預防或治療帕金森病的藥物組合物及其製備方法

2023-10-10 17:29:04 1

專利名稱：：預防或治療帕金森病的藥物組合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及一種藥物組合物，尤其涉及一種由刺五加有效成分按照特定配比組成的藥物組合物，本發明還涉及該藥物組合物在預防或治療帕金森病中的用途，屬於帕金森病的治療領域。
背景技術：
：帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)是一種常見的中樞神經系統退行性疾病，其發病率隨年齡增長而增加。我國現有PD患者170萬，並以每年新增10萬人速度增長。由於該病嚴重影響患者的活動能力和生活質量，致殘率高，病程長，往往需要終生治療，因而給人類帶來了嚴重的社會和經濟負擔。所以迫切需求尋找預防和治療帕金森病的有效中藥，以延緩帕金森病的進程和防止病情的加重。近年來，隨著現代生物技術手段在天然藥的應用，中藥中的活性單體開始成為人們關注的焦點，而且在神經退行性疾病方面的研究已經取得了一定進展。刺五力口為五力口才直物刺五力口(Acanthopanaxsenticosus(Rupr.etMaXim.)Harms.)的乾燥根和根莖。主產於黑龍江省山區。味辛、微苦、性溫、無毒，具有益腎健脾，補腎安神作用。目前刺五加複方和刺五加注射液已用於帕金森病的臨床治療，並取得了一定療效，但是迄今為止，尚未見有將刺五加有效成分配比用於帕金森病的治療，所以刺五加有效成分配比治療帕金森病具有廣闊的市場開發前景。
發明內容本發明的目的是提供一種對於帕金森病具有顯著療效的藥物組合物。本發明的目的是通過以下技術方案來實現的一種預防或治療帕金森病的藥物組合物，由刺五加苷B,刺五加苷D,丁香樹脂酚雙葡萄糖苦和胡蘿蔔苦組成；為了達到更好的治療效果，優選的，各組分的用量配比範圍是:刺五加苷B10~20Mg/ml，刺五加苷D20~40jLig/ml,丁香樹脂酚雙葡萄糖苷40~80|lig/ml,胡蘿蔔苷2080)ag/ml。更優選的，由刺五加苷B,刺五加苷D，丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷按照1:2:8:8的重量配伍而組成。上述各化合物均可以通過商業途徑購買得到，也可按照現有的文獻所公開的方法製備得到。將藥學上可接受用量的本發明藥物組合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑配合後，按本領域常規的製劑方法將其製備成任意一種適宜的臨床製劑。通常本發明組合物適合於口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑或口服液等液體製劑形式。基於前期工作確定刺五加治療帕金森病的有效組分，並分離鑑定出有效組分中的四個化合物的基礎上，為了系統深入地研究刺五加有效成分配比治療帕金森病的作用，本發明採用細胞培養的方法，以1-甲基-4苯基吡啶離子(MPP+)作為體外毒素的代表，造成PC12細胞的損傷，建立PD的細胞模型。採用MTT法檢測PCu細胞存活率，確定刺五加有效組分中各成分的劑量水平範圍。最終確定各成分的用量配比範圍是刺五加苷B10~20|ag/ml,刺五加苷D20~40jug/ml,丁香樹脂酚雙葡萄糖苷4080)ag/ml，胡蘿蔔苷20~80mg/ml。依據刺五加苷B、刺五加苷D、丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔香的劑量水平範圍，分別針對其各成分設計3個劑量水平，本發明以刺五加苷B、刺五加苷D、丁香樹脂酚雙葡萄糖香和胡蘿蔔普作為考察的4個因素，按"(34)正交設計表進行實驗，釆用MTT比色法，以細胞存活率為考察指標，採用方差分析法確定刺五加苷B、刺五加苷D、丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷的最佳配伍比例。實驗結果表明，刺五加的4個有效成分即刺五加苷B,刺五加苦D,丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷按照1:2:8:8的重量配比組成為最佳配比，由此配比所組成的藥物組合物能顯著提高PC12細胞存活率，對MPP+引起的PC12多巴胺能神經細胞損傷具有保護作用。本發明所提供的刺五加有效成分化學成分簡單明確，在生產中更易於藥物的質量控制。利用本發明得到的刺五加有效成分質量穩定，具有保護神經元的藥理作用，因此可以用來製備療效好，安全可靠的預防和治療帕金森病的藥物。本發明藥物組合物中的各化學成分製備工藝簡單，成本低，其毒副作用小。各化學成分簡單明確，在生產中更易於藥物的質量控制。利用本發明得到的刺五加有效成分配比質量穩定，具有保護神經元的藥理作用，因此可以用來製備療效好，安全可靠的預防和治療帕金森病的藥物。具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是範例性的，並不對本發明的範圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和範圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護範圍內。實驗例11、實驗細胞抹中科院上海細胞所2、實^驗藥物MPP+SIGMA-RBI乂A司刺五加苷B標準品3、實驗方法將PC12細胞配成單細胞懸液，以5x107ml接種於96孔培養板。連續培養24小時後換液，在每孔中分別加入不同濃度的刺五加苦B稀釋液，使它的終濃度分別為2.5,5,10，20,40,80|ig/ml,同時加入終濃度300jumol/LMPP+溶液。再繼續培養48小時後，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)2Gjul，37°C孵育4小時。終止培養後小心吸空培養基，每孔加入150|alDMS0，振蕩10分鐘，使結晶充分溶解。酶標儀檢測每個孔在490nm處吸收值，計算細胞存活率。實驗結果見表l,表2。(細胞存活率％=實驗組光吸收值/空白組光吸收值x100%),數據以均數±標準差(x±s)表示，用t檢驗進行統計學處理。表l不同濃度的刺五加苷B對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又土s)組別濃度OD值存活率(°/。)對照組0.48±0.06'100模型組MPP+300jumol/L0.42±0.0487.5給藥組2.5pg/ml+MPP+300pmol/L5|ug/ml+MPP+300拜ol/L10ug/ml+MPF300|amol/L0.44±0.070.48±0.090.49±0.09*91.7100102.1注:與模型組比較，*p<0.05表2不同濃度的刺五加苷B對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又±s)組別濃度0D值存活率(％)對照組0.46±0.09'100模型組MPP+300jamol/L0.38±0.0582.6給藥組20|ag/ml+MPP+300nmol/L40jug/ml+MPP+300,1/L80pg/ml+MPP+300pmol/L0.46±0.09*0.38±0.060.37±0.0610082.680.4注:與模型組比較，*p<0.05從實驗結果可以看出，不同濃度的刺五加香B對MPP+誘導的細胞損傷的影響存在明顯的差異。與模型組相比，10,20jLig/ml刺五加苷B組細胞存活率明顯高於模型組(P〈0.05,有統計學意義)，說明10,20jug/ml刺五加苷B能顯著減少MPP+的損傷效應，從而使細胞存活率有較大幅度的提高。實驗例21、實驗細胞林中科院上海細胞所2、實-瞼藥物MPP+SIGMA-RBI/^司刺五加苦D標準品3、實驗方法將PC12細胞配成單細胞懸液，以5x10Vml接種於96孔培養板。連續培養24小時後換液，在每孔中分別加入不同濃度的刺五加苷D稀釋液，使它的終濃度分別為2.5,5，10，20,40，80ug/ml,同時加入終濃度300|amol/LMPP+溶液。再繼續培養48小時後，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20jli1，37°C孵育4小時。終止培養後小心吸空培養基，每孔加入150julDMSO,振蕩10分鐘，使結晶充分溶解。酶標儀檢測每個孔在490nm處吸收值，計算細胞存活率。實驗結果見表3,表4。統計學處理數據以均數士標準差(x±s)表示，用t檢驗進行統計學處理。6表3不同濃度的刺五加苷D對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又±s)tableseeoriginaldocumentpage7注與模型組比較，*p<0.05表4不同濃度的刺五加苷D對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又±s)tableseeoriginaldocumentpage7注與模型組比較，*p<0.05從實驗結果可以看出，不同濃度的刺五加苷D對MPP+誘導的細胞損傷的影響存在明顯的差異。與模型組相比，20,40|ug/ml刺五加苷D組細胞存活率明顯高於模型組(P<0.05,有統計學意義)，說明20,40jag/ml刺五加苷D能顯著減少MPP+的損傷效應，從而使細胞存活率有較大幅度的提高。實驗例31、實驗細胞林中科院上海細胞所2、實—驗藥物MPP+SIGMA-RBI/^司丁香樹脂酚雙葡萄糖苷3、實驗方法將PC12細胞配成單細胞懸液，以5xlOVml接種於96孔培養板。連續培養24小時後換液，在每孔中分別加入不同濃度的丁香樹脂酚雙葡萄糖苷稀釋液，使它的終濃度分別為2.5,5,10,20,40,80jag/ml,同時加入終濃度300拜ol/LMPP+溶液。再繼續培養48小時後，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20y1，37°C孵育4小時。終止培養後小心吸空培養基，每孔加入150jLi1DMSO，振蕩10分鐘，使結晶充分溶解。酶標儀檢測每個孔在490nm處吸收值，計算細胞存活率。實驗結果見表5、表6。數據以均數士標準差(x土s)表示，用t檢驗進行統計學處理。表5不同濃度丁香樹脂酚雙葡萄糖苷對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又士s)組別濃度OD值存活率(％)對照組0.57±0.07'100模型組MPP+300nmol/L0.51±0.0589.5給藥組2.5pg/ml+MPP+300|amol/L0.53±0.0593.05lag/ml+MPP+300拜ol/L0.55±0.0496.510jag/ml+MPP+300|amol/L0.55±0.0496.5注與模型組比較，*p<0.05表6不同濃度丁香樹脂酚雙葡萄糖苷對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又士s)組別濃度OD值存活率(％)對照組0.52±0.04'100模型組MPP+300jumol/L0.44±0.0684.6給藥組20|ug/ml+MPP+300|amol/L40jag/ml+MPP+300拜ol/L80)ng/ml+MPP+300nmol/L0.49±0.090.57±0.09'0.57±0.08'94.2109.6109.6注與模型組比較，*p<0.05從實驗結果可以看出，不同濃度的丁香樹脂酚雙葡萄糖苷對MPP+誘導的細胞損傷的影響存在明顯的差異。與模型組相比，40，80Mg/ml丁香樹脂酚雙葡萄糖苷組細胞存活率明顯高於模型組(P司胡蘿蔔苷3、實驗方法將PC12細胞配成單細胞懸液，以5xl04/ml接種於96孔培養板。連續培養24小時後換液，在每孔中分別加入不同濃度的胡蘿蔔苷稀釋液，使它的終濃度分別為2.5，5,10,20，40,80|ig/ml,同時加入終濃度300pmol/LMPP+溶液。再繼續培養48小時後，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20n1，37°C孵育4小時。終止培養後小心吸空培養基，每孔加入150julDMSO，振蕩10分鐘，使結晶充分溶解。酶標儀檢測每個孔在490mn處吸收值，計算細胞存活率。實驗結果見表7、表8。數據以均數±標準差(x±s)表示，用t檢驗進行統計學處理。表7不同濃度的胡蘿蔔苷對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又±s)組別濃度OD值存活率(％)對照組0.34±0.04.100模型組MPP+300|amol/L0.31±0.0391.2給藥組2.5)jg/ml+MPP+300|amol/L5|ag/ml+MPP+300|araol/L10|ag/ml+MPP+300|araol/L0.31±0.030.33±0.080.34±0.0591.297.1100注與模型組比較，*p<0.05表8不同濃度的胡蘿蔔苷對MPP+誘導的PC12細胞損傷的影響(又士s)組別濃度OD值存活率(％)對照組0.37±0.05.100模型組MPP+300)amol/L0.31±0.0383.8給藥組20pg/ml+MPP+300|amol/L40ng/ral+MPP+300拜ol/L80pg/ml+MPP+300|amol/L0.37±0.06'0.42±0.09'0.52±0.09*100113.5140.5注與模型組比較，*p<0.059從實驗結果可以看出，不同濃度的胡蘿蔔苷對MPP+誘導的細胞損傷的影響存在明顯的差異。與模型組相比，20,40,80(ig/ml胡蘿蔔苷組細胞存活率明顯高於模型組(P〈0.05，有統計學意義)，說明20,40，80Mg/ml胡蘿蔔苷能顯著減少MPP+的損傷效應，從而使細胞存活率有較大幅度的提高。實驗例51、實驗細胞林中科院上海細胞所2、實^驗藥物MPP+SIGMA—RBI/^司刺五加苷B、刺五加苷D、胡蘿蔔苷丁香樹脂酚雙葡萄糖苷3、實驗方法依據上述實驗結果，得到各成分的劑量水平範圍(見表9),分別針對各有效成分設計3個水平，按L9(34)正交設計表(見表10)進行實驗將PC12細胞配成單細胞懸液，以5x107ml接種於96孔培養板。連續培養24小時後換液，在每孔中分別加入不同樣品稀釋液，使它的終濃度為250)ng/ml,同時加入終濃度300lamol/LMPP+溶液。再繼續培養48小時後，每孔加入MTT溶液(5mg/ml)20p1，37°C孵育4小時。終止培養後小心吸空培養基，每孔加入150ia1DMSO,振蕩10分鐘，使結晶充分溶解。酶標儀檢測每個孔在490nm處吸收值，計算細胞存活率。(細胞存活率y產實驗組光吸收值/對照組光吸收值xiooy。)，實驗結果見表ll,方差分析結果見表12.表9各有效成分的劑量水平範圍水平範圍(ug/ml)刺五加苦B10-20刺五加苷D20-40丁香樹脂酚雙葡萄糖苷40-80胡蘿蔔脊20~80tableseeoriginaldocumentpage11由上表可知，D因素影響顯著。A、B、C無顯著差別，所以選定最佳配伍比例為AACA,即四種有效成分配比為刺五加苷B:刺五加苷D:丁香樹脂酚雙葡萄糖苷:胡蘿蔔苷為1:2:8:8。權利要求1、一種預防或治療帕金森病的藥物組合物，其特徵在於由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷組成。2、按照權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於各組分的用量配比範圍是刺五加苦B10~20Mg/ml，刺五加香D20~40|ug/ml,丁香樹脂酚雙葡萄糖苷40-80jug/m1,胡蘿蔔苷20~80)ag/ml。3、按照權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物由刺五加苷B,刺五加苦D,丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷按照1:2:8:8的重量配伍而組成。4、按照權利要求1-3任何一項所述的藥物組合物，其特徵在於將所述藥物組合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑配合後，按本領域常規的製劑方法將其製備成任意一種適宜的臨床製劑。5、按照權利要求4所述的藥物組合物，其特徵在於所述的製劑是口服製劑或注射製劑。6、權利要求1-3任何一項所述的藥物組合物在製備治療帕金森病藥物中的用途。全文摘要本發明公開了一種預防或治療帕金森病的藥物組合物及其製備方法。該藥物組合物由刺五加苷B，刺五加苷D，丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷組成。本發明確定了上述4種組分的最佳劑量水平範圍，在此基礎上採用了正交試驗篩選出了上述4種活性成分之間的最佳配伍比例。實驗結果表明，將刺五加苷B，刺五加苷D，丁香樹脂酚雙葡萄糖苷和胡蘿蔔苷按照1∶2∶8∶8的重量配伍而成的藥物組合物能顯著提高PC12細胞存活率，對多巴胺能神經細胞損傷具有顯著的保護作用。本發明所提供的刺五加有效成分化學成分簡單明確，在生產中易進行於質量控制。本發明藥物組合物可以用來製備療效好，安全可靠的預防和治療帕金森病的藥物。文檔編號A61K31/704GK101537011SQ20091013557公開日2009年9月23日申請日期2009年4月27日優先權日2009年4月27日發明者劉樹民,芳盧,安麗鳳,楊婷婷申請人:劉樹民