毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法

2023-06-11 20:28:26

專利名稱：毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測醬油中各種防腐劑含量的方法，尤其是一種毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法。
背景技術：
醬油是一種富含營養、味道鮮美的調味品，受到微生物的汙染時可能發生腐敗變 質，因此，生產廠家會添加一些食用防腐劑來抑制可能形成的腐敗，在醬油中常用的防腐劑有苯甲酸、山梨酸以及對羥基苯甲酸酯類等。國家標準對防腐劑的限量作了明確規定，在安全使用範圍內，防腐劑對人體無毒副作用，但過量食用對人體有一定毒性。目前有關的檢測標準為GB/T 5009. 29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》和GB/T 5009. 31-2003《食品中對羥基苯甲酸酯類的測定》，如果直接採用標準方法進行醬油中各種防腐劑含量的測定，一份樣品要用兩種方法分別進行預處理和採用不同的儀器條件，費時費力。而且經實踐發現，在直接採用該標準對醬油類產品進行檢測時，加標回收率較低，測定結果不穩定，並且在對較為濃稠的老抽類樣品進行萃取時還容易因乳化現象的發生而難以分層進行後續操作。因此直接採用該標準中的氣相色譜法對醬油類產品特別是老抽類樣品進行檢測時，精密度與準確度均不夠理想，這是由於採用外標法定量，無論是樣品處理還是儀器條件都可能導致誤差的產生，繁瑣的測定步驟增加了操作誤差的發生機率，上機測定更是要求必須具有相當高的儀器性能與配置，例如需配置自動進樣器來確保準確控制進樣量等。

發明內容
為克服了現有技術的不足，本發明提供了一種毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，該方法可同時測定醬油中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸以及尼泊金酯類等防腐劑的含量，操作簡便易行，能有效減少操作誤差、以及儀器條件等因素對測定結果的影響，結果準確可靠。本發明的目的是通過以下技術措施來實現一種毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其包括以下步驟
(1)稱取醬油樣品；
(2)在樣品中加入內標物溶液，然後依次進行酸化、乙醚提取，淨化除水和濃縮處理，得到樣品溶液；
(3)取步驟(2)中的樣品溶液進行氣相色譜分析，獲得色譜分析數據；
(4)將步驟(3)的獲得的色譜分析數據與各待測防腐劑的校正因子比對，得到醬油中各種防腐劑的含量。本發明步驟⑴中可根據不同醬油類別稱取所述的醬油樣品的用量。作為本發明中的一個實施例，生抽類醬油推薦稱取量在O. 5^2. 5g範圍之間，而老抽類醬油推薦稱取量在O. 5 I. Og範圍之間。
由於老抽類醬油採用乙醚提取時，易出現乳化，導致無法達到有效提取防腐劑的目的，因而在本發明所述的步驟(I)中如樣品是老抽類醬油時，需對老抽類醬油進行預處理在老抽類醬油樣品中加入氯化鈉溶液稀釋廣2. 5倍。作為本發明的一種實施方式，所述的步驟(2)使用以下具體操作將醬油樣品置於具塞容器中，準確加入O. 3^0. 7ml內標溶液，再加入O. 3^0. 7ml鹽酸溶液，混勻，用2(T40ml乙醚分2次萃取，合併兩次上層溶液，然後在所得的上層溶液中加入3飛ml硫酸氫鈉溶液，振蕩，進行洗滌淨化，靜置，移除下層溶液後向上層溶液中加入:T7g無水硫酸鈉進行除水，然後4(T45°C水浴上吹氮濃縮至O. f lml，再用Π. 5ml丙酮稀釋，即成樣品溶液。在醬油樣品中加入鹽酸酸化後，其中的苯甲酸鈉、山梨酸鉀等以鹽的形式存在的防腐劑轉化為有機酸，用乙醚進行萃取，再用硫酸氫鈉洗滌淨化去除殘留的水溶性幹擾組分，用無水硫酸鈉吸除水，即可上機進行檢測，簡化了醬油樣品預處理的過程，提高了工作效率，同時也減少了有機溶劑的使用。本發明所述的具塞容器可以採用具塞量筒、具塞試管或比色管。本發明所述的步驟(3)推薦的色譜條件為所述的毛細管色譜柱採用極性毛細管色譜柱，要求能對各待測組分與內標物質同時實現良好分離；恆溫或適當的程序升溫均可；恆流或恆壓均可，手動或自動進樣O. 5 I. O μ 1，載氣為高純氮氣，柱頭壓O. 05 IMpa，分流比 50 100 I。所述恆溫的柱溫約20(T220°C。所述的程序升溫條件為初溫12(T130°C，以5 20°C /min的升溫速率升至20(T210°C，再以3 6°C /min的升溫速率升至22(T230°C，保持3 5分鐘。所述的極性毛細管色譜柱可以採用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M等。在本發明中所述的內標物溶液推薦採用脂肪酸酯的丙酮溶液，要求內標峰位於待測組分峰之間，無覆蓋。選用酯類物質的丙酮溶液作內標比用酸類物質更穩定，在冷藏條件下可保存較長時間不變質。所述的脂肪酸酯的丙酮溶液濃度在2 3g/L之間。所述的脂肪酸酯可以是碳數為16 24的脂肪酸甲酯或其它酯類，例如十七烷酸甲酯、二十烷酸甲酯等。本發明所述步驟⑷中各待測防腐劑的校正因子是通過用含O. Γ2. Og/L的內標物溶液的各種待測防腐劑組分的系列標準溶液，在相同的設定的氣相色譜條件下測得。本發明所述的乙醚必須經過碘化鉀溶液檢查，不得含有過氧化物，否則容易造成山梨酸測定結果偏低。本發明的優點在於
(I)檢測精度高本發明採用內標法，有效減少了因進樣量、溶劑損失、待測樣品的濃度等各種因素造成的誤差，即使測定條件略有變化也不會對結果產生影響，若採用外標法定量，則對儀器用具和人員操作的要求很高。
(2)操作時間短本發明能同時用於多種防腐劑的檢測，只用乙醚作為萃取劑進行一次性萃取獲得多種防腐劑的混合液即可，不必按相關國標分別進行預處理和測定，樣品預處理時間比標準方法大大縮短，故能大大縮短了檢測時間。(3)成本低易於推廣本發明操作簡便，對操作人員的要求不高，採取手動進樣，利用性能配置一般的檢測儀器與用具，就能獲得較為理想的測定結果，無需高配置高價位的檢測儀器，通常來說，一套氣相色譜儀價位為數萬元，而有些儀器僅僅自動進樣器一項就需數萬元，因此，本發明大大節約了儀器方面的投資。另外，不必分別進行預處理，節省了試劑的消耗，進一步節約了檢測成本。(4)本發明的極性固定相恆溫分離的條件還能用於對食用植物油的脂肪酸組成常規分析，可在同一臺儀器上實現對兩個檢測項目的交替測定，提高了儀器的利用率。


圖I是本發明實施例一的毛細管氣相色譜色譜 圖2是本發明實施例二的毛細管氣相色譜色譜 圖3是本發明實施例三的毛細管氣相色譜色譜圖； 圖4是本發明實施例四的毛細管氣相色譜色譜圖。
具體實施例方式為了更好地理解發明的實質，下面用實施例來詳細說明發明的技術內容，但本發明的內容並不局限於此。實施例一
1.色譜條件
配置FID檢測器的氣相色譜儀；
毛細管色譜柱為 HP-20M( 25 m X0. 32 mmXO. 30 μ m)
柱溫200°C，汽化室與檢測室均為220°C 手動進樣I. O μ I
載氣為高純氮氣，柱頭壓O. 07Mpa，分流比100 1
2.校正因子測定
配製標準溶液精確稱取苯甲酸、山梨酸各O. 2g，用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製內標溶液精確稱取十七烷酸甲酯O. 2g，用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製標準使用溶液取適量標準溶液與內標溶液混合，內標濃度為O. 4g/L，標準物質濃度則分別為 O. 2,0. 4,0. 6,0. 8、I. Og/L。在上述色譜條件下，用系列標準溶液進樣，以峰面積比和濃度比繪製標準曲線，獲得苯甲酸與山梨酸的校正因子，建立相應的內標分析方法。3.樣品處理
①稱取老抽樣品I. 0g，精確至O. OOlg，再加入I. 5g 200g/L的氯化鈉溶液，置於25ml具塞試管中，準確加入0. 5ml內標溶液，再加入0. 5ml鹽酸溶液(1+1 )，混勻，用30ml乙醚分2次萃取，每次振搖f2min，將兩次萃取所得的上層溶液併入另一個50ml具塞試管中。②在所得的上層溶液中加入4ml 20g/L的硫酸氫鈉溶液，充分振蕩I 2min，靜置l(Tl5min，然後用尖嘴吸管吸除下層溶液，再對保留的上層溶液重複此步驟一次。③在步驟②中所得的上層溶液中加入5g無水硫酸鈉，充分振蕩f2min，將溶液傾入圓底燒瓶中，置於4(T45°C水浴上吹氮濃縮至約0. 5ml，沿壁加入2. Oml丙酮，移入2ml樣品瓶中，供上機用。4.樣品測定
在與標準使用溶液相同的色譜條件下，選取相應的內標分析方法，進樣測定，從色譜工作站讀取測定結果，色譜圖如圖I所示。
實施例二
1.色譜條件
配置FID檢測器的氣相色譜儀；
毛細管色譜柱為 PEG-20M( 30 m X0. 32 mmXO. 25 μ m)
柱溫210°C，汽化室與檢測室溫為230°C 手動進樣O. 5 μ I
載氣為高純氮氣，柱頭壓O. 07Mpa，分流比50 I
2.校正因子測定
配製標準溶液精確稱取苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯各O. 2g,用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製內標溶液精確稱取二十燒酸甲酯O. 2g,用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製標準使用溶液取適量標準溶液與內標溶液混合，內標濃度為O. 4g/L，苯甲酸與山梨酸的濃度則分別為O. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Og/L，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯的濃度則分別為O. 05,0. 1,0. 15,0. 2,0. 25g/L。在上述色譜條件下，用系列標準使用溶液進樣，以峰面積比和濃度比繪製標準曲線，獲得苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯的校正因子，建立相應的內標分析方法。 3.樣品處理
①稱取生抽樣品2. 5g，精確至O. OOlg，置於25ml具塞試管中，準確加入0.5ml內標溶液，再加入O. 5ml鹽酸溶液(1+1)，混勻，用25ml乙醚分2次萃取，每次振搖llmin，將兩次萃取所得的上層溶液併入另一個50ml具塞試管中。②在所得的上層溶液中加入5ml 20g/L的硫酸氫鈉溶液，充分振蕩f2min，靜置l(Tl5min，然後用尖嘴吸管吸除下層溶液，再對保留的上層溶液重複此步驟一次。③在步驟②中所得的上層溶液中加入5g無水硫酸鈉，充分振蕩f2min，將溶液傾入圓底燒瓶中，置於4(T45°C水浴上吹氮濃縮至約O. 5ml，沿壁加入2. Oml丙酮，移入2ml樣品瓶中，供上機用。4.樣品測定
在與標準使用溶液相同的色譜條件下，選取相應的內標分析方法，進樣測定，從色譜工作站讀取測定結果，色譜圖如圖2所示。實施例三
1.色譜條件
配置FID檢測器的氣相色譜儀；
毛細管色譜柱為 PEG-20M ( 30 m X0. 32 mmXO. 25 μ m)
柱溫200°C，汽化室與檢測室溫為230°C 手動進樣0. 6 μ I
載氣為高純氮氣，柱頭壓0. 06Mpa，分流比100 I
2.校正因子測定
配製標準溶液精確稱取苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸各0. 2g，用丙酮溶解並定容至IOOml ；配製內標溶液精確稱取十七烷酸甲酯O. 2g，用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製標準使用溶液取適量標準溶液與內標溶液混合，內標濃度為O. 4g/L，苯甲酸與山梨酸的濃度則分別為O. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. Og/L,脫氫乙酸的濃度則為O. 05,0. 1,0. 15、O.2、0.25g/L0在上述色譜條件下，用系列標準使用溶液進樣，以峰面積比和濃度比繪製標準曲線，獲得苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸的校正因子，建立相應的內標分析方法。
3.樣品處理
①稱取生抽樣品2. 0g，精確至O. OOlg，置於25ml具塞試管中，準確加入0.5ml內標溶液，再加入O. 3ml鹽酸溶液(1+1)，混勻，用20ml乙醚分2次萃取，每次振搖llmin，將兩次萃取所得的上層溶液併入另一個50ml具塞試管中。②在所得的上層溶液中加入3ml 20g/L的硫酸氫鈉溶液，充分振蕩f2min，靜置l(Tl5min，用尖嘴吸管吸除下層，再對保留的上層溶液重複此步驟一次。③在步驟②中所得的上層溶液中加入5g無水硫酸鈉，充分振蕩f2min，將溶液傾入圓底燒瓶中，置於4(T45°C水浴上吹氮濃縮至約O. 5ml，沿壁加入2. Oml丙酮，移入2ml樣品瓶中，供上機用。4.樣品測定
在與標準使用溶液相同的色譜條件下，選取相應的內標分析方法，取樣品溶液進樣測定，從色譜工作站讀取測定結果，色譜圖如圖3所示。實施例四
1.色譜條件
配置FID檢測器的氣相色譜儀；
毛細管色譜柱為 DB-WAX ( 30 m X0. 32 mmXO. 25 μ m)
汽化室與檢測室溫為240°C
初溫130°C，以15°C /min的升溫速率升至210°C，再以5°C /min的升溫速率升至230°C，保持3分鐘。手動進樣0·4μ1
載氣為高純氮氣，柱頭壓0. 08Mpa，分流比50 I
2.校正因子測定
配製標準溶液精確稱取苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯各0. 2g，用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製內標溶液精確稱取十七烷酸甲酯0. 2g，用丙酮溶解並定容至IOOml ；
配製標準使用溶液取適量標準溶液與內標溶液混合，內標濃度為0. 4g/L，苯甲酸與山梨酸的濃度則分別為0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0g/L，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯的濃度則分別為 0. 05,0. 1,0. 15,0. 2,0. 25g/L。在上述色譜條件下，用系列標準使用溶液進樣，以峰面積比和濃度比繪製標準曲線，獲得苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯的校正因子，建立相應的內標分析方法。3.樣品處理
①稱取生抽樣品2. 5g，精確至O.OOlg，置於25ml具塞試管中，準確加入0.5ml內標溶液，再加入O. 6ml鹽酸溶液(1+1)，混勻，用40ml乙醚分2次萃取，每次振搖llmin，將兩次萃取所得的上層溶液併入另一個50ml具塞試管中。②在所得的上層溶液中加入5ml 20g/L硫酸氫鈉溶液，充分振蕩lmin，靜置l(Tl5min，然後用尖嘴吸管吸除下層溶液，再對保留的上層溶液重複此步驟一次。③在步驟②中所得的上層溶液中加入5g無水硫酸鈉，充分振蕩f2min，將溶液傾入圓底燒瓶中，置於4(T45°C水浴上吹氮濃縮至約O. 5ml，沿壁加入2. 5ml丙酮，溶解殘渣，移取2ml溶液入樣品瓶中，供上機用。4.樣品測定
在與標準使用溶液相同的色譜條件下，選取相應的內標分析方法，取樣品溶液進樣測定，從色譜工作站讀取測定結果，色譜圖如圖4所示。以上對本發明所提供的方法進行了詳細介紹，本文中應用了具體個例對本發明的 原理及實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是用於幫助理解本發明的方法及其核心思想；同時，對於本領域的一般技術人員，依據本發明的思想，在具體實施方式
及應用範圍上均會有改變之處，綜上所述，本說明書內容不應理解為對本發明的限制。
權利要求
1.一種毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，其包括以下步驟 (1)稱取醬油樣品； (2)在樣品中加入內標物溶液，然後依次進行酸化、乙醚提取，淨化除水和濃縮處理，得到樣品溶液； (3)取步驟(2)中的樣品溶液進行氣相色譜分析，獲得色譜分析數據； (4)將步驟(3)的獲得的色譜分析數據與預定防腐劑標準數據比對，得到醬油中各種防腐劑的含量。
2.根據權利要求I所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的步驟(2)的具體操作將醬油樣品置於具塞容器中，準確加入O.3^0. 7ml內標溶液，再加入O. 3^0. 7ml鹽酸溶液，混勻，用2(T40mlこ醚分2次萃取，合併兩次上層溶液，然後在所得的上層溶液中加入3飛ml硫酸氫鈉溶液，振蕩，進行洗滌淨化，靜置，移除下層溶液後向上層溶液中加入:T7g無水硫酸鈉進行除水，然後於4(T45°C水浴上吹氮濃縮至O. f lml，再用Π. 5ml丙酮稀釋，即成樣品溶液。
3.根據權利要求I或2所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的步驟(2)中的內標物溶液採用脂肪酸酷的丙酮溶液。
4.根據權利要求3所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的脂肪酸酷的丙酮溶液濃度在2 3g/L之間。
5.根據權利要求4所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的脂肪酸酯為碳數為16 24的脂肪酸甲酷。
6.根據權利要求5所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的步驟(3)的色譜條件為所述的毛細管色譜柱採用極性毛細管色譜柱，要求能對各待測組分與內標物質同時實現良好分離；恆溫或適當的程序升溫；恆流或恆壓,手動或自動進樣,載氣為高純氮氣。
7.根據權利要求6所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的極性毛細管色譜柱採用HP-20M、DB-WAX或者PEG-20M。
8.根據權利要求7所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的步驟(I)中根據不同醬油類別稱取所述的醬油樣品的用量。
9.根據權利要求7所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的步驟(I)中的醬油是老抽類醬油時，需對老抽類醬油進行預處理。
10.根據權利要求9所述的毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其特徵是，所述的預處理為在老抽類醬油樣品中加入氯化鈉溶液稀釋f 2. 5倍。
全文摘要
本發明公開了一種毛細管氣相色譜內標法同時測定醬油中各種防腐劑含量的方法，其包括以下步驟(1)稱取醬油樣品；(2)在樣品中加入內標物溶液，然後依次進行酸化、乙醚提取，淨化除水和濃縮處理，得到樣品溶液；(3)取步驟(2)中的樣品溶液進行氣相色譜分析，獲得色譜分析數據；(4)將步驟(3)的獲得的色譜分析數據與預定防腐劑標準數據比對，得到醬油中各種防腐劑的含量。該方法可同時測定醬油中的苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸以及尼泊金酯類等防腐劑的含量，操作簡便易行，能有效減少操作誤差、以及儀器條件等因素對測定結果的影響，結果準確可靠。
文檔編號G01N30/88GK102707002SQ20121016541
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月25日 優先權日2011年5月27日
發明者劉佔, 張慶宇, 曾亞麗, 李婕, 楊明泉, 樊瑞, 陳穗 申請人:廣東美味鮮調味食品有限公司