一種通過生物技術擴增脫氧胸苷三磷酸的方法與流程

2023-10-24 18:12:27 2

本發明涉及一種生物技術，尤其涉及一種通過生物技術擴增脫氧胸苷三磷酸的方法。

背景技術：

聚合酶鏈反應(polymerasechainreaction，pcr)由美國centus公司的karymullis發明，於1985年由saiki等在science雜誌上首次報導，是近年來開發的體外快速擴增dna的技術。通過pcr可以簡便、快速地從微量生物材料中以體外擴增的方式獲得大量特定的核酸，並且有很高的靈敏度和特異性，可在動物檢疫中用於微量樣品的檢測。

dna分子是由四種脫氧核糖核苷酸分子結合成的兩條互補多聚核苷酸鏈。合成這些多聚核苷酸的前體是四種脫氧核苷三磷酸，脫氧胸苷三磷酸作為四種原料之一參與核酸分子的體內或體外擴增。附著生物技術工業的發展特別是dna生物合成和聚合酶鏈式反應的推廣，市場上對dna擴增所需要的脫氧核苷三磷酸的需求量將會明顯地持續升高。另外，由於脫氧胸苷三磷酸在抗病毒抗腫瘤，治療心血管疾病等方面應用的推廣，同樣也會對本發明所闡述的產品，脫氧胸苷三磷酸的需求量的提高起到促進作用。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種一種通過生物技術擴增脫氧胸苷三磷酸的方法，採用的技術方案是：

一種通過生物技術擴增脫氧胸苷三磷酸的方法，其包括：脫氧胸苷三磷酸模版dna、限制性切刻酶、dna聚合酶、脫氧核苷三磷酸、與靶核酸序列3』末端互補的寡核苷酸引物、表面活性劑，所述方法包括以下步驟：

a、在樣品脫氧胸苷三磷酸模版dna培養液中加入一種或多種能夠在所選限制位點切割dna的限制性切刻酶，該限制性切刻酶在該dna的一條鏈上形成特定的3』末端；

b、加入寡核苷酸引物，該啟動子引物5』區域包含被dna的rna聚合酶所識別的啟動子序列，且其3』區域與步驟a形成的dna特定的3』末端互補；

c、向樣品中加入dna聚合酶，脫氧核苷三磷酸，表面活性劑；

d、控制溫度，將如此形成的混合物保持足夠的時間，以進行擴增。

至少兩種與靶核酸序列3』末端互補的寡核苷酸引物。

至少一種具有鏈置換能力的dna聚合酶。

至少一種脫氧核苷三磷酸。

所述表面活性劑為聚氧乙烯失水山梨醇單脂肪酸脂。

所述培養液的溫度控制在40℃～50℃內。

所述溶液在基本恆溫的條件下進行擴增的時間為45～60分鐘。

所述溶液的ph值控制項在7.0－8.0。

本發明的有益效果是：本發明基本上在恆溫的條件下擴增靶核酸序列，以外通過添加限制性切刻酶而不需要額外添加任何另外的試劑，而且時間短，工藝結構簡單，降低了生產成本。

具體實施方式

一種通過生物技術擴增脫氧胸苷三磷酸的方法，其包括：脫氧胸苷三磷酸模版dna、限制性切刻酶、至少一種具有鏈置換能力的dna聚合酶、至少一種具有鏈置換能力的dna聚合酶、至少兩種與靶核酸序列3』末端互補的寡核苷酸引物、聚氧乙烯失水山梨醇單脂肪酸脂表面活性劑，所述方法包括以下步驟：a、在樣品脫氧胸苷三磷酸模版dna培養液中加入一種或多種能夠在所選限制位點切割dna的限制性切刻酶，該限制性切刻酶在該dna的一條鏈上形成特定的3』末端；b、加入寡核苷酸引物，該啟動子引物5』區域包含被dna的rna聚合酶所識別的啟動子序列，且其3』區域與步驟a形成的dna特定的3』末端互補；c、向樣品中加入dna聚合酶，脫氧核苷三磷酸，表面活性劑；d、控制溫度，將如此形成的混合物保持足夠的時間，以進行擴增。所述培養液的溫度控制在40℃～50℃內，所述溶液在基本恆溫的條件下進行擴增的時間為45～60分鐘，所述溶液的ph值控制項在7.0－8.0。