一種屎腸球菌ef08及包含它的飼料添加物和飼料的製作方法
2023-10-05 01:50:44 2
一種屎腸球菌ef08及包含它的飼料添加物和飼料的製作方法
【專利摘要】本申請公開了一種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和飼料。屎腸球菌EF08，保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號是：CGMCC?No.5549。本申請之飼料添加物憑藉平衡腸道環境之菌相平衡，可降低腸道內之有害菌過度消耗飼料，進而提升經濟動物之飼料轉換率，使經濟動物所攝取之飼料可以有效轉換為具有經濟價值之初級畜產品，進而能夠達到提升經濟動物之經濟價值的功效。
【專利說明】-種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和飼料
【技術領域】
[0001] 本申請涉及一種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和飼料。
【背景技術】
[0002] 陸生經濟動物系包含家畜及家禽，如豬、牛、羊、鹿、雞、鴨、鵝等，該陸生經濟動物 系可以生產肉、乳、蛋、皮毛等初級畜產品，並且經由烹飪加工，而成為食品或商品，衍生不 同之經濟價值。
[0003] 現有技術中，在上述陸生經濟動物之飼育過程中，常會於飼料中同時混參低劑量 抗生素，因為低劑量抗生素可以殺死消化道部分微生物，降低消化道內微生物數量，從而減 少微生物對飼料的利用損耗，進而可以使陸生經濟動物可以產出較多初級畜產品，提升陸 生經濟動物的經濟價值。
[0004] 但抗生素之大量及不當使用，可能會導致抗生素殘留於陸生經濟動物體內，而影 響消費者之健康，還可能會造成環境或陸生經濟動物消化道中出現抗藥性菌株，因此，歐盟 已於2006年全面禁止此類低劑量抗生素之應用。
[0005] 因此，確實有需要提供一種飼料添加物，以取代少量抗生素之混參，進而改善混參 少量抗生素所導致的各種問題。
【發明內容】
[0006] 本申請要解決的技術問題在於提供一種屎腸球菌EF08及包含它的飼料添加物和 飼料。
[0007] 為解決上述技術問題，本申請的技術方案是：
[0008] -種屎腸球菌EF08,保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保 藏號是：CGMCC No. 5549。 屎腸球菌EF08的保藏單位地址是北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生 物研究所，保藏日期是2011年12月8日。
[0009] 申請人:經驗經發現：上述屎腸球菌EF08可以改善陸生經濟動物消化道菌相，以提 升陸生經濟動物之免疫系統狀態。屎腸球菌EF08的分類命名為Enterococcus faecium。
[0010] 上述屎腸球菌EF08,的16S rDNA序列為：
[0011] ctttttcaic cggagettge tceaecggaa mngrmgngt ggegaacggg tgagtaacac 60 gtgggtamx aagg細ttaa (:aggfgct>ia tar.cgtatai.! 120 caatcgiuiac cgcatggttt tgafttgiiaa- ggcgc'tttcg ggtgtcgctg atggatggac 1H0 ccgcggtgca ttagctagtt ggtgaggt.aac^etea《x，aHggccaeg>it gcatagccga 240 cctgagaggg tgatcgguca eHtt.gggm:t gHgucmiggc ccnaocfcct acgggaggca 300 guagtaggga Htxtteggcn atggacgmui MtctgjiccgH gcn<icgccgc gtgngtgn<)g 360 aaggttttug gatxgtaaaa etetgttgt.t agaga邱am.: aaggHtgaga gtamjtgttc: ..120 atcccttgac ggtatctaac cngmmgccn cggctB-acta cgtgccagca gccgcggtaa -180 tacgtaggtg gcaHgcgttg tccggattta ttgggegtaa agegagcgea ggeggtttct 540 taagtctgat gtgaaagccc ccggctcaac cggggagggt cattggaaac tgggagactt 600 gagtgcagaa gaggagagtg gaattceatg tgtageggtg aaatgcgtag atatatggag 660 gaacaccagt ggcgaaggcg gctctctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcgtg 720 gggtigcmmc aggattagat accctggtag tecacgcegt aaacgatgag tgetaagtgt 780 tggagggttt ccgcccttca gtgctgcagc taacgcatta agcactccgc ctggggagta 840 cgnccgcaag gttgfisactc naaggaattg aegggggece gcaciiagcgg tggagcatgt 900 ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt aecaggtett gacatccttt gaccactcta 960 gagatagagc ttccccttcg ggggcaaagt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagcteg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtts agtcecgcaa cgagcgcaae ccttattgtt agttgccatc 1080 atttagttgg gciictctiigc aagiietgceg gtgHCiiiiiice ggBggiitiggt ggggatgacg 1140 teaaatcatc atgececttH tgHc.etggge tHencHegtg ctHCHHtggg iuigtacaficg 1200 agttgcgaag tcgcgaggct aagctaatct cttaaagctt ctctcagttc ggattgcagg 1260 ctgcaactcg cctgcatgaa gccggaatcg ctagtaatcg cggatcage^i cgccgcggtg 1320 aatacgttcc cgggcettgt acaeacegec egteaeaeea egagag 1366〇
[0012] 一種飼料添加物，包含上述屎腸球菌EF08。
[0013] 上述飼料添加物可以提升經濟動物獲取營養的能力，動物使體內營養有效轉化為 初級畜產品產出所需，進而提升陸生經濟動物之經濟價值者。
[0014] 每克飼料添加物優選包含108?1012CFU之上述屎腸球菌EF08。這樣可進一步提升 經濟動物的免疫及抗病能力。進一步優選，每克飼料添加物包含l〇 1(lCFU的屎腸球菌EF08。
[0015] 上述飼料添加物，還包含由植物乳桿菌LP28與嗜酸乳桿菌LASW所組成之群組， 植物乳桿菌LP28寄存於中國普通微生物保藏管理中心，其寄存編號為CGMCC No. 3346 ;嗜 酸乳桿菌LASW寄存於中國典型型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC N0:M204083。這樣可進 一步提高飼料轉換率。
[0016] 上述飼料添加物，優選，每克飼料添加物系包含108?1012CFU的植物乳桿菌LP28 和10 8?10nCFU的嗜酸乳桿菌LASW，其中，植物乳桿菌與嗜酸乳桿菌LASW的用量比為 (1:1)-(10:1)。這樣可更進一步提高飼料轉換率。進一步優選，每克飼料添加物系包含 10 1(ICFU的植物乳桿菌LP28和109CFU的嗜酸乳桿菌LASW。
[0017] 一種包含上述飼料添加物的飼料，優選，每克飼料包含104?108CFU的屎腸球菌 ER)8。這樣可更進一步提升動物免疫及抗病能力。進一步優選每克飼料包含106CFU的屎 腸球菌EF08。
[0018] 上述屎腸球菌EF08的用途，系用以促進IL-10、TNF-a、IL-12p40和IFN-γ細胞 激素的分泌，抑制IL-4之分泌。
[0019] 上述屎腸球菌EF08的用途，系用以抑制有害菌之生長，優選抑制大腸桿菌和腸道 沙門氏菌之生長。
[0020] 上述飼料優選為陸生經濟動物所用飼料。
[0021] 申請人:經研究發現：本申請之屎腸球菌EF08系能夠耐受胃酸及膽鹽，完整通過胃 部，長時間存活於腸道之中，並可以吸附於腸道上皮細胞，同時分泌並釋放乳酸鹽，降低腸 道環境pH值，並藉由其良好抑菌效力，以抑制腸道之有害菌之生長，以促使腸道環境達到 菌相平衡，且能促進IL-10、TNF- a、IL-12p40及IFN- γ等細胞激素的分泌，進而達到提升 經濟動物免疫及抗病能力之功效，因此，該屎腸球菌EF08系可以單獨或混合其他成份，以 形成一飼料添加物，混參於陸生經濟動物之飼料中，以供給陸生經濟動物，從而有效提升該 陸生經濟動物之免疫及抗病能力。
[0022] 本申請飼料添加物可以為藥劑或其它等各種形式。
[0023] 本申請未特別說明的技術均可參照現有技術。
[0024] 本申請之飼料添加物憑藉平衡腸道環境之菌相平衡，可降低腸道內之有害菌過度 消耗飼料，進而提升經濟動物之飼料轉換率，使經濟動物所攝取之飼料可以有效轉換為具 有經濟價值之初級畜產品，進而能夠達到提升經濟動物之經濟價值的功效，同時有效提升 經濟動物之免疫及抗病能力。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0025] 圖1系本申請屎腸球菌EF08之耐酸性試驗測試結果。
[0026] 圖2系本申請屎腸球菌EF08之耐膽鹽試驗測試結果。
[0027] 圖3系本申請屎腸球菌EF08之抑菌效力測試結果。
[0028] 圖4a系本申請屎腸球菌EF08之促進IL-10分泌活性。
[0029] 圖4b系本申請屎腸球菌EF08之促進TNF- α分泌活性。
[0030] 圖4c系本申請屎腸球菌EF08之促進IL-12p40分泌活性。
[0031] 圖4d系本申請屎腸球菌EF08之促進IFN- γ分泌活性。
[0032] 圖5系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼離乳仔豬，對離乳仔豬糞便中之 氨含量影響結果。
[0033] 圖6系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼離乳仔豬，對離乳仔豬糞便中之 pH值影響結果。
[0034] 圖7a系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼離乳仔豬，對離乳仔豬糞便中 之乳酸菌菌群影響結果。
[0035] 圖7b系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼離乳仔豬，對離乳仔豬糞便中 之大腸桿菌菌群影響結果。
[0036] 圖7c系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼離乳仔豬，對離乳仔豬糞便中 之菌相比例影響結果。
[0037] 圖8系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼離乳仔豬，對離乳仔豬體內免疫 球蛋白A影響結果。
[0038] 圖9a系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼懷孕及哺乳母豬，對產出之仔 豬糞便中的乳酸菌菌群影響結果。
[0039] 圖9b系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼懷孕及哺乳母豬，對產出之仔 豬糞便中的大腸桿菌菌群影響結果。
[0040] 圖9c系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼懷孕及哺乳母豬，對產出之仔 豬糞便中的菌相比例影響結果。
[0041] 圖10系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼懷孕及哺乳母豬，對產出之仔 豬體內免疫球蛋白A影響結果。
[0042] 圖11a系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對產蛋前期蛋雞之產蛋 率影響結果。
[0043] 圖lib系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對產蛋前期蛋雞之平均 日產蛋量影響結果。
[0044] 圖12a系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對產蛋高峰期蛋雞之產 蛋率影響結果。
[0045] 圖12b系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對產蛋高峰期蛋雞之平 均日產蛋量影響結果。
[0046] 圖13a系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對產蛋下降期蛋雞之產 蛋率影響結果。
[0047] 圖13b系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對產蛋下降期蛋雞之平 均日產蛋量影響結果。
[0048] 圖14系以混參本申請飼料添加物之市售飼料餵飼蛋雞，對蛋雞之ND抗體衰退程 度影響結果。
【具體實施方式】
[0049] 為讓本申請之上述及其他目的、特徵及優點能更明顯易懂，下文特舉本申請之較 佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下：
[0050] 本申請之屎腸球菌EF08 (Enterococcus faecium)，系自健康成人糞便中選殖獲 得；該屎腸球菌EF08系具有降低腸道pH值、改善腸道菌相及促進周邊血液細胞分泌多種細 胞激素之能力。
[0051] 本申請之屎腸球菌EF08系經由順序相接的以下各步驟處理而獲得，A、培養步驟； B、鑑定步驟；C、保存步驟，各步驟具體如下：
[0052] A、培養步驟：該培養步驟系分離健康成人糞便所含有之乳酸菌進行培養；
[0053] 具體為取樣自一健康成人糞便，將所取樣置於一培養液進行增殖培養 (enrichment culture)，待適當培養時間後將該培養液進行序列稀釋，另接種至一培養基 以挑選可生長之菌株；
[0054] 上述增殖培養具體系將所取樣以1:50之體積比例接種於一 MRS液態培養基（配 方系如表1所記載），以37°C培養20小時而獲得一增殖培養菌液，再以序列稀釋該增殖培 養菌液，將稀釋後之增殖培養菌液以塗抹法接種於MRS固態培養基（繫於上述MRS液態培 養基中另添加質量用量為MRS液態培養基質量的1. 5%的瓊脂），挑選可生長之菌株；上述 1:5指取樣體積：MRS液態培養基體積=1:50 ;
[0055] 表1、MRS液態培養基配方（1L)
[0056]
【權利要求】
1. 一種屎腸球菌EF08,其特徵在於：保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心，保藏號是：CGMCC No. 5549。
2. 如權利要求1所述的屎腸球菌EF08,其特徵在於：其16S ri)NA序列為： ctttttecae cggagcttgc ?ccjiccggmi mmgmigagt ggegaacggg tgagtaacac 60 gtgggtaacc t.gce(.:atc.:a.g 機ggggat冊 cact.t.gg掛m eaggt.g(.:t· tnccgtataa 120 enatcgaaac cgcatggttt. tgatttgaaa ggcgctttcg ggtgt.cget.g at.ggat.ggac 180 ccgcggtgca ttagctagtt ggtgaggtaa cggc^tracu：H ogg(U：acgat gcatagccga. 2.1 cctgiigaggg tgfitcggccn eHttgggact gagacncgge cemiaetcct acgggaggca 300 gcagtaggga atcttcggca atggacgaaii gtctgiicegii gcmicgccgc gtgHgtrgaag 360 aHggttttcg gatcgt-H<iaa etetgtt.gtt Hgag<iHg<-mc H<iggHtgaga gtmictgtt.c ?20 ateccttgac ggtatctaac eagfiaageea cggctaaeta cgtgceagca gcegcggtaa. 480 tacgtuggt.g gcmigcgttg tecggattfii ttgggcgtm-ι agcgagcgca ggcggtttct 540 taagtctgat gtgmmgcce eeggetoiac cggggagggt eattggHaac tgggagactt 600 gagtgcuig?u-i gaggagagtg gaattceatg tgtngeggtg aaatgcgtag atatatggag 660 gaacaccagt ggcgaaggcg gctctctggt ctgtaactga cgctgaggct cgaaagcgtg 720 gggagcaaac aggattagat accctggtag tccacgccgt aaacgatgag tgctaagtgt 780 tggagggttt ccgcccttca gtgctgeagc taacgeatta iigeactecgc etggggagta 840 cgaccgcaag gttgeaactc aaaggaattg acgggggccc gcecaagcgg tggegcatgt 900 ggtttfcuittc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt gacatccttt gaccactcta 960 gagatagagc ttccccttcg ggggcaaagt gacaggtggt gcatggttgt cgtcagrtcg 1020 tgtcgtgaga tgttgggtta HgtcecgciMJ cgagcgcaae ccttattgtt agttgccatc 1080 atttagttgg gcactctage aagactgccg gtgacaaace ggaggaaggt ggggatgaeg 1140 tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tscacscgtg etacastggg aagtacaacg 1200 agttgcgaag tcgcgaggct aagctairtct cttaaagctt ctctcsgttc ggattgcagg 1260 ctgcaactcg cctgcatgaa gccggaatcg ctagtaatcg cggatcagca cgccgcggtg 1320 aatacgttcc cgggcettgt iicacacegcx cgixaeaeca cgagiig 1366〇
3. -種飼料添加物，其特徵在於：包含權利要求1或2所述的屎腸球菌EF08。
4. 如權利要求3所述的飼料添加物，其特徵在於：每克飼料添加物包含108?1012CFU 的權利要求1或2所述的屎腸球菌EF08。
5. 如權利要求3-4任意一項所述的飼料添加物，其特徵在於：還包含由植物乳桿菌 LP28與嗜酸乳桿菌LASW所組成之群組，植物乳桿菌LP28寄存於中國普通微生物保藏管理 中心，保藏號是為CGMCC No. 3346 ;嗜酸乳桿菌LASW寄存於中國典型型培養物保藏中心，保 藏號為 CCTCC N0:M204083。
6. 如權利要求5所述的飼料添加物，其特徵在於：每克飼料添加物還包含108? 1012CFU的植物乳桿菌LP28和10 8?10nCFU的嗜酸乳桿菌LASW，其中，植物乳桿菌LP28與 嗜酸乳桿菌LASW的用量比為（1:1)-(10:1)。
7. 如權利要求6所述的飼料添加物，其特徵在於：每克飼料添加物系包含101(ICFU的 權利要求1或2所述的屎腸球菌EF08、10 1(ICFU的植物乳桿菌LP28和109CFU的嗜酸乳桿菌 LASW。
8. -種包含權利要求3-7任意一項所述的飼料添加物的飼料，其特徵在於：每克飼料 包含10 4?108CFU的權利要求1或2所述的屎腸球菌EF08。
9. 如權利要求1或2所述的屎腸球菌EF08的用途，其特徵在於：系用以促進IL-10、 TNF- a、IL-12p40和IFN- γ細胞激素的分泌，抑制IL-4之分泌。
10. 如權利要求1或2所述的屎腸球菌EF08的用途，其特徵在於：系用以抑制大腸杆 菌和腸道沙門氏菌之生長。
【文檔編號】C12N1/20GK104195075SQ201410401691
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月14日 優先權日:2014年8月14日
【發明者】李庭羽, 王志軒, 林金生, 餘碧, 徐添根, 楊連傳 申請人:生合生物科技股份有限公司