與慢性疲勞有關的病毒感染的診斷和治療的製作方法

2023-10-11 10:07:09 2

專利名稱：與慢性疲勞有關的病毒感染的診斷和治療的製作方法
慢性疲勞症候群(CFS)的診斷是一件困難的事，僅在美國就有一千萬到一千二百萬人患上此病。這種病普遍存在的異常症狀是極度疲勞、淋巴腺腫大以及體質上的症狀，如體重下降，沒有食慾、記憶力減退，有些病人智力喪失。這種狀況特別發生在比較年輕、好動的人當中，且與含有核糖核酸RNA病毒和含有脫氧核糖核酸DNA病毒有關。一些CFS病人還表現出神經精神病學的變化，如抑鬱症、喪失記憶，以及類似於精神錯亂的病症。因此，有時很難把慢性疲勞症候群與純粹的精神病學的病症，特別是反應性抑鬱症區分開來。各種實驗室研究表明許多不同的病毒在每個有慢性疲勞症候群的病人體內複製，事實上這些人已變成「病毒陰溝」。象E-B病毒、細胞肥大病毒，逆向病毒、皰疹病毒等病毒常常在病人身上存在了多年，使這種病人成為進行性疲勞且臥床不起。
據測，在大多數患有慢性疲勞症候群的病人身上，2′-5′A分子路徑發生了特殊的變化，這種變化對診斷和預測有巨大價值。例如，考慮有許多25至30歲的婦女，她們家裡有非常好動的孩子，常常抱怨「慢性疲勞」，但並不一定是受了病毒感染。這裡所描述的診斷過程使臨床醫生能夠確定那些表現出慢性疲勞症狀和有關症狀如體重下降、沒有食慾，以及神經精神病學變化等症狀的病人是患有與病毒有關的慢性疲勞症候群的病人，並把他們與另外一些由於外部因素或抑鬱引起而出現疲勞症狀的病人中區分開來。對慢性疲勞症候群的正確診斷是有效的治療所必需的先決條件。在這裡也描述了治療方法。這些有價值的診斷和治療過程將在下面描述。
除了這些診斷過程以外，最初的對該病症的確定性療法現已發展成為用各種雙鏈RNA來醫治與病毒有關的病症，並且在病人身上獲得了成功。
在以前的研究中已經得出涉及與慢性疲勞症候群無關的一般性病毒的病症和特殊的逆向病毒感染，則2′-5′低聚腺苷酸/RNaseL路徑的各個組成部分有特殊的診斷效果。尤其是現在已經測得在慢性疲勞症候群患者體內，其中，2′-5′A合成酶異常低，核糖核酸RNaseL被異常激活，而RNaseL和2′-5′A合成酶二者是細胞的自然抗病毒路徑的組成部分，且與病人的疲勞狀況相互聯繫，這樣，對這二個量的測量可以作為慢性疲勞症候群的指示量或「標誌」，成為一種全新的，且臨床可靠的診斷及治療病症的方法。此外，該診斷方法是採用病人的末梢血樣，而不需要用外科的或其它有創的診斷試驗，因此比較方便。
本發明包括鑑定慢性疲勞症候群的過程，即根據病人末梢血樣中的淋巴細胞內2′-5′A合成酶的水平低，並結合與病毒有關的核糖核酸酶RNaseL的畸變來鑑定。本發明還包括用這一鑑定結果來判定是否患有慢性疲勞症候群的診斷過程;以及用補充外生的雙鏈核糖核酸dsRNA和改善病人的臨床狀況的方法，使病人的2′-5′A分子路徑畸變恢復的治療過程;還包括監測慢性疲勞症候群病人的狀況和測定在一個病人身上所需要補充的dsRNA的水平的治療過程;以及用於治療慢性疲勞症候群的藥物。
根據病人血樣(Ficoll-Hypaque-淨化末梢血液淋巴細胞)確定出在正常人體內和患有慢性疲勞症候群的人體內2′-5′A合成酶，2′-5′A分子和激活的RNaseL的濃度。2′-5′A的含量可用具有Poly U-〔32P〕-PCP的2′-5′A核纖維素來測定(類同色譜法)，在檢驗中，通過用2′-5′A激活的RNaseL去水解Poly(U)的能力來測定正在起作用的2′-5′A的濃度。
通過對25個近期內未感染過病毒的正常人進行測試來確定出參照值，可以根據近期沒有培養病毒的能力、沒有發燒、沒有全身體質上的症狀、沒有皰疹等等來確定其最近沒有病毒感染史。測出受試的正常人體內的淋巴細胞中2′-5′A的濃度作為可靠的2′-5′A分子的標準曲線，該標準的參照值可用每克淋巴細胞蛋白質中2′-5′A的毫微克分子來表示，通常這個值是在0.2到1.0範圍內。同樣，也建立起2′-5′A合成酶和RNaseL酶的正常人的標準曲線。
同這種檢驗方法，對10個表現出慢性疲勞症候群的普遍症狀的病人進行測試，其典型的結果總結如下2′-5′A低聚核苷酸的水平明顯增加約2～15倍，而2′-5′A合成酶成比例減少，一種新的核糖核酸RNaseL異常地上升。
表一病毒感染繼發慢性疲勞的病人在治療前體內2′-5′A/RNaseL路徑的畸變受試者編號Nmoles2′-5′A/每克淋巴蛋白A1.4，2.4B2.0
C10.1D5.2E11.3F7.6G8.3H4.7I3.8J5.9在用dsRNA治療之前，所有10個受試者都表現出細胞內2′-5′A合成酶約降至沒有受感染的健康受試者的5至50倍以下。患有慢性疲勞症候群的病人在稱為核糖核酸酶RNaseL的抗病毒防禦路徑的最後介質內，通常都自然地會產生一種變化(畸變)，因此，整個抗病毒防禦路徑存在二種變化(介質水平的變化)或畸變(新的激活的酶)。對患有這種慢性疲勞症候群的病人的治療可根據需要輸入外生的dsRNA，直到細胞內2′-5′A低聚核苷酸和2′-5′A合成酶達到正常水平，RNaseL的畸變被消除和/或病人的臨床症狀減輕。通常在這些分子發生改進的同時，臨床症狀也明顯好轉，從表二(對病人A體內的一種合成酶路徑進行了較長時間的研究)與病人A的臨床症狀圖表(表三和表四)的比較可以看出。對另外一些病人的研究也表明，90%以上的病人體內的酶都有類似的引入注目的改善，這種改善與臨床症狀的恢復相聯繫。
表二在慢性疲勞症候群(CFS)病人的PBMC內2-5A合成酶/RNase抗病毒系統的組成部分PBMC來源用失配dsRNA2′-5′A成酶細胞內2-激活的周數離體活力a 5A濃度bRNaseLcCFS病人02.41.4++++＃A01.82.4++++21.40.5+++42.10.7+81.40.6+健康人50.7+注a加入到2-5A中的ATP(三磷酸腺苷)/mg蛋白質的毫微克分子bNmoles/g蛋白質c +表示正常的程度3++++表示活動過度，RNaseL的激活程度可用rRNA分裂檢驗法來測量。
表三累積的神經精神病學的試驗記錄試驗87.8.2688.5.2688.6.30開始治療88.9.11↓Wais-R知識12131115指距118810詞彙12121216算術98511相似物1513912區組設計8659數字符號8238滿分IQ1109888112Halstead-Reitan受損程度手輕叩法激烈激烈激烈正常跟蹤A緩和激烈激烈正常跟蹤B緩和緩和中等正常表四運動耐力試驗日期等級持續時間88.7.2311分30秒88.8.9開始治療88.9.613分88.10.2023分35分88.12.613分26分10秒88.4.423分36分不斷測量病人細胞內的2′-5′A低聚核苷酸的水平、2′-5′A合成酶和RNaseL酶畸變的程度，同時根據需要輸入外生的dsRNA(雙鏈核糖核酸)，使這些分子的功能維持正常、或接近正常狀態，從而使病人抵抗慢性疲勞症候群的機致病毒的能力得到保持。
當一個病人受到病毒入侵時，例如受到慢性疲勞症候群的病毒入侵時，正常狀態的(細胞內的)dsRNA起著防禦宿主的作用。具有生物活性的dsRNA或那些直接或間接地依賴於dsRNA的酶的顯著減少，而主要是存在於特殊細胞內的與末梢血液淋巴細胞中2′-5′A的水平異常地低有關的2′-5′A合成酶的畸變的核糖核酸酶RNaseL的顯著減少對慢性病毒性疾病有影響，無論如何，通過重新調整該特殊的病毒劑dsRNA，主要是失配dsRNA(如美國的AMPLIGEN
，HEM研究公司的研究，ROCKVILLE.MD.USA)紊亂的分子路徑就可使疾病的症狀扭轉過來。
「失配dsRNA」的意思是指在配合物鍵之間的氫鍵(礆基堆積)比較穩定，即很少發生斷裂，相應地也應如此來理解名詞「失配dsRNA」，dsRNA可以是一種多聚肌苷酸(PolyI)和多聚胞苷酸(PolyC)的合成物，其中含有一定比例的二氧嘧啶基或胍基，例如1∶5至1∶30。這種合成物是(Poly I.Poly(C4-29.X＞U或G))dsRNA的普遍公式是rIn.r(C11-14U)n或rIn.r(C12.U)n。另外一些合適的dsRNA的例子下面詳述。在某些病例中也可以用特殊的雙鏈低核苷酸。
本發明中推薦使用的失配dsRNA是基於選自poly(Cn.U)和Poly(Cn.G)的復聚核苷酸，其中n是一整數，其值可以從4到29，復聚核苷酸是失配的多聚核糖肌苷酸和多聚核糖胞苷酸的合成物的類似物，是通過調整rIn.rCn，使其未配對的基(二氧嘧啶或胍基)與多聚核糖胞苷酸(rCn)的鍵結合在一起而形成的。另一種方法可以通過更改多聚核糖肌苷酸(rIn)的脊柱核糖基，例如用含有2′-0-甲基-核糖基殘基，從PoLy(I).Poly(C)dsRNA中得到dsRNA。失配合成物可以由一種穩定的RNA聚合物，例如賴氨酸和纖維素合成。這裡所提出的具有通式rIn.(C11-14.U)n或rIn I.r(C29.G)n的失配類似物，已由Carter和Ts′o在美國專利4，130，641和4，024，222中做了描述，該專利所公開的內容在這裡作為參考，專利中所描述的dsRNA一般說來也適用於本發明在本發明中所採用的另外一些失配dsRNA的樣本包括Poly(I).Poly(C4.U)Poly(I).Poly(C7.U)Poly(I).Poly(C13.U)Poly(I).Poly(C22.U)Poly(I).Poly(C20.G)Poly(I).Poly(C29.G)和Poly(I).Poly(CP23G＞P也可以使用低聚核苷酸dsRNA分子，在其分子的「末端」採用鏈連接以防止基對的滑動，從而使其在各種存在於人體生物液中的溶解的和水性的環境中具有特殊的生物活力。
可以用高壓液相色譜法(HPLC)來確定分子的大小和2′-5′A的濃度。用核糖體RNA分裂檢測法來測定病人體內合成的2′-5′A的生物學功能(活力)，並測定病人血樣中激活的RNaseL的水平。建議用末梢單核血細胞作為分析細胞，當然，如果慢性病毒感染發生在體內其它器官時，也可以分析其它細胞。
對患有慢性疲勞症候群的病人的典型的治療方法是用靜脈注射輸入200～600毫克的rIn.r(C11-14.U)，每周2～3次，直到2′-5′A的水平增加到使臨床症狀得到改進，並且合成酶的水平和RNaseL的畸變得到糾正。所輸入的雙鏈核糖核酸dsRNA的數量和次數將根據所測得的實驗室參數以及病人的臨床康復情況決定。根據在注射點的末端所測得的輸入量可以立即給出從0.01微克到1微克的每毫升病人全身循環血液中所含dsRNA數量的一個瞬時水平。所輸入的高分子dsRNA的分裂物、dsRNA的生物活性碎塊，作用是使2-5A酶的路徑得到改進，從而促進臨床恢復進程。
權利要求
1.一種診斷病人是否患有慢性疲勞症候群的方法，包括測定在病人的末梢血液樣品中細胞內2′-5′A低聚核苷酸的水平，並且把該測得結果與預先用同樣方法在健康人身上所測得的結果進行比較，當病人的2′-5′A低聚核苷酸的水平低於健康人時，則表示患有慢性疲勞症候群。
2.一種把由病毒誘發的慢性疲勞症候群與原發的心理學的或類似的神經精神病學的病症區別開來的方法，包括測定病人末梢血液樣品中細胞內2′-5′A的低聚核苷酸的水平，並且與預先確定的健康人的2′-5′A低聚核苷酸水平相比較。
3.按照權利要求1或2所說的方法，其中，2′-5′A低聚核苷酸是2′-5′低腺苷酸。
4.按照權利要求1或2所說的方法，其中，對於慢性疲勞症候群，當病人血樣中2′-5′A低聚核苷酸比每克淋巴細胞蛋白中所含有的2′-5′A為0.2毫微克分子還低時，該診斷法推定為陽性。
5.失配dsRNA用作治療由病毒引起的慢性疲勞症候群的藥物的製作。
6.按照權利要求5所說的藥物的用途，其中，失配dsRNA是多聚腺苷酸與多聚尿苷酸的合成物。
7.按照權利要求5所說的用途，其中，失配dRNA是多聚肌苷酸和多聚胞苷酸的合成物，其中含有從1∶5到1∶30的二氧嘧啶基或胍基。
8.按照權利要求7所說的用途，其中失配dsRNA是rIn.r(C11-14。U)n或失配dsRNA包含有鏈斷裂的區域，且rIn.r(C11-4.U)n對治癒率有促進作用。
全文摘要
誘發慢性疲勞的病毒感染可通過測定2′-5′A/RNaseL路徑來診斷，包括測量病人的末梢循環血液內白血球中2′-5′A低聚核苷酸的水平，並且把這些結果與健康人的相比較。當使用適量的雙鍵核糖核酸dsRNA，主要是失配dsRNA時，2′-5A增加，且使慢性疲勞綜合症病人體內的抗病毒的路徑正常化，使臨床症狀得到改進。
文檔編號C07H21/00GK1039722SQ8910670
公開日1990年2月21日 申請日期1989年7月7日 優先權日1988年7月7日
發明者威廉姆·A·卡特 申請人:Hem研究公司