一種抗口腔致齲菌的多肽Pm14及製備方法
2023-10-23 00:20:57 1
專利名稱：一種抗口腔致齲菌的多肽Pm14及製備方法
技術領域：
本 發明屬於醫藥生物技術領域，涉及Fmoc化學合成多肽，即一種抗口腔致齲菌的多肽Pml4及製備方法，該多肽具有抗口腔致齲菌能力，尤其是鏈球菌屬的細菌。
背景技術：
雖然投入了大量的人力、物力，齲病(dental caries)仍然是世界性非傳染性的三大疾病之一。齲病是在口腔內外環境中多種因素影響下，牙齒硬組織發生的一種慢性進行性破壞的細菌感染性疾病。變異鏈球菌和遠緣鏈球菌是主要的致齲菌。1946年，McClure 和Hewitt證實青黴素可以抑制大鼠齲病的發生，主要機理是抑制細菌細胞壁合成、抑制或幹擾細菌的核酸和蛋白質的代謝與合成途徑來達到抗菌的目的。然而這些傳統抗生素容易誘使細菌發生突變而產生抗菌素的耐藥性。因此，國內外學者一直致力於開發新型的抗菌素，而多肽是一段具有抗菌活性的短的胺基酸。魚類具有強有力的天然免疫系統，從而能夠應對大量的病原微生物。我們在之前已經證明了 α 螺旋線性陽離子多肽 Pleurocidin (GWGSFi7KKAAHVGKHVGKAALTHYL-NH2)具有抗致齲菌、真菌的能力，並對變異鏈球菌生物膜有一定的抑制作用。但是pleurocidin的長度為25個胺基酸，過長的胺基酸提高了合成成本和對細菌生物膜的滲透能力，因此開發出新的短肽就更為必要。
發明內容
本發明的目的在於提供一種抗口腔致齲菌的多肽Pml4及製備方法，以克服天然抗菌肽長度過長，合成成本相對較高的問題。本發明採用的技術方案是一種抗口腔致齲菌的多肽Pml4，其製備方法是通過對天然多肽pleurocidin的活性中心的查找，對口腔常見致齲菌有一定的抗菌、殺菌能力， 在確定活性中心的基礎上，對其進行胺基酸的刪除和替換形成新型的具有殺菌能力的抗菌多肽；所述新型抗菌多肽Pml4，序列為FKFFKKFFKKW。其製備方法中所述口腔常見致齲菌為變異鏈球菌。其製備方法中所述口腔常見致齲菌為遠緣鏈球菌。其製備方法中所述口腔常見致齲菌為血鏈球菌。多肽使細菌細胞膜表面失去原有性狀，變得粗糙甚至有出現孔隙，通過在細菌表面形成離子通道，引起細菌內容物的流出，從而導致了細菌的死亡。抗口腔致齲菌的多肽Pml製備方法是，其特徵在於通過保持、改進α螺旋特性， 對天然多肽pleurocidin活性中心胺基酸進行刪除和替換，通過直接化學Fmoc合成的方法，構建有抗菌能力的多肽。本發明的特點是發現併合成了新型的抗菌短肽。該多肽通過在細菌表面形成離子通道的原理來引起細菌的崩解、死亡。提高了合成成本和利用效率，從而更好的用於齲病的預防和治療。本發明通過對天然多肽pleurocidin活性中心的刪除和替換，構成了新的抗菌多肽。該多肽對口腔中的變異鏈球菌、血鏈球菌、遠緣鏈球菌都有一定的抗菌能力。多肽對細菌的最小抑菌濃度範圍為8-32Pg/ml，最小殺菌濃度範圍為8-64Pg/ml之間。多肽比天然多肽的長度更小，而抑菌、抗菌能力相當。本發明的多肽的抗菌原理為多肽使細菌表面失去原有性狀，變得粗糙甚至有出現孔隙；在細菌表面形成離子通道，引起細菌內容物的流出，從而導致了細菌的崩解、死亡；從而具有抗口腔致齲菌的能力。
以下結合附圖和實施例對本發明做進一步的詳細描述
圖1是本發明中的多肽Pmll和Pml4的α螺線結構軟體推測圖； 圖2是多肽處理細菌的電鏡照片； 圖3是多肽處理2個小時的結果； 圖4是多肽處理2個小時的結果。
具體實施例方式一種抗口腔致齲菌的多肽Pml4，其製備方法是通過對天然多肽pleurocidin的活性中心的查找，對口腔常見致齲菌有一定的抗菌、殺菌能力，在確定活性中心的基礎上， 對其進行胺基酸的刪除和替換形成新型的具有殺菌能力的抗菌多肽；所述新型抗菌多肽 Pml4，序列為 FKFi7KKFi7KKl其製備方法中所述口腔常見致齲菌為遠緣鏈球菌。其製備方法中所述口腔常見致齲菌為血鏈球菌。多肽使細菌細胞膜表面失去原有性狀，變得粗糙甚至有出現孔隙，通過在細菌表面形成離子通道，引起細菌內容物的流出，從而導致了細菌的死亡。抗口腔致齲菌的多肽製備方法是，其特徵在於通過保持、改進α螺旋特性，對天然多肽pleurocidin活性中心胺基酸進行刪除和替換，通過直接化學Fmoc合成的方法，構建有抗菌能力的多肽。實施例
圖1是多肽Pmll和Pml4的α螺線結構軟體推測圖。圖2是多肽處理細菌的電鏡照片。Α，正常變異鏈球菌；B，Pmll處理過後的變異鏈球菌；C，Pml4處理過後的變異鏈球菌；D，正常血鏈球菌；E，Pmll處理過後的變異鏈球菌； F，Pml4處理過後的變異鏈球菌。可以看見多肽處理過後的細菌表面發生變化，出現多孔狀或是細菌崩解，皺縮的現象。1.多肽的設計合成 1. 1多肽的設計
多肽採用截取pleurocidin活性中心的方法，刪除、替換 胺基酸的方法設計。設計後多肽的物理性質如表1。α螺線結構的參數見表1，示意圖見圖2。
權利要求
1.一種抗口腔致齲菌的多肽RI114，其製備方法是通過對天然多肽pleurocidin的活性中心的查找，對口腔常見致齲菌有一定的抗菌、殺菌能力，在確定活性中心的基礎上， 對其進行胺基酸的刪除和替換形成新型的具有殺菌能力的抗菌多肽；所述新型抗菌多肽 Pml4，序列為 FKFi7KKFi7KKl
2.根據權利要求1所述的抗口腔致齲菌的多肽Pml4，其製備方法中所述口腔常見致齲菌為變異鏈球菌。
3.根據權利要求1所述的抗口腔致齲菌的多肽Pml4，其製備方法中所述口腔常見致齲菌為遠緣鏈球菌。
4.根據權利要求1所述的抗口腔致齲菌的多肽Pml4，其製備方法中所述口腔常見致齲菌為血鏈球菌。
5.根據權利要求1所述的抗口腔致齲菌的多肽Riil4，其特徵是多肽使細菌細胞膜表面失去原有性狀，變得粗糙甚至有出現孔隙，通過在細菌表面形成離子通道，引起細菌內容物的流出，從而導致了細菌的死亡。
6.根據權利要求1所述的抗口腔致齲菌的多肽Riil4製備方法是，其特徵在於通過保持、改進α螺旋特性，對天然多肽pleurocidin活性中心胺基酸進行刪除和替換，通過直接化學Fmoc合成的方法，構建有抗菌能力的多肽。
全文摘要
本發明屬於醫藥生物技術領域，涉及Fmoc化學合成多肽，即一種抗口腔致齲菌的多肽Pm14及製備方法，其製備方法是通過對天然多肽pleurocidin的活性中心的查找，對口腔常見致齲菌有一定的抗菌、殺菌能力，在確定活性中心的基礎上，對其進行胺基酸的刪除和替換形成新型的具有殺菌能力的抗菌多肽；所述新型抗菌多肽Pm14，序列為FKFFKKFFKKW；其製備方法中所述口腔常見致齲菌為變異鏈球菌；其製備方法中所述口腔常見致齲菌為遠緣鏈球菌；其製備方法中所述口腔常見致齲菌為血鏈球菌。它克服天然抗菌肽長度過長，合成成本相對較高的問題。
文檔編號A61P1/02GK102382174SQ20111038123
公開日2012年3月21日 申請日期2011年11月26日 優先權日2011年11月26日
發明者倪龍興, 陶睿 申請人:倪龍興