一種環孢素a納米粒滴眼液的製備的製作方法
2023-10-07 16:02:59 2
專利名稱：一種環孢素a納米粒滴眼液的製備的製作方法
技術領域：
本發明屬製藥技術領域，特別是涉及一種載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液的製備方法。
背景技術：
環孢素A(CsA)作為一種強效的免疫抑制劑，可有效抑制角膜移植術後免疫排斥反應，但因難溶於水，不能配製成水溶性製劑用於眼局部。曾經採取全身給藥的方法，如口服環孢素A，根據血液中環孢素A濃度的監測，用藥後2小時及M小時均不能達到有效的藥物濃度。同時，該藥物對T細胞的活化有很強的抑制作用，可導致全身免疫力降低，還可以引起高血壓、肝腎毒性、或淋巴瘤等嚴重副作用。目前臨床上最常用的蓖麻油環孢素A滴眼液，因其油狀的性狀和外觀，以及長期放置後的凝固現象，使之不能成為臨床上的理想劑型。為了解決上述問題，研究不含蓖麻油並能提高環孢素A生物利用度的其它液體製劑成為當前的研究熱點，其中包括合成環孢素A修飾後的前體藥物(Jonathan B. Rothbard1, Sarah Garlington1, Qun Lin2'3, etl, Conjugation of arginine oligomers to cyclosporin A facilitates topical delivery and inhibition of inflammation, Nature Medicine. 6(2000) 1253-1257.)以及利用脂質體包載該藥物(Μ. K. Lee，L. Choi,Μ. H. Kim,C. K. Kim,Pharmacokinetics and organ distribution of cyclosporin A incorporated in liposomes and mixed micelles, Int. J. Pharm. 191 (1999)87-93.)等。理想的劑型應具有劑量小、毒性小、副作用小、靶向緩釋等特點。人們為此探索了多種環孢素A藥物輸送系統，如注射用乳劑、脂質體、 環糊精絡合物、水溶性前藥，聚合物微米/納米粒子、膠囊等，其中聚合物納米粒子具有明顯的優勢，比如顆粒小、容易進入細胞而實現高療效；比表面積大、連結或載帶的功能基團或活性中心多，可以實現治療與療效跟蹤同步化；也可以製成靶向藥物，輸送到人體特定器官，減少藥物毒副作用對正常器官或組織的損害；因其具有多孔、中空、多層等結構特性，易於藥物緩釋控制等，可以製成緩釋劑型，改變藥物在體內的半衰期，延長藥物的作用時間。聚乙二醇-聚乳酸共聚物具有良好的生物相容性和生物可降解性，可增強穿透作用，因此被研製成為生物大分子藥物的運送載體，以增強藥物在體內的有效濃度，提高療效。而與其它種類的高分子藥物載體相比，聚乙二醇-聚乳酸共聚物不僅原料豐富，而且具有低成本，可生物降解，良好生物相容性和生物親和性、無毒、易於化學改性等優點。發明人選用聚乙二醇-聚乳酸共聚物為原料，運用載藥納米粒子可提高難溶藥物的溶解性和生物利用度的特點，運用納米技術構建可高效包載疏水藥物CsA的納米粒子載體的特點，製備納米粒滴眼液，具有良好的臨床應用前景。
發明內容
所解決的技術問題
本發明所要解決的技術問題是提供一種環孢素A納米滴眼液的製備方法，以克服現有的環孢素A水溶性差，生物利用度低，毒副作用大等缺陷。技術方案本發明的技術方案之一是提供一種載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液，通過如下製備方法獲得(1)將環孢素A溶於有機溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶於有機溶劑，作為油相；(2)將表面活性劑溶於水中，作為水相。將油相與水相混合後在恆溫下攪拌，製成乳液；(3)將乳液用高壓勻質機進行混勻；(4)乳液用旋轉蒸發儀除去有機溶劑，得到納米粒子懸液；(5)離心，生理鹽水回溶，得到載有環孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；上述的環孢素A納米粒子的優選方案之一為，所述的載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子中聚乙二醇-聚乳酸共聚物與環孢素A的質量比為 2.5 1-100 1。上述的環孢素A納米粒子的優選方案之二為，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子對環孢素A的包封率為32-97%，載藥量為0. 3-38. 8wt%。上述的環孢素A納米粒子的優選方案之三為，所述的表面活性劑、油相的質量比為 O00-4000) (100-5000)。上述的環孢素A納米粒子的優選方案之四為，所述的環孢素A溶液為二氯甲烷溶液，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶液為二氯甲烷溶液。本發明的技術方案之二是提供一種載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子，依次包括如下步驟(1)將環孢素A溶於有機溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶於有機溶劑，作為油相；(2)將油相逐滴加入到機械攪拌的水中，攪拌；(3)乳液用旋轉蒸發儀除去有機溶劑(也可不用懸蒸，直接通過攪拌過夜除去有機溶劑)；(4)離心，生理鹽水回溶，得到載有環孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；上述的環孢素A納米粒子的優選方案之一為，所述的載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子中聚乙二醇-聚乳酸共聚物與環孢素A的質量比為 2.5 1-100 1。上述的環孢素A納米粒子的優選方案之二為，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子對環孢素A的包封率為32-97%，載藥量為0. 3-38. 8wt%。上述的環孢素A納米粒子的優選方案之三為，所述的環孢素A溶液為丙酮溶液，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶液為丙酮溶液。本發明的技術方案之三是提供一種免疫抑制劑，由權利要求1所述的載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子和藥學上可接受的載體組成。本發明所製備的聚乙二醇-聚乳酸共聚物/環孢素A納米粒子可簡稱為Polymer/ CsA NPs0有益效果本發明採用生物降解材料聚乙二醇-聚乳酸共聚物製備包裹環孢素A藥物的納米滴眼液，可避免蓖麻油引起的嚴重的過敏反應以及產生高敏性、神經毒性、腎毒性、心臟毒性等不良反應問題，並且可利用納米粒子的特性，在一定程度上提高藥物在眼部組織的生物利用度，延長藥物的角膜滯留時間，減少用藥次數，降低藥物在眼部或全身的毒副作用。
本發明的載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液採用納米沉澱法及乳化溶劑蒸發法製備，可直接用聚乙二醇-聚乳酸共聚物作為環孢素A藥物的載體，避免了繁瑣和複雜的修飾步驟，操作過程方便，並降低了生產成本，利於推廣。且製備的載藥納米粒子為單分散的規則球體，粒徑控制在100-250nm，無團聚現象。利用本發明的聚乙二醇-聚乳酸共聚物環孢素A納米滴眼液對白兔進行安全性評價，結果表明所製備的載藥納米滴眼液可明顯提高環孢素A的水溶性，使用安全。
圖1為1 %環孢素A納米粒滴眼液的眼刺激性實驗。圖2為環孢素A納米粒滴眼液的高效液相色譜圖。9-lOmin處的特徵吸收峰為CsA藥物的最大吸收峰，用210nm( λ max)檢測。圖3為Polymer/CsA NPs溶於乙腈的高效液相色譜圖。在9-lOmin附近出現了 CsA的特徵吸收峰，可知CsA被成功地包裹進Polymer中。圖4為Polymer/CsA NPs透射電鏡圖。圖4表明，製成的Polymer/CsA NPs為球形粒子，這些粒子分散均勻，且無團聚現象，粒徑範圍控制為四6. 9士32. 06nm。圖5為Polymer/CsA NPs粒徑分析儀圖。圖5表明，製成的Polymer/CsA NPs的粒徑分布較窄，分散性好，無團聚現象。圖6為聚合物PEG-PLA的體外降解曲線。圖6表明，聚合物PEG-PLA經過20天體外降解實驗後，剩餘重量為陽％，聚合物容易降解。圖7為Polymer/CsA NPs的體外釋放曲線。圖7表明，CsA從製成的Polymer/CsA NPs中緩慢釋放，20天左右釋放量達總CsA的90%。本發明的環孢素A納米粒滴眼液，使用方法是，滴入結膜囊內，一次1滴，一日三次。本發明的環孢素A納米粒滴眼液，經家兔單次、多次給藥眼刺激性試驗、最大耐受量試驗，對其毒性進行觀察，結果表明1.環孢素A納米粒滴眼液以濃度單次滴入家兔結膜囊內，連續觀察7天，不引起急性毒性反應，對家兔結膜、角膜、虹膜均無刺激；2.環孢素A納米粒滴眼液以濃度每日3次，連續14天滴入家兔結膜囊內，並繼續觀察7天，不引起急性毒性反應，對家兔結膜、角膜、虹膜均無刺激結果見圖1 ；3. 1 %環孢素A納米粒滴眼液以家兔能耐受的最大體積的藥量，一日內連續滴眼給藥14次，總給藥量為1. 4ml/kg(14mg/kg)，相當於臨床用量的210倍，連續觀察7天，動物未發生死亡，在行為、症狀、體徵等方面未見異常，體重均有增加。環孢素A納米粒滴眼液對家兔體重的影響
權利要求
1.載環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液，通過如下兩種方法獲得方法一(1)將環孢素A溶於有機溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶於有機溶劑，作為油相；(2)將表面活性劑溶於水中，作為水相。將油相與水相混合後在恆溫下攪拌，製成乳液；(3)將乳液用高壓勻質機進行混勻；(4)乳液用旋轉蒸發儀除去有機溶劑，得到納米粒子懸液；(5)離心，生理鹽水回溶，得到載有環孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；方法二 (1)將環孢素A溶於有機溶劑，聚乙二醇-聚乳酸共聚物溶於有機溶劑，作為油相；(2)將油相逐滴加入到機械攪拌的水中，攪拌；(3)乳液用旋轉蒸發儀除去有機溶劑(也可不用懸蒸，直接通過攪拌過夜除去有機溶劑)；(4)離心，生理鹽水回溶，得到載有環孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；
2.根據權利要求1所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物，其特徵在於其數均分子量為 5000Da。
3.根據權利要求1所述，載有環孢素A的納米粒子，其特徵在於，方法一中所述的有機溶劑為二氯甲烷，方法二中所述的有機溶劑為丙酮溶液。
4.根據權利要求1所述，載有環孢素A的納米粒子，其特徵在於，方法一中，所述的油相為聚乙二醇-聚乳酸共聚物和環孢素A二氯甲烷溶液，水相為不同濃度聚乙烯醇溶液；方法二中的所述的油相為聚乙二醇-聚乳酸共聚物和環孢素A丙酮溶液，水相水溶液。
5.根據權利要求1所述，載有環孢素A的納米粒子，其特徵在於，所述的表面活性劑、油相的質量比為 O00-4000) (100-5000)。
6.根據權利要求1所述，載有環孢素A的納米粒子，其特徵在於，所述的載有聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子中聚乙二醇-聚乳酸共聚物與環孢素A的質量比為 2. 5 1-100 1。
7.根據權利要求1所述，載有載有環孢素A的納米粒子，其特徵在於，所述的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米粒子對環孢素A的包封率為32-97 %，載藥量為0. 3-38. Swt %。
8.—種納米滴眼液，其特徵在於，所述的藥物組合由權利要求1中任何一項所述的方法製備得到。
全文摘要
本發明涉及一種聚乙二醇-聚乳酸共聚物載有環孢素A的納米滴眼液，通過如下兩種方法獲得，方法一，將聚合物與環孢素A同溶於有機溶劑中，與含有表面活性劑的水溶液一同磁力攪拌，高壓勻質機破碎，製成乳液，再用旋轉蒸發儀除去有機溶劑，離心，生理鹽水回溶，得到載有環孢素A聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液；方法二；將聚合物與環孢素A同溶於有機溶劑，緩慢滴加到磁力攪拌的水中，製得載有環孢素A的聚乙二醇-聚乳酸共聚物納米滴眼液。本方法所製備的載藥納米滴眼液可明顯提高環孢素A的水溶性。
文檔編號A61K38/13GK102210849SQ20111013968
公開日2011年10月12日 申請日期2011年5月27日 優先權日2011年5月27日
發明者吳雁, 張海娟, 徐清, 遊玉霞, 韓東, 馬科 申請人:北京市眼科研究所