一組吡唑醯胺類衍生物及其應用的製作方法

2023-10-11 16:57:09 3

本發明屬於醫藥領域，具體涉及一組吡唑醯胺類衍生物及其在製備抗腫瘤藥物方面的應用。

背景技術：

腫瘤是威脅人類健康的重大疾病，預計2020年，全世界癌症發病率將增加50％，每年將增加1500萬新病例。全國腫瘤登記中心發布的《2012年中國腫瘤登記年報》表明，中國近20年來，每年新發腫瘤病例約312萬例，平均每天8550人。目前中國的腫瘤發病率以每年3％-5％的速度增長。

從病種看，全國惡性腫瘤發病第一位的是肺癌，其次為胃癌、結直腸癌、肝癌和食管癌等消化道腫瘤。消化道腫瘤是惡性腫瘤中常見的一組腫瘤。在河南省，具有明顯地域特徵的上消化道腫瘤(主要包括食管癌和胃癌)的發病率和死亡率目前仍居各類惡性腫瘤的首位，儘管臨床上通過早期診斷和手術治療已經取得了明顯的療效，但是晚期疾病的防治及如何更好地延長病人的存活率目前仍為困擾臨床醫生的一大難題。

cdk11是一種具有高度同源性且含有pitslre基因序列的cdks，目前已發現有20餘種亞型。cdk11作為cdks的一個重要成員，其在食管癌、胃癌、宮頸癌、多發性骨髓瘤、結腸癌等惡性腫瘤中高表達且發揮重要的作用。抑制cdk11的活性可對上述腫瘤的發生和發展產生抑制作用，因此，cdk11可能是抗腫瘤的一個潛在靶點。

技術實現要素：

本發明目的在於克服現有技術缺陷，提供一組吡唑醯胺類衍生物及其在製備抗腫瘤藥物方面的應用。

為實現上述目的，本發明採用如下技術方案：

一組吡唑醯胺類衍生物、或其藥學上可接受的鹽或前體物，其結構如通式(i)所示：

r1選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環烷基、6-10元芳基、c1-c4烷基取代的6-10元芳基、5-10元雜芳基、c1-c4烷基取代的5-10元雜芳基、5-10元飽和或部分飽和的雜環基、或c1-c4烷基取代的5-10元飽和或部分飽和的雜環基；所述雜芳基、雜環基中含有1-3個選自n、o和s的雜原子；當r1為芳基、雜芳基或雜環基時，任選1-3個r11取代；

r11為1-3個相同或不同的氫、滷素、羥基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巰基、-c1-c4鏈烷基、-c1-c4烷硫基、或-c1-c4烷氧基甲基；

r2選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環烷基，或與r1形成3-6元飽和或部分飽和的雜環，所述3-6元飽和或部分飽和的雜環任選1-3個r21取代；

r21為1-3個相同或不同的氫、滷素、羥基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、或巰基；

r3選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、或-c3-c6的環烷基；

r4選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環烷基、或-cor41，r41為-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、或-c3-c6的環烷基。

具體的，本發明優選提供定義如下的通式(i)所述的吡唑醯胺類衍生物、或其藥學上可接受的鹽或前體物，r1選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環烷基、或

r11為1-3個相同或不同的氫、羥基、巰基、氨基、滷素、三氟甲基、或三氟甲氧基；

r2選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基，或與r1形成3-6元飽和或部分飽和雜環，所述3-6元飽和或部分飽和雜環任選1-3個r21取代；

r21為1-3個相同或不同的氫、滷素、羥基、氨基。

進一步的，本發明優選提供定義如下的通式(i)所述的吡唑醯胺類衍生物、或其藥學上可接受的鹽或前體物，r1選自：-c1-c4的直鏈或支鏈烷基、-c3-c6的環烷基、或

r11為1-3個相同或不同的選自氨基、滷素、三氟甲基或三氟甲氧基的取代基；

r2選自：-h、-c1-c4的直鏈或支鏈烷基，或與r1形成3-6元飽和雜環，所述3-6元飽和雜環任選1-3個r21取代；

r21為1-3個相同或不同的選自滷素、羥基、氨基的取代基。

本發明上述的吡唑醯胺類衍生物、或其藥學上可接受的鹽或前體物，可以優選為下述化合物中的一種或兩種以上，但下述化合物並不意味著對本發明的任何限制；其中下述化合物分別與本申請說明書表一中的化合物1至52相對應，具體列舉如下：

n-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,n-二甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環戊基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環己基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丁基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-n-(3-(4-甲基哌啶-1-羰基)-1h-吡唑-4-基)苯甲醯胺、

n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,1-二甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,n,1-三甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丙基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環丙基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環戊基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環己基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丁基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(1-甲基-3-(4-甲基哌嗪-1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲醯胺、

1-甲基-n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,1-二甲基-4-(3-((4-乙醯基基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,n,1-三甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丙基-1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環丙基-1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環戊基-1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環己基-1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丁基-1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(1-甲基-3-(4-乙醯基哌嗪-1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲醯胺、

1-甲基-n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,1-二甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n,n,1-三甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丙基-1-甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環丙基-1-甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環戊基-1-甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-環己基-1-甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-異丁基-1-甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

n-(1-甲基-3-(4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲醯胺、

1-甲基-n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,6-二氯苯基)-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺、

1-甲基-n-(2,5-二氯苯基)-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺。

按照本發明所屬領域的常規方法，本發明通式(i)所示的吡唑醯胺類衍生物可以與酸生成藥學上可接受的鹽。可藥用加成鹽包括無機酸和有機酸加成鹽，與下列酸加成的鹽特別優選的是：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、馬來酸、檸檬酸、富馬酸、草酸、酒石酸、苯甲酸等。

此外，本發明還包括本發明衍生物的前體物(前藥)。本發明衍生物的前藥是通式(i)的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性甚至沒有活性，但是給藥後，在生理條件下(例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式)被轉化成相應的生物活性形式。

本發明中「滷素」是指氟、氯、溴或碘代；「環烷基」是指取代或未取代的環烷基；「芳基」是指無取代基或連有取代基的單環或多環的環狀芳香體系；「雜芳基」是指含有一個或多個選自n、o、s雜原子的單環或多環的環狀體系。

本發明還提供了上述的吡唑醯胺類衍生物、或其藥學上可接受的鹽或前體物在製備抗腫瘤藥物中的應用，其還可以用作cdk11蛋白激酶抑制劑。本發明提供了上述吡唑類衍生物的藥理活性實驗，檢測了其對cdk11酶的抑制活性，試驗結果表明，部分化合物對cdk11激酶有較好的抑制活性，具有重要的進一步研究價值。

進一步的，本發明提供了以上述的吡唑醯胺類衍生物、或其藥學上可接受的鹽或前體物為有效成份，與藥學上可接受的一種或多種載體組成的藥物組合物。

本發明還提供了上述的藥物組合物在製備抗腫瘤藥物中的應用，該藥物組合物還可以用作cdk11蛋白激酶抑制劑。

目前，臨床上還沒有上市的cdk11抑制劑，本發明在參考與cdk11蛋白晶體結構相接近的cdk4/6蛋白酶的結構特點的基礎上，設計併合成了一系列新的吡唑醯胺類衍生物，經初步藥理活性測試發現，該類化合物對cdk11酶具有良好的抑制作用。迄今為止，尚未見有關本發明衍生物在抑制cdk11酶活性、以及製備抗腫瘤(如食管癌、胃癌、宮頸癌、多發性骨髓瘤、結腸癌等惡性腫瘤)藥物中應用的相關報導。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明的技術方案作進一步地詳細介紹，但本發明的保護範圍並不局限於此。

本發明通式(i)所示衍生物可參照下述合成路線進行製備。製備過程中所用原料可通過下述合成路線中描述的方式、或採用本領域普通技術人員熟知的方法製備、或直接商購獲得。

本發明通式(i)所示衍生物，可按照上述路線合成。該路線採用匯聚式合成方式，先分別合成片段a和片段b，再經縮合、水解、縮合等常規反應後得到目標化合物。

以下實施例在合成方法上具有代表性，本發明通式(i)所示衍生物(尤其是表一中的化合物1至52)均可參照合成路線以及實施例的製備方法合成得到。

實施例1化合物1的製備：n-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

步驟a：4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

將4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸(3.0g，19.10mmol)加入含有15ml甲醇的50ml茄型瓶中，冰浴下緩慢滴加socl2(1.8ml，24.83mmol)，加畢後轉移至室溫反應過夜，次日tlc檢測反應完畢。將反應液減壓濃縮除去未反應完全的甲醇和socl2，粗品用30ml石油醚勻漿、抽濾得目標產物粗品(2.93g，89.6％)，粗品不經純化直接投下一步反應。

1hnmr(400mhz,dmso)δ14.45(s,1h),8.96(s,1h),3.90(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z172.13。

步驟b：4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

將4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(1.0g，5.40mmol)加入含有20ml甲醇的氫化反應瓶中，加入pd/c催化劑(10％，0.1g)，40psi氫氣壓力下反應0.5h，tlc檢測顯示反應完畢，抽濾，濾除pd/c，減壓濃縮得到目標物粗品(0.79g，96.3％)，粗品不經純化直接投下一步反應。

1hnmr(400mhz,dmso)δ12.85(s,1h),7.11(s,1h),4.88(s,2h),3.79(s,3h)；lc-ms(esi,m+na+)m/z164.21。

步驟c：3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯的製備

將3-醛基苯甲酸甲酯(2.0g，12.18mmol)、n-甲基哌嗪(1.22g，12.18mmol)加入50ml茄型瓶中，加入ch2cl215ml，冰浴下分批加入nabh(oac)3(5.16g，24.36mmol)，加畢後將反應體系轉移至室溫，過夜反應，次日tlc檢測反應完畢，反應液加入20ml飽和碳酸氫鈉，ch2cl2萃取(3×30ml)，無水硫酸鈉乾燥後減壓濃縮得目標產物粗品(2.53g，83.5％)。

1hnmr(400mhz,dmso)δ7.89(s,1h),7.86–7.84(m,1h),7.57(d,j＝7.6hz,1h),7.48(t,j＝7.6hz,1h),3.86(s,3h),3.51(s,2h),2.50–2.16(m,8h),2.15(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z249.31。

步驟d：4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

將3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯(3.5g，14.09mmol)加入50ml茄型瓶中，加入meoh10ml，h2o20ml，冰浴下加入naoh(1.41g，35.24mmol)，加畢將反應體系轉移至室溫，反應2.5h，tlc檢測反應完畢，將反應體系用6n鹽酸調ph至3-4，減壓濃縮除去溶劑，得3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸和nacl的混合物，加入dmf20ml，4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(1.99g，14.09mmol)，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽edchcl(3.22g，16.91mmol)，1-羥基苯並三唑hobt(2.28g，16.91mmol)，加畢室溫反應10h，tlc檢測反應完畢，將dmf蒸乾後，加飽和碳酸氫鈉，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，ch2cl2:meoh＝15:1柱層析，得目標產物(3.01g，59.7％)。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.66(s,1h),9.86(s,1h),8.31(s,1h),7.86(s,1h),7.80–7.78(m,1h),7.55–7.50(m,2h),3.55(s,2h),2.45–2.28(m,8h),2.20–2.17(m,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z358.41。

步驟e：化合物1的製備

將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(0.4g，1.12mmol)加入10ml茄型瓶中，加入meoh1ml，h2o3ml，naoh(0.13g，3.36mmol)，反應液室溫反應2.5h後tlc檢測反應完畢，減壓濃縮除去溶劑，乙醚(3×2ml)萃取，水相用6nhcl調ph＝3-4，水相用乙酸乙酯(3×5ml)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸粗品，粗品不經純化，直接加入dmf8ml，甲胺醇溶液(2.0m於甲醇中)(1.68ml，3.36mmol)，edchcl(0.32g，1.68mmol)，hobt(0.23g，1.68mmol)，加畢室溫反應過夜，次日tlc檢測顯示反應完全，減壓濃縮除去dmf，乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，ch2cl2:meoh＝15:1柱層析得化合物1(0.15g，26.0％)。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.53(s,1h),7.83–7.80(m,1h),7.70–7.69(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.51(s,1h),7.26(t,j＝7.5hz,1h),6.75(s,1h),3.52(s,1h),3.14(s,3h),2.50–2.47(m,4h),2.35–2.33(m,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z357.32。

實施例2化合物2的製備：n,n-二甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

製備方法參照實施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為二甲胺醇溶液。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(s,1h),7.81–7.79(m,1h),7.72–7.70(m,1h),7.57–7.54(m,1h),7.26(t,j＝7.4hz,1h),6.86(s,1h),3.53(s,1h),3.21(s,6h),2.53(t,j＝5.2hz,4h),2.32(t,j＝5.2hz,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z393.35。

實施例3化合物3的製備：n-異丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

製備方法參照實施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為異丙胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.34(s,1h),10.82(s,1h),8.32(s,1h),8.28(d,j＝8.4hz,1h),7.86–7.85(m,1h),7.77–7.74(m,1h),7.54–7.52(m,2h),4.24–4.14(m,1h),3.57(s,2h),2.51–2.20(m,8h),2.20(s,3h),1.20(d,j＝6.6hz,6h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z385.30。實施例4化合物4的製備：n-環丙基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

製備方法參照實施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為環丙胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.33(s,1h),10.77(s,1h),8.58(d,j＝4.5hz,1h),8.31(s,1h),7.84(s,1h),7.77–7.75(m,1h),7.55–7.52(m,2h),3.57(s,2h),2.92–2.85(m,1h),2.49–2.28(m,8h),2.21(s,3h),0.70–0.66(m,4h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z383.19。

實施例5化合物9的製備：n-(4-甲基-3-(三氟甲基)苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

製備方法參照實施例1，其中，步驟e中將甲胺醇溶液替換為4-甲基-3-三氟甲基苯胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ13.58(s,1h),10.65(s,1h),10.45(s,1h),8.42(s,1h),8.28(d,j＝2.2hz,1h),8.06(dd,j＝8.3,2.2hz,1h),7.88–7.87(m,1h),7.80–7.77(m,1h),7.55–7.53(m,2h),7.42(d,j＝8.3hz,1h),3.57(s,2h),2.52–2.15(m,11h),2.15(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z501.19。

實施例6化合物18的製備：n-環戊基-1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

步驟a：中間體1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

將4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(22.10g，129.16mmol)加入500ml茄型瓶中，加入200ml四氫呋喃，冰浴下分批加入60％nah(6.72g，167.90mmol)，加畢後冰浴攪拌30min，冰浴下滴加mei(12.1ml，193.73mmol)，加畢後室溫反應6.0h，tlc檢測反應完畢，將反應液緩慢到入冰水中，抽濾得目標產品(20.1g，84.1％)。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.87(s,1h),3.95(s,3h),3.94(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z186.16。

步驟b：中間體1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

將1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯(5.0g，27.01mmol)加入含有50ml甲醇的氫化反應瓶中，加入pd/c(10％，0.5g)，40psi氫氣壓力下反應1.0h，tlc檢測顯示反應完畢，抽濾，濾除pd/c，減壓濃縮得到目標物粗品(3.72g，88.7％)，粗品不經純化直接投下一步反應。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ6.42(s,1h),3.92(s,3h),3.83(s,3h),3.50(s,2h)；lc-ms(esi,m+na+)m/z178.19。

步驟c：中間體1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

製備方法參照實施例1，其中，步驟d中將4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯替換為1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(s,1h),7.82–7.80(m,1h),7.69–7.68(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.54(s,1h),7.32(t,j＝7.5hz,1h),3.93(s,3h),3.80(s,3h),3.52(s,1h),2.45(t,j＝5.2hz,4h),2.31(t,j＝5.2hz,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z372.31。

步驟d：化合物18的製備

製備方法參照實施例1，其中，步驟e中將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、甲胺醇溶液替換為1-甲基-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、環戊胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),7.83–7.80(m,1h),7.70–7.68(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.30–7.27(m,2h),6.40(s,1h),4.08–4.02(m,1h),3.87(s,3h),3.54(s,1h),2.49–2.47(m,4h),2.35–2.33(m,4h),2.24–2.13(m,5h),1.76–1.56(m,5h)；lc-ms(esi,m+na+)m/z447.30。

實施例7化合物23的製備：1-甲基-n-(2,3-二氯苯基)-4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

製備方法參照實施例6，其中，步驟d中，將環戊胺替換為2,3-二氯苯胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.23(s,1h),8.58(s,1h),7.76–7.74(m,2h),7.57(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),7.55–7.46(m,1h),7.37(t,j＝7.5hz,1h),7.29–7.22(m,2h),7.05(dd,j＝7.5,2.0hz,1h),3.91(s,3h),3.52(s,1h),2.49(t,j＝5.2hz,4h),2.38(t,j＝5.2hz,4h),2.24(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z501.21。

實施例8化合物30的製備：n-環丙基-1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

步驟a：中間體3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)苯甲酸甲酯的製備

參照實施例1中步驟c的合成方法，其中，將n-甲基哌嗪替換為n-乙醯基哌嗪。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.90–7.88(m,1h),7.83–7.81(m,1h),7.55–7.51(m,1h),7.21(t,j＝7.5hz,1h),3.92(s,3h),3.60(t,j＝5.2hz,4h),3.50(s,1h),2.67(t,j＝5.2hz,4h),1.99(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z277.19。

步驟b：中間體1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

參照實施例1中步驟d的製備方法，將4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯替換為1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.60(s,1h),7.84–7.82(m,1h),7.72–7.69(m,1h),7.59–7.55(m,1h),7.54(s,1h),7.30(t,j＝7.5hz,1h),3.91(s,3h),3.86(s,3h),3.61–3.59(m,4h),3.54(s,1h),2.67–2.65(m,4h),2.01(s,3h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z400.32。

步驟c：化合物30的製備

參照實施例1中步驟e的製備方法，將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、甲胺醇溶液替換為1-甲基-4-(3-((4-乙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、環丙胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.61(s,1h),7.85–7.83(m,1h),7.71–7.70(m,1h),7.59–7.56(m,1h),7.38(t,j＝7.4hz,1h),7.29(s,1h),6.25(s,1h),3.42(s,3h),3.61(t,j＝5.2hz,4h),3.50(s,1h),2.68(t,j＝5.2hz,4h),2.53–2.46(m,1h),1.99(s,3h),0.81–0.73(m,2h),0.79–0.65(m,2h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z425.19。

實施例9化合物34的製備：n-(1-甲基-3-(4-乙醯基哌嗪-1-基)-1h-吡唑-4-基)-3-((4-甲基哌啶-1-羰基)甲基)-苯甲醯胺、

參照實施例8中的製備方法，其中，步驟c中將環丙胺替換為4-甲基哌啶。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),7.85–7.83(m,1h),7.72–7.70(m,1h),7.58–7.55(m,1h),7.38–7.33(m,1h),7.27(s,1h),4.21–4.15(m,2h),3.92(s,3h),3.65–3.62(m,4h),3.55(s,1h),3.01–2.95(m,2h),2.67(t,j＝5.2hz,4h),2.01(s,3h),1.83–1.74(m,2h),1.58–1.45(m,3h),1.01(d,j＝6.5hz,3h)；lc-ms(esi,m+na+)m/z489.25。

實施例10化合物45的製備：n-環己基-1-甲基-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

步驟a：中間體(3-((4-環丙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯的製備

參照實施例1中步驟c的合成方法，其中，將n-甲基哌嗪替換為n-環丙醯基哌嗪。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ7.91–7.88(m,1h),7.81–7.78(m,1h),7.55–7.53(m,1h),7.32(t,j＝7.5hz,1h),3.98(s,3h),3.61(t,j＝5.2hz,4h),3.50(s,1h),2.63(t,j＝5.2hz,4h),1.85–1.80(m,1h),1.10–1.04(m,2h),0.96–0.90(m,2h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z303.20。

步驟b：中間體1-甲基-4-(3-((4-環丙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯的製備

參照實施例1中步驟d的製備方法，其中，將(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯、4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯替換為(3-((4-環丙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲酸甲酯、1-甲基-4-胺基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.62(s,1h),7.85–7.82(m,1h),7.71–7.69(m,1h),7.61–7.55(m,1h),7.54(s,1h),7.38(t,j＝7.4hz,1h),3.95(s,3h),3.82(s,3h),3.60(t,j＝5.2hz,4h),3.54(s,1h),2.63(t,j＝5.2hz,4h),1.84–1.78(m,1h),1.11–1.07(m,2h),0.93–0.89(m,2h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z426.18。

步驟c：化合物45的製備

參照實施例1中步驟e的製備方法，將4-(3-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、甲醇胺溶液替換為1-甲基-4-(3-((4-環丙醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺)-1h-吡唑-3-甲酸甲酯、環己胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(s,1h),7.86(d,j＝7.5hz,1h),7.70(s,1h),7.62(d,j＝7.5hz,1h),7.32–7.27(m,2h),6.43(s,1h),3.92–3.89(m,4h),3.60(s,4h),3.56–3.52(m,2h),2.68(s,4h),2.30–2.24(m,2h),1.85–1.74(m,6h),1.67–1.58(m,1h),1.49–1.42(m,2h),1.09–1.07(m,2h),0.92–0.90(m,2h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z493.25。

實施例11化合物51的製備：1-甲基-n-(2,4-二氯苯基)-4-(3-((4-環丙烷甲醯基哌嗪-1-基)甲基)苯甲醯胺基)-1h-吡唑-3-醯胺

參照實施例10中的製備方法，其中，步驟c中，將環己胺替換為2,3-二氯苯胺。

1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.23(s,1h),8.61(s,1h),7.86–7.82(m,2h),7.73–7.69(m,2h),7.59–7.56(m,1h),7.49–7.47(m,1h),7.35–7.29(m,2h),3.95(s,3h),3.62(t,j＝5.2hz,4h),3.55(s,1h),2.63(t,j＝5.2hz,4h),1.83–1.78(m,1h),1.11–1.06(m,2h),0.93–0.89(m,2h)；lc-ms(esi,m+h+)m/z555.23。

除以上實施例所列化合物外，參照合成路線以及與上述實施例類似的方法，還製備得到其它一系列相關化合物(見表一)，本發明對該系列衍生物進行了藥理活性實驗研究。

應用試驗：本發明通式i所示衍生物的藥理活性測試

本發明所述化合物採用thermofisher公司的lanthascreen技術測定。該檢測體系包含有帶有gst標籤的cdk11蛋白激酶、eu標記的anti-gst的抗體、及螢光標記的atp類似物tracer，其中螢光標記的atp類似物tracer能夠和蛋白激酶的atp結合位點相結合，eu標記的anti-gst的抗體能和帶有gst標籤的cdk11蛋白激酶結合。如果檢測體系中沒有任何激酶抑制劑，則能夠產生fret(fluorescenceresonanceenergytransfer)信號；如果檢測體系中包含有蛋白激酶的競爭性抑制劑，則抑制劑會取代螢光標記的atp類似物tracer，從而使fret信號降低；依據此，就可以判斷出測試化合物是否是某一個激酶的抑制劑，並測定出化合物的抑制活性。具體試驗步驟為：取4μl空白對照液、及4μl0.1μm的待測化合物分別於384孔板中，每組設置三個復孔，每孔中加入8μl的酶/抗體溶液，然後每孔加入4μltracer，室溫孵育60min後，多功能酶標儀檢測665nm和615nm的螢光值，根據酶標儀信號強度計算化合物對激酶的抑制活性。

表一中的初步藥理活性結果顯示：0.1μm濃度下化合物具有良好cdk11蛋白激酶抑制活性，其中化合物3，6，8，9，13，14，15，16，23，25，30，31，32，50的抑制活性均在90％以上。鑑於尚未發現有關cdk11酶抑制劑的研究報導，因此通式i的化合物具有良好的研發前景。

表一：化合物1-52對cdk11蛋白激酶抑制活性測試結果