一種植物組織快速直接PCR擴增試劑盒的製作方法
2023-10-22 21:50:57 1
本實用新型屬於生物技術領域，涉及一種PCR擴增試劑盒，具體涉及一種植物組織快速直接PCR擴增試劑盒。
背景技術：
隨著越來越多植物基因組測序的完成，植物基因功能的研究越來越得到重視，基因研究的主要方法之一PCR也得到了長足的發展，植物基因組的PCR一直均以植物基因組DNA為擴增模板，因此在PCR的過程中第一步往往是植物基因組 DNA的提取。核酸提取純化的原始目的是為了去除可能干擾後繼反應的雜質，對於PCR技術來說，若是能跳過這一步，直接利用樣本進行PCR，那不僅能省時省力，還能避免交叉汙染的風險。由於DNA聚合酶性能的改進，已經使得Taq酶擴增性能越來越強大，實驗室之間早已流傳著各種直接用樣品進行PCR的方法，不過大多只限於哺乳動物細胞或者細菌類，而甚少涉及植物細胞或組織，且擴增性能極不穩定，因此設計開發一種可用於植物組織快速直接PCR擴增試劑盒顯得尤為重要。
技術實現要素：
本實用新型要解決的技術問題為針對植物組織進行直接PCR擴增的問題，本實用新型能較好的應用於植物組織進行直接PCR擴增，體積小，操作簡單、便於運輸攜帶和使用。
為實現上述目的，本實用新型採用以下技術方案：
一種植物組織快速直接PCR擴增試劑盒,其包括盒體(1)、海綿襯墊(2)，所述的海綿襯墊(2)置於盒體(1)內，海綿襯墊(2)上設有容器孔並裝有多個裝有試劑的試劑管，分別為裝有10xPCR Buffer的試劑管(3)、裝有dNTPs 的試劑管(4)、裝有MgCl2的試劑管(5)、裝有Taq酶的試劑管(6)。
所述的容器孔較佳的為4個，容器孔在所述的襯墊上分為兩排排列，上述的裝有10xPCR Buffer的試劑管、裝有dNTPs的試劑管、裝有MgCl2的試劑管、裝有Taq酶的試劑管的規格均為1.5ml。
上述的植物組織快速直接PCR擴增試劑盒試劑10xPCR Buffer主要包括KCl、 Tris-HCl,dNTPs主要包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP，MgCl2主要包括MgCl2溶液， Taq酶為經過基因工程改造而成的高耐受性，可用於以植物組織為模板進行PCR 擴增的Taq酶和taq酶抗體混合物。
本實用新型的保存溫度為-20℃，儘量減少反覆凍融。
本實用新型較佳的使用方法為：
1.PCR反應液的配製；
2.PCR擴增反應；
3.PCR產物的檢測。
優選地，所述的植物組織快速直接PCR擴增步驟包括：
1.PCR反應液的配製，將該發明試劑盒各組分進行水浴溶解並依據相應比例進行混合配製；
2.PCR擴增反應，將配製好的PCR反應液分裝至0.2mlPCR擴增管中，加入模板(植物組織)並蓋上管蓋進行PCR擴增,擴增程序為95℃10min，9810s、 58℃30s、72℃60s/kb、40個循環，72℃5min,4℃保存。
3.PCR產物的檢測，將PCR產物進行1.5％瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。
應用本實用新型的有益效果為：本實用新型提供的一種植物組織快速直接PCR擴增試劑盒，通過使用優化設計的試劑及方法，有效克服了常規方法步驟繁瑣，擴增效果差，無法以植物組織為模板進行擴增等問題。
本實用新型提供的植物組織快速直接PCR擴增試劑盒設計合理，內部結構及各試劑管排列有序，大小適宜，便於運輸和使用。
附圖說明
圖1為本發明的植物組織快速直接PCR擴增試劑盒結構示意圖。
具體實施方式
為了能夠更清楚地描述本發明的技術內容，下面結合具體實施例來進行進一步的描述。
本發明所述的一種植物組織快速直接PCR擴增試劑盒，包括盒體(1)、海綿襯墊(2)，所述的海綿襯墊(2)置於盒體(1)內，海綿襯墊(2)上設有容器孔並裝有多個裝有試劑的試劑管，分別為裝有10xPCR Buffer的試劑管(3)、裝有dNTPs的試劑管(4)、裝有MgCl2的試劑管(5)、裝有Taq酶的試劑管(6)。
所述的容器孔較佳的為4個，容器孔在所述的襯墊上分為兩排排列，上述的裝有10xPCR Buffer的試劑管、裝有dNTPs的試劑管、裝有MgCl2的試劑管、裝有Taq酶的試劑管的規格均為1.5ml。
上述的植物組織快速直接PCR擴增試劑盒試劑10xPCR Buffer主要包括500 mM KCl、100mMTris-HCl(pH 8.3),dNTPs主要包括25mM的dATP、dCTP、dGTP、 dTTP，MgCl2主要包括25mM的MgCl2溶液，Taq酶為5U/ul的Taq酶和1U/ul的 taq酶抗體混合物。
本實用新型的保存溫度為-20℃，儘量減少反覆凍融。
本實施例以擬南芥植物中HSP70基因為例。
本發明所述的植物組織快速直接PCR擴增試劑盒操作方法如下：
1.PCR反應液的配製，將該發明試劑盒各組分進行水浴溶解並依據相應比例進行混合配製，其中10xPCR Buffer 5ul，dNTPs 1ul，MgCl23ul，Taq酶1ul，上遊引物和下遊引物(10μM)各1ul，模板為擬南芥葉組織2mm2和擬南芥種子 2顆，設置空白對照組，加入3ul無菌純化水作為模板，加水補足體積至50ul。
2.PCR擴增反應，擴增程序為95℃10min，9810s、58℃30s、72℃27s、 40個循環，72℃5min,4℃保存。
3.PCR產物檢測，取3ulPCR產物並配製1.5％瓊脂糖凝膠進行電泳檢測。
在此說明書中，本發明已參照其特定的實施例作了描述。但是，很顯然仍可以作出各種修改和變換而不背離本發明的精神和範圍。因此，說明書和附圖應被認為是說明性的而非限制性的。
綜上所述，本實用新型結構簡單、使用方便、設計合理，該試劑盒在對植物組織快速直接PCR擴增時具有操作簡單、耗時短、PCR產物濃度高、便於運輸攜帶和使用等優點。