COX‑2和VEGF抑制劑及其三十烷醇的應用的製作方法

2023-10-25 11:19:47 6

本發明涉及醫藥領域，具體涉及三十烷醇作為COX-2和VEGF抑制劑，以及在製藥及保健品中的應用。
背景技術：
：三十烷醇，分子式為C30H62O，結構式為CH3-(CH2)28-CH2-OH，CAS號：593-50-0。三十烷醇主要來源於米糠蠟、蜂蠟、甘蔗中，農業上作為廣譜性植物生長促進劑。但在醫藥應用中，除古巴、美國以二十八烷醇為主要成分開發的保健品外，有關三十烷醇的報導很少。G.Thippeswamy等發表的文章「OctacosanolisolatedfromTinosporacordifoliadownregulatesVEGFgeneexpressionbyinhibitingnucleartranslocationofNF-BanditsDNAbindingactivity」表明，二十八烷醇可抑制內皮細胞和艾氏腹水癌細胞增殖、雞胚絨毛尿囊膜和大鼠角膜血管新生以及癌性腹水的分泌，其機制與二十八烷醇抑制腫瘤細胞分泌血管內皮生長因子(VEGF)有關，但是關於三十烷醇並沒有相關的報導。有關三十烷醇在藥物中的應用，申請號為CN200710066112.7的中國專利公開了三十烷醇在製備治療高血脂疾病中的應用，申請號為CN200610048846.8、CN200910146061.8的中國專利公開了三十烷醇對肝癌、腸癌、肺癌等具有不同程度的療效，但其作用機制和靶點尚不明確。目前尚未檢索到關於三十烷醇作為COX-2和VEGF抑制劑的報導。技術實現要素：本發明的目的是提供一種COX-2和VEGF抑制劑。本發明的另一目的是提供三十烷醇作為COX-2和VEGF抑制劑的應用。本發明所述的COX-2和VEGF抑制劑由重量百分比5-95％的三十烷醇和餘量的藥用輔料組成。由於三十烷醇為單一活性成分，藥用輔料僅只是作為賦型劑，所以三十烷醇在其中含量並不是重要的因素，只要能成藥即可，一般為10-50％。所述的藥用輔料為常用藥用輔料，如：聚乙二醇、羧甲基纖維素鈉中的一種或兩種。三十烷醇也可以與其它藥用成分如環磷醯胺配伍，作為COX-2和VEGF的抑制劑。三十烷醇的加入可以大大降低環磷醯胺的副作用。具體見後面的試驗。本發明涉及三十烷醇為單一活性成分或者與其它藥用成分配合作為製備COX-2和VEGF抑制劑的藥物中的應用。本發明涉及三十烷醇為單一活性成分或者與其它藥用成分配合作為製備COX-2和VEGF抑制劑的保健品中的應用。本發明首次發現三十烷醇具有抑制COX-2和VEGF的活性，通過抑制COX-2和VEGF的活性可以達到阻止癌細胞的增生和轉移的作用。COX-2(環氧合酶-2)與腫瘤的發生發展關係密切，通過促進腫瘤細胞增殖、抑制凋亡、促進腫瘤新生血管形成等機制，參與多種腫瘤的發生、發展，COX-2已成為腫瘤的一個重要的治療靶分子。COX-2的過表達能夠促進腫瘤組織中微血管的生成。作用於COX-2抑制劑的昔布類可用於預防和治療腫瘤，美國FDA在1999年批准昔布類抗炎藥用於人家族性腺瘤性息肉(FAP)輔助治療，但其嚴重心血管副作用限制了它的應用，默克公司的羅非昔布已撤出市場。作用於VEGF抑制劑的貝伐單抗在2004年2月26日獲得FDA的批准，是美國第一個獲得批准上市的抑制腫瘤血管生成的藥。血管內皮生長因子(VEGF)又稱血管滲透性因子(VPF)，是血管生長因子中具有高度特異的促新生血管形成作用的因子，是COX-2促血管形成作用的最重要的相關因子，在腫瘤血管新生的過程中起著重要的作用，是腫瘤生長和轉移過程中很重要的因素。COX-2可能通過PGs途徑上調VEGF的表達，從而參與腫瘤組織中新生血管的生成，這可能是COX-2促進腫瘤生長、浸潤、轉移的機制。癌症免疫治療是癌症治療領域的研究熱點，位於2013年《科學》十大突破之首。自然殺傷(NK)細胞是一群不同於T、B淋巴細胞的大顆粒淋巴細胞，屬於一類獨立的淋巴細胞。該細胞群是抗腫瘤的第一道防線，無需抗原預先致敏即可直接識別和殺傷腫瘤細胞，能發揮特異性殺傷靶細胞的作用，尤其是對多種腫瘤細胞有快速殺傷和溶解的作用。本發明闡明了三十烷醇通過選擇性抑制COX-2和VEGF，發揮抗腫瘤作用。試驗結果顯示：三十烷醇可以通過選擇性抑制COX-2發揮抗腫瘤作用，通過抑制VEGF的表達發揮抗新生血管生成的作用。同時，三十烷醇能夠提高機體免疫功能，劑量依賴性的激活小鼠NK細胞的活性，同時能明顯促進小鼠脾淋巴細胞的增殖和溶血素抗體的生成，拮抗環磷醯胺所致的白細胞數降低的作用。本發明揭示了三十烷醇作為單一活性成分或者與其它藥用成分配合作為製備COX-2和VEGF抑制劑的藥品和保健品中的應用。可以製成片劑、顆粒劑、硬膠囊、軟膠囊、幹混懸劑、凍乾粉針劑、口服液、滴丸或口腔速崩片。三十烷醇作為單一活性成分其有效劑量範圍為5mg-2000mg。藥效學試驗：1：三十烷醇對裸鼠COX-2表達的影響實驗設備：5％CO2孵箱、無菌實驗臺、離心機、電冰箱、超低溫冰箱、無菌細胞間、超純水系統、液氮罐。主要試劑：臺盼藍、Tween-80(產品編號：T8360)、羧甲基纖維素鈉(產品編號：C8621)、胎牛血清(南美血源，產品編號：FBS-12A-100)、胰蛋白酶(貨品編號：M0043)、RPMI-1640培養基(產品編號：C11875500bt，GIBCO)、PBS、三十烷醇(昆明龍津藥業股份有限公司，批號：20140716)、塞來昔布(產品編號：169590-42-5，武漢勝天宇生物科技有限公司)、免疫組化試劑盒:兔免疫組化試劑盒(編號：PV-9001，北京中杉金橋)、DABKIT3ml(產品編號：ZLI-9018，北京中杉金橋)；RabbitantiCOX-1/Cyclooxygenase-1Polyclonalantibody(產品編號：13393-1-AP，Proteintech)、COX-2環氧化物酶(產品編號：ZA-0515，北京中杉金橋)。主要材料：人結腸癌HT-29細胞株(重慶醫科大學附屬第一醫院分子腫瘤及表觀遺傳學重慶市重點實驗室贈送)；4～6周齡BALB/c雌性裸鼠30隻(體重15-20g)，購自重慶醫科大學實驗動物中心(許可證號：SCXK(京)2014-0004)。主要試劑的配製：受試化合物配製方法：0.5％羧甲基纖維素鈉：精確稱取羧甲基纖維素鈉500mg加入煮沸的蒸餾水100ml，不斷攪拌，直至液體澄清，常溫靜置一夜。三十烷醇劑量設置：高劑量組：精確稱取200mg三十烷醇加入吐溫-801ml充分攪拌混勻，加入0.5％羧甲基纖維素鈉12.3ml，充分攪拌直至呈均勻一致的混懸液13.3ml，濃度為15mg/ml。中劑量組：精確稱取200mg三十烷醇加入吐溫-801ml充分攪拌混勻，加入0.5％羧甲基纖維素鈉25.7ml，充分攪拌直至呈均勻一致的混懸液26.7ml，濃度為7.5mg/ml。低劑量組：精確稱取200mg三十烷醇加入吐溫-801ml充分攪拌混勻，加入0.5％羧甲基纖維素52.3ml，充分攪拌直至呈均勻一致的混懸液53.3ml，濃度為3.75mg/ml。陽性對照藥物塞來昔布的配製：精確稱取200mg塞來昔布粉末，加入吐溫-801ml充分攪拌混勻，加入0.5％羧甲基纖維素鈉25.7ml，充分攪拌直至呈均勻一致的混懸液26.7ml，濃度為7.5mg/ml。實驗步驟：三十烷醇對裸鼠移植瘤生長的影響細胞培養及移植瘤模型的建立：用培養基懸浮，取10μl細胞懸液，加入臺盼藍10μl，細胞計數板進行計數活細胞。10mlPBS洗細胞，1000r/min，3min，3次。用不含血清的培養基將細胞製成單細胞懸液，調細胞濃度使每0.2ml細胞懸液含3×106個細胞。4-6周齡雌性裸鼠，體重15-20g，無菌條件下，以1ml注射器再次將細胞懸液混勻，抽取細胞懸液0.2ml，排盡空氣備用。於擬成瘤點靠近尾端0.5-1cm處進針，緩慢將細胞懸液注入，共30隻。種瘤後密切觀察，待裸鼠成瘤後記錄裸鼠體重和瘤體大小，觀察裸鼠生長狀況。種瘤後第10天裸鼠移植瘤成瘤率100％。待裸鼠移植瘤大小約50-100mm3，30隻裸鼠分成5個小組，每組6隻灌胃：三十烷醇低劑量組(37.5mg/kg.d)、中劑量組(75mg/kg.d)、高劑量組(150mg/kg.d)、塞來昔布組(75mg/kg.d)、空白對照組(生理鹽水組)，每日1次。給藥4周後頸椎脫位法處死裸鼠，取腫瘤組織。用遊標卡尺測量腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，然後計算以下指標：體積：V＝ab2/2；抑瘤率＝[(V對照組-V實驗組)/V對照組]×100％。移植瘤標本的處理及免疫組化檢測COX-1和COX-2的表達：移植瘤與正常組織分界清楚，呈魚肉狀、質軟、易碎，PBS清洗，逐個編號後一部分放入標本管中，於液氮中保存。一部分於4％多聚甲醛中固定24-48h。標本充分固定後脫水、透明、包埋、切片以進一步處理。切片後行HE染色及按PV-9001免疫組化(Biotin-StrePtavidinHRPDetectionSystems)及ZLI-9018DABKit的操作步驟進行COX-1(抗體濃度1:200)、COX-2(抗體濃度1：200)的免疫組織化學染色。採用ImageProPlus軟體測量各組高倍鏡圖片的平均OD值(總OD值/Area)。統計方法：採用IBMSPSSStatistics22統計軟體對腫瘤大小和各組400倍圖片的平均OD值(總OD值/Area)行單因素方差分析，組間兩兩比較採用Post-hoc(LSD)分析。以P<0.05為差異有統計學意義。實驗結果：三十烷醇對裸鼠移植瘤生長的影響(表1)。表1各組裸鼠體積(mean±SDmm3)及抑瘤率％的表達組別對照組低劑量組中劑量組高劑量組塞來昔布組裸鼠n66666體積799±430458±227656±221429±262729±289抑瘤率(％)42.6817.9046.30*8.76三十烷醇高劑量組與對照組比較，其腫瘤生長顯著減慢，抑瘤率46.30％，*(P0.05)。對COX-2的免疫組織化學染色切片進行光密度值測定，方差分析顯示(表2)，與對照組相比，塞來昔布組、低劑量組、中劑量組、高劑量組COX-2的表達均顯著減低，*(P0.05)。中劑量組、高劑量組、塞來昔布組與對照組比較，其移植瘤生長顯著減慢，*P0.05)，塞來昔布組、中劑量組、高劑量組VEGF的表達均顯著減低，*P<0.05，見表4。表4各組VEGF免疫組化圖片的平均OD值用mean±SD表示組別樣本量(n)平均IOD空白對照組70.10750±0.06755低劑量組70.07556±0.03401中劑量組70.04782±0.02808*高劑量組70.03952±0.02121*塞來昔布組70.05301±0.04789*實驗結論：和陰性對照組相比，不同劑量組三十烷醇對轉移性結腸癌裸鼠移植瘤的生長均有不同程度的抑制作用。高劑量組和中劑量組三十烷醇對LOVO細胞裸鼠移植瘤VEGF的表達有抑制作用，可抑制結腸癌裸鼠肝轉移。3：三十烷醇對移植於裸鼠的人體腫瘤胃癌MNK-45的療效實驗實驗材料：吐溫80、0.5％CMC-Na、生理鹽水。環磷醯胺(CTX)，江蘇恆瑞製藥有限公司，批號：11030921，以生理鹽水溶解。瘤源：由上海醫藥工業研究院藥理評價研究中心傳代維持。瘤源：由上海醫藥工業研究院藥理評價研究中心傳代維持，將體外的細胞株轉化至免疫缺陷裸小鼠體內傳代待生長至第二代後使用。實驗動物：裸小鼠由上海斯萊克實驗動物責任有限公司提供。合格證號：SCXK(滬)2003-0003。裸小鼠為6周齡。雌雄皆可，每次使用同一性別小鼠。動物數：試驗組及陽性對照組裸小鼠每組6隻，陰性對照組為12隻。動物飼養環境：裸小鼠置於層流架中SPF條件飼養，所應用的飼料、墊料、籠具及接觸的器械等均應高壓消毒後使用。實驗主要步驟：無菌條件下取體內生長旺盛的人體腫瘤第2代後異種移植模型為瘤源，製備成瘤塊，於裸小鼠右腋皮下接種約2mm3/鼠，次日隨機分組，待腫瘤觸及約為100mm3開始給藥，每隔3-5天動態測試各組荷瘤鼠腫瘤生長的大小及荷瘤鼠體重，用卡尺測量荷瘤鼠腫瘤的短徑(a)及長徑(b)，按(a2×b)/2公式計算腫瘤體積。實驗約四周左右處死各組動物，剖取的腫瘤稱重按下列公式計算腫瘤抑制率：腫瘤抑制率％＝[(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重]×100％合併用藥的效應根據金氏公式計算Q值：Q＝Ea+b/(Ea+Eb-Ea×Eb)Ea+b為合併用藥的抑瘤率，Ea和Eb分別為A藥和B藥的抑瘤率。如Q值0.85-1.15為相加(+)，﹥1.15為增強(++)。表5三十烷醇對人胃癌MKN-45裸鼠異種移植模型抗腫瘤療效與溶劑對照組比較：*P<0.05，**P<0.01。表6三十烷醇合併環磷醯胺對人胃癌MKN-45裸鼠異種移植模型抗腫瘤療效與溶劑對照組比較：*P<0.05，**P<0.01。4：三十烷醇對小鼠脾淋巴細胞增殖及NK細胞活性的影響三十烷醇配製方法：精確稱取所需樣品，以少量吐溫80助溶後逐漸加入0.5％CMCNa溶液待充分混勻後稀釋至所需濃度即可。給藥體積為0.5ml/20g鼠。實驗材料：吐溫80、0.5％CMC-Na。香菇多糖，武漢迪奧藥業有限公司，批號20100202。DMEM完全培養基，內含10％新生牛血清(GIBCOBRL)、巰基乙醇、HEPES等。3H-TdR:放射性濃度：1mci/ml，購自上海原子核研究所。刀豆蛋白A：50μg/ml，購自Sigma公司。YAC-1細胞：上海醫藥工業研究院藥理評價研究中心傳代維持。實驗動物：品系：C57BL/6(SPF級)，購於上海斯萊克實驗動物責任有限公司，動物合格證號：SCXK(滬)2007-0005，體重為18-20g/6周齡。性別：雄性。動物數：試驗組、陰性對照組及陽性對照組每組10隻。實驗方法：NK細胞活性的測定：將C57BL/6小鼠隨機分組，每組10隻，按劑量連續給藥兩周，最後一次給藥結束後處死小鼠，無菌條件下取脾臟，置於小容器中，用手術剪刀將脾臟剪碎，分離細胞，經幾次自然沉降分離脾細胞，用DMEM培養基製成細胞懸液，將脾細胞調整至1×106/ml，加入100μl到96孔板中作為效應細胞。另取處於生長對數期的YAC-1細胞，調整細胞濃度為1×104/ml，作為靶細胞，以靶細胞與效應細胞之比為1:100的濃度加在96孔細胞培養板上，同時加入0.5μci/孔的3H-TdR同位素。每組設置10個復孔，在37℃二氧化碳培養箱中培養24小時，用多頭細胞器收集細胞，在液閃儀上測定CPM值，計算特異性抑制百分率(Pi)表示NK細胞活性。其中Pi＝1-(實驗組摻入CPM值/對照組摻入CPM值)×100％。小鼠脾淋巴細胞增殖的測定：將C57BL/6小鼠隨機分組，每組10隻，按劑量連續給藥兩周，最後一次給藥結束後處死小鼠，無菌條件下取脾臟，置於小容器中，用手術剪刀將脾臟剪碎，分離細胞，經幾次自然沉降分離脾細胞，用DMEM培養基製成細胞懸液，將脾細胞調整至1×107/ml，在無菌的96孔培養板中加入脾細胞100μl，同時加入1mg/ml的刀豆蛋白A50ul，在37℃二氧化碳培養箱中培養48小時後加入0.5μci/孔的3H-TdR同位素，繼續培養24小時。該實驗每組設置10個復孔，對照組用培養基代替脾細胞。培養結束後在多孔細胞收集器中收集細胞，5％TCA固定，無水乙醇脫水，液閃儀上測定CPM值。結果表明，三十烷醇樣品能夠劑量依賴性的激活小鼠NK細胞的活性，同時也能夠明顯促進小鼠脾淋巴細胞的增殖。詳見表7～8。表7三十烷醇對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響與對照組比較：*P<0.05，**P<0.01。表8三十烷醇對小鼠NK細胞活性的影響組別CPM值Pi(％)三十烷醇高劑量組6856±939.3**66三十烷醇中劑量組6890.2±602.8**65三十烷醇低劑量組9759.8±648.0**51香菇多糖6276.4±559.5**68對照19919.9±622.8與對照組比較：*P<0.05，**P<0.01。5：三十烷醇對小鼠溶血素的影響實驗材料：昆明種小鼠，雄性，18-20g，由上海斯萊克動物責任有限公司提供。合格證號：SCXK(滬)2007-0005。實驗劑量：實驗劑量設計為：150mg/kg，75mg/kg，37.5mg/kg。陽性藥：香菇多糖，批號：20100202，生產單位：武漢迪奧藥業有限公司。實驗劑量：50g/kg。給藥途徑及容量：灌胃給藥，0.5ml/20g。實驗方法：小鼠隨機分組，三十烷醇高、中、低各3個劑量組，陽性藥組，空白模型組。每組10隻。雞紅細胞用生理鹽水洗滌3次，配成5％混懸液即可，補體以2隻豚鼠血清混合，用生理鹽水配成10％濃度。每鼠腹腔注射5％生理鹽水雞紅細胞混懸液0.2ml進行免疫，同時開始給藥，免疫後7日，最後一次給藥1h摘眼球取血，離心，取血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清1ml，與5％雞紅細胞混懸液0.5ml、10％補體0.5ml混合，37℃恆溫箱保溫30min後，置0℃冰箱中中止反應。離心，取上清液於722分光光度計540nm處比色，測錄光密度(OD)，另設不加血清的空白對照，取其上清液作為比色時調「0」的基準以OD值作為判定血清溶血素的指標，比較各組的差異。實驗結果：三十烷醇高、中、低劑量組對小鼠溶血素抗體生成具有明顯促進作用，說明該藥可增強體液免疫，見表9。表9三十烷醇對小鼠溶血素的影響組別劑量(mg/kg)動物數(只)OD值三十烷醇高劑量組150102.611±0.646**三十烷醇中劑量組75102.477±0.595**三十烷醇低劑量組37.5102.250±0.702**陽性藥50102.398±0.789**空白模型組-101.692±0.257各組與空白模型組比較：*P＜0.05；**P＜0.01。6：三十烷醇對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響實驗材料：同上。實驗方法：小鼠隨機分組，每組10隻。三十烷醇高、中、低各3個劑量組，陽性藥、空白對照各一組。分組後第二天開始給藥，連續給藥1周，在最後一次給藥後一小時小鼠腹腔內注射2％雞紅細胞(經去除纖維蛋白，生理鹽水多次洗滌)0.2ml/只，4小時後處死小鼠，用生理鹽水衝洗腹腔，收集衝洗液、離心，傾去上清液，收集細胞塗片，涼幹後用瑞氏染色液染色，油鏡下觀察。計數100個巨噬細胞吞噬雞紅細胞數，按下公式計算。(1)吞噬百分率＝吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/100個巨噬細胞數，(2)吞噬指數＝被吞噬的雞紅細胞數/100個巨噬細胞數。實驗結果：三十烷醇中、高劑量組具有促進小鼠腹腔巨噬細胞吞噬作用，且具有一定劑量相關性。陽性藥也具有促進小鼠腹腔巨噬細胞吞噬作用，見表10。表10三十烷醇對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響各組與模型組比較：*P＜0.05；**P＜0.01。7：三十烷醇對環磷醯胺致Lewis小鼠白細胞數降低的升白作用實驗動物：C57BL/6小鼠，雄性，18-20g，由上海斯萊克動物責任有限公司提供。合格證號：SCXK(滬)2007-0005。實驗材料：吐溫80、0.5％CMC-Na。對照品：環磷醯胺，江蘇恆瑞製藥有限公司，批號11030921。瘤源：Lewis肺癌腫瘤模型由上海醫藥工業研究院藥理評價研究中心傳代維持。實驗方法：聯合環磷醯胺致荷瘤小鼠骨髓抑制模型的建立取生長旺盛的腫瘤，無菌條件下一勻漿法製備成細胞懸液約5～10×106/ml細胞濃度。每隻小鼠右腋皮下接種0.2ml。接種第3天(150mg/kg)和第5天(100mg/kg)，除空白正常組合樣品高劑量單獨給藥組外，其餘各組分別給以CTX造成聯合化療致荷瘤小鼠骨髓抑制模型。分組和給藥方法：隨機取10隻小鼠在實驗開始時作為基礎白細胞測試，將其餘動物以Lewis肺癌接種造成移植性腫瘤模型並隨機分組，每組10隻動物，並於接種腫瘤當日開始給藥。三十烷醇口服給藥，CTX腹腔注射給藥。(1)環磷醯胺組(接種後第3天，150mg/kg；接種後第5天，150mg/kg)。(2)三十烷醇+環磷醯胺組150mg/kg(接種當日開始給藥，直至實驗結束)。(3)三十烷醇組150mg/kg(接種當日開始給藥，直至實驗結束)。(4)空白組(接種當日開始給相應溶劑，直至實驗結束)。觀察指標：實驗開始時隨機取10隻小鼠進行眼眶後靜脈叢穿刺採血，血細胞自動分析儀(HEMAVET-950)測試血液常規。此後在環磷醯胺末次給藥後的次日開始每3天隨機取5隻小鼠以上述相同方法採血測試血液常規，直至各組白細胞恢復正常。實驗結果：結果在試驗開始後的第6天，三十烷醇+環磷醯胺組動物的白細胞數為正常動物的109.09％，陽性對照環磷醯胺造模組動物的白細胞數降至正常動物的6.21％。實驗表明三十烷醇組動物的白細胞數明顯高於陽性對照環磷醯胺造模組動物的白細胞數，二組之間有顯著性差異(P<0.01)。說明在此劑量和時相點三十烷醇+環磷醯胺組具有明顯的拮抗環磷醯胺致Lewis肺癌小鼠白細胞數降低的作用。詳見表11，圖1。表11三十烷醇對環磷醯胺致荷瘤小鼠白細胞降低的升白作用試驗與陰性對照比較**P<0.01，(白細胞的正常值範圍1.8-10.7K/uL)。8：三十烷醇抗角叉菜膠致炎作用研究受試藥物：低中高三個劑量組分別為50、100、200mg/kg。配製方法：將三十烷醇樣品研磨成粉末狀，稱取2g，適量吐溫-80乳化，生理鹽水溶解並定容至50ml，製得濃度為40mg/ml的高劑量受試藥，倍比稀釋獲得濃度分別為20mg/ml、10mg/ml的中劑量和低劑量受試物。給藥容量：1ml/200g大鼠。對照品：吲哚美辛腸溶片，來源：上海信誼黃河製藥有限公司，批號：120102，規格：25mg，藥物劑量：10mg/kg。配製方法：取一片對照品，研磨成粉末，用5％的碳酸氫鈉溶液溶解並定容至12.5ml，獲得濃度為2mg/ml。給藥容量：1ml/200g試劑名稱：角叉菜膠，來源：Adamas-beta，批號：P1050992，配製方法：精確稱取角叉菜膠0.15g，生理鹽水將其溶解並稀釋至15ml，即製得1％的角叉菜膠溶液。RatLTB4ELISAkit，批號：20131001A。實驗動物：品系：SD大鼠，來源：上海斯萊克實驗動物責任有限公司，動物合格證號：SCXK(滬)2007-0005，體重：180-200g，性別：雄性，動物分組：實驗前將動物按照體重隨機分為5組(n＝8)，分別為模型組、陽性藥組、三十烷醇高中低三個劑量組。實驗方法：受試藥三個劑量組每天灌胃一次，連續給藥五天，第六天給藥一小時後，大鼠麻醉，胸腔注射0.3ml1％的角叉菜膠。致炎5小時後，測量滲出液體積，取部分置入離心管中(含10M阿司匹林，4U/ml肝素)2000g離心10分鐘後獲得上清液，ELISA法測定LTB4濃度。實驗結果：由表12可以看出，與模型組相比，吲哚美辛組可以非常明顯地減少大鼠胸腔液體滲出(**P〈0.01)，三十烷醇低中高三個劑量組對大鼠胸腔液體積的減少也有非常顯著的作用(**P〈0.01，**P〈0.01，**P〈0.01)，其中中、高劑量組顯示出比陽性藥更為明顯的效果。另外，兩次應用ELISA法，未檢測出LTB4濃度，推測原因可能是試劑盒靈敏度不夠，或者該試劑盒所示方法不適於測動物胸液中的LTB4水平。目前國內未購到如文獻所示的運用同位素標記方法檢測的試劑盒。表12三十烷醇對角叉菜膠誘導的大鼠胸腔滲出液體積變化(ml)與模型組比較：**P〈0.01。實驗結論：三十烷醇三個劑量組均可以顯著減少大鼠胸腔液體滲出，具有一定的抗炎作用。ELISA法未測出LTB4水平的變化。9：三十烷醇對棉球肉芽腫的影響受試藥物：同上。對照品：同上。藥物劑量：3mg/kg。配製濃度為2mg/5ml。實驗用品：製備棉球，每個重量為50mg，滅菌後使用。實驗動物：同上。實驗方法：大鼠麻醉後腋下植入50mg棉球(經消毒)，按照藥物劑量，每天灌胃1次，6天後處死取出棉球，經60℃烘乾稱重，比較重量。實驗結果：由表13可以看出，與模型組相比，吲哚美辛組可以非常明顯地減少棉球肉芽腫重量(**P〈0.01)，三十烷醇低中高三個劑量組對棉球肉芽腫重量的減少也有非常顯著的作用(**P〈0.01，**P〈0.01，**P〈0.01)，並顯示出一定的量效相關性。表13三十烷醇對棉球肉芽腫重量的影響(g)與模型組比較：**P〈0.01。實驗結論：由表13看出，與模型組相比，三十烷醇三個劑量組均可以減少大鼠棉球肉芽腫重量，抑制增殖反應，三十烷醇對於炎症有一定的改善作用。附圖說明圖1為三十烷醇對環磷醯胺致荷瘤小鼠白細胞降低的白細胞動態變化圖。具體實施方式實施例1：稱取50g三十烷醇和150g聚乙二醇，80g羧甲基纖維素鈉，混合，在55℃下熔融，攪拌，冷卻後碾成粉。製成硬膠囊劑，共1000粒，每粒含三十烷醇50mg。實施例2：稱取100g三十烷醇和250g聚乙二醇，120g羧甲基纖維素鈉，混合，在55℃下熔融，攪拌，冷卻後碾成粉。製成硬膠囊劑，共1000粒，每粒含三十烷醇100mg。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp