一種亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的檢測方法
2023-09-23 04:06:15
專利名稱：一種亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物檢測方法，特別涉及一種亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的有關物質檢測方法。具體的講是一種新的採用UPLC儀器的方法檢測亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯有關物質的方法。
背景技術：
亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯為一種抗菌消炎藥物，其製劑的名稱為蓮必治注射液，已有產品上市銷售。現有亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的質量標準無有關物質測定方法。中國新藥雜誌2005年14卷7期中報導了一種用HPLC檢測亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯有關物質的方法，若採用該方法檢測並使用DAD檢測器進行全波長掃描，可發現其主峰的峰純度不高，顯示有雜質峰包含在主峰內，因此，採用文獻已報導的有關物質測定方法檢測，結果不準確。同時，文獻報導的方法檢測時間較長。所述的有關物質即亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯製備過程中殘留在成品中的類似物，異構體，中間體等雜質成分，一般難以分離除去，也難以通過常規方法檢測到，為控制產品質量，提高產品純度，檢測有關物質的含量和分離去除有關物質是必要的，因此本發明在於尋找一種快速，準確，適合工業化的檢測方法。本發明經過篩選，找到一種靈敏度高、雜質和主成分亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的分離度高的高效液相色譜檢測法，和現有技術相比，操作簡單，重現性好，峰純度高，準確度高，檢測時間短，為亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯後續的一些研究工作開展創造有利條件。
發明內容
本發明提供一種靈敏度高，雜質和主成分亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的分離度高的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的含量測定方法，該方法採用超高效液相色譜法，具體包括以下步驟步驟1，配製亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液；步驟2，配製亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯對照品溶液；步驟3，將上述溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖；步驟4，根據色譜圖計算亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品的有關物質的含量。其中的色譜條件為色譜柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um粒徑，
2.lmm*50mm，柱溫 20°C _50°C，流動相 A 相0. 001-0. 2mol/L 磷酸二氫鉀和 O. 01-0. lmol/L四丁基硫酸氫銨溶液相甲醇，兩者體積比例為A相55-95 B相45_5，優選A相60-70 B相40-30，最優選A相68 B相32，梯度方式為恆流，檢測波長220nm，流速O. 5ml/min ；優選的色譜條件為柱溫40°C，流動相A相0. 01-0. 05mol/L磷酸二氫鉀和O. 03-0. 08mol/L四丁基硫酸氫銨溶液；兩者體積比例為A相60-70 B相40-30，檢測波長220nm，更優選的色譜條件為柱溫40°C，流動相A相0.02mol/L磷酸二氫鉀和0. 05m0l/L四丁基硫酸氫銨溶液；兩者體積比例為A相68 B相32，檢測波長220nm。其中步驟I所述的供試品溶液的配製方法如下精密稱取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品，加水製成0. 01-10mg/ml的溶液。優選的，配製成0. l-4mg/ml的溶液，更優選的是0. 5-3mg/ml的溶液,最優選的是2mg/ml的溶液。其中步驟2所述的對照品溶液的配製方法如下精密量取亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液，加水製成0. 005-2mg/ml的溶液；優選的，配製成0. Ο1-lmg/ml的溶液，更優選的是0. 02-0. 5mg/ml的溶液，最優選的是0. 02mg/ml的溶液。其中步驟3，吸取供試品和對照品溶液，注入液相色譜儀檢測，進樣量10μ 1，本發明所述亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥樣品為工業化生產得到的未知有關物質的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥產品。通過以上方法得到對照品和供試品的色譜圖，用峰面積自身對照法可以計算出樣品中亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的有關物質的含量，計算公式如下(供試品總峰面積一供試品主峰面積)+對照品主峰面積X100%以上公式中主峰係指亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯峰。本發明的有關物質測定方法是經過對色譜條件的充分摸索和篩選得到的，屬於最優選的方法。以下的一些試驗可以表明本發明上述的檢測方法的可行性、準確性和可靠性。一 檢測波長的選擇取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加水溶解製成約2 mg/ml的供試品溶液，按照上述方法進行測定，並採用DAD檢測器進行全波長掃描。 檢測圖譜表明，亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯及其有關物質在檢測波長220nm處有最大吸收。因此，選定220nm為檢測波長。二 系統適用性取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加水溶解製成約2 mg/ml的供試品溶液，按照上述方法進行測定。各成分峰的理論塔板數大於2000，符合要求；均達到基線分離，符合要求；拖尾因子在0. 8-1. 2之間，符合要求。該方法的系統適用性符合要求。三專屬性取配製供試品溶液的純水，按照上述色譜條件進行測定，記錄圖譜，如
圖1。取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加水溶解，在沸水浴中保溫2小時，取出冷卻，加水稀釋製成約2 mg/ml的供試品溶液，按照上述色譜條件進行測定，記錄圖譜，如圖2。取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加入2m0l/L的鹽酸適量溶解，在沸水浴中保溫2小時，取出冷卻，用2m0l/L的氫氧化鈉溶液調節PH至接近中性，加水稀釋製成約2 mg/ml的供試品溶液，過濾，按照上述色譜條件進行測定，記錄圖譜，如圖3。取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加入2m0l/L的氫氧化鈉適量溶解，在沸水浴中保溫2小時，取出冷卻，用2m0l/L的鹽酸調節PH至接近中性，加水稀釋製成約2 mg/ml的供試品溶液，過濾，按照上述色譜條件進行測定，記錄圖譜，如圖4。取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加入3%的過氧化氫適量溶解，在沸水浴中保溫2小時，取出冷卻，加水稀釋製成約2 mg/ml的供試品溶液，過濾，按照上述色譜條件進行測定，記錄圖譜，如圖5。觀察上述圖譜，如圖1，空白對照無幹擾；如圖2 圖5，主峰與雜質峰達到基線分離，專屬性符合要求。四檢測限取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加水稀釋至很小濃度，進樣檢測，取信噪比為約3:1時樣品的濃度為檢測限，如圖6，此時主峰信噪比為3. 4，進樣濃度為O. 5ng/ml，最低檢測濃度為約O. 5 ng/ml。中國新藥雜誌2005年14卷7期890頁「亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的有關物質測定的方法學研究」中報導的最低檢測濃度為O. 4ug/ ml。很明顯，本方法的靈敏度大大優於文獻報導的方法。五線性關係試驗取恆重後的亞硫酸 氫鈉穿心蓮內酯原料藥適量，加水溶解製成約2 mg/ml的供試品溶液，作為忙備液，分別用 流動相稀釋至O. 16mg/ml、0. 18mg/ml、0. 19mg/ml、0. 20mg/ml、
0.22mg/ml、0. 24mg/ml，分別按照上述方法進行測定，根據測定得到的結果，以濃度為X軸、主峰面積為Y軸，進行線性回歸分析。濃度及峰面積如表1，標準曲線、線性回歸方程及R2見圖7表1:線性關係試驗結果
權利要求
1.一種亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的檢測方法，採用超高效液相色譜法，其特徵在於，該方法包括以下步驟 步驟1，配製亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液； 步驟2，配製亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯對照品溶液； 步驟3，將上述溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖； 步驟4，根據色譜圖計算亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品中有關物質的含量， 其中的色譜條件為色譜柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um粒徑，2. lmm*50mm，柱溫 20°C _50°C，流動相 A 相0. 001-0. 2mol/L 磷酸二氫鉀和 O. 01-0. lmol/L四丁基硫酸氫銨溶液相甲醇，兩者體積比例為A相55-95 B相45-5，梯度洗脫方式為恆流，檢測波長220nm,流速O. 5ml/min。
2.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，其中步驟I所述的供試品溶液的配製方法如下精密稱取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品，加水製成O. 01-10mg/ml的溶液，其中步驟2所述的對照品溶液的配製方法如下精密量取亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液，加水製成O. 005-2mg/ml的溶液，
3.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，其中步驟I所述的供試品溶液的配製方法如下精密稱取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品，加水製成O. 5-3mg/ml的溶液，其中步驟2所述的對照品溶液的配製方法如下精密量取亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液，加水製成O. 02-0. 5mg/ml的溶液。
4.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，其中步驟I所述的供試品溶液的配製方法如下精密稱取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品，加水製成2mg/ml的溶液，其中步驟2所述的對照品溶液的配製方法如下精密量取亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液，力口水製成O. 02mg/ml的溶液。
5.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，其中步驟3所述吸取供試品和對照品溶液，注入液相色譜儀檢測，其中的進樣量為10μ I。
6.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，其中色譜條件為色譜柱watersAcquity UPLC BEH C18 柱，1. 7um粒徑，2.柱溫40°C,流動相 A相:0. 01—0. 05mol/L磷酸二氫鉀和O. 03-0. 08mol/L四丁基硫酸氫銨溶液；兩者體積比例為A相60-70 B相40-30，檢測波長220nm。
7.如權利要求6所述的檢測方法，其特徵在於，其中色譜條件為色譜柱:watersAcquity UPLC BEH C18 柱，1. 7um 粒徑，2.柱溫 40°C,流動相 A 相O. 02mol/L磷酸二氫鉀和O. 05mol/L四丁基硫酸氫銨溶液；兩者體積比例為A相68 B相32，檢測波長220nm。
8.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，步驟如下精密稱取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品，加水製成lmg/ml的溶液，作為供試品溶液；精密量取亞硫酸氫鈉穿心連內酷供試品溶液，加水製成O. O lmg/ml的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品和對照品溶液各適量，注入液相色譜儀檢測，進樣量10 μ 1，色譜柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um 粒徑,2. lmm*50mm,柱溫 40°C,流動相 A 相O. 03mol/L 磷酸二氫鉀和 O. 04mol/L四丁基硫酸氫銨溶液；兩者體積比例為A相65 :B相35，檢測波長220nm，峰面積自身對照法可以計算出樣品中亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的有關物質的含量。
9.如權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，步驟如下精密稱取恆重後的亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯樣品，加水製成2mg/ml的溶液，作為供試品溶液；精密量取亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液，加水製成O. 02mg/ml的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品和對照品溶液各適量，注入液相色譜儀檢測，進樣量10μ 1，色譜柱waters Acquity UPLC BEH C18柱，1. 7um 粒徑,2. lmm*50mm,柱溫 40°C，流動相 A 相:O. 02mol/L 磷酸二氫鉀和 O. 05mol/L四丁基硫酸氫銨溶液；兩者體積比例為A相68 :B相32，檢測波長220nm，峰面積自身對照法可以計算出樣品中亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的有關物質的含量。
全文摘要
本發明涉及一種亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯的有關物質檢測方法，步驟如下步驟1，配製亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品溶液；步驟2，配製亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯對照品溶液；步驟3，將上述溶液注入高效液相色譜儀，得到色譜圖；步驟4，根據色譜圖計算亞硫酸氫鈉穿心蓮內酯供試品中有關物質的含量。
文檔編號G01N30/02GK103063772SQ20121057422
公開日2013年4月24日 申請日期2012年12月25日 優先權日2012年12月25日
發明者吳凌雲, 朱音, 姜迎慶 申請人:無錫濟民可信山禾藥業股份有限公司, 江西濟民可信金水寶製藥有限公司