呋喃並吡啶衍生物的製作方法

2023-10-11 05:27:29 2

呋喃並吡啶衍生物的製作方法
【專利摘要】其中R1、R2和R4具有權利要求1中表明的含義的式I化合物為Syk的抑制劑，並且可尤其用於治療癌症、類風溼性關節炎和/或系統性狼瘡。
【專利說明】映喃並吡啶衍生物
[0001] 發明背景 本發明的目的在於發現具有有價值性質的新化合物，尤其是可用於製備藥物的那些新 化合物。
[0002] 本發明涉及化合物和化合物在激酶（尤其是酪氨酸激酶）抑制、調控和/或調節 信號轉導中的用途，進一步涉及包含這些化合物的藥物組合物，並涉及所述化合物用於治 療激酶引起的疾病的用途。
[0003] 因為蛋白質激酶調節包括新陳代謝、細胞增殖、細胞分化和細胞存活在內的幾乎 所有細胞過程，因此它們是用於治療性幹涉各種疾病狀態的有吸引力的靶標。例如，其中蛋 白質激酶起關鍵作用的細胞循環控制和血管發生為與許多病況相關的細胞過程，所述病況 例如但不限於癌症、炎性疾病、血管發生異常和與其相關的疾病、動脈粥樣硬化、黃斑變性、 糖尿病、肥胖和疼痛。
[0004] 肥大細胞活化後信號轉導途徑中的關鍵事件之一是酪氨酸激酶Syk的活化。肥大 細胞通過釋放促炎性介質和細胞因子而在哮喘和變應性病症中起重要作用。抗原介導的 Fc ε RJ (IgE的高親和力受體）聚集導致肥大細胞的活化。這觸發一系列信號轉導事件， 其導致包括組胺、蛋白酶、白細胞三烯和細胞因子的介質的釋放。這些介質引起血管通透性 增加、粘液產生、支氣管收縮、組織降解和炎症，從而在哮喘和變應性病症的病因學和症狀 中起重要作用。Syk激酶起引起介質釋放的所有後續信號轉導的重要引發劑的作用。Syk 激酶在信號轉導途徑中的重要作用經通過含Syk激酶的SH2結構域的蛋白質完全抑制介質 釋放而得到證實，該蛋白質起Syk激酶抑制劑的作用（J. A. Taylor等，Molec. and Cell Biol, 15: 4149-4157 (1995)。
[0005] Syk (脾酪氨酸激酶）是72 KDa的非受體酪氨酸激酶，其屬於尤其包括ZAP70、 ?7讓2、4131、1162、1(01?和冊1?在內的細胞內酪氨酸激酶亞家族。371^是？^?$(^1?1、11、111、 Fc ε RI、Fc a R)和BCR信號轉導的主要調節物，並且在整個造血譜系中表達，以及在成纖維 細胞、破骨細胞、肝細胞、上皮細胞和神經細胞中表達。除了 C端激酶結構域之外，Syk還顯 示兩個SH2結構域和超過10個自磷酸化位點1。
[0006] 通過其兩個SH2結構域，SYK被特異性募集到磷酸化的ITAM (免疫受體基於酪氨 酸的活化基序，其存在於免疫受體例如Fc γ RI、IIA、IIIA、Fc a R、Fc ε RI和BCR上，由單核 細胞、巨噬細胞、肥大細胞、嗜中性粒細胞和Β細胞表達）上，並特異性介導由在肥大細胞、 Β細胞、巨噬細胞、單核細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性細胞、ΝΚ細胞、DC細胞、血小板和破骨細 胞中這些受體的活化觸發的免疫受體信號轉導u。
[0007] BCR交聯後，Iga /Igi3的細胞溶質尾的ITAM基序上的酪氨酸殘基被Src家族激 酶Lyn磷酸化，形成SYK的對接位點，SYK從而募集到BCR免疫複合物上。然後，SYK被Src 家族激酶Lyn磷酸化和活化。活化後，SYK將銜接蛋白BLNK磷酸化，這允許其通過BTK和 PLC γ 2各自的SH2結構域與BTK和PLC γ 2兩者相互作用。SYK磷酸化並由此活化的BTK進 而將PLC γ 2磷酸化和活化，導致IP3形成、Ca2+活動、PKC和MAPK活化以及隨後的NFAT、AP-1 和NF κ B轉錄因子活化，導致活化和表面標記表達、細胞因子釋放、B細胞的存活和增殖3。 在肥大細胞中，變應原活化的Fc ε RI被LYN和FYN磷酸化，並募集SYK，其進而被LYN磷酸 化並進一步自磷酸化，變成完全活化。活化的SYK將兩個銜接分子NTAL和LAT磷酸化，產 生針對含SH2蛋白質（例如PLC γ pvav和PI3K的p85調節亞基）的更多對接位點，導致肥 大細胞脫粒和細胞因子產生'Syk在肥大細胞的信號轉導中的重要作用通過以下可重現的 觀察結果證實：不能脫粒的來自人供體的嗜鹼粒細胞（循環肥大細胞）的10-15%具有降低 量的Syk蛋白 5'6。此外，SYK對破骨細胞的骨再吸收活性是必需的。破骨細胞被a v β 3整 聯蛋白刺激後，SYK最可能被c-Src以DAP-12 / Fc γ RII依賴性機制磷酸化，導致SPL-76 和Vav3磷酸化和隨後的細胞骨架重組。SYK缺陷的破骨細胞是無活性的，顯示有缺陷的細 胞骨架重組。與此關聯，SYK缺陷胚胎顯示有缺陷的骨骼塊 7'8。
[0008] 在淋巴結中BCR介導的B細胞活化以及在關節中FcR介導的樹突細胞、單核細胞、 巨噬細胞、嗜中性粒細胞和肥大細胞活化是類風溼性關節炎（RA)期間發生的細胞病理生 理機制的必要組成。此外，破骨細胞的活化導致骨和軟骨的破壞，這是該病理學的標誌 9。因 此，SYK信號轉導應在關節炎發生期間在外周和炎症位點均起關鍵作用1(1。實際上，口服可 用的Syk抑制劑R460 (由Rigel開發）引起臨床評分的顯著改善，並在RA的鼠模型中顯 著降低血清細胞因子濃度以及骨侵蝕n' 12。此外，該抑制劑顯示在人類的RA II期研究中具 有功效（ACR評分改善）和良好的耐受13'14'15。
[0009] 在SLE中，B細胞本質上通過產生自身抗體促進發病，所述自身抗體導致免疫複合 物形成，刺激Fc受體，並最終導致過度和慢性的炎症活化。在SLE的鼠模型中，用Syk抑制 劑治療導致類型轉變的（class-switched)生發中心、邊緣區、新形成的濾泡B細胞的數量 降低，並由此導致疾病緩和效果 18。
[0010] 儘管在胸腺細胞和天然τ細胞中TCR信號通過細胞內酪氨酸激酶ZAP-70傳遞，數 個研究表明，分化型效應T細胞例如涉及多發性硬化（MS)或系統性紅斑狼瘡（SLE)的病理 生理學的那些，顯示TCR ζ鏈減量調節和伴隨的TCR/⑶3鏈及其與FcR γ相互作用的增量 調節。這些研究表明，在效應細胞中TCR/⑶3/FcRy複合物募集並活化Syk酪氨酸激酶，而 不是ZAP-70酪氨酸激酶。在TCR信號轉導中該病理學轉變全部發生在效應細胞中，而不是 在天然或記憶T細胞中 16'17'18。然後並不令人驚訝的是，SYK抑制劑已表明延緩疾病進展和 提高SLE鼠模型的存活 17，18，19,2°，21。
[0011] SYK抑制劑亦可用於哮喘、變態反應症、多發性硬化和其它疾病例如血小板減少性 紫癜和T或B細胞淋巴瘤a22_ 35。
[0012] 用Syk抑制劑治療患病前的NZB/W小鼠防止腎病的發生，其通過降低腎小球硬化、 腎小管損傷、蛋白尿和BUN水平得到證實 18。
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[0014] 除了肥大細胞，Syk還在包括B細胞在內的其它造血細胞中表達，其中認為Syk 在轉導不成熟B細胞轉變成成熟循環B細胞所必需的信號中起重要作用（M. Turner等， Immunology Today, 21: 148 (2000)。已報導B細胞在一些炎性病況例如狼瘡（0. T. Chan 等，Immunological Rev, 169: 107-121 (1999)和類風溼性關節炎（A. Gause 等， Biodrugs, 15(2): 73-79 (2001)中起重要作用。
[0015] 還報導Syk是引起產生神經毒性產物的β澱粉樣蛋白和朊病毒原纖維的信號轉 導級聯放大的元件（C. Κ. Combs 等，J. Neuroscl, 19: 928-939 (1999)。此外，Syk 抑 製劑阻斷產生這些神經毒性產物。因此，呋喃並吡啶衍生物將可能用於治療阿爾茨海默氏 病和相關的神經炎性疾病。另一報導（Y. Kuno等，Blood, 97，1050-1055 (2001)證實 Syk在惡性進展中起重要作用。發現TEL-Syk融合蛋白轉變造血細胞，這表明其在造血惡性 腫瘤的發病中起作用。因此，呋喃並吡啶衍生物可用於治療某些類型的癌症。
[0016] 涉及在造血惡性腫瘤中的其它蛋白酪氨酸激酶包括ABL (ABL1)、ARG (ABL2)、 PDGF β R、PDGFaR、JAK2、TRKC、FGFR1、FGFR3、FLT3 和 FRK。
[0017] Janus激酶（JAK)是由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2組成的酪氨酸激酶家族。JAK在 細胞因子信號轉導中起關鍵作用。JAK激酶家族的下遊底物包括信號轉導及轉錄激活因子 (STAT)蛋白。JAK/STAT信號轉導涉及許多異常免疫反應的介導，例如變態反應、哮喘、自身 免疫疾病例如移植物（異體移植物）排斥、風溼性關節炎、肌萎縮性側索硬化和多發性硬 化、以及實體和血液惡性腫瘤例如白血病和淋巴瘤（JAK/STAT途徑的藥物幹預的綜述參見 Frank, Mol. Med. 5，432:456 (1999)和 Seidel 等，Oncogene 19，2645-2656 (2000)。 JAK2是已證實的治療骨髓增生病症（MPD)的強有力靶標，所述病症包括真性紅細胞增多 症（PV)、特發性血小板增多症、慢性特發性骨髓纖維化、伴隨有骨髓纖維化的骨髓樣組織變 性、慢性髓細胞樣白血病、慢性髓性單核細胞白血病、慢性嗜酸細胞性白血病、嗜酸細胞增 多症候群和系統性肥大細胞疾病。
[0018] Fms樣酪氨酸激酶3 (FLT3)，其亦稱為FLK-2 (胎肝激酶2)和STK-I (幹細胞激 酶1)，在造血幹細胞的增殖和分化中起重要作用。FLT3受體激酶在正常造血細胞、胎盤、 性腺和腦中表達。然而，該酶在超過80%的骨髓性患者的細胞和部分急性成淋巴細胞性白 血病細胞中以極高水平表達。此外，該酶亦可見於淋巴樣胚細胞危象的慢性髓細胞樣白血 病患者的細胞上。已報導FLT3激酶在30%的急性髓細胞樣白血病（AML)以及在急性成淋 巴細胞性白血病（ALL)的子集中突變（Gilliland等，Blood 100，1532-1542 (2002); Stirewalt 等，Nat. Rev. Cancer, 3，650-665 (2003)。FLT3 的最常見的活化突變是 在近膜區內固有的串聯複製，激酶結構域的點突變、插入或缺失較少見。這些突變的FLT3 激酶的一些是組成型活性的。FLT3突變與預後差有關（Malempati等，Blood，104，11 (2004)。開發了超過12個已知的FLT3抑制劑，並且一些已顯示出針對AML具有前景的臨 床效果（Levis 等 Int. J. Hematol, 52，100- 107 (2005)。
[0019] 已報導小分子FLT3抑制劑中的一些在具有FLT3活化突變的細胞系中有效誘導 細胞凋亡並延長在小鼠骨髓細胞中表達突變體FLT3的小鼠存活（Levis等，Blood，99， 3885-3891 (2002); Kelly等，Cancer Cell, 1，421-432 (2002); Weisberg等，Cancer Cell, 1，433-443 (2002); Yee 等，Blood, 100，2941-2949 (2002)。
[0020] 具體而言，本發明涉及化合物，並涉及其中Syk抑制、調控和/或調節信號轉導起 作用的化合物的用途。
[0021] 因此，通過酪氨酸激酶特別是Syk特異性抑制、調控和/或調節信號轉導的小分子 化合物的合成是合乎需要的，並且是本發明的目標。
[0022] 此外，本發明的目標在於合成用於預防和治療類風溼性關節炎、系統性狼瘡、哮 喘、變應性鼻炎、ITP、多發性硬化、白血病、乳腺癌和惡性黑素瘤的新化合物。令人驚訝的 是，我們已鑑定選擇性抑制SYK、BTK、KDR、Src、Zap70、Fak、Pyk2、Flt3或Jak或者抑制從 這些激酶中選擇的一些的呋喃並吡啶。
[0023] 此外，式I化合物抑制絲氨酸激酶GCN2。
[0024] 實體瘤的癌症治療的許多策略集中在儘可能地手術移除腫瘤塊和隨後通過放射 療法和用更特異性靶向癌細胞途徑的抑制劑或者細胞毒性劑的化學療法根除任何殘留腫 瘤細胞。然而，這樣的方法的成功性有限並且經常不可持續。這主要是由於所述細胞毒性劑 狹窄的治療窗（特異性和副作用）和癌症細胞適應由細胞毒性劑或其它抑制劑施加的選擇 壓力的能力造成。獲得對起始治療的抵抗力的小量腫瘤（幹）細胞的存活可足以播種腫瘤 的再生長。這些復發存在於與初始腫瘤相比更難治療的大多數病例中。結果，對腫瘤細胞的 更成功祀向可能需要祀向腫瘤細胞的平行的多重存活和逃脫機制（Muller & Prendegast 2007)。
[0025] 惡性腫瘤的發生伴有較多細胞生理學的參與。在該過程期間，癌症細胞獲得是 無限增殖化或對生長抑制信號不敏感基礎的數個性質。此外，腫瘤細胞還改變與微環境 的相互作用等。後者領域包括腫瘤細胞自免疫監督逃脫的策略（Muller & Prendegast 2007)。免疫監督限制惡性生長，但同時提供觸發避免免疫反應的機制進化的選擇壓力，如 [Dunn等2004]所綜述。基本上已經常觀察到T細胞免疫性的去除足以增加腫瘤發生率 [Shankaran等2001]，並且認為免疫逃脫在影響腫瘤潛伏（相對於進展），促進侵入和轉移， 並且負面影響治療反應。
[0026] 數個機理學研究發現，免疫逃脫與腫瘤微環境內的代謝改變具有重要的界面。此 處，介導對抗原的免疫耐受的重要作用與必需胺基酸色氨酸和精氨酸的分解代謝（分別由 酶吲哚胺2, 3-二加氧酶（ID0)和精氨酸酶I (ARG)進行）相關（Bronte和Zanovello， 2005; Muller 等，2005b; Muller 和 Prendergast, 2007; Munn 和 Mellor, 2007; Popovic 等，2〇〇7)。
[0027] IDO是催化色氨酸降解成犬尿氨酸的單鏈氧化還原酶。IDO不負責分解代謝過量 膳食色氨酸，而是負責調節在局部環境中的色氨酸水平。癌症患者中色氨酸分解代謝的提 高以顯著改變的色氨酸或分解代謝物血清濃度顯示，並且這與通常在腫瘤和引流淋巴結 中升高的ID0相關。根據數個出版物，ID0過表達與癌症預後差有關[Okamoto等2005; Brandacher 等，2006]。
[0028] T細胞似乎優先對ID0活化敏感，使得當對色氨酸飢餓時，它們不能分開，結果不 能通過呈遞給它們的抗原活化。Munn和Mellor以及他們的同事揭露，ID0通過阻抑T細胞 活化和通過對腫瘤抗原產生外周耐受來調節免疫性（Mellor和Munn, 2004)。這些機制包 括由腫瘤細胞募集到其直接微環境或腫瘤-引流淋巴結的免疫細胞的破壞。此處，通過抗 原呈遞細胞清除的腫瘤抗原被交叉呈遞到適應性免疫系統。除了是直接耐受產生之外，成 熟的DC還具有擴繁調節T細胞（Treg)的能力[Moser 2003]。
[0029] 除了色氨酸分解代謝之外，在腫瘤條件的微環境中精氨酸轉變增加，並且很多報 道表明，在腫瘤生長和發展期間精氨酸酶活化的作用。在腫瘤侵潤的骨髓細胞中，精氨酸通 過精氨酸酶I (ARG1)、精氨酸酶II (ARG2)轉變成脲和鳥氨酸，並且通過誘導形式的氧化氮 合酶（N0S2)氧化成瓜氨酸和一氧化氮（NO)。
[0030] 在結腸癌、乳腺癌、肺癌和前列腺癌患者中經常觀察到ARG活性增加 [Cederbaum 2004]，其與前列腺癌中存在的ARG和NOS過表達相關[Keskinege等2001，Aaltoma等 2001，Wang等2003]。已顯示侵潤巨噬細胞中的ARG活性損害抗原特異性T細胞反應和 CD3受體的表達。此外，骨髓細胞相關腫瘤中ARG和N0S的累積活性可對最終導致細胞凋亡 的抗原特異性T淋巴細胞產生抑制信號[Bronte 2003 a; 2003b]。
[0031] 與IDO和ARG有關的機制兩者在檢測到各自胺基酸濃度的衰竭濃度的點 時合併。在胺基酸剝奪期間，被稱為一般性控制非不可抑制2 (general control nonderepressible 2 (GCN2))的eIF2激酶EIF2AK4與細胞內聚集的脫醯tRNA相互作 用。因此，認為GCN2從自抑制改變成活性構象，並進一步通過自磷酸化被活化。然後，唯 一已知的底物蛋白質eIF2a被磷酸化並且結果用於翻譯起始的複合物被抑制[Harding等 2000]。這減少一般Cap依賴性翻譯起始和由此減少相應蛋白質產生。另一方面，這誘導應 激相關靶基因主要通過經由活化轉錄因子4 (ATF4)的cap非依賴性起始的特異表達。通 過表達相應的應激反應蛋白例如在胺基酸代謝中的酶，細胞試圖補償特定的細胞應激[Wek 等2006]。如果應激持續，通過轉錄促細胞凋亡轉錄因子CCAAT/增強子結合蛋白同源蛋白 (CHOP)，同一途徑轉變以促進細胞凋亡[Oyadomari 2004]。已顯示色氨酸飢餓觸發GCN2 依賴性應激信號轉導途徑。在T細胞中，改變eIF2a磷酸化和翻譯起始導致細胞生長停止 (Munn等2005)。Sharma等[2007]公布成熟Treg的直接ID0誘導活化和GCN2依賴性活 化。類似地，Fallarino 等[2006]發現 CD4+CD25-細胞至 CD25+FoxP3+ Treg 的 GCN2 依賴 性轉變，後者產生IL-10和TGFi3。Rodriguez等[2007]鑑定，通過色氨酸或精氨酸耗盡的 GCN2途徑的活化連同TCR信號轉導導致CD3 ζ鏈減量調節、細胞周期停止和無反應性。
[0032] 重要的是，GCN2途徑不僅對腫瘤免疫逃脫是重要的，而且在直接調節腫瘤存活中 起積極作用。Ye等[2010]發現在人實體瘤中前述轉錄因子ATF4過量表達，這表明在腫瘤 進展中的重要作用。胺基酸和葡萄糖剝奪是實體瘤中存在的典型應激，並活化GCN2途徑以 增量調節涉及胺基酸合成和運輸的ATF4靶基因。與正常組織相比，在人類和小鼠腫瘤中觀 察到GCN2活化/過表達和磷酸-eIF2a增加，並且ATF4或GCN2表達的廢除顯著抑制體內 腫瘤生長。得出結論，GCN2-eIF2a-ATF4途徑對維持腫瘤細胞中的代謝動態平衡是關鍵的。
[0033] 現有生物學通過適應性機制全面幹擾對制動腫瘤免疫逃脫有吸引力的ARG/ID0 途徑。此處GCN2功能的幹擾特別引人關注，因為其是兩種途徑即ID0和ARG途徑的合併點， 以及其為直接阻礙腫瘤代謝提供另外的機會。
[0034] 數種途徑抑制劑已被考慮為免疫調節劑。這些抑制劑主要針對ID0或ARG蛋白的 酶功能（Muller和Scherle, 2006)。精氨酸酶抑制劑N-輕基-nor-L-Arg的施用阻斷小鼠 中s. c. 3LL肺癌的生長[Rodriguez 2004]。貢獻N0的阿司匹林例如NCX 4016 (2-(乙醯 基氧基）苯甲酸3-(硝基氧基甲基）苯基酯）已被報導幹擾骨髓細胞的抑制酶活性。口服 給予的N0阿司匹林使荷瘤宿主的免疫狀態正常化，增加腫瘤抗原特異性T淋巴細胞的數量 和功能，並且提高由癌接種引發的抗腫瘤免疫的預防和治療有效性（DeSanto 2005)。
[0035] 底物類似物1甲基-色氨酸（1MT)和相關分子在癌症背景和其它環境下已廣泛用 於革巴向IDCLFriberg等（2002)和Uyttenhove等（2003)的研究證實，1MT可限制過表達ID0 的腫瘤的生長。然而，在數個腫瘤模型中1MT不能引起腫瘤消退，暗示著當ID0抑制用作單 一療法只有不高的抗腫瘤功效。相比之下，用1MT和多種細胞毒性化學治療劑的組合治療 引起建立的MMTV-neu/HER2腫瘤消退，所述腫瘤對任何單一作用劑療法反應差[Muller等 2005a]。治療之前，小鼠的CD4+或CD8+ T細胞的免疫耗竭廢除該模型中觀察到的組合功 效，證實1MT間接通過活化T細胞介導的抗腫瘤免疫性而起作用的預期。IDO靶向是1MT作 用所必需的重要證據由以下論證提供：在遺傳缺乏IDO的小鼠中1MT缺乏抗腫瘤活性[Hou 等，2007]。
[0036] GCN2的抑制使得能夠將胺基酸飢餓誘導的免疫編輯的兩種途徑分支合併，並減少 腫瘤避開抑制任一分支的選擇。此外，如上文詳述，GCN2抑制提供幹擾腫瘤代謝的機會，同 時可提高單一療法或與其它抗癌方法的組合療法的功效。
[0037] 文獻： 1. Aaltoma，S. Η. , Ρ. Κ. Lipponen和 V. Μ· Kosma. 2001. Inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and its prognostic value in prostate cancer (可誘導 的氧化氮合酶（iNOS)表達和其在前列腺癌中的預後價值）.Anticancer Res. 21:3101-3106. 2. Brandacher，G. ; Perathoner，A. ; Ladurner，R. ; Schneeberger，S. ; Obrist， P. ; Winkler, C. ; Werner, E. R. ; Werner-Felmayer, G. ; Weiss, H. G. ; Gobel，G.; Margreiter，R. ; Konigsrainer，A. ; Fuchs, D. ; Amberger，A. Prognostic value of indoleamine 2,3_ dioxygenase expression in colorectal cancer: effect on 七11111〇1'；!_1111；^^七;!_1^1'〇6118(剛哚胺2,3-二加氧酶表達在結腸直腸癌中的預後價值：對 腫瘤侵潤 T 細胞的作用）.Clin. Cancer Res. 2006，12，1144-1151. 3. Bronte V，Zanovello P. (2005). Regulation of immune responses by L-arginine metabolism (L_ 精氨酸代謝的免疫反應調節）· Nat Rev Immunol 5: 641-654. 4. Bronte, V. , P. Serafini，C. De Santo, I. Mari go, V. Tosello，A. Mazzoni, D. M. Segal, C. Staib，M. Lowel, G. Sutter 等· 2003a. 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[0038] 本發明具體涉及抑制、調控和/或調節經由Syk的信號轉導的式I化合物，涉及包 含這些化合物的組合物，涉及將其用於治療Syk誘導的疾病和症狀的方法。
[0039] 式I化合物可進一步用於分離和研究Syk的活性或表達。此外，它們特別適合用 於與Syk活性不調或阻礙有關的疾病的診斷方法。
[0040] 宿主或患者可屬於任何哺乳動物物種，例如靈長類物種，特別是人類；嚙齒類動 物，包括小鼠、大鼠和倉鼠；兔；馬、牛、狗、貓等。對實驗研究而言，動物模型具有吸引力，只 要是用於治療人類疾病的模型。
[0041] 特定細胞對用本發明化合物治療的易感性可通過體外試驗測定。通常將細胞培養 物與各種濃度的本發明化合物混合一段時間，所述時間足以允許活性作用劑例如抗IgM誘 發細胞反應例如表面標誌物表達，通常在約1小時和1周之間。可使用來自血液或活檢樣 本的培養細胞進行體外試驗。所表達的表面標誌物的量通過流式細胞術使用識別該標誌物 的特異性抗體來評價。
[0042] 劑量根據所用的具體化合物、具體疾病、患者狀況等而改變。治療劑量通常足以顯 著降低靶組織中不需要的細胞群，同時患者的成活力得以維持。治療通常持續直到發生顯 著降低（例如細胞負荷降低至少約50%)，並且可以持續直到機體內基本上不再有不需要的 細胞被檢測到。
[0043] 對於鑑定信號轉導途徑和檢測各種信號轉導途徑之間的相互作用，許多科學家已 開發了合適的模型或模型系統，例如細胞培養模型（例如Khwaja等，ΕΜΒ0，1997，16， 2783-93)和轉基因動物模型（例如 White 等，Oncogene, 2001，20，7064-7072)。對於 確定信號轉導級聯中的某些階段，可利用相互作用化合物以調節信號（例如Stephens等， Biochemical J.，2000，351，95-105)。本發明化合物還可在動物和/或細胞培養模型中 或在本申請提及的臨床疾病中用作測試激酶依賴性信號轉導途徑的試劑。
[0044] 激酶活性的測量是本領域技術人員熟知的技術。使用底物例如組蛋白（例如 Alessi等，FEBS Lett. 1996，399，3，333-338頁）或鹼性髓磷脂蛋白測定激酶活性的 一般性測試系統，描述於文獻（例如 Campos-Gonzdilez，R.和 Glenney, Jr.，J. R. 1992， J. Biol. Chem. 267，14535 頁）。
[0045] 對於鑑定激酶抑制劑，可利用各種測定系統。在閃爍迫近測定法（scintillation proximity assay) (Sorg 等，J. of. Biomolecular Screening, 2002, 7, 11-19)和閃 光板（flashplate)測定法中，測量用γΑΤΡ對作為底物的蛋白質或肽的放射性磷酸化。在 抑制化合物的存在下，可檢測到放射性信號減少或根本沒有。此外，均相時間分辨螢光共 振會泛量傳遞（homogeneous time-resolved fluorescence resonance energy transfer, HTR-FRET)和螢光偏振（FP)技術適宜作為測定方法（Sills等，J. of Biomolecular Screening, 2002， 191-214)。
[0046] 其它非放射性ELISA測定法使用特異性磷酸-抗體（磷酸-AB)。磷酸-AB僅結 合磷酸化底物。可通過化學發光使用第二過氧化物酶綴合的抗山羊抗體檢測該結合（Ross 等，2002，Biochem. J.)。 現有技術
[0047] 其它雜環 Syk 抑制劑描述於 W02008/118823、W02009/136995、W0 2010/027500。
[0048] 發明簡述 本發明涉及式I化合物和其藥學上可用的溶劑合物、鹽、互變異構體和立體異構體（包 括其以所有比例的混合物）： 其中
【權利要求】
1. 式I的化合物和其藥學上可接受的溶劑合物、鹽、互變異構體和立體異構體，包括 其以所有比例的混合物，
其中 R1 表示 Ar1 或 Het1, R2 表示 Ar2、Het2、NH (CH2) nAr2、0 (CH2) nAr2、NH (CH2) nHet2、NHCONHA、CONH2 或 N3， R4表示H或F， Ar1 表示苯基，其是未取代的或被 Hal、A、[C(R3)2]nCN、（CH2) nOH、（CH2)nOA、（CH2)nCOOH、 (CH2) nCOOA、S (0) _/、（CH2) nHet3、CON (R3) 2、CONH (CH2) nC (R3) 2N (R3) 2 和 / 或 CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3] (CH2)p0R3 -、二或三取代， Ar2 表示苯基，其是未取代的或被 A、Hal、（CH2)n0H、（CH2)n0A、（CH 2)nNH2、（CH2)nNHA、 (CH2)nNA2、S02NH2、S0 2NHA、S02NA2、（CH2)nC0NH 2、（CH2)nC0NHA、（CH2)nC0NA 2、[C(R3)2]nN(R3) 2、 CONH (CH2) PCH [ (CH2) nN (R3) 2] (CH2) P0R3、CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3] NHS02A、CONH (CH2) PCH [ (CH2) n0R3]0R3、C0NH(CH2)p[(CH(0R 3)]pCH20R3、CONHR4、CONH(CH 2)pCH[(CH2)nN(R3) 2]Cyc、C0NH(CH2) nC (R3) 2N (R3) 2 和 / 或 CONHC (R3) 2 (CH2) P0R3 -、二或三取代， Het1表示苯並-1，3-間二氧雜環戊烯基或吲唑基，其各自是未取代的或被A -取代， Het2表示哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、嗎啉基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、 噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡啶基、嘧啶基、三唑基、四唑基、噁二唑基、噻二唑 基、噠嗪基、吡嗪基、喹啉基、異喹啉基、苯並咪唑基、呋喃並吡啶基或吲唑基，其各自是未取 代的或被他1、順(〇1 2)丨6七4、六、（〇12)110!1、（〇12) 11(^、（〇12)11順2、（〇12) 1^祖、（〇12)11隱2和/或 =0-、二或三取代， Het3表示四唑基或噁二唑基，其各自是未取代的或被A、（CH2)nNH 2、（CH2)nNHA、（CH2)nNA 2 和/或=0-或二取代， Het4表示哌啶基或四氫呋喃基，其各自是未取代的或被A或NH2 -取代， R3表示Η或具有1、2、3或4個C原子的烷基， Α表示非支鏈的或支鏈的具有1-10個C原子的烷基，其中1-7個Η原子被F和/或C1 置換，和/或其中一個或兩個非鄰近的CH2基團可被0和/或ΝΗ置換， 或者 具有3-7個C原子的環狀烷基，其可以是未取代的或被OH、NHC0A或NH2 -取代， Cyc表示具有3-7個C原子的環狀烷基， m表示0、1或2， η 表示 0、1、2、3 或 4， Ρ表示1、2、3或4。
2. 權利要求1的化合物和其藥學上可接受的溶劑合物、鹽、互變異構體和立體異構 體，包括其以所有比例的混合物，所述化合物選自

3.權利要求1-2的化合物和其藥學上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構體和立體異構 體的製備方法，其特徵在於 a)將式Ila的化合物與式Ilia的化合物以Suzuki型偶聯進行反應，得到式IVa的化 合物
其中R4具有權利要求1中表明的含義； f-L Ilia 其中R1具有權利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團；
其中R1和R4具有權利要求1中表明的含義； 隨後將式IVa的化合物與式Va的化合物以Suzuki型偶聯進行反應， R2-L Va 其中R2具有權利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團； 或者 b) 將式lib的化合物與式Va的化合物以Suzuki型偶聯進行反應，得到式IVb的化合 物，
其中R4具有權利要求1中表明的含義； R2-L Va 其中R2具有權利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團；
其中R2和R4具有權利要求1中表明的含義； 隨後將IVb的化合物與式Ilia的化合物以Suzuki型偶聯進行反應， RiL Ilia 其中R1具有權利要求1中表明的含義， 和L表示硼酸或硼酸酯基團； 或者 c) 通過用溶劑分解劑或氫解劑處理將其自其官能衍生物之一釋放， 和/或 將式I的鹼或酸轉化成其鹽之一。
4. 藥物，其包含：至少一種式I的化合物和/或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物、互變 異構體和立體異構體，包括其以所有比例的混合物；和任選的藥學上可接受的載體、賦形劑 或溶媒。
5. 式I的化合物和其藥學上可接受的鹽、溶劑合物、互變異構體和立體異構體的藥 物，包括其以所有比例的混合物，其用於治療和/或預防炎性病況、免疫學病況、自身免疫 病況、變應性病況、風溼性病況、血栓形成病況、癌症、傳染病、神經變性疾病、神經炎性疾 病、心血管疾病和代謝病況，該方法包括給予有需要的受試者有效量的式I化合物。
6. 權利要求5的化合物，其用於治療和/或預防癌症，其中所述待治療的癌症是實體 瘤或血液和免疫系統腫瘤。
7. 權利要求6的化合物，其中所述實體瘤源自於上皮、膀胱、胃、腎、頭和頸、食道、宮 頸、甲狀腺、腸、肝、腦、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系統、胃、喉、骨包括軟骨肉瘤和尤因肉瘤、 生殖細胞包括胚胎組織腫瘤和/或肺的腫瘤，源自於單核細胞性白血病、肺腺癌、小細胞性 肺癌、胰腺癌、成膠質細胞瘤、神經纖維瘤、血管肉瘤、乳腺癌和/或惡性黑素瘤。
8. 權利要求5的化合物，其用於治療和/或預防選自類風溼性關節炎、系統性狼瘡、哮 喘、多發性硬化、骨關節炎、缺血性損傷、巨大細胞動脈炎、炎性腸病、糖尿病、囊性纖維化、 銀屑病、舍格倫症候群和移植器官排斥的疾病。
9. 權利要求5的化合物，其用於治療和/或預防選自阿爾茨海默病、唐氏症候群、伴有 Dutch型澱粉樣變性的遺傳性腦出血、大腦澱粉樣血管病、克雅病、額顳痴呆、亨廷頓病、帕 金森病的疾病。
10. 權利要求5的化合物，其用於治療和/或預防選自利什曼原蟲、分枝桿菌包括麻風 分枝桿菌、結核分枝桿菌和/或鳥分枝桿菌、利什曼原蟲、痕原蟲、人免疫缺陷病毒、Epstein Barr病毒、單純皰疫病毒、C型肝炎病毒的疾病。
11. 藥物，其包含：至少一種式I的化合物和/或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物和立 體異構體的藥物，包括其以所有比例的混合物；和至少一種另外的藥物活性成分。
12. 由以下的分開包裝組成的套裝（藥盒）： (a) 有效量的式I化合物和/或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物、鹽和立體異構體，包括 其以所有比例的混合物， 和 (b) 有效量的另外的藥物活性成分。
【文檔編號】A61P33/00GK104114558SQ201380010420
【公開日】2014年10月22日 申請日期:2013年1月22日 優先權日:2012年2月21日
【發明者】L.布格多夫, T.羅斯, C.多伊奇 申請人:默克專利股份公司