核桃殼提取物的製備及其在強心和心腦血管領域藥物製劑的應用的製作方法

2023-10-06 22:31:39 1

專利名稱：：核桃殼提取物的製備及其在強心和心腦血管領域藥物製劑的應用的製作方法
技術領域：
：本發明是屬於醫藥領域，特別是天然藥物領域中天然藥理活性成分的提M其在心臟和心腦血管疾病防治藥物製劑的用途。本發明涉及一種天然核桃殼活性成分的提取製備方法，更具體地說是從核桃下腳料核桃殼中經7JC或一定濃度的乙醇提取得到活性成分群，該活性成分群富>^核桃醌、其苷、鞣質、多糖及植物蛋白類成分。本發明公開了其提取製備方法，和以該提取物為活性成分的藥物組合物，以及該組合物在製備強心和改善心肌缺血及心腦血管病防治藥物製劑中的應用。該4^取工藝是醫藥保健品領域中天然產物的製備技術。它揭示了一種可產業化提取製備的工藝技術。二
背景技術：
：核桃殼為胡桃科植物胡桃JuglansregliaL.成熟果實的硬殼。核桃又名胡桃、晃桃，通常以核桃仁入藥，具有補腎益精，溫肺定喘等功效。核桃在我國具有2000多年的栽培歷史，世界上出產核桃的國家很多，除我國外，還有美、法、意、印度、土耳其等國；其中產量、面積最大的是中國和美國，合計年產量超過世界總產量的80%。核桃樹在我國絕大總分省區均有栽培分布，面積有1000多萬畝，自然資源十分豐富。19世紀80年代以後，我國核桃產量呈穩步上升趨勢。2002年核桃年產量已達30萬噸。隨著優質樹種的推廣種植，核桃產量還在逐年增長。核桃仁營養豐富，蛋白質和不飽和脂肪酸含量高，特別適合人體吸收利用，具有較高的營養保健和藥用價值。核桃仁可作為保健食品加工成各種美食。隨著近年來核杉^工業的JUl，大量的核桃殼下角料得以收集利用。核書^工出仁率按45~50%計算，核桃出殼率達50~55%，折算起來現在每年可有15~20萬噸的核桃殼資源可以利用。現在核桃殼主要直接作為生產活性炭的原料，製造環保濾料進行汙水處理，以及在油田中應用、研磨材料製造等，目前核桃殼作為藥物來研究利用還很少。現代研究表明核桃殼具有抗氧化活性，能有效地清除OH-自由基，而對02-無清除作用，可與同濃度的茶多酚相媲美。但單純抗氧化活性，很難確定其在哪一類疾病中應用能有較好的防治效價。核桃殼的藥理活性、功能主治的研究在國內外開展還很少，影響這一豐富天然資源的有效開發和利用，長期以來造成這一藥物資源的巨大浪費。我們知道，心腦血管疾病仍是人類健康的大敵，是老年常見病和多發病，發病率和死亡率仍居各類重大疾病之首。在臨床上治療心衰的天然強心藥以洋地黃類藥物(如地高辛)為主而廣泛應用，但這一類藥物毒性很大，治療範圍窄，有效劑量與中毒劑量接近，很容易引發中毒事件，給用藥的安全造成隱患，病人不可以長期大量使用。因此尋找天然低毒有效的強心藥物，對心臟病人及心衰患者長期安全用藥，擺脫疾病的困擾意義重大。再者，心肌供血不足是導致心臟損傷和慢性功能衰減、逐漸走向衰竭的重要原因，改善心肌供血是減少和預防相關疾病發生、A艮的重要治療措施。同樣，降〗Mt脂的藥物，可以有效防治動J3^化的發生，對防治心腦血管疾病，抗衰老有重要意義本發明以核桃下腳料核桃殼為原料，經過挑選、粉碎、過篩、乙醇回流提取，回收溶劑，乾燥得到有效成分研細，製劑等工序，製備而得。藥物含有核桃醌及其苷、鞣質等成分.具有工藝簡單，成分及藥效穩定，容易實現產業化生產的特徵。其強心作用及改善心肌缺血藥理活性均為首次發現的新藥理活性；另外還具有一定的降血脂和調節血壓功效，可用於防治動JI^化。因而可用於心腦血管疾病防治藥物的應用。藥理活性研究表明，醇提取和7jC提取的總提取物具有強心活性及改善心肌供血的功效，而且對機體的肝脾腎無損傷，不損傷免疫功能，完全有可能成為具有良好的心臟病和心腦血管疾病防治功效新的中藥材品種.在發揮心臟活性的同時對機體基本沒有副作用，是一種具有防治心衰和心腦血管疾病功效的天然植物成分藥，這也是首次發現核桃殼提取物全新的藥理活性.本發明還公開了核桃殼在用於製備改善心肌供血、強心活性及降血脂作用等心腦血管方面藥理活性防治藥物製劑的研究應用.本發明的再一個目的在於，提供了幾種以核桃殼提取物為活性成分的藥物組合物的配方和製劑劑型。本發明所述的核桃殼提取物治療有效劑量為50~500mg;較好為100~350mg;最佳150300mg,本發明所述的核桃殼提取物藥物組合物，它是由核桃殼7jc或乙醇及其總提取物和藥學上應用的各種製劑輔料，通過合理組合製成的用於醫療目的口服製劑，所述的藥物組合物製劑包括片劑、膠嚢、散劑、顆粒劑和滴丸劑等口服製劑.所述的藥學上可接受的載體，包括製劑中常規的稀釋劑、填充劑(如乳糖、聚乙二醇)，粘合劑(澱粉、微晶纖維素)，崩解劑(如羧曱基纖維素、低取代的雍丙基纖維素)，潤滑劑(如滑石粉、硬脂酸鎂)，溼潤劑(如丙二醇、乙醇)，穩定劑(EDTA-2Na、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、乙醇胺、碳酸氫鈉、煙醯胺)等等.上述輔料可以是常用劑量，以常用的配比與核桃殼提取物混合，當核桃殼提取物用量確定後，各藥用輔料之間的配比可以根據需要適當調節。
發明內容
發明內容包括以下幾個方面1.提取工藝研究採用水和不同濃度的乙醇回流進行提取，得到醇提取物，2.急性毒性研究使用23-25克的ICR小鼠30隻，J^M^半進行實驗，3.強心藥理活性研究用離體大鼠心臟進行強心活性的研究，每組6隻。3.改善心肌缺血作用研究用大鼠整體實驗觀察改善心肌缺血活性。4.降血脂活性的研究使用大鼠高血脂膜型進行降血脂活性研究。5.口服製劑的劑型研究包括片劑、膠嚢劑、散劑、顆粒劑及滴丸劑的研究製備，(一)、提取製備工藝研究核桃去殼下腳料核桃殼，經挑選、粉碎過篩、回流提取、回收溶劑、轉移乾燥等工序得到核桃殼活性提取物，提取率5-9%,所用溶劑為水和不同濃度的乙醇.(二)、急性毒性實驗核桃殼水醇法總提取物的急性毒性實驗ICR小鼠10隻/組，在口服2000mg/kg、4000mg/kg、6000mg/kg時均無死亡，而且飲食、精神均正常，而其最佳有效劑量為50~500mg/kg，可見藥物基本無毒，很安全。(三)、強心藥理活性研究核桃殼提取物htl、ht2對離體心臟作用方法Wistar大鼠每組6隻，12%水合氯醛360mg/kg，ip。經舌下靜脈注射5mg/ml肝素10mg/kg進行全身肝素化。開胸，取出心臟，立即置通95%02+"/。C02的4iCK-H液中使心臟停搏，找到主動脈，將灌流裝置接口管插入主動脈，然後置Langendorff灌流裝置中，打開通95%02+5%0)2的K-H液灌流液進行冠狀動脈逆向灌注(灌流液面與主動脈口相距40cm)。心尖處縫合無損傷縫合線經萬能滑輪接張力換能器，換能器位移信號放大後，經MP-150多導生物信號採集系統將數位訊號輸入計算機，採集並進行分析心率(HR，bpm)、心臟收縮力(T，g力)及心臟收縮變化速率(±dT/dt,g力/s)。平衡30min後，分別給予不同濃度的受試藥物，觀察^項指標的變化。結果(htl為水醇法總提取物；而ht2為70-100%乙醇提取部分)htl2.4、8.0mg/L可使心臟收縮力增加，最高可達24%,心臟收縮變化速率亦增加'ht20.75、2.5mg/L可使心臟收縮力增加，最高可達59%，心臟收縮變化速率亦增加。結果見表1。可見有效部位(ht2)提取物的活性要明顯強於總提取物.表l核桃殼提取物htl、ht2對離體心臟作用G±s，n=6)tableseeoriginaldocumentpage7注*P<0.05，"P<0.01，***P<0.001vscontrol.Iso為陽性對照藥——異丙腎上腺素.(四)、改善心JWWr活性研究核桃殼提取物對大鼠急性心肌缺血作用的試驗研究1.試驗目的觀察核桃殼提取物對大鼠急性心肌缺血的保護作用，以期為臨床應用4l:供試JiH^據。2.藥物與試劑核桃殼提取物(以下簡稱HT):7jc醇揭，取法之總揭^取物，批號07012,以1。/qCMC配製成6、20、60mg/mL不同濃度溶液供大鼠灌胃用。硝酸異山梨酯(IsosorbideDinitrate，ID):5mg/片，每瓶100片。天津太平洋製藥有P^公司生產，批號060402。以1%CMC配製成4mg/mL的混懸液供大鼠灌胃用.3.動物及儀器Wistar大鼠，SPF級，中國醫學科學院放射醫學研究所提供，動物合格證號SCX津2005-0001。MP150多導生物信號採集與分析系統，Biopac公司產品o4.實驗方法wistar大鼠78隻，##各半，體重280.6土8.9(266~297)g，糾重隨機分為6組，每組10隻。分別給予1%CMC(假手術對照、模型對照組)、核桃殼70-100%乙醇提取物30、100、300mg/kg(受試藥物組)、單硝酸異山梨酯20mg/kg(陽性藥物組).給藥體積均為5ml/kg體重，每天1次，連續給藥5天。末次給藥後lh，動物經乙醚全身麻醉後，測定正常II導心電圖(作正常對照)後左胸部去毛，常規哄酒、酒精消毒，以左鎖骨正中線與第四肋骨交點為中心，沿鎖骨正中線切開皮膚、肌層，環肌層作荷包縫合，串線備扎，切斷笫四肋骨，以環形勾將心臟拉出胸腔，於左心耳下與肺動脈圓錐之間，距冠脈前降JU^始部1.5咖處以6/0號無損傷縫合絲線結紮冠脈左前降支(方法見附圖)，假手術組不作結紮，將心臟放回胸腔，抽出胸腔內空氣，並作肌層的荷包結紮，縫合皮膚；隨後經J^!t注射12W水合氯醛360mg/kg體重麻醉動物，測定結紮冠脈後5、10、15、20、30、45、60、90、120minII導心電圖，並置籠祠養。5.試驗結果:5.l核桃殼提取物對大鼠II導聯心電圖ST段的影響大鼠冠脈前降支結紮後，II導心電圖ST段明顯抬高，與假手術對照組比較差異有顯著性意義(P<0.001)，呈現明顯的缺血性損傷表現，ST段抬高可持續至2h。大鼠口服給予核桃殼提取物30mg/kg,每天1次，連續5天後，可使5~20minECG的ST段顯著降低，100、300mg/kg可使560minECGII的ST段顯著降低，與模型對照組比較差異有顯著性意義。結果見表l。5.2核桃殼提取物對大鼠心率(冊)的影響大鼠口服給予核桃殼提取物30、100、300mg/kg，每天1次，連續5天後，對心率無明顯影響.結果見表2。表1.核桃殼提取物對大鼠ECG-ST段影響(mV,5i士s,n-lO)組別劑量_給藥後(mg/kg〉給藥前510152030456090120min一0.070.070.070.060,050.060.040.060.040.08假手術±0.03±0.04±0.06±0.06±0.03±0.05±0.03±0.04±0.03±0.06—0.060,380.380.360.360.360.330.320.280.30模型±0.03士0.08一±0,l(T±0.10"士O.10*"±0.07一土O.07"*士O.08,±0.08***士O.09*"300.040.280.260.240.240.290.270,270.310.28HT±0.03±0.06f+±0.12*±0.If±0.14+士O.07±0.07±0.07±0.11士O.111000.060.170.190.170.160.150.180.180.220.24HT±0.06±0.09"+±0,l廣士0.09"'士O.0廣±0.09"+±0.08"+±0'08"±0,07±0.093000.070.170.170.130.160.150.190.170,210.23HT±0.07±0,廣±0.13*"±0.l(T±0.14"±0.07+"±0.11++±0.09"+±0.09±0.10200.040.200.180.160.170.170.160.200.210.23ID±0.03±0.13"±0,l廣±0.09"+±0.10"'±0.09"+±0.l廣±0.09"±0.08±0.14注l.與假手術組非配對t檢驗比較",P〈0.001;2.與模型組非配對t檢驗比較+P〈0.05,++P<0.01，+++P0.05;2.與模型組非配對t檢驗比較P>0.05.6.結論採用大鼠冠脈前降支結紮法造成的急性心肌缺血模型，觀察核桃殼提取物的抗心肌缺血作用。結果表明，大鼠口月艮給予核桃殼提取物30mg/kg，每天1次，連續5天後，可使520minECG的STM著降低，100、300mg/kg可使560minECGII的ST段顯著降低，與模型對照組比較差異有顯著性意義。大鼠口服給予核桃殼提取物30、100、300mg/kg，每天1次，連續5天後，對心率無明顯影響.上述結果提示，口服給予核桃殼提取物對大鼠急性心肌缺血有明顯的治療效果.(五)、降血脂活性的研究取大鼠60隻，分組、口服給藥，連續30d，同時除陰性對照組餵食J^！飼料外，其餘4組餵食高脂飼料鵬固醇3%、豬油10%、蛋黃粉5%、甲基硫氧嗜啶O.3%、M飼料81.7。/。，充分拌勻後加適量7j^E成小塊^用).取血前禁食12h，於笫15和30天分別斷頭6隻取血，測定血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)含量。結果表明給藥組能明顯降低高脂飼##發的大鼠血清高膽固醇(TC)及甘油三酯(TG)，升高高密度脂蛋白(HDL-C)的含量，結果M3。表明藥物具有較明顯降血脂防治動JJ^化的功效。表3受試大鼠實驗前及實驗笫15、30dTC、TG和HDL—C含量(咖ol/L，X±s)tableseeoriginaldocumentpage10注與高血脂模型組相比，"<0.05;**P1,(4)顆粒衝劑袋^it溶顆粒劑。(5)滴丸劑增加吸收率和吸j(fclt度，起效快.各種藥物製劑的製備具體^^ft如下(1).按配置總量計稱取含10~70%核桃殼提取物，加入30~90%的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑等，充分攪拌混合製成顆粒，在60~701C乾燥2~4小時後，壓製成片，使每片含核桃殼提取物50150mg。(2).或將製成的顆粒直接充填入各種空膠嚢殼中，使每粒膠嚢含核桃殼提取物50200mg，為膠嚢劑，當然各製劑配比及輔料選用會有所差異，(3)按配置總量計稱取含20~70%核桃殼提取物，加入30-80%的助溶劑如糊精、矯味劑等，溶解均勻後乾燥，磨細粉裝袋，即得粉劑.(4).按配置總量計稱取含10%~60%核桃殼提取物，加入40%~90%的填充劑、崩解劑、矯味劑等，充分攪拌混合用12~14目篩製成顆粒。在60~70\:乾燥充分後裝袋，使每克顆粒劑含核桃殼提取物100~500mg,(5)按配置總量計稱取含10%~60%核桃殼提取物，加入40%~90%的助溶劑聚乙二醇、抗氧劑等，加熱熔融溫度(40~901C)，使原料和輔料充分混溶，滴製成丸，使每粒滴丸含核桃殼提取物5~20mg。本發明的施藥量可根據用藥途徑、患者年齡、體重、疾病類型和嚴重程度等諸多因素加以調整，日劑量為一般為50~500mg;i^好為100~250mg;最佳150200mg。可才艮據臨床的病例表現適當加以改變。具體實施例方式下面通過實施例對本發明做進一步說明，但並非是對本發明的限制實施實例1:1,500g核桃殼，粉碎過20目篩，加1200~1500ml的70%乙醇回流提取4次，每次回流l小時，合併乙醇液旋轉蒸發，601C回收乙醇，轉移放入60t:烤箱乾燥，得到32.6克棕紅色提取物，提取率6.5%,2.2000g核桃殼，粉碎過20目篩，加10000~12000ml的無水乙醇回流提取4次，每次回流l小時。合併乙醇液旋轉蒸發，601C回收乙醇，轉移;^601C烤箱乾燥，得到120.5克棕紅色提取物，提取率6.1%.3.2000g核桃殼，^^碎過20目篩，加10000~12000ml的95%乙醇回流^>取3次，每次回流1小時。殘料以10000ml蒸鎦7JC再回流1小時，提取2次，合併水醇液旋轉蒸發，601C回收乙醇，轉移iL^601C烤箱乾燥，得到172.0克棕紅色提取物，提取率8.6%。實施例2:取核桃殼4C取物500g，藥用澱粉300g，糊精300g，50%乙醇適量，將上述原料充分攪拌混合製成顆粒，在60~70€乾燥2~4小時，壓製成10000片，包糖衣，每片含核桃殼提取物0.05g。實施例3:取核桃殼提取物500g，藥用澱粉500g，50%乙醇適量，制粒，整粒，烘乾，裝2#膠囊，每粒0.1g.實施例4:M桃殼提取物500g，藥用澱粉300g，糊精300g，50%乙醇適量，將上述原料充分攪拌混合製成顆粒，在60~70匸乾燥2~4小時，裝袋封口，即為顆粒衝劑。實施例5:取核桃殼提取物40g，聚乙二醇-400020g，聚乙二醇-600060g，焦亞硫酸鈉適量，加熱熔融溫度(40~900，使原料和輔料充分混溶，滴製成20000粒滴丸，使每粒滴丸含核桃殼提取物3.0~5.Omg。儘管本發明結合它專門的實施例已做了詳細的描述，但是很明顯對M術領域熟悉的人士來說仍能做出各種各樣的變化和改進，但都不會偏離本發明的精神實質和保護範圍。權利要求1.工藝方法一種以水或乙醇提取核桃殼提取物的工藝方法，該工藝包括，取去除核桃仁的核桃殼下腳料，經粉碎、過篩、提取回收溶劑和烘乾、研細工藝，得到富含核桃醌其苷、鞣質、多糖及植物蛋白等活性成分。2.—種以核桃殼提取有效部位為活性成分的藥物組合物，該組合物含有治療有效量的活性提取物，及一種或一種以上的藥學上可接受的載體。製成的口服製劑有片劑、散劑、膠嚢劑，以及滴丸劑。3.核桃殼提取物用於製備強心藥物、改善心肌缺血藥物的應用.4.核桃殼有效部位提取物在降血脂、調節血壓防治動脈硬化及心腦血管疾病方面藥物的應用。5.以其他有機溶劑提取，或通過其他分離工藝手段得到的核桃殼有效活性成分或部位用於強心及心腦血管藥物製劑領域的應用。全文摘要本發明公開了一種天然核桃殼提取物的乙醇提取的製備方法，及以該提取物為活性成分的藥物組合物及相關藥理學的研究結果。將核桃殼經粉碎、乙醇煮提，濃縮、乾燥，得到棕紅色提取物。該提取方法具有工藝簡短，提取物收率較高的特徵，易於實現產業化生產。核桃殼的藥用價值的發現及產品開發可以避免天然藥物資源的巨大浪費。藥理活性研究表明，核桃殼提取物具有一定的強心及改善心肌供血等活性，有可能研製成為具有多種藥理活性低毒高效的天然中藥的心腦血管病治療新藥。取治療有效量的提取物與藥用輔料混合製成多種不同藥物組合物的各種口服製劑。文檔編號A61K36/52GK101274011SQ20071005699公開日2008年10月1日申請日期2007年3月26日優先權日2007年3月26日發明者冰於,何小雲,劉厚孝,周則衛,秀沈,王曉雪,王維亭,趙專友,魯卓林申請人:中國醫學科學院放射醫學研究所;天津藥物研究院