫度為45°C，提取時間為60分鐘，超聲提取時的相對溼度為55%，超聲提取設備的輸出功率為2000W，頻率為 200Hz ；
6、胎盤組織液分離
將超聲提取後的胎盤組織液和胎盤組織剩餘物置於離心機中進行離心處理，離心管內設置有孔徑為1. 5um的濾布，提取液置入濾布中，啟動離心機進行離心分離，使胎盤組織液與胎盤剩餘物分離，得到澄清的粗分胎盤組織液，其中，離心處理的溫度為22°C，相對溼度為55%，離心處理的轉速為7500rpm，離心時間為30分鐘，離心機的濾布孔徑為1. 5um， 獲得的粗分胎盤組織液中去除了粒度大於1. 5um的顆粒；
7、酸水解
向粗分胎盤組織液中加入鹽酸溶液，調節其pH值為3. 6後，置於HSOT系列超聲波提取機中，加熱升溫，進行酸水解，得到酸水解胎盤組織液，其中，鹽酸溶液的摩爾濃度為 1. 5mol/L，水解溫度為45°C，水解時間為40分鐘；
將酸水解胎盤組織液冷卻、靜置24小時後，向水解胎盤組織液加入針用活性炭並混合均勻，置於板框過濾機中進行加壓過濾，得到胎盤組織液A，其中，每IL水解胎盤組織液中加入針用活性炭10g，用活性炭的粒度為80-100目，板框過濾機的濾布的孔徑為 1. Oum，加壓過濾的絕對壓力為1. 5MPa ；
8、鹼水解
向胎盤組織液A中加入氯化鈉，使胎盤組織液A中的氯化鈉的質量百分比含量為 0. 85%,接著再加入氫氧化鈉溶液，調節其pH值為7. 4，然後將其置於HSOT系列超聲提取設備中，加熱升溫，進行鹼水解，得到鹼水解胎盤組織液，其中，氫氧化鈉溶液的摩爾濃度為 2mol/L，水解溫度為45°C，水解時間為30分鐘；
將鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置12小時後，將鹼水解胎盤組織液進行減壓微孔濾膜過濾，得到胎盤組織液B，其中，其中，微孔濾膜(購自南京金日製藥裝備有限公司)的孔徑為0. 65um，微孔過濾的溫度為22°C，相對溼度為55 %，減壓過濾的相對真空度為-0. 095MPa ；
9、精濾
向胎盤組織液B中加入鹽酸溶液，調節其pH值至7. O後，經過0. 22um微孔濾膜進行精濾，得到淡黃色澄明的胎盤組織液C，其中，鹽酸溶液的摩爾濃度為l.Omol/L，精濾的溫度為22°C，相對溼度為55% ；
10、分裝[0129]將胎盤組織液C以每瓶2ml定量分裝於5ml的西林瓶中，然後於6小時內置於整體滅菌櫃(張家港市環宇製藥設備公司)設備中，進行滅菌處理，得胎盤組織液，其中滅菌處理溫度為114°C，滅菌時間為30分鐘。
製得的胎盤組織液的pH為7. 0，總氮含量為3. Og/L。
權利要求
1.一種胎盤組織液的製備方法，其特徵在於，製備步驟如下(1)選取健康胎盤，在質量百分比為4 9%的氯化鈉溶液中浸泡4 5小時後用清水漂洗，得到漂洗胎盤組織，其中，所述胎盤與所述氯化鈉溶液的重量比為1 0.4 0.9，浸泡時的浸泡溫度為18 26°C，相對溼度為45% 65% ；漂洗時的漂洗溫度為18 26°C， 相對溼度為45% 65% ；(2)將所述漂洗胎盤組織在40 50°C進行烘乾處理8.5 10小時，並將得到的烘乾胎盤組織在30 40°C粉碎，得到粉碎胎盤，其中，烘乾處理的相對真空度為-0. 09 -0. 08MPa,所述粉碎胎盤的粒度為20 50目；(3)將所述粉碎胎盤與注射用水按重量比為1 7 12的比例混合後，在30 45°C 進行超聲波提取60 80分鐘，然後將提取所得的胎盤組織混合液置於離心機中進行離心過濾20 40分鐘，得粗分胎盤組織液，其中，所述胎盤組織混合液包括超聲波提取的胎盤組織液和胎盤剩餘物，離心處理的溫度為18 26°C，相對溼度為45% 65%，離心速度為 5000 lOOOOrpm，所述離心機的濾布孔徑為1. 5 μ m ；(4)向所述粗分胎盤組織液中加入摩爾濃度為1 2mol/L的鹽酸溶液，調節混合液的 PH值為2. 6 3. 6，加熱至40 50°C，並保持溫度水解20 40分鐘，得酸水解胎盤組織液；(5)在將所述酸水解胎盤組織液冷卻、靜置24小時後採用孔徑為0.8 1. 0 μ m的濾布以1 2MPa的絕對壓力加壓過濾，然後向所得濾液中加入氯化鈉並使氯化鈉在濾液中的質量百分比為0.8% 0.9%，接著加入摩爾濃度為1 2mol/L的氫氧化鈉溶液，調節其PH 值為6. 8 8. 0，加熱至40 50°C，並保持溫度水解20 40分鐘，得鹼水解胎盤組織液；(6)在將所述鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置12小時後採用孔徑為0.45 0. 65 μ m的微孔濾膜微減壓過濾，所述微減壓過濾溫度為18 26°C，相對溼度為45% 65%，相對真空度為-0. 095 -0. 09MPa ；當所得濾液PH值小於7. 0時，向所得濾液中加入摩爾濃度為0. 5mol/L的氫氧化鈉溶液，使其PH值為7.0，當所得濾液PH值大於7. 0時，向所得濾液中加入摩爾濃度為1. Omol/L的鹽酸，使其PH 值為7.0，然後採用孔徑為0. 22 μ m的微孔濾膜進行精濾，得精濾胎盤組織液，其中，精濾的溫度為18 26°C，相對溼度為45% 65% ；(7)對所述精濾胎盤組織液進行滅菌處理，得胎盤組織液，其中，滅菌處理溫度為 114°C，滅菌時間為30分鐘。
2.根據權利要求
1所述的胎盤組織液的製備方法，其特徵在於，製備步驟如下(1)選取健康人胎盤，在質量百分比為4%的氯化鈉溶液中浸泡4小時後用清水漂洗， 得到漂洗胎盤組織，其中，所述胎盤與所述氯化鈉溶液的重量比為1 0.4，浸泡時的浸泡溫度為18°C，相對溼度為45% ；漂洗時的漂洗溫度為18°C，相對溼度為45% ；(2)將所述漂洗胎盤組織在40°C進行烘乾處理9小時，並將得到的烘乾胎盤組織在 40°C粉碎，得到粉碎胎盤，其中，烘乾處理的相對真空度為-0. 09MPa，所述粉碎胎盤的粒度為20目；(3)將所述粉碎胎盤與注射用水按重量比為1 10的比例混合後，在40°C進行超聲波提取80分鐘，然後將提取所得的胎盤組織混合液置於離心機中進行離心過濾40分鐘，得粗分胎盤組織液，其中，離心處理的溫度為18°C，相對溼度為45%，離心速度為5000rpm ；(4)向所述粗分胎盤組織液中加入摩爾濃度為lmol/L的鹽酸溶液，調節其PH值為 3. 0，加熱至40°C，並保持溫度水解30分鐘，得酸水解胎盤組織液；(5)將所述酸水解胎盤組織液冷卻、靜置，並向水解胎盤組織液中以20g/L的分量加入粒度為80 100目的針用活性炭，混合均勻後，採用孔徑為1. 0 μ m的濾布以IMPa的絕對壓力加壓過濾，然後向所得濾液中加入氯化鈉並使氯化鈉在濾液中的質量百分比為0. 85%, 接著加入摩爾濃度為lmol/L的氫氧化鈉溶液，調節其PH值為8. 0，加熱至40°C，並保持溫度水解40分鐘，得鹼水解胎盤組織液；(6)在將所述鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置後採用孔徑為0.65 μ m的微孔濾膜微減壓過濾，所述微減壓過濾溫度為18°C，相對溼度為45%，相對真空度為-0. 09MPa，並向所得濾液中加入摩爾濃度為lmol/L的鹽酸，使其PH值為7. 0，然後進行精濾，得精濾胎盤組織液， 其中，精濾溫度為18°C，相對溼度為45%，相對真空度為-0. 09MPa ；(7)對所述精濾胎盤組織液進行滅菌處理，得胎盤組織液。
3.根據權利要求
1所述的胎盤組織液的製備方法，其特徵在於，製備步驟如下(1)選取健康人胎盤，在質量百分比為6%的氯化鈉溶液中浸泡5小時後用清水漂洗， 得到漂洗胎盤組織，其中，所述胎盤與所述氯化鈉溶液的重量比為1 0.6，浸泡時的浸泡溫度為26°C，相對溼度為65% ；漂洗時的漂洗溫度為26°C，相對溼度為65% ；(2)將所述漂洗胎盤組織在50°C進行烘乾處理10小時，並將得到的烘乾胎盤組織在 35°C粉碎，得到粉碎胎盤，其中，烘乾處理的相對真空度為-0. 08MPa，所述粉碎胎盤的粒度為50目；(3)將所述粉碎胎盤與注射用水按重量比為1 12的比例混合後，在30°C進行超聲波提取70分鐘，然後將提取所得的胎盤組織混合液置於離心機中進行離心過濾20分鐘，得粗分胎盤組織液，其中，離心處理的溫度為26°C，相對溼度為65%，離心速度為IOOOOrpm ；(4)向所述粗分胎盤組織液中加入摩爾濃度為2mol/L的鹽酸溶液，調節其PH值為 2. 6，加熱至50°C，並保持溫度水解20分鐘，得酸水解胎盤組織液；(5)在將所述酸水解胎盤組織液冷卻、靜置後採用孔徑為0.8μπι的濾布以2MPa的絕對壓力加壓過濾，然後向所得濾液中加入氯化鈉並使氯化鈉在濾液中的質量百分比為 0. 85%,接著加入摩爾濃度為1. 5mol/L的氫氧化鈉溶液，調節其PH值為6. 8，加熱至50°C， 並保持溫度水解20分鐘，得鹼水解胎盤組織液；(6)在將所述鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置後採用孔徑為0.45 μ m的微孔濾膜微減壓過濾，所述微減壓過濾溫度為26°C，相對溼度為65%，相對真空度為-0. 09MPa，並向所得濾液中加入摩爾濃度為0. 5mol/L的氫氧化鈉溶液，使其PH值為7. 0，然後進行精濾，得精濾胎盤組織液，其中，精濾溫度為26°C，相對溼度為65%，相對真空度為-0. 09MPa ；(7)對所述精濾胎盤組織液進行滅菌處理，得胎盤組織液。
4.根據權利要求
1所述的胎盤組織液的製備方法，其特徵在於，製備步驟如下(1)選取健康人胎盤，在質量百分比為9%的氯化鈉溶液中浸泡4. 5小時後用清水漂洗，得到漂洗胎盤組織，其中，所述胎盤與所述氯化鈉溶液的重量比為1 0.9，浸泡時的浸泡溫度為22°C，相對溼度為55% ；漂洗時的漂洗溫度為22°C，相對溼度為55% ；(2)將所述漂洗胎盤組織在45°C進行烘乾處理8.5小時，並將得到的烘乾胎盤組織在 30°C粉碎，得到粉碎胎盤，其中，烘乾處理的相對真空度為-0. 09MPa，所述粉碎胎盤的粒度為30目；(3)將所述粉碎胎盤與注射用水按重量比為1 7的比例混合後，在45°C進行超聲波提取60分鐘，然後將提取所得的胎盤組織混合液置於離心機中進行離心過濾30分鐘，得粗分胎盤 組織液，其中，離心處理的溫度為22°C，相對溼度為55%，離心速度為7500rpm ；(4)向所述粗分胎盤組織液中加入摩爾濃度為1.5mol/L的鹽酸溶液，調節其PH值為 3. 6，加熱至45°C，並保持溫度水解40分鐘，得酸水解胎盤組織液；(5)在將所述酸水解胎盤組織液冷卻、靜置後，向水解胎盤組織液中以10g/L的分量加入粒度為80 100目的針用活性炭，並混合均勻，然後採用孔徑為1. 0 μ m的濾布以1. 5MPa 的絕對壓力加壓過濾，再向所得濾液中加入氯化鈉並使氯化鈉在濾液中的質量百分比為 0. 85%,接著加入摩爾濃度為2mol/L的氫氧化鈉溶液，調節其PH值為7. 4，加熱至45°C，並保持溫度水解30分鐘，得鹼水解胎盤組織液；(6)在將所述鹼水解胎盤組織液冷卻、靜置後採用孔徑為0.65 μ m的微孔濾膜微減壓過濾，所述微減壓過濾溫度為22°C，相對溼度為55%，相對真空度為-0. 095MPa,向所得濾液中加入摩爾濃度為1. Omol/L的鹽酸，使其PH值為7. 0，然後進行精濾，得精濾胎盤組織液，其中，精濾溫度為22°C，相對溼度為55% ；(7)對所述精濾胎盤組織液進行滅菌處理，得胎盤組織液。
5. 一種胎盤組織液，其特徵在於，利用權利要求
1至4任意一項所述的方法製備得到。
專利摘要
本發明公開了一種胎盤組織液的製備方法，該方法包括如下順序進行的步驟1)收集健康胎盤組織，依次用氯化鈉溶液進行浸泡，清水漂洗，得到預處理胎盤組織；2)對預處理胎盤組織進行烘乾、粉碎，製成粉碎胎盤；3)粉碎胎盤與水混合後依次進行超聲提取、離心過濾，得到粗分胎盤組織液；4)對粗分胎盤組織液進行酸水解，過濾，得到酸水解胎盤組織液；5)向酸水解胎盤組織液中加入氯化鈉，調節氯化鈉含量後，進行鹼水解，過濾，得到鹼水解胎盤組織液；6)調節鹼水解胎盤組織液pH，進行精濾，得到精濾胎盤組織液；7)對精濾胎盤組織液進行滅菌。本發明方法工藝簡單，條件溫和，產品中的活性成分含量高，活性高，安全性好，產品生產成本低。
文檔編號A61P1/14GKCN101721458 B發布類型授權 專利申請號CN 200910210335
公開日2012年2月15日 申請日期2009年10月30日
發明者葛龍海 申請人:葛龍海導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (1), 非專利引用 (1),