藏紅花脫毒種球的生產方法與流程

2023-10-06 19:55:39 1

本發明涉及生物工程技術，尤其是涉及一種藏紅花脫毒種球的生產方法。

背景技術：

藏紅花又名西紅花、番紅花，屬名貴緊缺中藥材，因含有藏紅花素而備受關注，被譽為世界上最貴的藥用植物、世界上最好的染料、世界上最高檔的香料。國家中醫藥管理局列為重點發展的中藥材品種。近年來藏紅花在醫療、保健、化工等方面的價值被全面開發，由於用量巨大，市場供不應求，主要依賴進口。藏紅花為三倍體，不結實，所以採用無性繁殖，「種球」在繁殖過程中很容易感染植物病毒，一經染毒很難去除而且會越來越嚴重，極大降低了藏紅花的產量和質量。經對現有技術的檢索發現，藏紅花脫毒後增產效果明顯，但藏紅花生長點剝離困難，另外微型種球的生長緩慢，這成為了限制藏紅花脫毒技術大面積推廣的一個瓶頸。

技術實現要素：

本發明的目的，就是為了解決上述問題，提供一種藏紅花脫毒種球的生產方法。

為了達到上述目的，本發明採用了以下技術方案：一種藏紅花脫毒種球的生產方法，包括如下步驟：

步驟一，用氯氣對藏紅花種球進行表面消毒，然後接種到生長培養基中；

步驟二，種球發芽後切取只帶一個葉緣基的生長點進行脫毒處理，然後接種到生長培養基中成苗；

步驟三，生長點成苗後進行病毒檢測；

步驟四，選擇不帶病毒的植株，繼代到誘導培養基中，產生微型種球；

步驟五，將微型種球接種到含有擴繁培養基的生物反應器內擴繁；

步驟六，將擴繁後得到的微型種球放4℃保存備用。

所述生長培養基為添加1-2mg/L赤黴素和0.8-1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤的MS培養基。

所述誘導培養基為添加10-15mg/L病毒唑的MS培養基。

所述微型種球的擴繁方法為：使用鼓泡式生物反應器進行連續培養。

所述種球的擴繁培養基為添加1-2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤的MS培養基。

上述MS培養基為Murashige和Skoog(1962)公開的培養基，其中1/2MS培養基為大量元素減半的MS培養基。MS培養基在現有的生物以及農業等領域有著廣泛的應用。

採用本發明的生產方法，藏紅花脫毒效果好，脫毒材料繁殖速度快，在生產上有較大的應用價值。

具體實施方式

下面通過實施例對本發明作進一步說明。

實施例的藏紅花種子來自中國藥科大學。

實施例所用MS培養基採用Murashige和Skoog(1962)公開的培養基，具體成分如表1所示。

表1

實施例：

步驟一，用75毫升次氯酸鈉與25毫升濃鹽酸生成的氯氣對藏紅花種球表面消毒20分鐘後，接種到添加1mg/L赤黴素和1mg/L 6-苄氨基嘌呤的MS培養基中，獲得無菌材料；

步驟二，種球發芽後切取帶一個葉原基的生長點，接種到添加1mg/L赤黴素和1mg/L 6-苄氨基嘌呤的MS培養基中成苗；

步驟三，生長點成苗後用PCR和掃描電鏡檢測進行病毒檢測；

步驟四，選擇不帶病毒的植株，轉入添加15mg/L病毒唑的MS培養基生產微型種根；

步驟五，將擴繁後的微型種球接種到鼓泡式生物反應器內擴繁，擴繁培養基為添加1.5mg/L 6-苄氨基嘌呤的MS培養基；

本實施例中，12個種球表面消毒成功，生長點剝離後得到55個脫毒苗，誘導出的脫毒種球用5升的鼓泡式反應器進行擴繁，通氣速率為0.3vvm。微球型根在反應器中27天內數量增加了兩倍，並於4℃下保存6個月後發芽率達到100％。