腦震寧製劑的製藥新用途的製作方法

2023-10-18 07:47:34 2

本發明涉及一種藥物的新的醫藥用途，特別是涉及上市藥品腦震寧製劑的新的醫藥用途。

背景技術：

創傷性腦損傷(traumaticbraininjury，tbi)是導致45歲以下人群殘疾的重要病因。在北美和歐洲，每年創傷性腦損傷的發生率約為500/100000人。世界衛生組織預測從2000年到2020年，死於道路交通事故的人數(其中多數是由於創傷性腦損傷造成)將增加一倍，而且還會持續增加，並且主要集中在低-中等收入國家的交通事故中。到2020年，創傷性腦損傷將會成為全球致殘致死的第三大病因(who，2009)。

另一方面，與青少年運動造成的腦震蕩有關的急性和慢性高危因素也值得關注。越來越多的證據表明，有多次輕微腦損傷病史的患者更易患早發性痴呆，後期也更容易並發物質使用障礙以及精神疾病。

創傷性腦損傷不僅造成患者神經精神上的疾患，同時也給患者本人及其家庭的社會生活和經濟帶來了極大負擔，更是給整個社會增加了經濟負擔。2000年，美國因創傷性腦損傷造成的支出將近600億美金。據bilmes和stiglitz研究室估計，在2015年，伊拉克戰場歸來的腦損傷患者治療所耗費的政府支出約為140億美金。據wittchen實驗室估計，歐洲每年腦損傷的醫療費用高達330億歐元。由此可見，創傷性腦損傷是一個嚴重的社會性問題。

創傷性腦損傷不僅是由物理撞擊造成的原發性損傷，更進一步會引發繼發性損傷，包括細胞興奮性毒性損傷，彌散性軸突、樹突損傷，神經炎症，神經血管破壞所致的微血管性缺血。這些損傷可影響腦內大片區域。而在這些損傷中，細胞死亡是最為顯著的問題之一。

神經元死亡及神經退行性病變破壞了大腦的內在連接網絡。根據受損區域的不同，神經元缺失可導致神經通路的連接受損，從而引發肢體運動、認知或情緒的異常。目前尚未發現有效的手段能減少腦損傷後的細胞死亡。因此，急需一種針對細胞死亡的神經保護藥物或者神經修復手段。

儘管已經有大量的嘗試和研究致力於研發神經保護性藥物，但成功通過臨床試驗的藥物卻寥寥無幾。到目前為止，尚未有fda批准的能減少腦損傷後細胞死亡的藥物。

中藥療法起源於中國，有兩千多年的悠久發展歷史。中藥療法現今已被廣泛接受，是傳統療法的重要組成部分。腦震寧是專門治療腦震蕩、腦外傷後症候群的唯一藥品，從1985年起被廣泛用於治療腦損傷患者，已逾百萬例。臨床數據表明，它可以改善自主神經功能障礙，緩解頭痛，改善睡眠以及減輕精神症狀。

技術實現要素：

本發明的目的是提供腦震寧製劑的新用途，具體是在製藥中的新用途。

本發明所涉及的腦震寧製劑是依據zl931007410公開的處方製成的顆粒劑、膠囊、片劑、軟膠囊、口服液等各種適宜劑型，用於預防和治療腦震蕩、腦外傷後症候群、神經外科術後恢復，是山西振東安特生物製藥有限公司的獨家品種。

腦震寧顆粒收錄於《中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方製劑(第十七冊)》第230頁(ws3-b-3312-98)，其處方為：當歸200g、地黃200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龍150g、丹參375g、茯苓250g、陳皮250g、竹茹250g、酸棗仁(炒)250g、柏子仁250g；製法為：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，蒸餾後的水溶液另器收集；藥渣與其餘丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合併煎液，慮過，濾液與上述水溶液合併，濃縮至相對密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入適量蔗糖和糊精，制粒，乾燥，加入上述揮髮油，混勻，製成1000g。功能涼血活血，化瘀通絡，益血安神，寧心定智，除煩止嘔。用於治療腦外傷引起的頭痛，頭暈，煩躁失眠，健忘驚悸，噁心嘔吐。

根據上述腦震寧顆粒改進而成的腦震寧無糖顆粒，其標準(ws3-b-3312-98-1)由國家食品藥品監督管理局發布，處方為當歸333.4g、地黃333.4g、牡丹皮250g、川芎250g、地龍250g、丹參625g、茯苓416.7g、陳皮416.7g、竹茹416.7g、酸棗仁(炒)416.7g、柏子仁416.7g；功能、主治與腦震寧顆粒相同，只是製法略有區分，具體為：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，蒸餾後的水溶液另器收集；藥渣與其餘丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合併煎液，慮過，濾液與上述水溶液合併，濃縮至相對密度1.35～1.38(55℃)的清膏，以糊精為輔料，制粒，乾燥，加入上述揮髮油，混勻，製成1000g，即得。

具體地，本發明涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷的藥物中的應用。

本發明還涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷所致繼發性損傷的藥物中的應用。

進一步地，本發明還涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷所致皮層組織缺損的藥物中的應用。

還涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷所致皮層細胞死亡的藥物中的應用。

還涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷所致海馬體細胞死亡的藥物中的應用。

還涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷所致皮層神經元軸突損傷的藥物中的應用。

還涉及腦震寧製劑在製備治療創傷性腦損傷所致皮層神經元樹突損傷的藥物中的應用。

為了更好的理解本發明的實質，下面將通過腦震寧製劑的藥理試驗及結果來說明其在製藥領域的新用途。

腦震寧顆粒為山西振東安特生物製藥有限公生產，由11味中藥組成：當歸200g、地黃200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龍150g、丹參375g、茯苓250g、陳皮250g、竹茹250g、酸棗仁(炒)250g、柏子仁250g。製備步驟如下：1、提取當歸、牡丹皮、川芎和陳皮四味中藥的揮髮油(i)；2、加入剩餘7味中藥進行水提獲得粗提物(ii)；3、精煉粗提物(ii)獲得精製提取物(iii)；4、在精製提取物(iii)中加入輔料，並將之製成顆粒；5、將揮髮油(i)噴灑在顆粒上。以上製備的腦震寧顆粒，每1g顆粒中含有4.125g的處方量。

一、試驗動物和藥物

1、動物管理

本研究採用8周齡的雄性c57bl/6小鼠。所有步驟均通過印第安納大學動物管理與應用委員會(indianauniversity’sanimalcareandusecommittee，iacuc)許可。

2、可控性皮層撞擊(controlledcorticalimpact)腦損傷模型

取8周齡小鼠(n＝80)接受中度cci造模。cci模型所用儀器為電磁衝擊器(impactonetm，stereotacticimpactorforcci，leicamicrosystem，illinois，usa)，衝擊速度設定為3.5m/s，衝擊深度1mm，此參數可造成中度損傷。造模術後，縫合頭部皮膚。

3、腦震寧顆粒處理

術後，80隻腦損傷模型小鼠被隨機分配入純水處理組或腦震寧處理組。

腦震寧顆粒溶於純水中，終濃度0.2g/ml。

腦震寧處理組小鼠按每公斤體重6.25g腦震寧顆粒給藥，顆粒溶於400～500μl純水中(水量取決於體重)灌胃給藥，一日兩次直至取材。

空白組小鼠同樣一日兩次伺服等量純水。

術後1天、3天、5天、7天，分別取每組5隻小鼠進行取材，評估皮層組織缺損、細胞死亡、軸突損傷和樹突損傷。

二、試驗內容

1、組織收集

小鼠均由avertin深度麻醉，用冷鹽水經心臟灌流，隨後用冷的4％多聚甲醛固定。腦組織取出後在多聚甲醛中固定過夜，經30％蔗糖脫水處理後進行冰凍切片。冰凍切片使用leicacm1950冰凍切片機，取連續切片，切片厚度30μm。切片保存於-20℃，組織病理分析時取用。

2、尼氏染色

將冰凍切片貼在防脫載玻片(fisherscientific，pittsburgh，pa，usa)上，乾燥後以焦油紫染色20min。染色結束後快速在純水中清洗兩次，用95％乙醇分色2min。隨後將玻片在100％乙醇中脫水兩次(每次5min)，最後在100％二甲苯中透明兩次(每次2min)。切片晾乾封片後，即可用於圖像採集。

3、皮層組織缺損面積測量

為量化挫傷程度，需測量損傷皮層的百分比。具體步驟為：大腦連續切片(每片30μm厚)，每隔六片取一片(即兩片之間相隔180μm)，以焦油紫染色後可顯示未缺損皮層。用axiovision軟體(version4.8，zeiss，thornwood，ny，usa)分別勾勒出健側皮層和患側未缺損的皮層輪廓。輪廓內體積即為所勾勒皮層的體積，皮層缺損百分比計算公式為：缺損百分比＝(健側皮層體積-患側皮層體積)/健側皮層體積×100％。

4、fluoro-jadeb染色

0.0004％fluoro-jadeb(fjb)溶液：取4ml0.01％fjb儲存液加入96ml純水中配製而成，使用前加入0.1％冰醋酸。

將冰凍切片貼在防脫載玻片(fisherscientific)上。染色時，先將玻片置於純水中2min復水，隨後將玻片轉移至0.06％高錳酸鉀溶液中氧化20min。氧化結束後，漂洗兩次(每次2min)，置於0.0004％fluoro-jadeb(fjb)溶液中20min。染色結束後，玻片漂洗兩次，晾乾封片。

5、皮層挫傷處臨近區域的死亡神經元計數

對tbi後皮層挫傷處的臨近區域的fjb陽性細胞進行計數，計數採用盲目定量組織學分析，每個時間點有5隻小鼠。每隻小鼠取3片最靠近損傷中心的腦組織切片，挫傷處臨近區域的細胞死亡數皆被納入計數，結果以密度表示。那些雖有組織殘留，其上卻未見陽性染色的不納入計算範圍。

在axioimagerm2顯微鏡5×物鏡下，用stereoinvestigatorsoftware(microbrightfieldinc.，williston，vt)軟體劃出可見死亡細胞的邊界。fjb陽性神經元以在劃定區域內系統抽樣的方式進行計數，計數在40×物鏡進行。劃定區域被劃分成300×300μm2的數格，每一格取一100×100μm2的小格，對其內陽性細胞進行計數，陽性細胞根據細胞形態和螢光強度來識別。

在獲得估算的fjb陽性細胞總數和劃定區域體積後，便可以通過計算得出fjb陽性細胞的密度。

計算公式：細胞密度＝估算的細胞總數/[劃定區域體積(mm3)×100000000(μm3/mm3)]。

6、海馬體中的死亡神經元計數

對損傷後海馬體內各個區域的fjb陽性細胞總數進行評估，計數採用盲目定量組織學分析(每個時間點5隻小鼠)。連續切片後，包含所有海馬結構的切片依次每隔6片取1片進行fjb染色。20×物鏡下，可識別所有的fjb陽性細胞並計數。最後，將所有切片上海馬體內的fjb陽性細胞相加並計算得到總數。

7、免疫螢光染色

切片在pbs中漂洗3次(每次5min)後，室溫封閉1h(封閉液成分：0.1％tritonx-100，1％牛血清白蛋白和5％山羊血清)。隨後，切片在一抗中4℃孵育過夜。用pbs漂洗3次(每次5min)後，室溫下孵育二抗1h，用4′，6-diamidino-2-phenylindole(dapi)染核2min。最後pbs漂洗3次(每次5min)，乾燥後，用fluoromountg(southernbiotech，birmingham，al，usa)封片。

染色所用一抗及終濃度如下：β-appantibody(1∶1000，rabbit，invitrogen)；gfapantibody(1∶1000，mouse，sigma，usa)；ibal(1∶200，goat，abcam，usa)；ng2(1∶200，rabbit，millipore，usa)；synaptophysinantibody(1∶1000，mouse，millipore，usa)。

染色所用二抗均來自immunoresearchlaboratoriesinc.，濃度1∶1000。染色後，使用倒置顯微鏡(zeiss，axiovert200m)及數位相機(zeiss，axiocammrc5)在10×、40×和63×倍鏡下進行圖像採集。

8、高爾基染色

以fdrapidgolgistain試劑盒(fdneurotechnologies)按供應商提供方法進行高爾基染色。步驟如下：新鮮取材的腦組織置於浸漬液(a溶液與b溶液等量混合而成)中，避光室溫下靜置2周，再轉移至c溶液，4℃下浸泡48h(避光)。隨後，腦組織用滑動切片機切片，切片厚度150μm，切片後進行高爾基染色。

9、樹突形態分析

按如下標準篩選出需要分析的錐體神經元：位於皮層ii/iii層、高爾基染色著色、頂樹突能延伸至皮層表面。

使用電動顯微鏡(zeissimagerm2)及neurolucida軟體(microbrightfield，vt)，在20×鏡下重建神經元樹突上的所有分支。重建後，使用neuroexplorer軟體(microbrightfield)對重建的3d模型進行分析。

本實驗中每個實驗組4隻小鼠，每隻小鼠至少有10個神經元被重建分析，同一隻小鼠所得數據取平均值。

為觀察樹突形態的整體變化，從不同角度進行分析：樹突分支的總長度，樹突分支的平均長度以及樹突的分支數目。所得數據用one-wayanova進行組間比較。

三、統計分析

所有數據均以「平均值±標準誤」形式表現。組間差異以one-wayanova或者t檢驗進行分析，統計學差異以p＜0.05為標準。

四、結果

1、腦震寧顯著減少了損傷所致皮層組織缺損

創傷性腦損傷後高發的神經功能障礙乃至死亡，很大程度上由皮層大量的繼發性細胞死亡導致。

為了評估腦震寧在損傷後對皮層組織缺損的影響，小鼠(每組10隻)接受cci造模，術後，按照6.25g/kg給予腦震寧顆粒(溶於純水中)或者純水處理，一日兩次，連續給藥7天後取材進行組織學分析。

取材後，腦組織切片經尼氏染色可用於分析組織缺損。通過測量殘餘皮層的體積，可計算並評估皮層組織缺損和保護的情況。具體見圖1，圖中：(a)腦損傷後空白組小鼠大腦皮層組織。(b)腦損傷後腦震寧組小鼠大腦皮層組織。(c)腦損傷區域皮層組織損傷率的定量測定(p＜0.05)，差異有統計學意義。

結果顯示：純水處理組小鼠，其患側皮層組織缺損率為16.4±1.3％(圖1a)，然而，在腦震寧組，其皮層組織缺損率只有12.0±1.1％(圖1b)。相較純水組，腦震寧組減少了34.9％的組織缺損率，且統計學上有顯著性。這個結果表明，腦震寧在小鼠cci模型中能有效減少損傷造成的皮層組織缺損。

2、腦震寧減少了中度腦損傷後的皮層細胞死亡

使用fjb染色來評估皮層的細胞死亡，具體如圖2。圖中，(a)腦損傷後空白組小鼠皮層神經細胞死亡。(b)腦損傷後腦震寧顆粒組小鼠皮層神經細胞死亡。(c)皮層組織神經細胞死亡的定量測定(p＜0.05)。

在fjb染色後，死亡神經元的胞體可被染成綠色(圖2a和b)，有些神經元甚至可見樹突的主幹(圖2a和b)，說明fjb在神經元死亡發生的早期即可標記。

在皮層挫傷處臨近的區域，純水處理組的fjb陽性神經元密度(純水處理組：48366±1929/μm3，圖2a和c)與腦震寧組(37271±3589/μm3，圖2b)有顯著差異，且統計學有意義。此結果表明，腦震寧的術後處理可有效減少中度腦損傷引起的皮層神經元死亡。

3、腦震寧減少了中度腦損傷後海馬的細胞死亡

腦損傷不僅造成皮層的神經元死亡，同時也造成海馬中大量的細胞死亡。為了評估海馬中的細胞死亡，用fjb染色來標識海馬中死亡的細胞。在海馬中，fjb陽性細胞主要集中於齒狀回(圖3a和c)。

圖3中，(a)腦損傷後空白組小鼠齒狀回神經細胞死亡。(b)白色框中選定區域fjb-陽性細胞的放大畫面。(c)腦損傷後腦震寧組小鼠齒狀回神經細胞死亡。(d)白色框中選定區域fjb-陽性細胞的放大畫面。(e)海馬神經細胞死亡的定量測定(p＜0.05)。

在空白組中，海馬內的fjb陽性細胞總數為6168±2331/μm3(圖3a和b)，而在腦震寧組中，fjb陽性細胞總數只有3978±663/μm3(圖3c和d)。相較空白組(圖3e)，腦震寧組的fjb陽性細胞總數有所減少。結果表明，腦震寧在一定程度上減少了海馬中損傷引起的神經元死亡。

4、腦震寧減輕了中度腦損傷後皮層的軸突損傷

由於腦損傷還常引起軸突損傷，因此，需要進一步評估腦震寧是否對損傷後的軸突有保護作用。

cci造模術後，小鼠分別於術後1h和術後12h給予兩次腦震寧伺服。取材於術後24h進行。

取材後，以β-澱粉樣蛋白前體蛋白(β-amyloidprecursorprotein，app)進行染色以檢測早期的軸突損傷情況，圖4給出了代表區域表達了β-澱粉樣前體蛋白(β-app)標記的腦損傷後皮層挫傷處臨近區域和胼胝體損傷的軸突。其中：(a)對照組在皮層受到中度腦損傷後顯示了大量β-app染色。(b)圖(a)中β-app染色的中度腦損傷後皮層挫傷處臨近區域的放大圖像。(c)圖(a)中β-app染色的中度腦損傷後皮層胼胝體的放大圖像。(d)腦震寧組在皮層受到中度腦損傷後顯示了大量β-app染色。(e)圖(d)中減少β-app染色的中度腦損傷後皮層挫傷處臨近區域的放大圖像。(f)圖(d)中顯著減少β-app染色的中度腦損傷後皮層胼胝體的放大圖像。

術後24h，空白組(圖4a-c)和腦震寧組(圖4d-f)中均可見大量的app陽性反應，主要集中於皮層挫傷處臨近區域以及胼胝體。從放大圖中，皮層挫傷處臨近區域可見app染色呈串珠狀分布，在腦震寧組(圖4e)中，app陽性信號的密度小於空白組(圖4c)。在胼胝體中，軸突束的app染色呈纖維狀，並伴有串珠狀膨大，且腦震寧組(圖4f)的綠色串珠樣膨大比空白組(圖4c)有所減少。上述結果表明，腦震寧對損傷後皮層的軸突有保護作用。

5、腦震寧對中度腦損傷72h後的皮層神經元樹突形態有保護作用

樹突分支是神經元一個重要組成部分，其為樹突棘的形成提供了廣闊的表面，因此具有舉足輕重的意義。

通過高爾基染色來檢測神經元的樹突形態(圖5)，評估腦震寧是否對中度腦損傷後的神經元樹突有保護作用。

高爾基染色是一種高敏可靠的染色方法，常用於神經元微細結構的形態學研究，尤其是樹突棘。通過高爾基染色，可見空白組(圖5a)和腦震寧組(圖5b)的皮層內錐體神經元及其樹突。前期研究顯示，中度腦損傷造成的神經元樹突損傷，高峰期發生於術後72h，因此，本實驗也在術後72h進行評估。

從空白組(圖5a)和處理組(圖5b)的皮層中選取符合前述條件的ii/iii層錐體神經元(n＝100)，並對其進行樹突重建，進而評估其樹突形態的複雜性是否在損傷後有所削弱。

在腦震寧組，損傷後頂樹突的樹突分支數從6.0±1.06增加至6.64±0.53(p＝0.05)，而基樹突分支數從7.07±0.86增加至8.18±0.62(p＝0.05)(圖5c)。樹突分支的總長度從813.17±90.16μm增長至1006.36±93.31μm(p＝0.05，圖5c)。樹突分支的平均長度也略有增長。結果表明，在中度腦損傷模型中，腦震寧對皮層中神經元樹突有一定程度上的保護作用。

五、結論

腦震寧為山西振東安特生物製藥有限公司的專利藥物，以丹參、當歸、川芎、地龍、丹皮為主要有效成分。其中丹參活血化瘀，當歸補血止痛，川芎順氣活血，地龍通經止痛，丹皮涼血滋陰生津。酸棗仁、柏子仁、茯苓養心補肝、安神定志，陳皮溫中止嘔，竹茹和胃止吐。在小鼠的藥理毒理學研究中，藥物具有鎮靜、鎮痛、止吐的作用，同時降低了小鼠的自主活動，並增強了戊巴比妥鈉的抑制效果。不僅如此，它還提高了小鼠在熱板實驗中的痛閾，以及改善了小鼠的學習記憶功能。該藥在阿撲嗎啡導致家犬嘔吐的實驗中也表現出了緩解作用。早在1985年，腦震寧顆粒就開始應用於臨床治療中，服用腦震寧的患者多為腦震蕩、腦損傷症候群和手術後康復患者。臨床觀察顯示此藥對多種症狀，如頭痛、頭暈、煩躁、失眠、健忘、心悸、噁心嘔吐等均有改善效果。

本實驗將腦震寧應用於小鼠的中度腦損傷模型中，結果表明，腦震寧對創傷性腦損傷具有神經保護作用。

附圖說明

圖1是腦震寧製劑對中度腦損傷後皮層組織缺損情況的影響(a空白組，b腦震寧組，c皮層組織損傷率)。

圖2是腦震寧製劑對中度腦損傷後皮層細胞死亡的影響(a空白組，b腦震寧組，cfjb染色細胞死亡密度)。

圖3是腦震寧製劑對中度腦損傷後海馬細胞的影響(a空白組，b腦震寧組，cfjb染色細胞數)。

圖4是腦震寧製劑對中度腦損傷後皮層軸突的影響(a、b、c空白組，d、e、f腦震寧組)。

圖5是腦震寧製劑對中度腦損傷72小時後皮層神經元樹突形態的影響(a空白組，b腦震寧組，c樹突分支數、總長度和平均長度)。

具體實施方式

下述實施例僅為本發明的優選技術方案，並不用於對本發明進行任何限制。對於本領域技術人員而言，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。

實施例1：腦震寧提取物

腦震寧提取物是依據專利號為931007410的專利公開的處方製成的精製物。

處方：當歸200g，地黃200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龍150g，丹參375g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹250g，炒酸棗仁250g，柏子仁250g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，再加入其他藥材水提，濾過，濃縮成稠膏狀即得腦震寧提取物。

實施例2：腦震寧顆粒

根據標準ws3-b-3312-98-1製備不含蔗糖的腦震寧顆粒。

處方：當歸200g，地黃200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龍150g，丹參375g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹250g，炒酸棗仁250g，柏子仁250g。

以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，蒸餾後的水溶液另器收集；藥渣與其餘丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合併煎液，濾過，濾液與上述水溶液合併，濃縮至相對密度為1.35～1.38(55℃)的清膏，加入適量的蔗糖和糊精，制粒，乾燥，加入上述揮髮油，混勻，製成1000g；即得腦震寧有糖顆粒；或者加入適量的糊精，制粒，乾燥，加入上述揮髮油，混勻，製成600g，即得腦震寧無糖顆粒。

實施例3：腦震寧膠囊

處方：當歸220g，地黃210g，牡丹皮160g，川芎140g，地龍130g，丹參330g，茯苓260g，陳皮260g，竹茹260g，炒酸棗仁160g，柏子仁160g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，再加入其他藥材水提，水提取後，用80％的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，加入適量的澱粉混勻、制粒、乾燥整粒、加入所得揮髮油，攪拌均勻，製得腦震寧膠囊200粒，每粒膠囊裝0.4g。

實施例4：腦震寧片劑

處方：當歸175g，地黃175g，牡丹皮150g，川芎75g，地龍75g，丹參300g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹150g，炒酸棗仁150g，柏子仁150g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，再加入其他藥材水提，水提取後，用70％乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，加入適量的澱粉、羧甲基澱粉鈉混勻、制粒、乾燥整粒，再加入所得揮髮油，攪拌均勻，壓片。製得腦震寧片200片，每片重0.5g。

實施例5：腦震寧軟膠囊

處方：當歸300g，地黃300g，牡丹皮275g，川芎250g，地龍250g，丹參500g，茯苓275g，陳皮375g，竹茹275g，炒酸棗仁275g，柏子仁275g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，再加入其他藥材水提，水提取後，用80％的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，以滴製法製得腦震寧軟膠囊300粒，每片粒0.5g。

實施例6：腦震寧分散片

處方：當歸250g，地黃220g，牡丹皮200g，川芎100g，地龍100g，丹參400g，茯苓330g，陳皮300g，竹茹200g，炒酸棗仁190g，柏子仁220g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，再加入其他藥材水提，水提取後，用70％的乙醇醇沉2次，濃縮成稠膏狀，加入適量的羧甲基澱粉鈉、微晶纖維素、微粉矽膠、用乙醇制粒、乾燥、整粒，再加入所得揮髮油，混勻後，壓片。製得腦震寧分散片200片，每片重0.65g。

實施例7：腦震寧口服液

處方：當歸210g，地黃210g，牡丹皮140g，川芎140g，地龍140g，丹參350g，茯苓260g，陳皮280g，竹茹240g，炒酸棗仁230g，柏子仁230g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，再加入其他藥材水提，水提取後，用70％的乙醇醇沉2次，加入蜂蜜、聚山梨酯80、苯甲酸鈉適量，用枸櫞酸調節ph值至4.5～5.5，攪勻，濾過，得腦震寧口服液1000ml，5ml/支。

實施例8：小兒腦震寧顆粒

處方：當歸200g，地黃200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龍150g，丹參375g，茯苓250g，陳皮250g，竹茹250g，炒酸棗仁250g，柏子仁250g。

製法：以上十一味，當歸、牡丹皮、川芎、陳皮蒸餾提取揮髮油，蒸餾後水溶液另器收集；藥渣與其餘丹參等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合併煎液，濾過，濾液與上述水溶液合併，濃縮至相對密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入適量蔗糖和糊精，制粒，乾燥，加入上述揮髮油，混勻，製成1000g，即得。