用於測量低密度脂蛋白膽固醇的方法
2023-10-22 19:20:02 2
專利名稱：用於測量低密度脂蛋白膽固醇的方法
技術領域：
本發明涉及測量樣本中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其中具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物特異地和非LDL(VLDL或者HDL)形成複合物。
背景技術：
除了和白蛋白結合的游離脂肪酸外，存在於血液的脂質摻入脂蛋白的結構中，並且它們以乳糜微粒(CHM)、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白 (HDL)等等的形式存在。膽固醇特別地分布於VLDL、LDL和HDL。已知LDL起運輸膽固醇的作用，並且高水平的LDL促進動脈硬化。已知血液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的測量成為動脈硬化發生和進行的指示物。Burstein M 等人(Rapid Method for the Isolation of Lipoproteins from Human Serum by Precipitation with Polyanions, J. Lipid Researchll :583，1970)描述， 主要地通過使用聚陰離子化合物使除了 HDL外的脂蛋白特異凝集。然而，該文獻描述的聚陰離子化合物特異地和非LDL(VLDL或者HDL)形成複合物是困難的。CC Heuck 禾口 G Schlierf(Beta-lipoprotein cholesterol quantitation with polycations，Clin Chem 1977 23 =536-540)描述通過使用聚乙烯亞胺和陽離子交換樹脂排除VLDL和HDL，從而定量脂蛋白膽固醇。然而，該文獻描述的方法難以解決其要求孵育 15分鐘或更長，以及其需要兩類試劑的問題。
發明內容
本發明的目的是提供一種高選擇性測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL)的方法。作為為實現上述目的而進行的深入研究的結果，本發明的發明人發現具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其能夠和非LDL形成複合物。使用本發明的化合物，使得單一的化合物和非LDL(特別地，VLDL和HDL)在短時間形成複合物成為可能。因此，使得測量包含於LDL的成分(例如膽固醇、中性脂肪和脫輔基蛋白)成為可能。本發明基於這些發現而完成。本發明提供減少或者除去樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL) 的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理含有極低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的樣本。本發明還提供測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，並使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。優選地，使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中的極低密度脂蛋白(VLDL)形成複合物。優選地，使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中的高密度脂蛋白(HDL)形成複合物。優選地，所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚(烯丙胺)、聚(烯丙胺)鹽酸鹽、烯丙胺鹽酸鹽共聚物、二烯丙胺鹽酸鹽聚合物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物中的任何，條件是根據需要任選修飾烯丙胺和二烯丙胺。優選地，所述烯丙胺鹽酸鹽共聚物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物分別是烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物以及二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。優選地，所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚(烯丙胺)或者二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。優選地，所述低密度脂蛋白膽固醇通過使得過氧化物酶和色原體作用於從低密度脂蛋白膽固醇產生的過氧化氫以實施顯色反應而測量，所述過氧化氫是由於膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶的作用而從所述低密度脂蛋白膽固醇產生的。本發明還提供用於測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶和(c)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。本發明還提供用於測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑盒，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。本發明還提供用於測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的乾燥分析元件，其包括 (a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。根據本發明，可以僅使用單一化合物在短時間內高選擇性地測量低密度脂蛋白膽固醇。
圖1顯示實施例1中進行的瓊脂糖凝膠電泳(膽固醇染色的結果)。圖2顯示對比例1中進行的瓊脂糖凝膠電泳(膽固醇染色的結果)。圖3顯示實施例2中LDL-C測量的結果。圖4顯示對比例2中LDL-C測量的結果。
具體實施例方式在下文中，本發明的實施方案將被詳細描述。在本發明說明書中，以％表達的濃度表示重量百分比濃度。本發明涉及減少或者除去樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL) 的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理含有極低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的樣本。此外，本發明涉及測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，並使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。血液、血清、血漿、尿等等可以用作體液。這樣的血液、血清、血漿或者尿可以直接用作體液樣品。另外，也可以使用已經適當地預處理的血液、血清、血漿或者尿。構成本發明所用的具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物的單體的實施例包括烯丙胺(伯胺)、二烯丙胺(仲胺)、烷基二烯丙胺(叔胺)和二烷基二烯丙胺(季胺)。 胺既可以是游離形式，也可以是鹽，如鹽酸鹽、乙酸鹽或硫酸鹽。氨基基團可以由烷基基團 (例如甲基基團、乙烷基團等)、烷氧羰基基團(例如甲氧羰基基團)或其它基團保護。多胺可以是多胺的均聚物、或多胺和二氧化硫、順丁烯二酸等等形成的共聚物。所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物優選是聚(烯丙胺)、聚(烯丙胺)鹽酸鹽、烯丙胺鹽酸鹽共聚物、二烯丙胺鹽酸鹽聚合物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物中的任何，條件是根據需要任選修飾烯丙胺和二烯丙胺。應當指出，本發明中使用的術語「鹽酸鹽聚合物或者共聚物」，不是指單體鹽酸鹽聚合形成的產物，而是指單體聚合後形成的聚合物的胺的部分是鹽酸鹽，與生產方法無關。具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物的分子量優選是從300至200000，更優選是從1000至50000，以及進一步優選從1000至10000。本發明使用的具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物的具體實施例包括 Nitto Boseki Co.，LTD的PAA系列和PAS系列。可以用於本發明的Nitto Boseki Co., LTD的PAA系列和PAS系列聚合物化合物的性質將在下面描述。然而，可以用於本發明的化合物的類型並不受限於此。表 權利要求
1.一種用於減少或除去樣本中極低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)的方法， 其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理含有極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)的樣本。
2.一種測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，以及使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LHL-C)。
3.根據權利要求2的方法，其中使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中極低密度脂蛋白(VLDL)形成複合物。
4.根據權利要求2的方法，其中使用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物，其和脂蛋白中高密度脂蛋白(HDL)形成複合物。
5.根據權利要求2的方法，其中所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚 (烯丙胺)、聚(烯丙胺)鹽酸鹽、烯丙胺鹽酸鹽共聚物、二烯丙胺鹽酸鹽聚合物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物中的任何，條件是根據需要任選修飾烯丙胺和二烯丙胺。
6.根據權利要求5的方法，其中所述烯丙胺鹽酸鹽共聚物和二烯丙胺鹽酸鹽共聚物分別是烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物以及二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。
7.根據權利要求4的方法，其中所述具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物是聚 (烯丙胺)或者二烯丙胺鹽酸鹽和-S02-的共聚物。
8.根據權利要求2的方法，其中所述低密度脂蛋白膽固醇通過使得過氧化物酶和色原體作用於從低密度脂蛋白膽固醇產生的過氧化氫以實施顯色反應而測量，所述過氧化氫是由於膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶的作用而從所述低密度脂蛋白膽固醇產生的。
9.用於測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶或者膽固醇脫氫酶和(c)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。
10.用於測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的試劑盒，其包括(a)膽固醇酯酶、(b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。
11.用於測量低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的乾燥分析元件，其包括(a)膽固醇酯酶、 (b)膽固醇氧化酶、(c)過氧化物酶、(d)色原體和(e)具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物。
全文摘要
本發明提供用於測量低密度脂蛋白膽固醇的方法。具體地說，本發明提供能夠高選擇性地測量體液中低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的方法，其包括用具有烯丙胺或二烯丙胺單元的聚合物化合物處理體液，以及使用(a)膽固醇酯酶和(b)膽固醇氧化酶或膽固醇脫氫酶測量低密度脂蛋白膽固醇(LHL-C)。
文檔編號C12Q1/60GK102162005SQ20111004511
公開日2011年8月24日 申請日期2011年2月22日 優先權日2010年2月23日
發明者M·朱馬維德, 豬股弘子 申請人:富士膠片株式會社