一種採收迷迭香的方法和製備具有抑菌活性提取物的方法

2023-10-07 06:22:44 2

專利名稱：一種採收迷迭香的方法和製備具有抑菌活性提取物的方法
技術領域：
本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種採收迷迭香的方法和製備具有抑菌活性提取物的方法。
背景技術：
迷迭香(Rosmarinusofficinalis L.)是唇形科多年生常綠亞灌木,原產於地中海地區，主要分布於法國、西班牙、土耳其和義大利等地。1981年由中國科學院植物研究所北京植物園引種至我國，在貴州、雲南、廣西、海南和新疆等地都有栽種。迷迭香精油的主要成分為單萜及其衍生物，包括α -菔烯，1，8-桉葉素，樟腦，莰 烯和龍腦等。根據ISO標準，迷迭香精油的化學型有兩種，即突尼西亞-摩洛哥型(Tunisianand Moroccan type)和西班牙型(Spanish type)。前者以1，8_桉葉素為主要成分，佔38%-55% ;後者α -菔烯、1，8_桉葉素、樟腦三種成分的含量相仿，在12. 5%_26%之間(Bruneton, 1999)。除此之外還存在一些不常見的香型,例如土耳其迷迭香精油p-cymene/linalool/ y -terpinen 香型、葡萄牙的 myrcene/ a -pinene/1, 8-cineole 香型和古巴的camphor/1, 8-cineole/borneol香型。根據文獻報導,我國貴州、福建、雲南、新疆、廣西等地產迷迭香精油的香型均為西班牙型。由上可知，迷迭香精油化學組成多祥，受到多種因素的影響，包括品種、株齡、生長階段等內在因素和栽培條件(溫、光、水、肥)、種植地區、提取方法、取材部位等外在因素。而精油的成分不僅影響香型，還和抑菌活性密切相關。因此，探求最佳的栽培、採收和生產條件組合，對於獲得理想香型和高抑菌活性的迷迭香精油，高效、可持續利用迷迭香資源，具有重要意義。

發明內容
本發明的ー個目的是提供一種採收迷迭香的方法。本發明提供的方法，包括如下步驟在東經103° 36' -109° 35'、北緯24° 37' -29° 13^處，每年在夏季和/或冬季採收迷迭香。上述方法中，所述夏季為6月-7月，具體為6月；所述冬季為12月。上述方法中，所述6月或7月的月平均氣溫20_22°C，所述6月或7月的月降水量150-200mm ；所述12月的月平均氣溫5-7 °C，所述12月的月降水量40_50mm ；所述採收時迷迭香的株齡為不高於10年，所述採收時迷迭香的株齡具體為10年、4年或2年；所述東經103° 36' -109° 35'、北緯24° 37' -29° 13'處為中國貴州省；所述採收方式為保留所述迷迭香地上部分25-35cm，採收其他地上部分；所述其他地上部分為莖和/或葉。
由上述的方法採收的迷迭香也是本發明保護的範圍。上述迷迭香在製備具有抑菌活性的迷迭香水提取物中的應用也是本發明保護的範圍。本發明的另ー個目的是提供ー種製備迷迭香水提取物的方法。本發明提供的方法，包括如下步驟將上述迷迭香的組織浸沒在水中，蒸餾，收集揮髮油，即得到迷迭香水提取物。上述方法中，上述的迷迭香的組織和所述水的配比為Ig IOml;所述蒸餾為180°C恆溫加熱至得到第一滴揮髮油，沸騰2h後，結束蒸餾。上述方法中，在所述蒸餾前，還包括將上述的迷迭香的組織乾燥、粉碎的步驟；在所述蒸餾後和所述收集揮髮油前，還包括將所述蒸餾的產物靜置15_20min的 步驟；在所述收集揮髮油後，還包括將所述揮髮油脫水，得到迷迭香水提取物的步驟；所述迷迭香的組織為莖或葉。由上述方法製備的迷迭香水提取物也是本發明保護的範圍；所述迷迭香水提取物具體具有抑菌活性；所述菌進ー步具體為大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureu ssubsp. aureus)、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)和/或變形桿菌(Proteus vulgaris；,,上述的迷迭香水提取物在製備具有抑菌活性產品中應用也是本發明保護的範圍；所述菌進一步具體為大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃葡萄球菌(Staphylococcusaureussubsp. aureus)、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)和/ 或變形桿菌(Proteusvulgarisノ。本發明的實驗證明，本發明的採收方法可以在貴州山區夏季或冬季採收，更重要的是可以在夏季採收後經過秋季生長恢復，冬季二次採收迷迭香，一年內在6月和12月兩次採收的迷迭香水提取物並不比一年內在9月份採收一次的迷迭香水提取物的抑菌活性低，反而部分為活性提高，說明一年內在6月和12月兩次採收的迷迭香不僅生物量多，而且迷迭香水提取物的抑菌活性不低於一年內9月份採收；而且迷迭香連年種植退化不明顯，可以持續利用至少十年，且10年內的抑菌活性無顯著差異。因此，這是一種以獲得高抑菌活性精油為目標的、高效、可持續的迷迭香採收方法。


圖I為採收季節對於精油抑菌活性的影響圖2為株齡對於精油抑菌活性的影響
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。下述實施例中的實驗均為重複三次，結果取平均值。實施例I、迷迭香採收時機的摸索和提取具有抑菌活性提取物一、迷迭香採收時間的摸索
I、不同時間採收迷迭香貴州地區地處南方高原，冬季溫和，夏季溼熱，迷迭香可以在野生狀態下生長，適合大面積栽培用於生產抗菌和抗氧化產品，同時取得荒山緑化、固土護坡的生態效益。2010 年，在貴州(東經 103° 36' -109° 35'、北緯 24。37' -29° 13')，分別在夏季(6月25日，月平均氣溫21. 3°C，月降水量195. 4mm)、秋季(9月10日，月平均氣溫20. 2°C，月降水量156. 7mm)和冬季(12月15日，月平均氣溫6. 7°C，月降水量47. Imm)採摘2年株齡迷迭香，保留迷迭香地上部分30cm，採收其他地上部分。且冬季採收的植株為夏季採收後經過秋季生長 後的植株，秋季採收的未在夏季採收過的植株。2、提取將上述3組採摘的迷迭香的莖、葉分別用如下方法處理採用Clevenger型提取裝置，通過水蒸氣蒸餾法提取迷迭香揮髮油，具體如下將3組採摘的迷迭香的莖、葉陰乾、粉碎，分別稱取IOOg迷迭香乾葉和IOOg迷迭香乾莖，置於2000ml的圓底燒瓶中，分別加入IOOOml蒸餾水淹沒植物材料，180°C恆溫加熱，在第一滴精油滴出後開始計吋，沸騰2h後，結束蒸餾。停止加熱後，靜置20min，待油水分離後，取油水分離器中上層液體即為粗油，用無水硫酸鈉脫水，得迷迭香水提取物(精油)。3、抑菌活性測定紙片擴散法分別將待測菌種(大腸桿菌Escherichia coli ATCC25922(CGMCC1. 2385,請提供)、金黃葡萄球菌 Staphylococcus aureus subsp. Aureus ATCC25923(CGMCC I. 2386)、枯草芽孢桿菌 Bacillus subtilis ATCC6633 (CGMCC I. 2428)、變形桿菌Proteus vulgaris ATCC49132 (CGMCC I. 491))用牛肉膏蛋白腖液體培養基培養，使用前用比濁儀將各菌液稀釋到IxlO8CFU · mじ1。滅菌的牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基傾注於直徑9cm的培養皿中，培養基凝固後，用移液槍吸取各菌液100 μ I均勻塗布於平板上，然後用鑷子取乾熱滅菌後的直徑6_濾紙片平貼於平板中央。迷迭香水提取物(精油)過O. 45 μ m微孔濾膜，移液槍吸取4μ I滴加在濾紙片上，每ー個處理三個重複。設置蒸餾水作空白對照，抗生素(青黴素、鏈黴素和頭孢他啶，Img · mじ1)作陽性對照。迷迭香水提取物(精油)被充分吸收後，37°C倒置培養24小時，測定抑菌圈直徑。結果如下圖I和表I所示表I為不同採收季節得到的迷迭香製備的提取物的活性
權利要求
1.一種採收迷迭香的方法，包括如下步驟在東經103° 36' -109° 35'、北緯24° 37' -29° 13^處，每年在夏季和/或冬季採收迷迭香。
2.根據權利要求I所述的方法，其特徵在於所述夏季為6月-7月； 所述冬季為12月。
3.根據權利要求I或2所述的方法，其特徵在於 所述6月或7月的月平均氣溫20-22°C，所述6月或7月的月降水量150_200mm ； 所述12月的月平均氣溫5-7°C，所述12月的月降水量40-50mm ； 所述採收時迷迭香的株齡為不高於10年，所述採收時迷迭香的株齡具體為10年、4年或2年； 所述東經103° 36' -109° 35'、北緯24° 37' -29° 13'處為中國貴州省； 所述採收方式為保留所述迷迭香地上部分25-35cm，採收其他地上部分； 所述其他地上部分為莖和/或葉。
4.由權利要求1-3中任一所述的方法採收的迷迭香。
5.權利要求4所述的迷迭香在製備具有抑菌活性的迷迭香水提取物中的應用。
6.ー種製備迷迭香水提取物的方法，包括如下步驟 將權利要求4所述的迷迭香的組織浸沒在水中，蒸餾，收集揮髮油，即得到迷迭香水提取物。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於 所述權利要求4所述的迷迭香的組織和所述水的配比為Ig IOml ； 所述蒸餾為在溫度為180°C下提取至得到第一滴揮髮油，沸騰2h後，結束蒸餾。
8.根據權利要求6或7所述的方法，其特徵在於 在所述蒸餾前，還包括將權利要求4所述的迷迭香的組織乾燥、粉碎的步驟； 在所述蒸餾後和所述收集揮髮油前，還包括將所述蒸餾的產物靜置15-20min的步驟； 在所述收集揮髮油後，還包括將所述揮髮油脫水，得到迷迭香水提取物的步驟； 所述迷迭香的組織為莖或葉。
9.由權利要求6-8中任一所述的迷迭香水提取物；所述迷迭香水提取物具體具有抑菌活性；所述菌進ー步具體為大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃葡萄球菌(Staphylococcusaureus subsp. aureus)、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)和 / 或變形桿菌(Proteusvulgaris)。
10.權利要求9所述的迷迭香水提取物在製備具有抑菌活性產品中應用；所述菌進一步具體為大腸桿菌(Escherichia coli)、金黃葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.aureus)、枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)和/ 或變形桿菌(Proteus vulgaris)。
全文摘要
本發明公開了一種採收迷迭香的方法和製備具有抑菌活性提取物的方法。本發明提供的方法，包括如下步驟在東經103°36′-109°35′、北緯24°37′-29°13′處，在夏季採收迷迭香；或在所述夏季採收迷迭香後在冬季二次採收迷迭香。本發明的實驗證明，本發明的採收方法可以在貴州山區夏季採收，也可以在夏季採收後經過秋季生長恢復，冬季二次採收的迷迭香，提取的精油抑菌活性較高，而且迷迭香連年種植退化不明顯，可以持續利用至少十年。因此，這是一種以獲得高抑菌活性精油為目標的、高效、可持續的迷迭香採收方法。
文檔編號A61P31/04GK102687627SQ201210158838
公開日2012年9月26日 申請日期2012年5月21日 優先權日2012年5月21日
發明者李慧, 潘巖, 白紅彤, 石雷 申請人:中國科學院植物研究所