一種食品毒力測定的方法
2023-10-30 10:56:42
專利名稱：一種食品毒力測定的方法
技術領域：
本發明涉及一種毒力測定的方法，具體地說，它是一種用微生物進行食品毒力測定的方法。
在已有技術中，食品的毒力測定所涉及的檢測項目較多，對食品中已知毒素的含量或毒素分子的組成或毒素品種的測定等一般採用化學方法；而對食品中未知毒素的毒力測定或總有害物質的綜合毒力的測定，則需要用到動物實驗。由於動物需要人力、財力和時間去飼養，再者，動物體在實驗中對被檢物質有消化、吸收的時間過程，因此，動物實驗的時間較長、費用較大，而且動物的飼養和管理也很麻煩。隨著食品業的發展，食品檢測量越來越大，因此，動物實驗的缺點也就越來越突出，逐漸引起應用者的重視。到目前為至，仍未見有較好的、能夠代替動物實驗的方法問世。
本發明的目的是針對已有技術的現狀，提供一種用微生物進行食品毒力測定的方法，用以代替動物實驗。
實現本發明的思想是選用單細胞真核微生物作為實驗對象來代替小動物進行食品的毒力測定。根據科學界分析，單細胞真核微生物與動物體細胞結構非常相似，都是由生物膜、細胞質和細胞核組成，且呼吸作用基本相同。同時，根據毒力測定的動物實驗驗證，任何物質的毒性都是通過作用於動物體的細胞而使動物體產生病變或死亡的，那麼，能夠破壞動物體細胞的物質，對單細胞真核微生物也應該同樣具有破壞作用。鑑於以上依據，選用與動物細胞非常相似的單細胞真核微生物作毒力測定的實驗對象應當是可行的。再者，選用單細胞真核微生物作實驗對象具有反應敏捷、快速的特點，因為單細胞比多細胞的接觸面大，且在實驗中可以與被檢物質直接接觸，不象動物體要通過消化吸收等作用才能使被檢物質到達細胞組織，因此，它對物質毒性的反應速度大大超過動物體。
實現本發明的具體方案是一、選用單細胞真核微生物作為實驗對象；二、實驗過程包括以下步驟1、根據預初實驗選擇確定至少三個被檢食品的劑量；2、配製液體麥芽汁培養基，並分成多個等量液樣，根據所確定的被檢食品的劑量對多個等量液樣進行分組，並留出一組作對照組；3、在各劑量組和對照組液樣中分別加入等量單細胞真核微生物的懸浮菌液，並在各劑量組液樣中對應加入相應劑量的被檢食品，搖勻；4、將各劑量組和對照組液樣在單細胞真核微生物生長條件下培養24小時；5、培養24小時之後，每隔一個時間間隔對各組中的每個液樣進行鏡檢觀察一次，並採用美蘭染色法檢測活細胞數，然後計算得出各組活細胞的統計平均數；6、將各劑量組的活細胞數與對照組進行比較，根據二者活細胞數量的差值來判斷被檢食品是否有毒和定性確定其毒力的大小。
本發明的方法是通過觀察單細胞真核微生物與被檢物質接觸後發生的毒性反應來確定食品的毒力的。單細胞真核微生物與被檢物質最明顯的毒性反應是死亡，因此，本發明通過測出的各劑量組和對照組的活細胞數量來審看各劑量組中細胞非正常死亡的情況，用此來判斷被檢食品是否有毒和定性確定其毒性大小。
本發明的優越在於選用了易培養、反應敏捷、快速的微生物代替小動物作為食品毒力測定的實驗對象，並將微生物的實驗方法用於食品的毒力測定，這在毒力檢測上是一個大膽嘗試和突破。它與動物實驗相比，要快速、方便、經濟的多。該方法的問世，可以將目前大量的用動物進行食品毒力測定的工作變得簡單、方便、經濟，節省了大量的人力和財力。同時，它還可能為藥品的毒力測定特別是保健藥品的毒力測定開拓一個新的檢測途徑。
下面根據檢測實例詳細說明實驗過程。
為了說明問題，在以下實例中選用幾種已經由動物實驗測定的有害物質，將它們分別加入某種被檢食品中，人為地製成含有害物質的被檢食品，並用含有害物質濃度的大小代替劑量的大小。實例中濃度的具體數值根據預初實驗的結果來選擇確定，預初實驗的目的與動物實驗的一樣，是確定實驗對象死亡率0％的濃度值和死亡率為100％的濃度值，然後在該濃度值範圍之內選擇確定三個不同的濃度值來進行實測。其中實驗對象均選用單細胞真核微生物的懸浮菌液。
實例1，對牛奶中殘留樂果(C5H12O3NPS2)的毒力測定。
製作樂果含量濃度分別為0.005mg/ml、0.02mg/ml和0.03mg/ml的被檢牛奶，按常規法配製液體麥芽汁培養基，取十個三角瓶，分別加入100ml液體麥芽汁培養基，留出一個三角瓶作對照， 其餘九個三角瓶分成三個濃度組；在無菌條件下， 在十個三角瓶的培養基中加入10ml懸浮菌液，並且在三個濃度組中分別加入濃度為0.005mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml的被檢牛奶1ml，搖勻；將十個三角瓶在25℃條件下遙床培養24小時；然後每隔兩小時對各三角瓶取樣鏡檢觀察一次，並採用美蘭染色法檢測活細胞數，計算得出各組活細胞統計平均值。其結果如下表表中單位樂果含量濃度Nmg/ml；活細胞數n(統計平均數)個數；時間T小時。
通過上表看出，各濃度組的活細胞數大大低於對照組，說明在同樣的生長條件下，由於各濃度組的細胞接觸了有害物質而不能正常生存，大部分非正常死亡了。因此，可以判定被檢物質有毒。
實例2，蔬菜汁中殘留亞硫酸鈉的毒力測定。
實驗過程與實例1相同。其實驗結果如下表表中單位亞硫酸鈉含量濃度Nppm；活細胞數n(統計平均數)個數；時間T小時。
通過上表看出，各濃度組活細胞數仍是低於對照組。因此，可以判定被檢物質有毒。
實例3，醬油中砷的毒力測定。
實驗過程與實例1相同。其實驗結果如下表
表中單位砷的含量濃度Nmg/l；活細胞數n(統計平均數)個數；時間T小時。
通過上表可以判定被檢物質有毒。
實例4，馬鈴薯中茄鹼的毒力測定。
實驗過程與實例1相同。其實驗結果如下表表中單位茄鹼的含量濃度Nmg/l；活細胞數n(統計平均數)個數；時間T小時。
通過上表可以判定被檢物質有毒。
實例5，大米中黃麴黴毒素的毒力測定。
實驗過程與實例1相同。其實驗結果如下表表中單位黃麴黴毒素的含量濃度Nmg/l；活細胞數n(統計平均數)個數；時間T小時。
通過上表可以判定被檢物質有毒。
通過以上實例可以得出如下結論1、凡是能使動物出現中毒的物質，也能導致單細胞真核微生物的中毒死亡。
2、在同樣的生長條件下，只要各濃度組的活細胞數低於對照組，就可以判定被檢食品有毒。
3、各濃度組的活細胞數與對照組的差值越大，則被檢物質的毒力就越大；反之，被檢物質的毒力就越小。因此，可以定性確定被檢物質的毒力的大小。
4、通過上述實例看出，本發明的實驗時間為30小時，而動物實驗的時間少則15天，多則1～3個月，因此，證實了單細胞真核微生物的反應要比動物敏捷和快速得多。
5、培養單細胞真核微生物所用的經費比飼養動物要少得多。根據實例1計算培養單細胞真核微生物所用的經費為人民幣8元，而動物實驗則需要小鼠60隻，每隻為2.3元，實驗期為15天，實驗期的飼養費用為每隻每天0.10元，綜合費用為60×2.3元+60×15×0.10元＝228元，因此，本發明比動物實驗至少便宜220元。
6、本發明無汙染，比動物實驗衛生、方便。
權利要求
1.一種食品毒力測定的方法，其特徵是1.1、選用單細胞真核微生物作為實驗對象；1.2、實驗過程包括以下步驟1.2.1、根據預初實驗選擇確定至少三個被檢食品的劑量；1.2.2、配製液體麥芽汁培養基，並分成多個等量液樣，根據所確定的被檢食品的劑量對多個等量液樣進行分組，並留出一組作對照組；1.2.3、在各劑量組和對照組液樣中分別加入等量單細胞真核微生物的懸浮菌液，並在各劑量組液樣中對應加入相應劑量的被檢食品，搖勻；1.2.4、將各劑量組和對照組液樣在單細胞真核微生物生長條件下培養24小時；1.2.5、培養24小時之後，每隔一個時間間隔對各組中的每個液樣進行鏡檢觀察一次，並採用美蘭染色法檢測活細胞數，然後計算得出各組活細胞的統計平均數；1.2.6、將各劑量組的活細胞數與對照組進行比較，根據二者活細胞數量的差值來判斷被檢食品是否有毒和定性確定其毒力的大小。
全文摘要
本發明是一種食品毒力測定的方法。它選用單細胞真核微生物作實驗對象,實驗步驟包括:配製液體麥芽汁培養基,並根據所確定的被檢食品的劑量進行分組,留出一組作對照組;在各組中加入等量單細胞真核微生物的懸浮菌液,並在各劑量組中加入相應劑量的被檢食品,搖勻;培養24小時;然後,每隔一個時間間隔進行鏡檢觀察一次,檢測活細胞數;再根據各劑量組活細胞數與對照組的差值來判斷被檢食品是否有毒和定性確定其毒力的大小。
文檔編號G01N33/02GK1169534SQ96118709
公開日1998年1月7日 申請日期1996年6月24日 優先權日1996年6月24日
發明者孫悅迎, 張旭東 申請人:孫悅迎