麥角硫因的檢測方法
2023-10-10 18:43:49 3
麥角硫因的檢測方法
【專利摘要】本發明涉及一種菌絲體中或發酵液中的麥角硫因的高壓液相色譜檢測方法，包括對菌絲體或發酵液的預處理步驟和高壓液相色譜檢測步驟。對菌絲體的預處理步驟包括將發酵液固液分離，收集菌絲體，再加入純水溶解並進行浸提而得到浸提液，然後經過超濾膜超濾，得到含有麥角硫因樣品的透過液。對發酵液的預處理步驟包括對發酵液直接進行浸提，然後經過超濾膜超濾，得到含有麥角硫因樣品的透過液。本發明的方法先經過簡單的預處理，再利用高壓液相色譜進行檢測，去除了發酵液和菌絲體中的大部分雜質，提高了色譜柱的使用壽命和樣品的分離度，使檢測結果更精確穩定，降低了檢測的成本。
【專利說明】麥角硫因的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及化學分析領域，特別是涉及發酵液和菌絲體中麥角硫因的檢測方法。【背景技術】
[0002]麥角硫因(L-Ergothioneine，EGT)，化學名為2_巰基組氨酸三甲基內鹽，是一種稀有的天然手性胺基酸，它是至今唯一為人們所知的天然2-硫代咪唑胺基酸(2-thio-1midazole),化學結構式如下:
[0003]
【權利要求】
1.一種菌絲體中的麥角硫因的高壓液相色譜檢測方法，包括以下步驟: 1)菌絲體的預處理步驟，包括將發酵液固液分離，收集菌絲體，再加入純水懸浮並進行浸提而得到浸提液，然後經過超濾膜超濾，得到含有麥角硫因樣品的超濾透過液； 2)高壓液相色譜檢測步驟，對含有麥角硫因待測樣品的透過液進行高壓液相色譜分析。
2.如權利要求1所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，發酵液固液分離的方法選自離心、過濾和抽濾中的一種或多種。
3.如權利要求1所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，浸提方法包括水浴浸提和/或磁力攪拌浸提。
4.如權利要求1所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，浸提方法包括一次性浸提或反覆浸提，浸提溫度為50~100°C，浸提總時間為10~90min。
5.如權利要求4所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，浸提溫度為80~90℃。
6.如權利要求4所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，浸提總時間為60 ~90mino
7.如權利要求1所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，攪拌轉數為O~600rpmo
8.如權利要求1所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，超濾過程中用到的超濾膜的截留分子量為1.5kDa~30kDa。
9.如權利要求8所述的方法，其中在所述的菌絲體的預處理步驟中，超濾過程中用到的超濾膜的截留分子量為3kDa。
10.一種發酵液中的麥角硫因的高壓液相色譜檢測方法，包括以下步驟: 1)發酵液的預處理步驟，包括對發酵液直接進行浸提，然後經過超濾膜超濾，得到含有麥角硫因樣品的透過液； 2)高壓液相色譜檢測步驟，對含有麥角硫因樣品的透過液進行高壓液相色譜分析。
11.如權利要求10所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，浸提方法包括水浴浸提和/或磁力攪拌浸提。
12.如權利要求10所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，浸提溫度為50~100°C，浸提時間為10~90min。
13.如權利要求12所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，浸提溫度為80 ~90?。
14.如權利要求12所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，浸提時間為60 ~90min。
15.如權利要求10所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，攪拌轉數為O~600rpm。
16.如權利要求10所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，超濾過程中用到的超濾膜的截留分子量為1.5kDa~30kDa。
17.如權利要求10所述的方法，其中在所述的發酵液的預處理步驟中，超濾過程中用到的超濾膜的截留分子量為3kDa。
18.如權利要求1~17中任一項所述的方法，其中在所述的高壓液相色譜檢測步驟中，高壓液相色譜檢測的條件如下:色譜柱為反相碳十八柱，採取兩根柱子串聯的連接方式進行檢測；流動相溶液成分以體積分數計為甲醇/乙腈-純水=(O~10): (90~100);流動相的pH範圍為4.0~6.5 ;用於調節pH的酸或鹽選自乙酸、乙酸鈉、硼酸、甲酸、丁酸、乙二酸、和丙酮酸中的一種或多種；檢測波長為250~260nm ;柱溫為15~40°C ;流動相的流速為0.3~1.3mL/min ;色譜圖的記錄時間為40min以下；麥角硫因的出峰時間為3~18min。
19.如權利要求18所述的方法，其中在所述的高壓液相色譜檢測步驟中，流動相溶液成分以體積分數計為甲醇/乙腈-純水=(O~5): (95~100)。
20.如權利要求18所述的方法，其中在所述的高壓液相色譜檢測步驟中，流動相的pH範圍為4.0~5.0。
21.如權利要求18所述的方法，其中在所述的高壓液相色譜檢測步驟中，用於調節pH的酸或鹽為硼酸。
22.如權利要求18所述的方法，其中在所述的高壓液相色譜檢測步驟中，麥角硫因的出峰時間為5~8min。
23.如權利要求22所述的方法，其中在所述的高壓液相色譜檢測步驟中，麥角硫因的出峰時間為7~8min。
24.如權利要求18所述的方法，還包括對麥角硫因進行定量的步驟，所述的定量步驟包括: 1)麥角硫因標準品的預處理步驟，包括製備含不同濃度的麥角硫因標準品的溶液； 2)對含不同濃度的麥角硫因標準品的溶液分別進行高壓液相色譜檢測； 3)根據麥角硫因標準品的濃度與相應的高壓液相色譜峰面積繪製標準線； 4)根據麥角硫因待測樣品的高壓液相色譜出峰時間和峰面積，比照標準品的出峰時間和標準曲線，對待測樣品中的麥角硫因進行定量。
25.如權利要求24所述的方法，其中對含不同濃度的麥角硫因標準品的溶液進行高壓液相色譜檢測的條件，與權利要求18所述的方法中所使用的高壓液相色譜檢測的條件相同。
【文檔編號】G01N30/02GK103743825SQ201210392294
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2012年10月16日 優先權日:2012年10月16日
【發明者】姜文俠, 劉琦, 周濤 申請人:中國科學院天津工業生物技術研究所