尾孢醯胺的製造方法

2023-10-11 22:38:04

專利名稱：尾孢醯胺的製造方法
技術領域：
本發明涉及使用屬於粒毛盤菌屬(丄ac/2"wm屬)和/或i^ei^/aegen'to 屬的菌來製造尾孢醯胺(cercosporamide)的方法、通過該製造方法製造 的尾孢醯胺以及製造尾孢醯胺的菌等。
背景技術：
尾孢醯胺是從真菌類CercosporWwm /2e"z力gw7的培養液中分離的 天然物質(參照美國專利第4983587號公l良；The Journal of Organic Chemistry, 1991年,第56巻，第909 910頁；Tetrahedron, 1992年, 笫48巻，第4757 4766頁和Molecular and Cellular Biology, 1994年， 第14巻，第1017 - 1025頁)。
已知尾孢醯胺具有抗真菌活性。此外，還已知尾孢醯胺的某些衍 生物與尾孢醯胺一樣具有抗真菌活性(美國專利第4983587號公報)。
尾孢醯胺作為用於合成其衍生物的前體也是有用的，並要求開發 更有效率的生產方法。
作為產生尾孢醯胺的孩i生物，已知有真菌類Cwco^ on'c^w Z"gw7,但並不知道屬於粒毛盤菌屬禾口屍wt^aege〃Ya屬的菌產生尾孢 醯胺。

發明內容
發明所要解決的問題
本發明的一個目的在於提供使用微生物製造尾孢醯胺的方法。本 發明的另一目的在於提供根據該製造方法製造的尾孢醯胺。本發明的又一目的在於提供製造尾孢醯胺的微生物。
為了解決上述問題，本發明人等進行了深入研究，發現尾孢醯胺
是由屬於粒毛盤菌屬和屍^t^aegehto屬的菌產生的，並發現了使用上 述菌製造尾孢醯胺的方法，從而完成了本發明。
解決問題的方法
技術領域：
本發明包括以下(1) (12):
(1) 尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於培養屬於粒毛盤菌屬的 菌，並從其培養物中回收尾孢醯胺；
(2) 上述(l)的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於粒毛盤菌 屬的菌為至少一種選自Z^c/2"wm ^kyc^scem、 Lgc/z"ww ca(ydo/(i^禾口 Lac/zw蘭cafera/Zaf簡的菌；
(3) 上述(l)的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於粒毛盤菌 屬的菌為至少一種選自丄ac/^ww yk cescem SANK 19096菌才朱、 丄ac/zw謂ca(yc/o油51 SANK 12497菌抹禾口丄ac/zw簡caesa/Zafww SANK 10906菌抹的菌；
(4) 尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於培養屬於屍wwt/aegehto 屬的菌，並從其培養物中回收尾孢醯胺；
(5) 上述(4)的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於 屍sei^aeger/to屬的菌為屍sew(iaegm'to we6他h;
(6) 上述(4)的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於 屍5^wdaegm.to屬的菌為屍^W(iae,/to we/ 他"'SANK 1歸6菌林；
(7) 尾孢醯胺，其是按照上述(1) (6)中任一項的製造方法製造的；
(8) 藥物，其含有按照上述(1) (6)中任一項的製造方法製造的尾 孢醯胺作為有效成分；
(9) Z^rc/w,加cescmy SANK 19096菌抹；
(10) 丄a由Mm ca(yc/o/fifes SANK 12497菌抹；
(11) 丄ac/zw應caera/Www SANK 10906菌抹；禾口formula see original document page 5 (I)
尾孢醯胺顯示下述的物理化學性質。
1) 性狀弱酸性、脂溶性、黃褐色粉末
2) 分子式C16H13N07
3) 分子量331(EI質譜法測定)
4) 利用高分辨EI質譜法測定的精密質量[^1]+ (Q6H!3N07)如下 實測值331.0690
計算值331.0692
5) 比旋光度[oc]D25 - 396.4° (c 0.51,乙腈) 6^H-核磁共振圖譜(5,卯m)
在重氯仿中，以其殘留質子信號(7.27ppm)為內標測定的^-核磁 共振圖譜(500 MHz)如下。
1.75 (3H,s), 2.68 (3H,s), 5.99 (lH,s), 6.26 (lH,s), 6.38 (lH,s), 6.96 (lH,s), 10.55 (lH,s), 12.98 (lH,s)， 18.83 (lH,s) 7)"C-核磁共振圖譜(5,ppm)
在重氯仿中，以重氯仿的信號(77.23卯m)為內標測定的"C-核磁共 振圖譜(125 MHz)如下。
27.9 (q), 32.1 (q)， 58.8 (s), 94.0 (s), 99.4 (d), 101.5 (d), 104.0 (s)， 105.6 (s), 155.2 (s), 158.1 (s), 166.1 (s), 169.8 (s), 178.2 (s), 191.8 (s), 197.7 (s), 5201.9 (s)
發明效果
根據本發明，提供尾孢醯胺的製造方法、根據該方法製造的尾孢 醯胺和製造尾孢醯胺的屬於粒毛盤菌屬或i^ewtfaeg^7'to屬的菌。本發 明所提供的產生尾孢醯胺的菌具體有Z^c/2做w ykyc"ce似SANK 19096菌抹、丄ac/w應 ca(yc/o/fifes SANK 12497菌抹、丄ac/w應 a7era/W謂SANK 10906菌抹和屍化i^aegen'to曹6她n. SANK 11006菌 抹。尾孢醯胺其本身作為抗真菌劑是有用的，此外，其作為用於製造 尾孢醯胺衍生物的前體也是有用的。
實施發明的最佳方式
l.尾孢醯胺產生菌
本發明人等廣泛檢索了產生尾孢醯胺的微生物，結果在Lac/z咖m /贓esc面SANK 19096菌林、Lac/j"簡ca/戶oto SANK 12497菌抹、 Lac/m謂a^a/z'(^應SANK 10906菌抹和屍5^<^,"" SANK 11006菌抹的培養物中發現了尾孢醯胺。
對尾孢醯胺產生菌沒有特別限定，只要是屬於粒毛盤菌屬和 屍"M(iaegm'to屬的菌即可，優選為至少 一種選自丄ac/zw纖,cesce/w 、
菌。更優選為至少一種選自Lac/2"ww/wsc^ce"s SANK 19096菌才朱(以下 稱作"SANK 19096菌林，，)、Lac/2肌m ca(yc,'o^fey SANK 12497菌林(以 下稱作"SANK 12497菌林，，)、丄ac/2"wm caera/Wwm SANK 10906菌抹 (以下稱作"SANK 10906菌林，，)和Aewdtoeg^7'towA對e"SANK11006 菌林(以下稱作"SANK110C^菌抹，，)的菌。
以下，描述SANK 19096菌抹、SANK 12497菌抹、SANK 10906 菌抹和SANK 11006菌林的真菌學性質。
在真菌學特徵的描述中，根據"Kornerup, A & Wanscher, JH (1978)Methuen handbook of colour.第3版,EyreMethuen， London, UK， 1~
252"來表示菌落顏色。
觀察各菌株在培養過程中的真菌學性狀時，使用以下各培養基。 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(Potato dextrose agar)培養基(以下稱作"PDA培
養基")將39 g日水馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(日水製藥0朱)制)溶解在
1000ml蒸餾水中，在12rC下滅菌15分鐘後製作平板(plate)。
改良型Weitzman and Silva-Hutner培養基(以下稱作"WSH培養
基")將10g日食燕麥粉、lg七水硫酸鎂、1 g磷酸二氫鉀、1 g硝酸
鈉和20 g瓊脂溶解在1000 ml蒸餾水中，在121。C下滅菌15分鐘後製作平板。
麥芽提取物瓊脂(Malt extract agar)培養基(以下稱作"MEA培養 基")將20g麥芽提取物、1 g多聚蛋白腖(日本製藥)、20g葡萄糖 和20g瓊脂溶解在1000 ml蒸餾水中，在12rC下滅菌15分鐘後製作 平板。
玉米粉瓊脂(CornMealAgar)培養基(以下稱作"CMA培養基") 將17 g日水玉米粉瓊脂(日水製藥(抹)制)溶解在1000 ml蒸餾水中，在 121。C下滅菌15分鐘後製作平板。
Abdullah's麥芽提取物瓊脂(Abdullah's malt extract)培養基(以下稱 作"AMEA，，培養基)將0.76g麥芽提取物、0.14 g甘油、0.16 g糊 精、0.046 g GE90M (DMV公司制)和15 g瓊脂溶解在1000 ml蒸餾水 中，在121。C下滅菌15分鐘後製作平板。
培養SANK 19096菌抹、SANK 12497菌抹和SANK 10906菌抹時 使用PDA培養基、WSH培養基、CMA培養基和MEA培養基；培養 SANK 11006菌林時使用PDA培養基、WSH培養基、CMA培養基和 AMEA培養基。
(1)丄ac/m扁ykscesc SANK 19096菌抹
從在日本國長野縣採集的落葉上產生的子實體中分離丄ac/wwm /wsc^cms SANK 19096菌林，作為Z^c/z"w/ 7 sp. SANK 19096菌林。以下，記述用於分離SANK 19096菌抹的子實體乾燥標本的真菌 學性狀。子嚢盤為短柄，用水再浸泡時，高263〃m,直徑約557 /rni， 盤面呈淺凹狀，淡褐色。乾燥時邊緣向內側褶曲，直徑499pm，呈淡 褐色。外嚢盤被為矩胞菌絲組織，呈淡褐色 褐色，由厚壁細胞組成， 從最外層形成毛樣短突起或毛。髓嚢盤被由緻密的交錯菌絲組織組 成，無色。毛為圓筒形，筆直或略彎，尖端為鈍頭，有隔膜，表面有 粒狀，呈褐色，寬4.5-6/mi，長71 76^m。毛的尖端部分稀疏地附 著有結晶。柄為圓筒形，呈淡褐色，長115〃m。子嚢為無嚢蓋的，圓 筒狀棍棒形，含8個孢子，其大小為30~43 x 3.5~5/mi。子嚢的尖端 遇梅爾澤試劑(Melzer，sreagent)變藍。側絲為矛尖狀，無隔膜，依稀有 1~2隔膜，無色，長50.9-68.7/rni，最粗的部分為2.7 ~4.1/mi,超出 子囊尖端9.1 16.5/mi。子嚢孢子為紡錘形 長橢圓形，無隔膜，無色， 其大小為5.5 ~ 8.5x1.3 ~ 2.2/mi。
SANK 19096菌抹在上述各培養基上顯示出以下真菌學性狀。
PDA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達19~21 mm。菌 落為絨毛狀 綿毛狀，由向中心部隆起的菌絲層組成，呈赤灰色 (Reddish Grey (11B2)) 白色。未觀察到浸出液、菌核、分生孢子。菌 落背面的中心部分為灰橙色(GreyishOrange(5B4))，邊緣部分呈白色， 具有放射狀的褶皺。未觀察到可溶性色素。菌絲有隔膜，分枝，無色， 直徑達1.5 ~ 3.5戶。
WSH培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達29 31mm。菌 落為羊毛狀 絨毛狀，由薄菌絲層組成，呈白色。未觀察到浸出液、 菌核、分生孢子。菌落背面呈白色。未觀察到可溶性色素。
CMA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達33 34mm。菌 落僅由極薄的菌絲層組成，無色。未發現浸出液、菌核、分生孢子。 菌落背面為無色。未》見察到可溶性色素。
MEA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達21 22mm。菌 落的中心部分為綿毛狀，朝邊緣部分菌絲密集，變成絨毛狀，呈灰黃色(Greyish Yellow (4C4)) 黃白色(Yellowish White (4A1))，氣生菌絲密 集的部分呈白色，邊緣部分僅由基質菌絲(basalmycelia)組成，茶橙色 (Browish Orange (5C3)) 黃灰色(Orange Grey (5C2))。未觀察到浸出液、 菌核、分生孢子。菌落背面呈黃茶色(Yellowish Brown (5D6)) 灰橙色 (Greyish Orange (5B3))，邊緣部分呈白色。未觀察到可溶性色素。
上述真菌學特徵與Spooner的文獻(Spooner， BM (1987) Bibliotheca Mycologica 116: 1 ~ 711)的粒毛盤菌屬的描述一致。因此，鑑定本菌 為丄ac/mww sp.，並命名為丄ac/mi/m sp. SANK 19096菌4朱。
而且，SANK 19096菌林與Dennis的文獻(Dennis, RWG (1949) Mycological Papers 32: 1 ~ 97)的Dos7"/ /2z^yksce鮮"s (Pers.) Gray以 及Tanaka和Hosoya的文獻(Tanaka, I和Hosoya， T (2001) Mycoscience 42: 597 ~ 609)的Z^c/2"ww >sc^cera (Pers.) P. Karst.種的描述一致(除
少i午例夕卜)。現在D057JCJ^/2U51 /z^CMCe"5^皮當4乍AXac/2"Wm /iWCMCeWS
的別名。另夕卜，在Baral和Krieglsteiner的文獻(Baral, HO & Krieglsteiner, GJ (1985) Beihefte zur Zeitschrift fiir Mykologie 6: 1 ~ 160)中，為象 Z^c/2做w /w"^ce似一樣具有茶色毛的粒毛盤菌屬的種設立了新屬 fin/朋z戸7a屬，並看作是不同於粒毛盤菌屬的屬。而在Baral和 Krieglsteiner的文獻中，Lac/z"謂加cesce"s被看作是5rw朋一a /^ceycmy (Pers.) Baral的別名。然而，此想法並沒有被廣泛接受，在 Krik等人的出版物(Krik, PM等.(2001) Ainsworth & Bisby's Dictionary of Fungi第9版，CABI International, Wallingford, UK, 1~655)中, 萬ra朋一7"屬被看作是粒毛盤菌屬的別名。因此，在本專利中，根據 Tanaka和Hosoya的文獻，將SANK 19096菌抹鑑定為Lac/mww /kscescms* ， 並命名為丄ac/2w羅/kycescmy SANK 19096菌抹。
SANK 19096菌林作為丄ac/2做w sp. SANK 19096，於2005年5月 24日國際保藏在獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生物寄託 中心(地址日本國茨城縣筑波市東1-1-1中央第6),授予保藏號為 FERM BP-10338。(2)丄a由謂ca(y"'o/cfes SANK 12497菌林
以下，描述SANK 12497菌一朱的真菌學性質。
Z^c/www ca/_yc/o/fifey SANK 12497菌株是自在日本國鳥取縣採集的 草本枯莖上產生的子實體中分離的。
以下，記述用於分離SANK 12497菌抹的子實體乾燥標本的真菌 學性狀。子嚢盤散在或叢生，有柄，乾燥時邊緣向內側褶曲，高1271 ~ 1817戶，直徑437 913戶，盤面呈灰橙色(Greyish Orange (6B4))， 毛呈明茶色(Light Brown (7D4)) 暗茶色(Dark Brown (7F7))，柄和外嚢 盤被呈灰橙色(Greyish Orange (6B4》。外嚢盤被為矩胞菌絲組織，呈 無色 褐色，由厚壁細胞組成，自最外層形成毛樣的短突起或毛。髓 嚢盤被由緻密的交錯菌絲組織組成，無色。毛為圓筒形，筆直或稍彎 曲，尖端為鈍頭，有隔膜，表面為粒狀，褐色，寬3.8 5.5/rni，長58.1 ~ 111.6/mi。毛尖端部分有附著物質，其上面常常附著有子嚢孢子。柄 為圓筒形，長908 ~ 1374/mi,直徑170 ~ 205/mi，呈無色 褐色。子嚢 為無嚢蓋的，圓筒狀棍棒形，尖端為圓錐形，含8個孢子，其大小為 69.3 - 80.2x3.9 ~ 6.8 ^m。子嚢尖端經3% KOH處理後，遇梅爾澤試劑 變藍。側絲為矛尖狀，通常無隔膜，依稀有1 3隔膜，無色，長98.1-130.2 〃m,最粗的部分為4.4 7.0〃m,超出子嚢尖端13.5 ~ 36.0/mi。 子嚢孢子為紡錘形 長橢圓形，無隔膜，無色，其大小為8.8 15.6x1.8 ~
3.0 ^m。
SANK 12497菌林在各培養基上顯示出以下真菌學性狀。 PDA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達21 25mm。菌 落為絨毛狀 綿毛狀，由向中心部分略隆起的菌絲層組成，呈赤茶色 (Reddish Brown (8E2)) 灰橙色(Greyish Orange (5B3》。菌落邊緣部分 呈不規則的鋸齒狀。未7見察到浸出液、菌核、分生孢子。菌落背面的 中心部分為暗茶色(Dark Brown (6F4)) 灰橙色(Greyish Orange (5B3))， 邊緣部分呈白色，具有放射狀的褶皺。未產生可溶性色素。菌絲有隔 膜，分枝，呈無色 淡褐色，直徑1.3 2.6/mi。WSH培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達32-34mm。菌 落由薄菌絲層組成，呈明黃色(Light Yellow(2A5)) 白色。菌落邊緣部 分圓滑。沒有觀察到浸出液、菌核、分生孢子。菌落背面的顏色與表 面相同。未產生可溶性色素。
CMA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達33 -35 mm。菌 落僅由極薄的菌絲層組成，無色。菌落邊緣部分圓滑。未發現浸出液、 菌核、分生孢子。菌落背面的顏色與表面相同。未產生可溶性色素。
MEA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達18-27mm。菌 落為薄絨毛狀，朝向邊緣部分具有放射狀的褶皺，呈灰橙色(Greyish Orange (5B6)) 明黃色(Light Yellow (3A4))。菌落邊緣部分有稀少的平 緩鋸齒。未觀察到浸出液、菌核、分生孢子。菌落背面呈灰橙色(Greyish Orange (5B6》 橙灰色(Orange Grey (5B2》，邊緣部分呈白色。未產生 可溶性色素。
上述真菌學特徵與Spooner的文獻(Spooner , BM (1987) BibliothecaMycologica 116: 1 ~ 711)的粒毛盤菌屬的記載一致。而且， 上述真菌學特徵與Rehm的出版物(Rehm, H (1896) Dr. Rabenhorst's Kryptogamen-Flora von Deutschland ， Oesterreichs und der Schweiz Zweite Auflage. 巻 1. III. Abtheilung: Ascomyceten (子嚢菌) Hysteriaceen und Discomyceten, Eduard Kummer, Leipzig, Germany, 1 ~ 1275)的丄c c/z"w附ca(ycz'o/cfes (Rehm) Rehm、 Brietenbach禾口 Kranzlin 的出版物(Brietenbach, J & Kranzlin ， F (1984) Fungi of Switzerland.巻 1 Ascomycetes (子嚢菌),Verlag Mykologia, Luzern Switzerland, 1 ~ 310)的 Da，c，/m ca/戸'o油s (Rehm) Sacc.和 Scheuer 的文獻 (Scheuer, C (1988) Bibliotheca Mycologica 123: 1 ~ 274)的B簡"一a ca/y"'oz'cfes (Rehm) Baral種的i己載 一 至丈(除少i午例夕卜)。Lac/mww ca/yc/oW^ 、 Dos^^cj^/ws ca(yc/oZ<5fes*牙口 Srww"^ f7a ca(yc/o/<ies是同 一種 的別名，在Baral和Krieglsteiner的文獻(Baral， HO & Krieglsteiner, GJ (1985) Beihefte zur Zeitschrift fiir Mykologie 6: 1 ~ 160)中Da，觀/2ws c一c/o/(5fes被看作是Srw朋一a ca(yc/o油s的另'J名。然而， Scheuer的文獻中所使用的5rw朋^,7a屬並沒有被廣泛接受，在Krik 等人的出版物(Krik， PM等(2001) Ainsworth & Bisby's Dictionary of Fungi第9版，CABI International, Wallingford, UK， 1~ 655)中， Srw"m;^7a屬被看作是粒毛盤菌屬的別名。因此，在本專利中將SANK 12497菌4朱鑑定為丄(3c/ "MW CGr(yc/o/(iM，並命名為丄ac/ "wm ca/yc/o/cfes" SANK 12497。
SANK 12497菌抹作為Lac/2肌附calycioides SANK 12497，於2006 年6月29日國際保藏在獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生 物寄託中心(地址日本國茨城縣筑波市東1-1-1中央第6)，授予保藏 號為FERMBP-10636。 (3)丄a由謂(:<^ //加蘭SANK 10906菌林
以下，描述SANK 10906菌林的真菌學性質。
丄ac/zm/m 07^a//afww SANK 10906菌4朱是自在日本國神奈川縣採 集的落葉上產生的子實體中分離的。
以下，記述用於分離SANK 10906菌抹的子實體乾燥標本的真菌 學性狀。子嚢盤散在或叢生，有柄，乾燥時邊緣向內側褶曲，高391~ 858〃m,直徑212 446/mi，盤面呈暗橙色(Dark Orange (5A8))，毛為 白色，柄和外嚢盤被呈明橙色(Light Orange (6A5))。將其再浸入水中 時，直徑為532- 739/rni，盤面為淺凹狀，並且整體呈淡橙色。
外嚢盤被為矩胞菌絲組織，呈無色 淡褐色，由厚壁細胞組成， 自最外層形成毛樣的短突起或毛。髓嚢盤被由緻密的交錯菌絲組織組 成，無色。毛為圓筒形，筆直或略彎曲，尖端為鈍頭，有隔膜，表面 有粒狀，無色，寬2.1 ~2.7〃m，長43.9 98.9〃m。柄為圓筒形，長310~ 530/mi，直徑55 90/mi，呈無色 淡褐色。子嚢為無嚢蓋的，為圓筒 狀棍棒形，含8個孢子，其大小為29.8 ~ 42.0x3.6 ~ 5.4 /mi。子嚢尖端 經3。/。KOH處理後，遇梅爾澤試劑變藍。側絲為細長矛尖狀，無隔膜， 無色，長33.9-42.6/mi，最粗的部分為1.4 ~ 2.8 〃m，超出子嚢尖端5 9.5/mi。子嚢孢子為紡錘形 長橢圓形，無隔膜，無色，長11.4- 17.2/mi, 寬1.5 ~2.4/mi。
SANK 10906菌4朱在各培養基上顯示以下真菌學性狀。
PDA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達10 12mm。菌 落為絨毛狀 綿毛狀，呈灰黃色(Greyish Yellow (4C7)) 明黃色(Light Ydlow(4A5))。菌落邊緣部分呈白色，呈不規則鋸齒狀。未觀察到浸 出液、菌核、分生孢子。菌落背面的中心部分為黃茶色(YellowishBrow (5F8-5E6))，邊緣部分呈白色。未產生可溶性色素。菌絲有隔膜，分 枝，呈明茶色 無色，直徑達1.7 5.1/mi。
WSH培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達17-20mm。菌 落由薄菌絲層組成，其中一部分形成白色的綿毛狀氣生菌絲，呈白色。 菌落邊緣部分圓滑。未^L察到浸出液、菌核、分生孢子。菌落背面呈 白色。未產生可溶性色素。
CMA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達30 34mm。菌 落僅由極薄的菌絲層組成，無色。菌落邊緣部分圓滑。未觀察到浸出 液、菌核、分生孢子。菌落背面為無色。未產生可溶性色素。
MEA培養基中的菌落在23。C下培養21天，直徑達8~11 mm。菌 落為絨毛狀，呈茶橙色(Browish Orange (5C4》 灰橙色(Greyish Orange (5B3))。菌落邊緣部分呈白色，依稀有平緩鋸齒。未觀察到浸出液、 菌核、分生孢子。菌落背面呈黃茶色(Yellowish Brown (5F8)) 金茶色 (GoldBrown(5D8))，邊緣部分呈白色。未產生可溶性色素。
上述真菌學特徵與Spooner的文獻(Spooner， BM (1987) Bibliotheca Mycologica 116: 1 ~ 711)的粒毛盤菌屬的記載一致。在粒毛盤菌屬的 已有種中，SANK 10906菌林和Spooner的文獻所記載的丄ac/z"ww ,r油/ /^〃wm (Rodway) Spooner和丄ac/ "應 vahimy (Rehm) M.P. Sharma接近。但是，SANK 10906菌林是從木本植物的落葉中分離的， 一目只寸於jt匕,丄ac/wiwm/^en'<iop/^//ww;fpZ^c/2"wm van'aMS迄今為止是,人才沙 秒科宿主中分離的，與SANK 10906菌抹相比，其子嚢長、毛寬等，因此明確區別於SANK 10906菌林。因此，判斷SANK 10906菌株是粒 毛盤菌屬的未記載種，暫且將本種命名為丄flc/7mw2 <%f^ra//afww，將 SANK 10906菌4朱命名為Lac/2"wm caera/ZWwm SANK 10906菌#朱。
SANK 10906菌林作為SANK 10906，於2006 年6月29日國際保藏在獨立行政法人產業技術綜合研究所特許生 物寄託中心(地址日本國茨城縣筑波市東1-1-1中央第6)，授予保藏 號為FERM BP-10634。 (4)潔6他"'SANK 1兩6菌抹 以下，描述SANK 11006菌抹的真菌學性質。 屍ww^egmto we^teh SANK 11006菌林是自在日本國宮崎縣採集 的落枝上生成的繁殖體(propagules)中分離的。
以下，記述SANK 11006菌林在AMEA培養基中在15。C下培養28 天時所觀察到的繁殖體和用於分離SANK 11006菌^f朱的乾燥標本的真 菌學性狀。
AMEA培養基中的菌絲存在於培養基表面或潛入其中，有隔膜， 分枝，茶色 無色，直徑1.3~3.2 〃m。分生孢子柄為單生，未分化或 略分化，有隔膜。產孢細胞為多芽殖性。繁殖體為球形 近球形，分 散在基質表面，稀疏叢生，呈白色，直徑達26.6 80.9/mi。繁殖體由 串狀高度分枝的組織組成，各細胞為球形 近圓形，直徑為3.6~5.6 /mi。各細胞間有空隙，各生出1~4個子細胞。未觀察到瓶梗形的分生 孢子。落枝上形成的繁殖體與AMEA培養基上的繁殖體大致相同，直 徑為37.0~ 106.0 pm，各細胞的直徑達3.4 ~ 6.8/mi。未觀察到瓶梗形 的分生孢子。
SANK 11006菌林在上述各培養基上顯示以下真菌學性狀。 PDA培養基中的菌落在15。C下培養28天，直徑達13-14mm。菌 落為絨毛狀，由向中央隆起的菌絲層組成，呈橄欖色(01ive(2F6》 橄 欖灰色(01ive Grey (2D2))。菌落邊緣部分為平緩鋸齒狀。沒有觀察到 浸出液、菌核、繁殖體。菌落背面的顏色與表面相同。未產生可溶性色素。菌絲有隔膜，分枝，呈紅褐色 無色，直徑達1.6 3.0/mi。
WSH培養基中的菌落在15。C下培養28天，直徑達13mm。菌落由 薄菌絲層和羊毛狀氣生菌絲組成，呈橄欖色(01ive(2F4-2E5))。菌落邊 緣部分圓滑。沒有觀察到浸出液、菌核、繁殖體。菌落背面呈橄欖色 (Olive (2F7)) 橄欖灰色(Olive Grey (2F2))。未產生可溶性色素。
CMA培養基中的菌落在15。C下培養28天，直徑達13-18mm。菌 落僅由薄菌絲層組成，呈橄欖色(Olive (3F3)) 灰黃色(Greyish Yellow (3B3))。菌落邊緣部分圓滑。從菌落中心部分到邊緣部分稀疏形成白 色的繁殖體。沒有觀察到浸出液、菌核。菌落背面的顏色與表面相同。 未產生可溶性色素。
AMEA培養基中的菌落在15。C下培養28天，直徑達6-16mm。菌 落僅由薄菌絲層組成，呈橄欖色(Olive (3F3)) 灰黃色(Greyish Yellow (3B3))。從菌落中心部分到邊緣部分稀疏形成白色的繁殖體。沒有觀 察到浸出液、菌核。菌落背面的顏色與表面相同。未產生可溶性色素。
上述真菌學特徵與Abdullah等人的文獻(Abdullah， SK等(2005) Mycological Research 109 : 590 ~ 594)的屍sewcfcfeger"a "w由feh Abdullah & Guarro種的記載一致(除少許例外)。SANK 11006菌抹和 i^ewdaegw'to we6weh的記載之間略有不同在Abdullah等人的記載 中繁殖體的各細胞的直徑為3~4 //m，而SANK 11006菌林為3.6~5.6 戶。因jt匕，鑑定本菌為i^ew(iaeger/to we&fer/，並命名為i^ewdaegeWto wte" SANK 11006。
SANK 11006菌4朱作為屍犯i^aegen'to wefe&n' SANK 11006,於 2006年6月29日國際保藏在獨立行政法人產業技術綜合研究所特 許生物寄託中心(地址日本國茨城縣筑波市東1-1-1中夾第6),授予 保藏號為FERMBP-10635。
眾所周知，真菌類在自然界或經人工處理(例如紫外線照射、放射 線照射、化學藥品處理等)容易發生變異，在這一點上本發明的SANK 19096菌林、SANK 12497菌林、SANK 10906菌抹和SANK 11006菌林也是如此。本發明中所說的SANK 19096菌抹、SANK 12497菌林、 SANK 10906菌抹和SANK 11006菌抹包含其所有的變異菌林。
上述變異菌抹中還包括通過遺傳方法，例如重組、轉導、轉化等 得到的菌抹。即，產生尾孢醯胺的SANK 19096菌林、SANK 12497 菌林、SANK 10906菌林和SANK 11006菌株、它們的變異菌抹和與 它們沒有明確區別的菌林均包含在SANK 19096菌林、SANK 12497 菌抹、SANK 10906菌抹和SANK 11006菌抹中。
2.發酵
尾孢醯胺產生菌可以使用通常用於經微生物發酵生產的、含有微 生物可以同化的碳源、氮源和無機鹽的培養基進行培養。
碳源包括葡萄糖、果糖、麥牙糖、蔗糖、甘露醇、甘油、糊精、 燕麥、黑麥、壓榨大麥、玉米澱粉、馬鈴薯、玉米粉、大豆粉、棉籽 油、糖蜜、枸櫞酸、酒石酸等，這些可以單獨使用或者可以將兩種以 上結合使用。碳源的含量通常在培養基量的1 10%重量內變動。
氮源可以使用含有蛋白質或其水解產物的物質、無機鹽等。上述 氮源例如有大豆粉、麥麩、落花生粉、棉籽油、酪蛋白水解物、 farmamine、魚粉、玉米漿、蛋白腖、肉類提取物、酵母、酵母提取物、 麥芽提取物、硝酸鈉、硝酸銨、硫酸銨等，上述物質可以單獨使用或 者將兩種以上結合使用。氮源的含量通常在培養基量的0.1 10%重量 範圍內變動。
營養無機鹽可以使用可提供離子的普通鹽類、金屬鹽等。鹽類例 如有鈉、銨、鈣、磷酸鹽、硫酸鹽、氯化物、碳酸鹽等。金屬鹽例 如有鉀、鉤、鈷、錳、鐵、鎂等的金屬鹽。
另外，根據需要還可以添加維生素B1、生物素等維生素類；硫 胺等菌體增殖促進物質等。
液體培養尾孢醯胺產生菌時，可以使用^5圭油、；f直物油、表面活性
劑等作為消泡劑。為了製造尾孢醯胺而培養選自SANK 19096菌林、SANK 12497菌抹、SANK 10906菌株和SANK 11006菌抹的任一種菌 抹時，培養基的pH因培養基的成分、生育溫度等而異，但通常只要 是用於生產發酵產物的pH即可。
SANK 19096菌抹、SANK 12497菌林、SANK 10906菌林和SANK 11006菌林的發酵溫度因培養基的成分、pH等而異，通常為10°C 30 °C， 20 26。C的範圍對生育良好。在尾孢醯胺的生產中優選發酵溫度 為23 26°C。
對用於製造尾孢醯胺的發酵方法沒有特別限定，只要是通常用於 微生物的培養方法即可，可以使用使用固體培養基的培養法、攪拌 培養法、振蕩培養法、通氣攪拌培養法等。
以下，作為用於製造尾孢醯胺的方法例，列舉SANK19096菌抹 的發酵方法，但只要可以製造尾孢醯胺即可，並不限於本方法。
SANK 19096菌抹的發酵通常從包含一個或兩個以上階段的種子 培養開始，在旋轉式振蕩培養機中、在20 26。C(優選26。C)下振蕩5 10 天(優選7天)或者振蕩至充分生育。
固體培養SANK 19096菌抹時，可以將上述種子培養液接種在錐 形燒瓶等固體培養基培養容器中的本發酵培養基(fmal fermentation medium)中。培養時，將接種的固體培養基培養容器在20 26。C(優選 26。C)下靜置10~20天(優選14天)，進行生產培養。在如此操作得到 的本發酵培養基(培養物)中可以得到所需的尾孢醯胺。
以較小規^t進行液體培養SANK 19096菌抹時，將種子培養液接 種在含有本發酵培養基的錐形燒瓶中，在旋轉式振蕩培養機中、在 20 26。C(優選26'C)下振蕩數日。在如此操作得到的發酵液(培養物)中 可以得到所需的尾孢醯胺。
另一方面，以較大規^t進行液體培養SANK 19096菌抹時，優選 使用帶有攪拌機、通氣裝置、保溫裝置等的適當的發酵槽。通過使用 該裝置，可以事先在該槽中製作培養基。例如，將本培養培養基在121 。C下加熱滅菌，冷卻。接下來，接種種子培養物，在26。C下一邊通氣攪拌一邊進行本發酵。在如此操作得到的發酵液(培養物)中可以得到 所需的尾孢醯胺。這種發酵方法適於大量製造所需的尾孢醯胺。
發酵本發明的尾孢醯胺產生菌來製造該物質時，該培養物中的尾 孢醯胺的產量可以利用後述的高效液相色鐠法(HPLC)等進行經時監
測。利用HPLC分析進行監測時，首先，用丙酮等親水性溶劑提取培 養物，餾去該親水性溶劑後，用乙酸乙酯等與水不混溶的溶劑提取。 接下來，餾去該與水不混溶的溶劑後，優選將重新溶解於適當溶劑中 的產物供給分析或試驗。
3.尾孢醯胺的回收和純化
可以從按照上述"2.發酵"項所示的方法發酵的尾孢醯胺產生菌 的固體培養基(培養物)或培養液(培養物)中回收尾孢醯胺。對尾孢醯胺 的回收和純化方法沒有特別限定，只要可以回收和純化尾孢醯胺即 可。
例如，在尾孢醯胺產生菌的液體發酵結束後，向發酵液(培養物) 中加入丙酮等與水混合的有機溶劑，利用以硅藻土等為助劑的過濾操 作或離心操作等，將培養物分成可溶組分(培養上清液)和不溶組分(菌 體)，將存在於所得培養上清液中的尾孢醯胺利用其物理化學性質進行 提取純化，從而可以回收尾孢醯胺。作為其他方法，在尾孢醯胺產生 菌的液體發酵結束後，向發酵液(培養物)中添加沸石等過濾助劑，然 後進行過濾，將得到的含有菌體的不溶組分浸在丙酮等與水混合的溶 劑的水溶液中，將自菌體中提取的尾孢醯胺再利用其物理化學性狀進 行提取純化，也可以回收尾孢醯胺。
從培養上清液中純化尾孢醯胺的方法例如有向培養上清液中加 入鹽酸等酸性物質，將pH調節至3.0，然後添加乙酸乙酯進行提取的 方法，但並不受限於此。
將得到的提取物通過使用矽膠、鎂-矽膠系矽碳鎂載體(Florisil)等 載體的吸附柱色譜法；薄層色譜法；使用TSK Gel ToyoPearl HW-40F(註冊商標，Tosoh(林)公司制)、Sephadex LH-20 (註冊商標，Amersham Biosciences公司制)等的分配柱色譜法；使用Cosmosil 140C18 (註冊商 標，Nacalai Tesque公司制)等的反相柱色諳法；使用正相或反相柱的 HPLC等進行純化，可以分離所需的尾孢醯胺。
純化本發明的尾孢醯胺時，各純化步驟中的該物質的行為例如可 以通過HPLC在下示條件下進行監測。
(用於檢測尾孢醯胺的HPLC條件) 分離柱YMC J， sphere ODS-H80 S畫4 4.6x150 mm (YMC(抹)制) 流動相乙腈0.4。/。三乙胺-磷酸緩衝液(pH3.2)(45 : 55) 流速l.Oml/分鐘 檢測紫外線吸收225 nm 保留時間9.3分鐘
4.含有尾孢醯胺的藥物
將本發明的尾孢醯胺或其鹽作為藥物對人或人以外的動物進行 給藥時，可以製成各種形式。其給藥形式取決於製劑、年齡、性別、 疾病等。例如，片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液劑、懸浮 劑、乳劑、膠嚢劑等進行口服給藥。注射劑等進行靜脈內給藥、肌肉 內給藥、皮內給藥、皮下給藥或腹腔內給藥。栓劑進行直腸內給藥。 軟膏等用作外用劑。
含有尾孢醯胺作為有效成分的藥物製劑，可以按照常規方法，使 用賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、溶解劑、矯味矯臭劑、包衣劑 等藥物製劑領域中通常可以使用的公知補助劑進行製備。
製成片劑時，作為載體可以廣泛使用該領域中公知的物質，例如 有乳糖、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、澱粉、碳酸鈣、高嶺土、 結晶纖維素、矽酸等賦形劑；水、乙醇、丙醇、單糖漿、葡萄糖溶液、 澱粉漿、明膠溶液、羧曱基纖維素、蟲膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚 乙烯吡咯烷酮等粘合劑；千澱粉、海藻酸鈉、瓊脂粉末、海帶多糖粉末、碳酸氫鈉、碳S臾鍋、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯類、十二烷
基硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、澱粉、乳糖等崩解劑；蔗糖、甘油三硬 脂酸酯、可可脂、氫化油等崩解抑制劑；季銨鹼、十二烷基硫酸鈉等 吸收促進劑；甘油、澱粉等保溼劑；澱粉、乳糖、高嶺土、膨潤土、 膠態矽酸等吸附劑；精製滑石粉、硬脂酸鹽、硼酸粉末、聚乙二醇等 潤滑劑等。片劑根據需要可以製成普通包衣片，例如糖衣片、明膠包 衣片、腸溶衣片、薄膜衣片或雙層片、多層片。
製成丸劑時，作為載體可以廣泛使用該領域中公知的物質，例如 有葡萄糖、乳糖、澱粉、可可脂、硬化植物油、高嶺土、滑石粉等 賦形劑；阿拉伯膠粉末、黃蓍膠粉末、明膠、乙醇等粘合劑；海帶多 糖、瓊脂等崩解劑。
製成注射劑時，優選將溶劑和懸浮劑滅菌，並且與血液等滲。制 成上述溶液劑、乳劑和懸浮劑時，作為稀釋劑可以廣泛使用該領域中 公知的物質，例如有水、乙醇、丙醇、環氧化異十八烷醇、環氧化 十八烷醇、聚氧化異十八烷醇、聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯類等。 為了維持等滲，可以含有足夠量的食鹽、葡萄糖或甘油。可以含有助 溶劑、緩衝劑、無痛化劑糖(indolent sugar)、著色劑、保存劑、香料、 風味劑、甜味劑、其他藥劑等。
應說明的是，將注射劑靜脈內給藥時，將其和葡萄糖、胺基酸等 普通補液混合或者作為與聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯類等的乳 液來單獨進行給藥
製成栓劑時，作為載體可以廣泛使用該領域中公知的物質，例如 有聚乙二醇、可可脂、高級醇、高級醇的酯類、明膠、半合成甘油 酯等。
製成軟膏等外用劑時，作為賦形劑可以廣泛使用該領域中^^知 的、屬於疏水性基質(油脂性軟膏基質)、吸水基質、親水性基質(乳膏) 以及水溶性基質(非潤滑脂制軟膏基質)中的任一種的物質。
對上述藥物製劑中所含的尾孢醯胺或其鹽的量沒有特別限定，但上限為30~70%重量，下限為1%重量，優選範圍是1~30%重量。
尾孢醯胺或其鹽的給藥量取決於症狀、年齡、體重、給藥方法、
劑型等，通常對於成人，每天給予的尾孢醯胺或其鹽的量，上限為
100 1,000mg，下限為l 10mg，優選範圍是10 100 mg。
尾孢醯胺或其鹽的給藥次數為數日1次、l日l次或l日多次。 本發明還提供包含給予藥理上有效量的尾孢醯胺或其鹽的感染
症的治療或預防方法、尾孢醯胺或其鹽在治療或預防上述疾病中的應用。
尾孢醯胺衍生物的合成
曰月M擊il"!告-^、漆嶽i1
體。作為尾孢醯胺的衍生物，已知將尾孢醯胺的羥基用醚4定進行化學 修飾的衍生物，但只要能夠以尾孢醯胺為前體即可，對衍生物沒有限制。
實施例
接著，列舉實施例來更詳細地說明本發明，但本發明並不受限於此。
(實施例1) Z^c/mMw/i^c^cem SANK 190%菌衝朱(FERM BP-10338)的 燒瓶發酵
從SANK 19096菌抹的斜面培養(slant)上切取邊長約5 mm的菌絲 片，懸浮在約2 ml的生理鹽水中，使用玻璃陶器(glass potter)進行勻 漿。將全量無菌接種在含有30ml表l所示的培養基(以下記作"培養 基A，，)的100 ml容積的錐形燒瓶中。在23。C下以210轉/分鐘(以下 記作"rpm")的旋轉式振蕩培養機中預培養5天。
將所得預培養液按5%(容量/容量以下記作"v/v")接種在含有 80ml培養基A的500 ml容積的錐形燒瓶中，在26。C、 210rpm的旋 轉式振蕩培養機中本培養7天。按後述條件進行HPLC分析。此時在培養液中確認到保留時間與尾孢醯胺一致的峰(

圖1)，可以確認SANK 19096菌林產生了尾孢醯胺。圖1中，9.315分鐘的峰表示尾孢醯胺。
沐l)
培養基A培養基組成
蔗糖20 g
生馬鈴薯100 g
多聚蛋白腖10 g
磷酸二氫鉀5 g
七水石危酸4美15 g
消泡劑CB-442100 mg
(曰本油脂公司制)
自來水1000ml
培養基未調節pH在121 'C下滅菌20分鐘後使用。
按以下條件進行HPLC分析。 分離柱YMC J， sphere ODS-H80 S-4 4.6小x 150 mm (YMC(抹)制) 流動相乙腈0.4。/。三乙胺-磷酸緩衝液(pH3.2)(45 : 55) 流速1.0ml/分鐘 檢測紫外線吸收225 nm 保留時間9.3分鐘
(實施例2) Lac/2肌m ykyc^cera SANK 19096菌4朱(FERM BP-10338)的 大量發酵
從SANK 19096菌^f朱的一個斜面培養上切取菌絲片，懸浮在約2 ml生理鹽水中，使用玻璃陶器進行勻漿。將全量接種在含有30 ml表 2所示的培養基(以下記作"培養基B，，)的100ml容積的錐形燒瓶中。 在23。C、 210 rpm的條件下在旋轉式振蕩培養機中培養7天。向培養 結束後的培養液中加入等量的20%甘油，混合。將該混合液在-80°C 下保存，作為種子培養液。
將2 ml種子培養液接種在含有30 ml培養基B的100 ml容積的錐形燒瓶中。在23。C、 210 rpm的條件下在旋轉式振蕩培養機中進行 5天最初的預培養(第1預培養)。
將第l預培養中得到的培養液(第l預培養液)按5。/。(v/v)接種在含 有500 ml培養基B的2 L容積的錐形燒瓶中，在23°C 、 210 rpm的條 件下在旋轉式振蕩培養機中進行4天第2次的預培養(第2預培養)。
將第2預培養得到的培養液(第2預培養液)按5% (v/v)植菌在含有 30 L培養基B的60 L容積的發酵槽中。 一邊調節攪拌速度使溶氧濃 度保持在3 5 ppm的範圍， 一邊以每分鐘30 L的通氣量在培養溫度 23。C下進行2天第3次的預培養(第3預培養)。
將笫3預培養得到的培養液(第3預培養液)按5。/。(v/v)植菌在含有 300 L培養基B的600 L容積的發酵槽中。 一邊調節攪拌速度使溶氧 濃度保持在3~5 ppm的範圍， 一邊以每分鐘300 L的通氣量在培養溫 度23。C下進行2天笫4次的預培養(第4預培養)。
將第4預培養得到的培養液(笫4預培養液)按5% (v/v)植菌在含有 4,000 L培養基B的6,000 L容積的發酵槽中。 一邊調節攪拌速度使溶 氧濃度保持在5 ppm, —邊以每分鐘2,000 L的通氣量在培養溫度26 。C下培養8天。在發酵的第4天和第5天分別添加200 L 20%的蔗糖 溶液。在發酵的第6天和第7天分別再添加300 L 20%的蔗糖溶液。 按以下所示的HPLC條件確認尾孢醯胺的產生。
(表2)
培養基B培養基組成
葡萄糖 40 g
馬鈴薯顆粒(Agrawest公司制) 20 g
多聚蛋白腖 10 g
培養基未調節pH在121 。C下滅菌20分鐘後使用。按以下條件進行HPLC分析。 分離柱Cadenza CD-C18， 4.6)x75 mm (Imtakt (才朱)制) 流動相乙腈0.02%三氟乙酸(40 : 60)。用8分鐘將溶劑的組成變
為(90 : 10)，進行洗脫。 流速l.Oml/分鐘 檢測紫外線吸收225 nm 保留時間5.4分鐘
(實施例3)從Lac/2"wwyksc^cem SANK 19096菌4朱(FERM BP-10338) 的發酵液中純化尾孢醯胺
在實施例2所記載的HPLC條件下進行目標物質尾孢醯胺的確認。 使用沸石545 (Celite Corp.公司制)作為過濾助劑，過濾實施例2中 得到的4,800 L Z^c/ "wm/iwc^ce朋SANK 19096菌抹的發酵液。向得 到的含有沸石的781 kg菌體中加入2,500 L自來水均勻懸浮。向懸浮 液中加入2,500 L丙酮進行提取。將得到的4,973 L提取液供給用50% 丙酮水平4紆化的80LDiaionHP-20柱(三菱化學制)。用50%丙酮水洗 滌DiaionHP-20柱，將通過液和洗滌液合併，得到5,500 L溶液。
向所得溶液中添加75。/。闢l酸，調節至pH3.0,之後加入3，000 L 乙酸乙酯進行提取。將4，218L經乙酸乙酯提取的溶液用1,000L25% 的食鹽水洗滌。減壓下自洗滌後的3,841 L提取液中餾去乙酸乙酯。 減壓下濃縮至81L ，之後使用20L的旋轉蒸發儀進一步餾去乙酸乙 酯，得到濃縮液。
將得到的約10 L濃縮液在4 。C下放置，使析出尾孢醯胺的結晶。 將所得的4,700 g溼結晶真空乾燥,得到4,140 g尾孢醯胺的乾燥結晶。
(實施例4)利用Z^c/zm^7 /ksce"era SANK 19096菌4朱(FERM BP-10338)產生尾孢醯胺從SANK 19096菌林的斜面培養上切取邊長約5 mm的菌絲片， 懸浮在約2ml的生理鹽水中。使用玻璃陶器進行勻漿，將全量無菌接 種在含有20 ml以下記栽的培養基的100 ml容積的錐形燒瓶中。在23 °C、 210 rpm的旋轉式振蕩培養機中預培養7天。將所得預培養液按 5% (容量/容量以下記作"v/v")接種在含有80 ml相同組成的培養 基的500 ml容積的錐形燒瓶中，在26°C 、 210 rpm的旋轉式振蕩培養 機中本發酵10天。如下進行用於分析的提取。向2ml發酵液中添加 0.4 ml 3 M的甘氨酸鹽酸緩衝液(pH3.2)、 1 ml丙酮、2 ml正丁醇，室 溫下振蕩提取10分鐘。在3,000 rpm的轉速下離心10分鐘，向所得 溶劑層中添加2 ml飽和食鹽水。室溫下振蕩洗滌10分鐘。減壓濃縮 溶劑層，將所得油狀提取物溶解在0.2 ml二甲基亞碸甲醇(7 : 3)溶 液中。將該提取物溶液供給後述條件下的HPLC分析。此時確認到保 留時間與用作對照的尾孢醯胺一致的峰(保留時間20.7分鐘)。
培養基組成
葡萄糖40 g
馬鈴薯顆粒(Agrawest公司制)20 g
多聚蛋白腖10 g
磷酸二氫鉀5 g
七水;充酸4美"g
消泡劑CB-442 (日本油脂公司制)500 mg
自來水1000 ml
培養基未調節pH在121。C下滅菌20分鐘。
按以下條件進行HPLC分析。 柱Symmetry Cl8 4.6(j)x150 mm (Waters 0朱)制) 流動相乙腈0.3。/。三乙胺-磷酸緩沖液(pH3.2)(5 : 95)。用28分鐘將 溶劑的組成變為(90 : 10),進行洗脫。 流速1.0ml/分鐘 檢測紫外線吸收210 nm(實施例5)利用Lac/j"wm ca c/oz'血s SANK 12497菌4木(FERM BP-10636)產生尾孢醯胺
從SANK 12497菌抹的斜面培養上切取邊長約5 mm的菌絲片， 懸浮在約2ml的生理鹽水中，使用玻璃陶器進行勻漿。以下按照與實 施例4相同的方法進行發酵、提取、分析。通過HPLC分析，在發酵 液中確認到保留時間與尾孢醯胺一致的峰(保留時間20.7分鐘)。
(實施例6)利用Z^c/j肌m caeM//Ww/T2 SANK 10906菌才朱(FERM BP-10634)產生尾孢醯胺
自SANK 10906菌抹的斜面培養上切取邊長約5 mm的菌絲片， 懸浮在約2ml的生理鹽水中。使用玻璃陶器進行勻漿。以下按照與實 施例4相同的方法進行發酵、提取、分析。通過HPLC分析，在發酵 液中確認到保留時間與尾孢醯胺一致的峰(保留時間20.7分鐘)，確 認SANK 10906菌林產生了尾孢醯胺。
(實施例7)利用SANK 11006菌林(FE腹 BP-10635)產生尾孢醯胺
自SANK 11006菌抹的斜面培養上切取邊長約5 mm的菌絲片， 無菌接種在含有20 ml培養基的100 ml容積的錐形燒瓶中。以下按照 與實施例4相同的方法進行發酵、提取、分析。通過HPLC分析，在 發酵液中確認到保留時間與尾孢醯胺一致的峰(保留時間20.7分鐘)， 確認SANK 11006菌林產生了尾孢醯胺。
附圖簡述
圖l表示利用HPLC來分析由丄ac/2"wm ykscMcms SAKK 19096菌 抹(FERM BP-10338)的發酵液得到的尾孢醯胺時的色譜圖。產業實用性
根據本發明可以製造尾孢醯胺，根據該方法製造的尾孢醯胺，其 本身可以用作藥物的有效成分。另外，該尾孢醯胺作為尾孢醯胺衍生 物的前體也是有用的。
權利要求
1.尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於培養屬於粒毛盤菌屬(Lachnum屬)的菌，並從其培養物中回收尾孢醯胺。
2. 權利要求l的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於粒毛盤 菌屬的菌為至少 一種選自Lac/w羅ykyce5"cmr 、丄0c/2w應"'oZ^fes和 Aac/w麗caeratof訓的菌。
3. 權利要求l的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於粒毛盤 菌屬的菌為至少一種選自Z^c/ "wm /i^cescew SANK 19096菌抹、 丄ac/m簡c一cz'oz'cfe51 SANK 12497菌抹和Z^c/m應caesa/Z^ww SANK 10906菌抹的菌。
4. 尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於培養屬於i^ewdaegehto 屬的菌，並從其培養物中回收尾孢醯胺。
5. 權利要求4的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於 屍化W(iaegm.to屬的菌為T^ewc/aegm'to weZ)敗"'。
6. 權利要求4的尾孢醯胺的製造方法，其特徵在於屬於 屍"M(iaege"'to屬的菌為屍sez^crege"'to w6他n' SANK 11006菌抹。
7. 尾孢醯胺，其是按照權利要求1~6中任一項的製造方法製造的。
8. 藥物，其含有按照權利要求1 6中任一項的製造方法製造的 尾孢醯胺作為有效成分。
9. 丄ac/wwm yksresce"s SANK 19096菌鬥朱。
10. 丄ac/w訓c"/戸.o法5 SANK 12497菌株。
11. 丄ac/m應0^< //加謂SANK 10906菌抹。
12. ，6欲h SANK 11006菌抹。
全文摘要
本發明提供尾孢醯胺(cercosporamide)的製造方法，其特徵在於培養屬於粒毛盤菌屬(Lachnum)的菌和/或屬於Pseudaegerita屬的菌，並從該培養物中回收尾孢醯胺。另外，本發明提供由該製造方法取得的尾孢醯胺。本發明還提供新的微生物即Lachnum fuscescens SANK19096菌株、Lachnum calycioides SANK 12497菌株、Lachnum caesaliatum SANK 10906菌株和Pseudaegerita websteri SANK 11006菌株。
文檔編號A61P31/10GK101292039SQ20068003658
公開日2008年10月22日 申請日期2006年8月8日 優先權日2005年8月9日
發明者三浦正巳, 大隅潤, 小野泰典, 濱野潔, 細矢剛 申請人:第一三共株式會社