一種生產半夏胚狀體和組培苗的方法與流程

2023-10-29 23:48:32 2

本發明屬一種簡單高效生產半夏胚狀體和組培苗的方法。

背景技術：

半夏為天南星科多年生草本植物，《中國藥典》收載的半夏為Pinellia ternata(Thunb)Briet，是一種重要的傳統中藥材和出口物資，其塊莖炮製後具有燥溼化痰、降逆止嘔，消痞散結之功效，生用外治癰腫。由於半夏以地下塊莖入藥，隨市場需求不斷增加，濫採亂挖十分嚴重，使得野生資源岌岌可危。為解決資源保護與市場需求的矛盾，近些年對半夏組培快繁技術的研究與應用在國內迅速展開。綜合多途徑檢索的結果表明，目前各單位無論用球莖、葉片、葉柄或珠芽，何種材料作外植體，都要選用兩種或兩種以上的生長調節劑(有時被泛稱「激素」)，主要有細胞分裂素(CTK)中的N6-苄基腺嘌呤(BA)或激動素(KT)，生長素(Auxin)中的2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)、或吲哚丁酸(IBA)等，再按不同濃度與配比復配成幾種成分各不相同的培養基，分別用於「外植體啟動」、「愈傷組織誘導」、「胚狀體誘導」、「成苗誘導」、「增殖擴繁」和「生根」等不同的生產環節。整個生產程序比較繁雜，而且胚狀體的誘導率一般只有40-50％，30d為一個周期，組培苗的繁殖倍數也只有5-10，效率偏低。

靈發素(Lingfasu，LFS；代號PGR-08)是一種新型生長調節劑，它同時具有CTK和Auxin兩類激素的生物活性，用它配製成的單一培養基，已經成功建立了三七(見《中國中藥雜誌》，2007年32卷6期，PP.481-483.)、羅漢果(見《種子》，2006年25卷8期，PP.4-6)和翅子羅漢果(見《種子》，2008年27卷12期，PP.12-14)，等名貴中藥材組培苗簡單高效的生產方法。但是，尚未檢索到用於半夏胚狀體和組培苗生產的資料。

技術實現要素：

本發明要解決的技術問題是提供一種簡單高效生產半夏胚狀體和組培苗的方法。

本發明以如下技術方案解決上述技術問題：

申請人利用靈發素(Lingfasu，LFS；代號PGR-08)同時具有CTK和Auxin兩類激素生物活性的特點，經過對其使用濃度的反覆篩選，將LFS 0.3mg·L-1(0.05-2.0均為有效濃度)添加到常規MS固體培養基中，以半夏葉柄切段(或其它離體器官)為繼代擴繁材料，進行常規組織培養。由於只用MS+LFS 0.3mg·L-1這種單一培養基就能取代常規要用兩種或兩種以上生長調節劑配製成的多種培養基，一次性完成「外植體啟動」、「愈傷組織誘導」、「胚狀體誘導」、「成苗誘導」、「增殖擴繁」和「生根」等多個技術環節，特別是能誘導葉柄切段(一端或兩端)形成胚性愈傷組織並直接分化出大量胚狀體，誘導率達80-100％，既能為半夏人工種子的研製提供人工胚，又能繼續促其萌發建成組培苗(若葉柄切段已有珠芽原基，還可使珠芽提前萌發成苗)，組培苗繁殖倍數達10-20，或者更高。從而實現簡單高效地生產半夏胚狀體和組培苗。

具體實施方式

以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。

實施例

申請人利用LFS同時具有CTK和Auxin兩類激素生物活性的特點，經過對適宜濃度的反覆篩選及與常規方法的比較研究發現：用MS+LFS 0.3mg·L-1這種單一培養基，以半夏球莖為外植體，按照常規培養獲得無菌苗後，取其葉柄切段(或葉片等其它離體器官)為繼代擴繁材料，仍用這種單一培養基繼代培養，能誘導葉柄切段一端或兩端迅速形成胚性愈傷組織並分化出胚狀體，誘導率達80-100％；胚狀體可用於製備人工種子，亦能繼續萌發生長成為組培苗。一次繼代培養，組培苗(未萌發的胚狀體及苗高≤2cm者不計)增殖倍數可達10-20，或更高。若葉柄切段已有珠芽原基，珠芽亦可萌發成苗。

因此，以MS+LFS 0.3mg·L-1這種單一培養基取代常規使用的幾種不同的培養基可以簡單高效地生產半夏胚狀體與組培苗。

雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬於本發明要求保護的範圍。