用於治療hiv的ccr5拮抗劑的製作方法

2023-10-22 04:26:27 1

專利名稱：用於治療hiv的ccr5拮抗劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及用作趨化因子受體，尤其是CCR5受體選擇性抑制劑 的哌咬基派溱化合物、含本發明化合物的藥用組合物，和使用本發明 化合物的治療方法。本發明還涉及一種或多種發明化合物與 一種或多 種抗病毒藥或用於治療人免疫缺陷病毒(HIV)的其它藥物的組合的應 用。本發明還涉及本發明化合物，單獨或與另一個藥物聯合，在治療 實體器官移植排斥、移植物抗宿主疾病、關節炎、類風溼性關節
炎、炎性腸道疾病、特應性皮炎、4艮屑病、哮喘、變態反應或多發 性爿哽化症中的應用。
背景技術：
由HIV,獲得性免疫缺陷症候群(AIDS)的致病因子引起的全球健 康危機是公認的。儘管近期藥物治療學的進步已經成功地減緩了 AIDS 的進展，但人們仍需要找尋一種更安全、更有效、低花費的方法以控 制該病毒。
已有報導，CCR5 (CC趨化因子受體5)基因在抵抗HIV感染方面 起作用。HIV感染始於病毒通過與細胞受體CD4和次級趨化因子輔助 -受體分子的相互作用而附接於靶細胞膜，並通過受感染的細胞在血液 及其它組織中複製及擴散來發展。有多種趨化因子受體，但相信親巨 噬細胞的fflV是早期感染中在體內複製的關鍵致病毒抹，fflV進入細 胞所需的主要趨化因子受體是CCR5。因此，幹擾病毒受體CCR5和 fflV之間的相互作用可阻止fflV進入細胞。本發明涉及為CCR5拮抗 劑的小分子。
據報導，CCR5受體介導炎症性疾病諸如關節炎、類風溼性關節炎、特應性皮炎、銀屑病、譯喘和變態反應中的細胞轉移。這樣的受 體的抑制劑有望用於治療這樣的疾病以及用於治療諸如炎性腸道疾 病、多發性硬化症、實體器官移植排斥和移植物抗宿主疾病的其它炎 症性疾病或病症。
作為用於治療諸如阿爾茨海默病等認知障礙的毒蕈鹼拮抗劑哌
咬衍生物，在美國專利號5,883,096、 6,037,352、 5,889,006、 5,952,349, 和5,977,138中公開。
用作CCR5受體拮抗劑的化合物，在美國專利號6,387,930; 6,720,325; 6,602,885和6,391,865中、在PCT申請號WO 2000/66558、 WO 2000/66559、 WO 02/079194、 WO 03/69252、 WO 03/020716、 WO 04/056770、歐洲專利申請號EP1421075和US專利申請號US 2004/0092745和US 2004/0092551以及於2003年11月3曰提交的美 國臨時申請序號60/516,954中公開。
美國專利第6,720,325號公開了下式化合物
及其作為用於治療AIDS的CCR5拮抗劑的用途。
2002年10月17日公布的PCT申請號WO 2002/081449 (R. Albert 等)公開了某些用作趨化因子受體抑制劑的聯哌咬基衍生物。
A-M. Vandamme等，抗病毒化學和化療(Antiviral Chemistry & Ch畫theram^ 9:l87-203 (1998)公開了當前臨床治療人類fflV-1感染 方法，包括至少三種藥物聯合或所謂的高效抗逆轉錄病毒療法 ("HAART")。 HAART涉及核普逆轉錄酶抑制劑("NRTI")、非核苦逆 轉錄酶抑制劑("NNRTI")和HIV蛋白酶抑制劑("PI")的各種組合。在非藥物順應性患者中，HAART可有效地減少死亡率及減緩HIV-1至 AIDS的發展。然而，這些多藥物療法並不消除fflV-l且長期治療通 常導致多抗藥性。仍需優先考慮研發可提供更佳fflV-l治療的新的藥 物療法。
本發明提供一種作為CCR5受體拮抗劑的新的化合物、製備此化 合物的方法、含有此化合物的藥用組合物及使用此化合物治療、預 防或改善一種或多種與CCR5受體相關的疾病的方法。
本發明的一個方面涉及純淨或分離形式的、由結構式I表示的化
合物
formula see original document page 6 式I
或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
式I化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物可用作CCR5抑制 劑並用於治療和預防與CCR5受體和人免疫缺陷病毒相關的疾病。


圖l顯示，在對健康男性志願者一次性口服給予式A化合物(50 mg)後於0-24小時人尿中發現式I化合物(m/z 643)是主要的代謝產物。 (M5a/M5b/M5c/M5d是式I化合物的潛在的旋轉異構體)
發明概述圖2顯示，在對健康男性志願者一次性口服給予式A化合物(50 mg)後於血漿(2小時)中發現式I化合物(M5a/M5b/M5c/M5d)是主要的 代謝產物。
圖3顯示通過人尿(0-24小時)的LC-MS/MS對式I化合物 (M5a/M5b/M5c/M5d)的結構特徵鑑定。對應峰值的結構片段如下
348
、0
圖4顯示，在對健康男性志願者一次性口服給予式A化合物(50 mg)後，0-24小時人尿中式I化合物(M5a/M5b/M5c/M5d)的 LC-APCI-MS。 [M+H-0]+的形成支持如下判斷式I化合物 (M5a/M5b/M5c/M5d)是式A化合物的N-氧化物代謝產物(Ramanathan, R.; Su, A. D. Alvarez, N.; Blumenkrantz， N.; Chowdhury, S. K.; Alton, K. B.; Patrick J. E."用於區別N-氧化物與羥基化的化合物的液相色i普/質 譜方法，，("Liquid Chromatography/Mass Spectrometry Methods for Distinguishing N-oxides from Hydroxylated Compounds") ^朋/. CTzem. 2000, 72, 1352-1359)。
圖5顯示，在對健康志願者一日兩次口服給予劑量為50mg的式 A化合物的苯磺酸鹽後，式A化合物及式I化合物的預計平均穩態血 漿濃度。
圖6顯示，在一日兩次給予劑量為50mg的式A化合物的苯磺酸 鹽後，式I化合物的預計波谷水平將為約20nM，或為體外EC50濃 度的2.5倍。
7發明詳述
在一個實施方案中，本發明公開了如上描述的式I化合物或其藥 學上可接受的鹽或溶劑合物。
本發明的另 一個實施方案提供確定患者是否已經給予式A化合
物的方法，
式A
該方法包括確定得自患者的血漿、尿液、膽汁、糞便樣本是否顯示存 在權利要求1的化合物的步驟。
除非另有所指，應理解如上文和本公開通篇所用的下列術語具 有以下含義
"患者，，包括人類及動物。
"哺乳動物"意指人類及其它哺乳動物。
用於化合物的術語"分離的"或"分離的形式"是指所述化合物在自 合成過程或天然來源或其組合分離後的物理狀態。用於化合物的術 語"純化的"、"純化的形式"或"分離和純化形式"是指該化合物自本文 所描述的或為本領域技術人員熟悉的 一種或多種純化方法，以足夠純 度獲得後的物理狀態，該純度可通過本文所描述的或為本領域技術 人員熟悉的標準分析技術來鑑定。
也應注意到，對於本文的文字說明、流程、實施例及表格中的任 何具有不飽和化合價的碳原子以及雜原子，均假定其具有足夠氬原子 數目以使化合價達到飽和。
當化合物中官能團被稱為"保護的"時，此意指該基團是呈經修飾的形式，以避免當該化合物參與反應時在受保護位置上發生不期望的 副反應。適宜保護基團可為本領域一般技術人員所知，以及可參照標
準教科書，例如T. W. Greene等，有機合成中的保護基團(屍ra&c"ve org謹'c合成)(1991), Wiley， New York)得知。 當任一變量(例如，芳基、雜環、W等)在任一構成或式I中出現 一次以上時，則其每次出現的定義獨立於其在所有其它出現時的定 義。
本文所用術語"組合物"意欲包括含特定量的特定成分的產物以及 任何由特定量的特定成分的組合直接或間接產生的產物。
本文還預期包括本發明化合物的前藥及溶劑合物。本文所用術語 "前藥"指為藥物前體的化合物，當將其在給予患者後，經過代謝過程 或化學過程發生化學轉變，生成式I的化合物或其鹽和/或溶劑合物。 關於前藥的論述參見T. Higuchi及V. Stella，作為新的傳遞系統的前 藥(屍ra-dn/^ w iVow/ ￡>e//ve^y S^fem^ (1987) ii , A.C.S.研討會叢書 (Symposium Series)及於藥物設計中的生物可逆性載體CS/orevera/Z /e Ca庁/era z'" i>wg Dew'g")， ( 1987)Edward B. Roche,編輯，美國製藥協會 禾口 Pergamon出版社(American Pharmaceutical Association and Pergamon Press),兩者皆通過引用結合到本文中。
"溶劑合物"意指本發明化合物與 一個或多個溶劑分子的物理締 合。該物理締合涉及不同程度的離子鍵合及共價鍵合(包括氫鍵)。在 某些狀況下，溶劑合物能夠離析，例如當一個或多個溶劑分子結合 到晶狀固體的晶格中時。"溶劑合物"包括溶液相及可分離的溶劑合 物。適宜溶劑合物的非限制性實例包括乙醇合物、曱醇合物等。
"水合物"是其中溶劑分子為H20的溶劑合物。
"有效量"或"有效治療量"意欲闡述可有效抑制上述疾病進而產生 期望的治療、改善、抑制或預防效應的本發明化合物或組合物的 量。
式I化合物可形成也在本發明範圍內的鹽。應理解，除非另有說明，否則本文所提及式I化合物包括其鹽。本文所用術語"鹽(類)"是指 與無機酸和/或有機酸形成的酸性鹽，以及與無積減和/或有機鹼形成 的鹼性鹽。此外，當式I化合物含有鹼性部分，諸如，但不限於吡啶 或咪唑，和酸性部分，諸如，但不限於羧酸時，可形成兩性離子("內 鹽")，且其包含於本文所用術語"鹽"內。優選的是藥學上可接受(即， 無毒，生理學上可接受)的鹽，但也可使用其它鹽。例如，可通過使式 I化合物與 一定量(例如等當量)的酸或鹼在一種諸如可使鹽沉澱析出 的介質中或在水性介質中反應，繼而用凍幹法來形成式I化合物的鹽。 酸加成鹽的實例包括乙酸鹽、抗壞血酸鹽、苯曱酸鹽、恭璜酸鹽、 硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、反 丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、 曱烷磺酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽、水楊酸 鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、曱苯磺酸鹽(也稱作甲
笨璜酸鹽(tosylates))等。此外，通常被視為適用於自鹼性藥用化合物 形成藥學上有用的鹽的酸在下列文獻中討論，例如，P. Stahl等，Camille G.(編輯)"藥用鹽手冊性質、選擇與用途(7/a"必ooA: o/i^ammce^'ca/ /Sato.屍ra/ eW/es， /Se/e"/ow aw<i t/ye)"。 (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge等,Jowr"a/ 0/屍/za/7w"cew"ca/ 5We"cas (1977) 66(1) 1國19; P. Gould, 7wterwafz'owa/ / 0/屍/wrmaceM"as (1986) 33 201-217; Anderson 等，"藥物化學實踐(r/2e Prac"ce o/Mec /c/"。/ C/^w& y)"(1996)， Academic Press (學術出版社)，紐約；及"橙皮書(The Orange B00k)，，(F00d & Drug Administration, Washington, D.C.在其網站上)中。 這些公開內容均以引用的方式併入本文中。
鹼性鹽的實例包括銨鹽、鹼金屬鹽(例如鈉、鋰及鉀鹽)、鹼土金
屬鹽(例如釣鹽及鎂鹽)、有一;u成(例如，有機胺，諸如二環己基胺、 叔-丁基胺)的鹽及胺基酸(例如，精氨酸、賴氨酸等)的鹽。可使用諸
如下列試劑使含氮鹼性基團季胺化低級烷基卣化物(例如，曱基、
乙基及丁基的氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷基酉旨(例如，硫酸二曱基酯、硫酸二乙基酯及硫酸二丁基酯)、長鏈卣化物(例如，癸 基、月桂基及硬脂基的氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基卣化物(例 如，千基及苯乙基的溴化物)及其它。
所有此類酸性鹽及鹼性鹽欲為本發明範圍內的藥學上可接受的 鹽，且所有酸性鹽及石鹹性鹽^^見為等效於可用於本發明的相應化合物 的游離形式。
劑合物的製備是眾所周知的。因此，例如M. Caira等，J屍/zam"ce^ca/ , 93m, 601 -611 (2004)闡述了在乙酸乙酯中以及自水製備抗真菌劑 氟康唑(fluconazole)的溶劑合物。溶劑合物、半溶劑合物、水合物等的 類似製備闡述於E. C. van Tonder等，^4屍S屍/za mSWrec/2.， 5(1), article 12 (2004);及A. L. Bingham等，C7ze肌Commw"., 603-604 (2001)中。 典型非限制性方法包括，在高於環境溫度下，將本發明化合物溶於所 需量的所需溶劑(有機溶劑或水或其混合物)中，並以足夠形成晶體的 速率將該溶液冷卻，隨後通過標準方法分離該晶體。分析技術如I.R. 光譜學顯示作為溶劑合物(或水合物)的晶體中存在溶劑(或水)。
式I化合物及其鹽、溶劑合物及前藥可以其互變異構體形式(例 如，作為醯胺或亞氨基醚)存在。本文包括預期作為本發明的一部分 的所有這樣的互變異構形式。
本發明化合物(包括該化合物的那些鹽、溶劑合物、酯及前藥以 及該前藥的鹽、溶劑合物及酉旨)的所有立體異構體(例如，幾何異構 體、旋光異構體等)，例如因各取代基上不對稱碳原子而可存在的那 些異構體，包括對映異構形式(其在即使不含不對稱碳原子時也可存 在)、旋轉異構體形式、阻轉異構體形式及非對映異構體形式，均期 望包括於本發明的範圍內，位置異構體(例如，4-吡啶基及3-吡咬基) 也包括在本發明的範圍內。本發明化合物的單個立體異構體可例如， 實質上不含其它異構體，或者可，例如作為外消旋體，或與所有其它 立體異構體或其它經選擇的立體異構體混合。本發明的手性中心可
ii具有S或R構型，如由IUPAC 1974推薦標準(Recommendations)所界 定的。術語"鹽"、"溶劑合物"、"酯"、"前藥"等的使用，欲等同應用 於本發明化合物的對映體、立體異構體、旋轉異構體、互變異構 體、位置異構體、外消旋替或前藥的鹽、溶劑合物、酯及前藥。
本發明欲包含式I化合物的多晶型形式及式I化合物的鹽、溶劑 合物、酯及前藥的多晶型形式。
式I化合物可用作CCR5抑制劑及用於治療和預防與CCR5及人 免疫缺陷病毒相關的疾病。其可用於治療、預防和/或減輕諸如例如下 列疾病獲得性免疫缺陷症候群("AIDS")、實體器官移植排斥、移植 物抗宿主疾病、關節炎、類風溼性關節炎、炎性腸道疾病、特應性皮 炎、銀屑病、哞喘、變態反應或多發性硬化症。因此，本發明的一方 面是涉及包含式I化合物的、用於治療fflV的藥用組合物。
本發明的另 一 方面涉及治療人免疫缺陷病毒的方法，其包括給 予需要此治療的患者有效治療量的式I化合物。本發明的另 一方面是 涉及治療實體器官移植排斥、移植物抗宿主疾病、關節炎、類風溼 性關節炎、炎性腸道疾病、特應性皮炎、銀屑病、嗜喘、變態反應 或多發性硬化症的方法，其包括給予需要此治療的患者有效治療量 的式I化合物。
本發明的又一方面涉及治療人免疫缺陷病毒的方法，其包括聯 合給予需要此治療的患者式I化合物與一種或多種抗病毒藥或用於此 治療的其它藥物。本發明的還一方面涉及治療實體器官移植排斥、 移植物抗宿主疾病、關節炎、類風溼性關節炎、炎性腸道疾病、特 應性皮炎、銀屑病、哞喘或變態反應的方法，其包括聯合給予需要 此治療的患者式I化合物與一種或多種抗病毒藥或用於此治療的其它 藥物。CCR5與是該組合藥物的組分的抗病毒藥或其它藥物可以以單 一劑型給予或分開給予。
本發明也構思一種包含各活性成分的分開的劑型的藥劑盒。因 此，本發明提供一種在單一包裝的各容器中包含可聯合用於治療人免疫缺陷病毒的不同藥用組合物的藥劑盒，其在一個容器中包含一種含 有在藥學上可接受的載體中的有效量的式I化合物或其藥學上可接受 的鹽或溶劑合物的藥用組合物，而在另外的分開容器中包含一種或多 種含有在藥學上可接受的載體中的、有效量的抗病毒藥或用於治療人
免疫缺陷病毒的其它藥物的藥用組合物。
這樣的組合藥物的非限制性實例，包括核苦及核苦酸逆轉錄酶抑
製劑("NRTI")、非核普逆轉錄酶抑制劑("NNRTI")、蛋白酶抑制劑 ("PI")、其它抗病毒藥、抗-HIV治療劑等。
本文所用術語"核苷及核苷酸逆轉錄酶抑制劑，，意指可抑制HIV-1 逆轉錄酶(可催化病毒基因組fflV-l RNA轉化成前病毒HIV-1 DNA的 酶)活性的核普及核苦酸及其類似物。
典型適宜的NRTI包括齊多夫定(AZT),可以商品名稱 RETROVIR自Glaxo-Wellcome公司(Research Triangle, NC27709)獲 得；去羥肌苷(ddl)，可以商品名稱VIDEX自Bristol-Myers Squibb公 司(Princeton, NJ08543)獲得；扎西他濱(ddC)，可以商品名稱fflVID 自Roche Pharmaceuticals, Nutley， NJ 07110獲得；司他夫定(d4T),可 以商品名稱ZERIT自Bristol-Myers Squibb公司(Princeton, NJ 08543) 獲得；拉米夫定(3TC)，可以商品名稱EPIVIR自Glaxo-Wellcome Research Triangle, NC 27709獲得；阿巴卡韋(1592U89)，於 WO96/30025中公開，並可以商品名稱ZIAGEN自Glaxo-Wellcome Research Triangle, NC 27709獲得；阿德福韋二匹伏酯[雙 -(POM)-PMEA]，可以商品名稱PREVON自Gilead Sciences, Foster City, CA 94404獲得；洛布卡韋(BMS-180194), —種於EP-0358154和 EP-0736533中公開，並由Bristol-Myers Squibb， Princeton, NJ 08543開 發的核苷酸逆轉錄酶抑制劑；BCH-10652, —種由Biochem Pharma， Laval， Quebec H7V, 4A7(加拿大)開發的逆轉錄酶抑制劑(呈 BCH-10618與BCH-10619的外消旋混合物形式)；恩曲他濱 [(-)-FTC],由Emory大學以Emory大學美國專利第5,814,639號予以批准並正由Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707開發； P-L-FD4 (也稱作卩-L-D4C且名稱為P-L-2',3'-二脫氧-5-氟-胞嘧。定核 香)，由耶魯大學許可Vion Pharmaceuticals, New Haven CT 06511; DAPD，嘌呤核苷，(-)-P-D-2，6-二氨基-。票呤二氧戊環，於EP 0656778 中公開並由Emory大學及喬治亞大學許可Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707;及羅德腺苦(lodenosine) (FddA)， 9-(2,3-二脫氧 -2-氟-b-D-蘇型-呋喃戊糖基)腺噪呤， 一種酸穩定的基於嘌呤的逆轉 錄酶抑制劑，由NIH公開並由U.S. Bioscience公司(West Conshohocken， PA 19428)開發。
本文所用術語"非核苷逆轉錄酶抑制劑"意指可抑制HIV-1逆轉錄 酶活性的非核苷類。
典型適宜的NNRTI包括奈韋拉平(BI-RG-587)，可以商品名稱 VIRAMUNE自Boehringer Ingelheim (Roxane Laboratories的生產商), Columbus, OH 43216獲得；地拉韋咬(delaviradine) (BHAP, U-90152),可以商品名稱RESCRIPTOR自Pharmacia & Upjohn Co., Bridgewater NJ 08807獲得；依法韋侖(efavirenz)(DMP-266)， 一種於 WO94/03440中公開並可以商品名稱SUSTIVA自DuPont Pharmaceutical公司(Wilmington, DE 19880畫0723)獲得的苯並漆畫2-酮；PNU-142721, —種由Pharmacia和Upjohn， Bridgewater NJ 08807 開發的呋喃並吡啶-硫代-嘧啶；AG-1549(以前為Shionogi# S-1153);碳酸5-(3,5-二氯苯基)-硫代-4-異丙基-l-(4-吡咬基)曱基-lH-咪唑-2-基曱基酯，於WO 96/10019中公開並由Agouron Pharmaceuticals公司(LaJolla CA 92037-1020)臨床開發；MKC-442 (l-(乙氧基-曱基)-5-(l-曱基乙基)-6-(苯基曱基)-(2，4(lH,3H)-嘧啶二 酉同),由Mitsubishi Chemical公司發現並由Triangle Pharmaceuticals, Durham, NC 27707開發；及(+)-紅厚殼素植物提取物A (NSC-675451) 和B，於NIH美國專利第5,489,697號中公開的香豆素衍生物，特許給予Med Chem Research與Vita-Invest共同開發作為可經口給藥的產 品的(+)紅厚殼素植物提取物A。
本文所用的術語"蛋白酶抑制劑"意指HIV-1蛋白酶的抑制劑，所 述酶是一種將病毒多蛋白前體(例如，病毒GAG和GAG Pol多蛋白) 經蛋白水解方式裂解為發現於感染性HIV-1中的各功能性蛋白質所需 的酶。HIV蛋白酶抑制劑包括具有擬肽結構的、高分子量(7600道爾 頓)的及基本肽特徵的化合物，例如，CRIXIVAN(可自Merck獲得)以 及非肽蛋白酶抑制劑，例如，VIRACEPT(可自Agouron獲得)。
典型適宜的PI包括沙會那韋(saquinavir)(Ro 31 -8959)，可以商 品名INVIRASE的硬明膠膠嚢形式獲得)及以商品名FORTOVASE的 軟明月交膠嚢形式獲得)，自Roche Pharmaceuticals, Nutley， NJ 07110-1199獲得；利託那韋(ABT-538)，商品名稱NORVIR，自 Abbott Laboratories, Abbott Park, IL 60064獲得；茚地那韋(MK-639), 商品名稱CRIXIVAN,自Merck公司，West Point, PA 19486-0004獲 得；奈非那韋(nelfnavir)(AG-1343)，商品名稱VIRACEPT，自
(141W94)，商品名稱為AGENERASE ， 一種由Vertex Pharmaceuticals 公司(Cambridge, MA 02139-421 l)開發並可自Glaxo-Wellcome, Research Triangle, NC在擴展通路計劃下獲得的非肽蛋白酶抑制劑； 拉西那韋(BMS-234475)，可自Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543獲得(最初由瑞士 Novartis (Basel, Switzerland)發現 (CGP-61755)); DMP-450, —種由Dupont發現並由Triangle Pharmaceuticals開發的環狀脲；BMS-2322623, —種作為第二代 HIV-1 PI，由Bristol-Myers Squibb, Princeton, NJ 08543開發的氮雜肽 (azapeptide); ABT-378,由Abbott, Abbott Park, IL 60064開發；和 AG-1549，由Shionogi (Shionogi #S-1153)發現並由Agouron Pharmaceuticals, Inc. (LaJolla CA 92037-1020)開發的口服活性咪哇氨 基曱酸酯。其它抗病毒藥包括羥基脲、利巴韋林、IL-2、 IL-12、噴他夫西 (pentafuside)及Yissum項目號11607。羥基脲(Droxia), —種核糖核苷 三磷酸還原酶抑制劑，該酶參與T-細胞激活，發現於NCI處且其由 Bristol-Myers Squibb開發；在臨床前研究中，其已顯示對去羥肌苦活 性具有協同作用，且已經將其與司他夫定一起研究。IL-2於Ajinomoto EP-0142268、 TakedaEP-0176299及Chiron美國專利第RE 33653號、 第4530787號、第4569790號、第4604377號、第4748234號、第4752585 號和第4949314號中公開，且其作為一種適於靜脈注射或經皮下的凍 乾粉針劑，在給藥時重新構成並用水稀釋，以商品名稱PROLEUKIN (阿地白介素)，自Chiron公司(Emeryville, CA94608-2997)獲得；經皮 下給藥時優選劑量為約l，OOO,OOO至約20,000,000 IU/天；經皮下給藥 時更優選劑量為約15,000，000IU/天。IL-12於W096/25171中公開， 且其可自Roche Pharmaceuticals, Nutley， NJ 07110-1199及American Home Products, Madison, NJ 07940獲得；經皮下給藥時優選劑量為約 0.5微克/公斤/天至約10微克/公斤/天。噴他夫西(DP-178,T-20)(—種 36個胺基酸的合成肽)，於由Duke大學授權給予與Duke大學聯合開 發噴他夫西的Trimeris的美國專利第5，464，933號中公開；噴他夫西通 過抑制HIV-1與靶膜融合來發揮作用。對接受三重聯合療法難以治療 的HIV-1陽性患者，給予作為連續皮下輸注劑或注射劑的噴他夫西 (3-100 mg /天)以及依法韋侖和2種PI;優選劑量為100 mg /天。Yissum 項目號11607， 一種基於HIV-1 Vif蛋白質的合成蛋白質，由Yissum Research Development公司，Jerusalem 91042 (以色歹'J)實施臨床前開 發。利巴韋林(l-(3-D-呋喃核糖基-lH-l，2,4-三唑-3-曱醯胺)可自ICN Pharmaceuticals公司(Costa Mesa, CA)獲得；其製備及調配於美國專利 第4,211,771號中闡述。
本文所用術語"抗-fflV-1療法"意指可單獨或作為多種藥物聯合療 法(尤其是HAART三重和四重聯合療法)的一部分用於治療人類 HIV-1感染的任何抗-fflV-l藥物。典型適宜的已知抗-HIV-l療法包括，但不限於多重藥物的聯合療法，諸如(i)至少三個選自下列的抗 -HIV-l藥物2個NRTI、 1個PI、另 一個PI及一個NNRTI;和(ii) 至少2個選自NNRTI及PI的抗-HIV-l藥物。典型適宜的HAART-多種藥物聯合治療包括
(a)三聯療法，諸如，2個NRTI及1個PI;或(b)2個NRTI及1 個NNRTI;及(c)四聯療法，例如2個NRTI、 1個PI及第2個PI或1 個NNRTI。在治療未曾接受治療的患者時，優選使用三聯療法開始 抗-HIV-l治療；除非對PI不耐受，否則優選使用2個NRTI及1個 PI。藥物的順應性是極為重要的。應每3-6個月監測CD4+及 HIV-1-RNA血漿水平。若病毒負荷是穩定的，則可加入第4個藥物， 例如，1個PI或1個NNRTI。參見下表，其中進一步描述典型療法
抗-fflV-l多重藥物的聯合療法
A. 三聯療法
1. 2個NRTIs1 + 1個PI2
2. 2個NRTIs1 + 1個NNRTI3
B. 四聯療法4
2個NRTIs十1個PI十第2個PI或1個NNRTI
C. 替代方案5 2個NRTI1
1個NRTI5 + 1個PI2
2個Pis6 + 1個NRTI7或NNRTI3
1個PI2 + 1個NRTI7 + 1個NNRTI3
對上表的注釋
1. 下列聯合中的一種齊多夫定+拉米夫定；齊多夫定+去羥肌 苷；司他夫定+拉米夫定；司他夫定+去羥肌苷；齊多夫定+扎西他濱
(alcitabine)
2. 茚地那韋、奈非那韋、利託那韋或沙奎那韋軟明膠膠嚢。
173. 奈韋拉平或地拉韋啶。
4. 參見A-M. Vandamne等抗病毒化學與化療(Antiviral Chemistry & Chemotherapy) 9:187第193-197頁和圖1 + 2。
5. 替代方案是用於因順應性問題或毒性而不能耐受推薦方案的 患者，以及那些經推薦方案治療後失敗或復發的患者。雙重核苷耳關合 可導致許多患者出現HIV抗性及臨床失敗。
6. 大部分數據是用沙喹那韋及利託那韋(各為400 mg,每日2 次)獲得的。
7. 齊多夫定、司他夫定或去羥肌苷。
為了從本發明所描述的化合物製備藥用組合物，藥學上可接受的 惰性載體可或者為固體或為液體。固體形式製劑包^"R劑、片劑、分 散顆粒劑、膠嚢劑、扁嚢劑及栓劑。散劑及片劑可包含約5%至約95% 的活性成分。適宜的固體載體為本領域所知，例如，碳酸鎂、硬脂酸 鎂、滑石粉、食糖或乳糖。片劑、粉劑、扁嚢劑及膠嚢劑可作為適於 口服的固體劑型使用。藥學上可接受的載體的實例及製備各種組合物 的方法可於A. Gennaro (ed)， 《Remington's藥物科學》(Remington's Pharmaceutical Sciences),第18版，(1990)， Mack出版公司，Eastern, Pennsylvania中找到。
液體形式製劑包括溶液劑、懸浮劑及乳劑。液體形式製劑的實 例包括，但不限於用於胃腸外注射的水或水-丙二醇溶液劑，或者可加 入甜味劑及遮光劑的口服溶液劑、懸浮劑及乳劑。液體形式製劑也 包括經鼻給藥的溶液劑。
適於吸入的氣霧劑製劑可包括溶液及粉末狀固體，其可與藥學 上可接受的載體(諸如，惰性壓縮氣體(如氮氣)組合。
本發明也意欲包括其在即將使用前轉變為適於經口服用或非經 腸給藥的液體形式製劑的固體形式製劑。這樣的液體形式包括溶液 劑、懸浮劑及乳劑。本發明化合物也可經透皮傳遞。透皮組合物可採用乳膏劑、洗 劑、氣霧劑和/或乳劑形式，並可包含於本領域中為達該目的而常規 使用的基質或儲庫型經皮貼劑中。
也可經皮下遞送本發明化合物。
優選地，該化合物以口服形式給藥。
優選地，該藥物製劑採用單位劑型。在此形式中，將此製劑分 成含有有效治療量的式I化合物的、適宜大小的劑量單位。
依據具體的應用不同，製劑的單位劑量中活性化合物的量可以
變化，或在自約10mg至約500mg，優選自約25 mg至約300 mg， 更優選自約50 mg至約250 mg且最優選自約55 mg至約200 mg之間調整。
所用本發明化合物的實際劑量可視患者的需求及所治療病況的 嚴重程度不同而異。本領域技術人員可確定用於具體情形的適當劑 量方案。為了方便起見，可將總日劑量分成若干份並按照需要在一 天內分次給予。
臨床主治醫師在考慮諸如患者年齡、病情及體格以及欲治療症狀 的嚴重程度等諸因素加以判斷後，可調整本發明化合物和/或其藥學上 可接受的鹽的給藥劑量及頻率。典型的口服給藥推薦日劑量方案可介 於約100 mg /天至約300 mg /天之間，優選為150 mg /天至250 mg / 天，更優選為約200mg/天，分兩次至四次給藥。
臨床醫師可參照使用包裝盒插頁中或如試驗方案(protocols)中所 提出的批准劑量及劑量方案，在考慮了患者年齡、性別和狀況以及所 治療病症的嚴重程度後，確定與本發明化合物聯合使用的NRTI、 NNRTI、 PI及其它藥物的劑量及給藥方案。
預期與本發明化合物聯合使用的抗病毒藥，包括核苦及核苷酸逆 轉錄酶抑制劑、非核苷逆轉錄酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和不屬於這些 類別的下文所列的其它抗病毒藥物。抗病毒藥的具體實例包括，但不 限於齊多夫定、拉米夫定、扎西他濱、去羥肌苷、司他夫定、阿巴卡韋、阿德福韋二匹伏酯、洛布卡韋、BCH-10652、恩曲他濱、卩-L-FD4、 DAPD、羅德腺苷、奈韋拉平、地拉韋啶、依法韋侖、PNU-142721、 AG-1549、 MKC-442、 (+)-紅厚殼素植物提取物A和B、沙壹那韋、 茚地那韋、利託那韋、奈非那韋、拉西那韋、DMP-450、 BMS-2322623、 ABT-378、氨普那韋、羥基脲、利巴韋林、IL-2、 IL-12、噴他夫西、 Yissum編號11607及AG-1549。特別地，稱作HAART的聯合預期與 本發明化合物聯合使用。
對於使用1個以上活性藥物的聯合治療(其中各活性藥物以不同 劑型呈現)而言，可分別或一起給予所述活性藥物。另外， 一個成分 可在給予另一藥物之前、同時或之後給予。
本發明的另一方面提供一種治療下列疾病的方法實體器官移植 排斥、移植物抗宿主疾病、關節炎、類風溼性關節炎、炎性腸道疾 病、特應性皮炎、銀屑病、哞喘、變態反應或多發性硬化症，所述 方法包括給予需要此治療的患者以有效治療量的式I化合物，優選與 一種或多種藥學上可接受的載體組合。在另一實施方案中，用於治 療實體器官移植排斥、移植物抗宿主疾病、類風溼性關節炎、炎性 腸道疾病或多發性硬化症的方法，還包括與式I化合物聯合給予一個
或多個用於治療所述疾病的其它藥物。
已知可與本發明化合物聯合給予，治療類風溼性關節炎、移植及
移植物抗宿主疾病、炎性腸道疾病及多發性硬化症的藥物如下
實體器官移植排斥和移植物抗宿主疾病免疫抑制劑，諸如環孢
素和介白素-10(IL-10)、他克莫司、抗淋巴細胞球蛋白、0KT-3抗體 及類固醇；
炎性腸道疾病IL-10(參見美國專利US 5,368,854)、類固醇和柳 氮磺胺吡咬(azulfidine);
類風溼性關節炎氨曱蝶呤、硫唑噤呤、環磷醯胺、類固醇和麥 考酚酸嗎乙酯；
多發性硬化症幹擾素-P、幹擾素-a和類固醇。本發明的HIV-1療法的目標是，將fflV-l-RNA病毒負荷減低至 可檢測限以下。本發明的上下文中的"HIV-1-RNA的可檢測限"意指通 過定量的、多循環逆轉錄酶PCR方法檢測得的患者的每毫升血漿中 有低於約200至低於約50拷貝的HIV-1-RNA。在本發明中優選通過 Amplicor-l Monitor 1.5 (可自Roche Diagnsotics獲得)的方法或 NuclisensfflV-l QT-1的方法才企測fflV-l-RNA。
下列測試可用於測定本發明化合物的CCR5抑制和拮抗活性。
CCR5膜結合試驗
利用CCR5膜結合試驗的高通量篩查可確認RANTES結合的抑制 劑。此試驗利用由表達人類CCR5趨化因子(chemokine)受體的NIH 3T3細胞製備的膜，其能夠結合RANTES(該受體的天然配體)。使用 96-孔格式板，於存在或不存在該化合物的情形下，將膜製備物與 125I-RANTES —起孵育1小時。在0.001 ug/ml至1 ug/ml的寬範圍 內，對化合物進行系列稀釋並按一式三份進行試驗。通過玻璃纖維 過濾器收穫反應混合物(cocktails)，並充分洗滌。取全部重複試驗的平 均計數，並以抑制總125I-RANTES結合的50%所需的濃度報告數據。 可在基於第二代細胞的HIV-1進入及複製試驗中進一步對在膜結合試 驗中具有有效活性的化合物進行特徵分析。
fflV-l進入試驗
如Connor等，Virology, 206 "995),第935-944頁所述的，通過 共轉染編碼HIV-1的NL4-3毒抹的質粒(其已經通過使包膜基因突變 和引入螢光素酶受體質粒加以修飾)與編碼若干fflV-l包膜基因中的 一個的質粒，產生複製缺陷型HIV-1受體病毒體。在通過磷酸鉤沉澱 轉染兩種質粒後，在第3天時收穫病毒上清液並測定功能病毒滴度。 然後，將這樣的儲備液用於感染穩定表達CD4和趨化因子受體 CCR5(其與或不與試驗化合物一起預培養)的U87細胞。在37。C下實 施感染2小時，洗滌所述細胞並用含有化合物的新新鮮培養基替換原 來的培養基。將所述細胞培養3天，溶解細^^並測定螢光素酶活性。以抑制對照培養物中50%的螢光素酶活性所需化合物的濃度來報告結 果。
HIV-1複製試驗
此試驗使用原代外周血單核細胞或穩定的U87-CCR5細胞系來測 定抗-CCR5化合物阻斷原初fflV-l毒抹的感染效應。自正常的健康供 體純化原代淋巴細胞並在感染前於體外用PHA和IL-2刺激3天。使 用96-孔格式板，於37'C下用藥物預處理細胞1小時，隨後用M-tropic fflV-l分離林感染細胞。在感染後，洗滌所述細胞以去除殘留的接種 物，並於化合物存在下培養4天。收穫培養物上清液並通過測定病毒 p24抗原濃度來4全測病毒複製。
鈣流試-瞼
在添加化合物或天然CCR5配體前，將表達HIV共受體CCR5的 細胞與鈣敏染劑一起裝入。具有拮抗性質的化合物將在細胞中引發 鈣流信號，而本發明化合物是作為其自身不引發信號傳導但能夠通 過天然配體RANTES阻斷信號傳導的化合物加以鑑定。
GTP口S結合試驗(次級膜結合試驗)
GTP口S結合試驗檢測受體被CCR5配體激活的程度。此試驗可檢 測35S標記的GTP與偶合G-蛋白的受體間的結合，該結合是因受體受 適當配體激活而發生。在此試驗中，CCR5S己體，RANTES與來自表 達CCR5的細胞的膜一起孵育，並通過測試結合的35S標記物來測定 受體結合的激活(或結合)。如果化合物通過誘導受體激活呈現激動特 性或者通過以竟爭或非竟爭方式檢測RANTES結合的抑制呈現拮抗 特性，則可以定量地確定此試-瞼。
趨化性試驗
趨化性試驗是一可表現試驗化合物的激動劑與拮抗劑特性對比 的功能性試驗。該試驗;險測表達人類CCR5 (BaF-550)的非粘附性小 鼠細胞系因應答試驗化合物或天然配體(即，RANTES, MIP-ip)而遷 移穿過膜的能力。細胞遷移越過可使具有拮抗活性的化合物滲透過
22的膜。作為拮抗劑的化合物不僅不能夠誘導趨化性，而且能夠抑制
應答已知CCR5配體的細胞遷移。 螢光素酶複製試驗
編碼HIV-1 pNL-4-Luc全長基因組的質粒(其中gp 120 V-3環由 fflV-l ADA、 YU畫2或HxB的Bgl II片^殳(ADA-Luc畫FL 、 YU-2-Luc隱FL 及HxB-Luc-FL)替代)自Dr. Susan Pontow (華盛頓大學，St. Louis MO) 獲得。通過使用Superfect (Qiagen)或Mirus轉染試劑將質粒轉染入 293T細胞中而產生有複製能力的焚光素酶報告病毒儲備液。在轉染後 48小時收集病毒儲備液，並滴定U-87-CCR5或CXCR4細胞上所生成 的螢光素酶。將U87-CD4-CCR5細胞(104個/孔)置於96-孔細胞培養板 中並培養過夜。移除培養基，並用50 pl新鮮培養基(DMEM, 10% FCS) 及50 nl稀釋於培養基中的化合物替代。將細胞與化合物在37。C下一 起孵育1小時。移除所得上清液，並用20|^1含有化合物的培養基代 替，並在37。C下用等體積的經稀釋的或未經稀釋的病毒儲備液感染 3-4小時。用DMEM洗滌細胞1次，並加入200 pl含有化合物的培養 基。將所述培養物孵育3天，將所述細胞在螢光素酶溶胞緩衝液 (Promega, Madison, WI)中溶解並轉移至Immulon平4反(Dynex Technologies, Chantilly VA)上。向溶胞產物中加入等體積的螢光素酶 底物(Promega， Madison WI)，並立即在Wallac Luminometer上讀才反。 使用GraphPad PRISM軟包測定50%及90°/。抑制濃度。
用於本發明的化合物通過下列製備實施例加以說明，不應將所 述實施例視為對本公開內容的範圍的限制。本發明範圍內的可替換 的其它機制途徑及類似結構對本領域技術人員而言可能是顯而易見 的。
實施例
可通過本領域已知的方法或通過下列實施例中所描述方法製備 本發明化合物。不應將下列製備流程及實施例解釋為限制本公開內容的範圍。本發明範圍內的可替換的其它機制途徑及類似結構對本 領域技術人員而言可能是顯而易見的。
實施例1 式I化合物的合成
按照美國專利第6,900,211號中所概述的類似方法製備式B^:合物。
如美國專利第6,391,865號中所述，按照實施例23C步驟1及2 所概述的方法製備嘧啶酸。
使哌啶A (94 mg)、鹽酸l-(3-二曱基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺 (73 mg)、 l-羥基苯並三唑(51 mg)及二異丙基乙基胺(O.l mL)溶於 CH2Cl2t,並在25。C下攪拌19小時。用CH2Cl2稀釋該溶液並用1N NaOH(aq.)洗滌。用012(:12萃取水性層並用MgS04乾燥。過濾並濃 縮，形成黃色油狀物。通過製備型薄層色譜(10/1丙酮/己烷，Si02)純 化，得到43mg(36。/。)無色油狀式I化合物。HRMS計算值(MH"): 643.3442;實測值643.3448。
式I化合物是上述式A化合物的主要代謝產物。在給予式A化合 物後，測定首次在人體研究的臨床樣本中的式I化合物。作為式A化 合物的主要代謝產物的式A化合物不易再迅速代謝。
通過抑制經原始R5 HIV 1臨床分離抹感染的人類外周血單核細 胞(PBMCs)中的病毒複製，測定式A化合物及其活性N-氧化物代謝產 物(式I化合物)的抗病毒效能。結果表明式I化合物的體外效能是式A化合物體外效能的約l/8th，中值ICso分別為8.0nM及1.0nM。然 而，此體外效能與CCR5拮抗劑SCH-417690(Vicriviroc，現在正處於 第II期開發中，參見以下結構)的體外效能類似，所述CCR5拮抗劑 SCH-417690的中值IC50為7.5 nM。
在人類遞增的單劑量研究中，口服給予式A化合物後，評估在第 2、 8及24小時時所抽取血液樣本中式I化合物相對於式A化合物的 血漿水平。採用LC-MS/MS檢測內部(in-house)代謝物譜的分析方法 實施該評估。根據人類血漿中式I化合物的此定量評定，預計人類血 漿中式I化合物的濃度為式A化合物濃度的多達3倍(參見圖5)。此 被視為 一個令人感到驚奇且出人意料的結果。
先前已經顯示，CCR5抑制劑化合物的穩態波谷血漿濃度與病毒 抑制相關。如圖6所示，在每日2次給予50 mg的化合物A笨璜酸鹽 後，式I化合物的預計(projected)波谷水平將為約20 nM，或4交體外 ECso濃度大2.5倍。另外，在每日2次給予50mg的化合物A苯磺酸
其中病毒負荷的預計下降為2 1.0 log。此預計是以由另一 CCR5抑制 劑(即，也稱作SCH-417690(Vicriviroc)(參見美國專利第6,391,865號) 的如下化合物)獲得的14-天濃度-效應關係，
以及相對於SCH-417690的式A化合物和式I化合物體外效能為 基礎的。
儘管已經結合以上提出的具體實施方案來闡明本發明，其許多備 選方案、修飾及變化形式對本領域普通技術人員而言將是顯而易見 的。所有這些備選方案、修飾及變化形式均欲落入本發明的精神及範 疇內。出於所有目的，本文所引用各文獻(包括已發表的專利、專利申請、 期刊文章等)均通過引用全部結合於本文。
權利要求
1. 純淨及分離形式的式I化合物，式I或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
2. 藥用組合物，其包含有效量的權利要求1的化合物或其藥學 上可接受的鹽或溶劑合物以及藥學上可接受的載體。
3. —種治療人免疫缺陷病毒的方法，其包括給予需要這樣治療 的人有效治療量的權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑 合物或酯。
4. 權利要求3的方法，其還包括聯合給予一種或多種抗病毒藥或用於治療人免疫缺陷病毒的其它藥物以及權利要求1的化合物或其 藥學上可接受的鹽、溶劑合物或酯。
5. 權利要求4的方法，其中所述抗病毒藥選自核苷逆轉錄酶抑制劑、非核苷逆轉錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑。
6. 權利要求5的方法，其中所述抗病毒藥選自齊多夫定、拉米 夫定、扎西他濱、去羥肌苷、司他夫定、阿巴卡韋、阿德福韋二匹伏 酯、洛布卡韋、BCH畫10652、恩曲他濱、卩-L-FD4、 DAPD、羅德腺苷、 奈韋拉平、地拉韋啶、依法韋侖、PNU-142721、 AG-1549、 MKC-442、 (+)-紅厚殼素植物提取物A和B、沙奎那韋、茚地那韋、利託那韋、 奈非那韋、拉西那韋、DMP-450、 BMS-2322623、 ABT-378、氨普那 韋、羥基脲、利巴韋林、IL-2、 IL-12、噴他夫西、YissumNo. 11607和AG陽1549。
7. —種治療實體器官移植排斥、移植物抗宿主疾病、關節炎、 類風溼性關節炎、炎性腸道疾病、特應性皮炎、4艮屑病、哮喘、變態 反應或多發性硬化症的方法，所述方法包括給予需要這樣治療的人有 效治療量的權利要求1的化合物或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或 酯。
8. 權利要求7的方法，其用於治療實體器官移植排斥、移植物 抗宿主疾病、關節炎、類風溼性關節炎、炎性腸道疾病、特應性皮炎、 銀屑病、哮喘、變態反應或多發性硬化症，該方法還包括使用一種或 多種用於治療所述疾病的其它藥物。
9. 一種藥劑盒，其包含在單一包裝的各分開容器中的用於聯合 治療人免疫缺陷病毒的藥用組合物，所述藥劑盒在一個容器中包含含 有在藥學上可接受的載體中的有效量的權利要求1的化合物或其藥學 上可接受的鹽或溶劑合物的藥用組合物，而在分開的容器中包含含有 在藥學上可接受的載體中的有效量的抗病毒藥或用於治療人免疫缺 陷病毒的其它藥物的一種或多種藥用組合物。
10. —種確定患者是否已經給予式A化合物的方法，式A該方法包括確定得自患者的血漿、尿液、膽汁、糞便樣本是否顯 示存在權利要求1的化合物的步驟。
全文摘要
本發明在其許多實施方案中，提供了一類作為CCR5受體抑制劑的、具有結構式I的新的化合物(當結構式出現在紙件形式的摘要中時，應該將化學式插在此處)、製備這樣的化合物的方法、含一個或更多個這樣的化合物的藥用組合物、製備含一個或更多個這樣的化合物的藥物製劑的方法以及使用這樣的化合物或藥用組合物治療、預防、抑制或改善與CCR5關聯的一種或多種疾病的方法。本發明還涉及一種或多種本發明化合物與一種或多種抗病毒藥或用於治療人免疫缺陷病毒的其它藥物的聯合應用。本發明還涉及本發明化合物，單獨或與另一個藥物聯合，在治療實體器官移植排斥、移植物抗宿主疾病、關節炎、類風溼性關節炎、炎性腸道疾病、特應性皮炎、銀屑病、哮喘、變態反應或多發性硬化症中的應用。
文檔編號C07D409/14GK101426781SQ200780014520
公開日2009年5月6日 申請日期2007年2月22日 優先權日2006年2月24日
發明者A·滕朵卡, D·葛羅茲, D·雷根, K·B·艾頓, M·W·米樂, R·羅曼森, S·K·邱德赫瑞 申請人:先靈公司