用於HBV治療的PEG-IFNa和利巴韋林的製作方法

2023-10-07 16:22:19 5

專利名稱：：用於HBV治療的PEG-IFNa和利巴韋林的製作方法用於HBV治療的PEG-IFNa和利巴韋林本發明涉及使用對治療慢性B型肝炎有效的一定量的PEG-IFN-a綴合物與利巴韋林(Ribavirin)的聯合來治療慢性肝炎病毒感染的領域。幹擾素(IFN)是天然存在的蛋白質，具有抗病毒、抗增殖和免疫調節的活性。已知在人中存在四種不同類型的幹擾素(Pestka等人，(1987)Ann.Rev.Biochem.f^，727-777和Emanual&Pestka(1993)J.Biol.Chem.268,12565-12569)。IFNa家族代表由被刺激的外周血白細胞細胞系(Pestka等人，loc.cit.;Havell等人，(1975)Proc.Natl.Acad.Sci.USA2，2185-2187;Cavalieri等人，(1977)Proc.Natl.Acad.Sei.USA21，3287-3291)、類淋巴母細胞細胞系和類原粒細胞細胞系(Familletti等人，(1981)Antimicrob.Agents.Chemother.^，5-9)產生的主要類型的幹擾素。實現IFNa的抗病毒效果不僅通過直接影響病毒自身，而且通過在防止病毒感染的意義上對它們的靶細胞的作用。幹擾素可以影響癌症胂瘤並且影響機體的免疫系統，即例如，活化巨噬細胞和NK細胞並增強細胞膜的多種免疫有效成分的表達。製備幹擾素-cDNA及其直接表達(特別是在大腸桿菌中)的細節，已經是許多出版物的主題。因此，例如，重組幹擾素的製備是已知的，例如參見Nature^(1982)，503-508，Nature言(1980)，326-320，Nature塑(1981)，20-26，NucleicAcidsRes.絲(1980)，4057-4074，以及歐洲專利號No.32134，43980和211148。在慢性B型肝炎中，利巴韋林與標準幹擾素a的聯合誘導CD4+T-細胞持續增殖和Thl細胞因子釋放，這增強了持續根除HBV的可能性(MARico,JAQuiroga,DSubira，SCastanon，JMEsteban，MPardo，VCarreno:HepatitisBvirus-specificT-cellproliferationandcytokinesecretioninchronichepatitisBeantibody-positivepatientstreatedwithribavirinandinterferonalpha.份/7fl油gy2001,33:295-300)。在初步研究中，24名HBeAg-陰性的慢性B型肝炎患者用標準幹擾素(5MU每周三次)和利巴韋林(每天1000-1200mg)聯合治療了12個月[TCotonat，JAQuiroga，JMLopez-Alcorocho，RClouet,MPardo,FManzarbeitia,VCarreno:PilotstudyofcombinationtherapywithribavirinandinterferonalfafortheretreatmentofchronichepatitsBeantibody-positivepatients.好印"Mtosv2000，31:502-506。所有患者均是以前對幹擾素單一治療的無反應者。在這些難以治療的群體中，12個月後的隨訪病毒學反應(PCR檢測HBVDNA陰性)在50%的患者中實現，21%的患者中ALT正常[TCotonat,JAQuiroga，JMLopez-Alcorocho,RClouet,MPardo，FManzarbeitia,VCarreno:PilotstudyofcombinationtherapywithribavirinandinterferonalfafortheretreatmentofchronichepatitsBeantibody-positivepatients.i7印"to/0^;2000，31:502-506]。因此，該治療並非總是有效的。因此，PEG-IFN-a綴合物與利巴韋林的聯合治療可以比IFN-a與利巴韋林的聯合治療更有效。已經觀察到，在IFN-a的情形中，加入聚乙二醇(PEGylation)增加了循環半衰期和血漿殘留時間，降低了免疫原性，減少了清除並增加了體內活性。因此，本發明提供了PEG-IFN-a綴合物與利巴韋林聯合用於製備治療慢性B型肝炎感染藥物中的應用。此外，本發明還提供了在需要治療慢性B型肝炎感染的患者中治療慢性B型肝炎感染的方法，該方法包括施用對治療慢性B型肝炎有效的一定量的PEG-IFN-a綴合物與一定量的利巴韋林的聯合。本發明還提供了包括PEG-IFN-a綴合物與利巴韋林的試劑盒，用於治療慢性B型肝炎感染。優選的，所述慢性B型肝炎是HBeAg-陰性或HBeAg-陽性的慢性B型肝炎。更優選的，所述的慢性B型肝炎是HBeAg-陰性的慢性B型肝炎。患者或者是以前未接受過治療的患者，或以前用IFN-a和/或利巴韋林或任何其它藥物治療，但隨後復發的患者，或對以前的IFN-a和/或利巴韋林或任何其它藥物治療的無反應者。優選的，患者是以前對幹擾素單一療法的無反應者。使用B型肝炎e抗原(HBeAg)區分由野生型HBV引起的HBeAg-陽性的慢性肝炎，和由天然存在的HBV變體引起的HBeAg-陰性的慢性肝炎，所述變體具有在基因組的前核心或/和基本核心啟動子區域的突變。已經認識到，最近十年間，HBeAg-陰性的慢性肝炎在很多國家都在增長，而且代表了很多國家中的主要病例。該類型的B型肝炎一般與更嚴重的肝病聯繫在一起，所述肝病具有極低自然康復率和對抗病毒治療的低持續應答率。本文使用的術語"PEG-IFN-a綴合物"包括源自任何天然材料(例如，白細胞、成纖維細胞、淋巴細胞)或來自所述天然材料的材料(例如，細胞系)的IFN-a，或那些用重組DNA糹支術製備的IFN-a。克隆IFN-aA其直接表達(特別是在大腸桿菌中)的細節已經是很多出版物的主題。重組IFN-a的製備是已知的，例如參見Goeddel等人，(1980)Nature巫，316-320和(1981)，Nature290,20-26，以及歐洲專利號No.32134，43980和211148。有許多類型的IFNa，例如IFNaI、IFNa2，並且另外它們的亞型，包括但不限於IFNa2A、IFNa2B、IFNa2C和IFNaII(也稱為IFNaII或a-IFN)。術語"IFNa"也包括來自Amgen的共有IFNa(consensusIFNa)，或WO01/25438或WO2004/046356中公開的天然和/或重組的IFNa或IFNa變體的混合物。使用IFNa2A是優選的。歐洲專利號No.43980和211148中已經描述了IFNa2A的製備。IFNa與多聚物如聚亞烷基二醇(取代或非取代的)綴合，例如，與聚乙二醇綴合形成PEG-IFN-a綴合物。可以通過本領域已知的各種連接體實現綴合，特別的，通過例如在歐洲專利申請公開號No.0510356、593868和809996中公開的那些。聚合物(優選的聚乙二醇)的分子量可以在300至70000道爾頓之間，可以綴合一個或多個，優選的1個至3個聚合物到IFN-a上。優選的PEG-IFN-a綴合物具有式formulaseeoriginaldocumentpage8其中R及R'是甲基，X是NH，n和n'分別或兩者都是為420或520。利巴韋林，l-(3-D-呋核亞硝脲(Ribofuranosyl)-lH-l，2，4-三唑-3-氨甲醯，描述在默克索引，化合物No.8199，第11版中。其製備和配製描述在美國專利號No.4.211.771中。實施本發明的聯合治療的PEG-IFN-a的劑量是，不論體重，每周約33至540毫克(mcg),每周給藥一次或兩次。實施本發明的利巴韋林的劑量是，每天約400至1200毫克，每周至少五天，優選的每周7天。基於患者體重在40至150kg之間的假設，劑量範圍因此為每天每千克體重10至30毫克之間。在更具體的實施方案中，利巴韋林的每日劑量為800至1200毫克，更優選的1000至1200毫克。該每日劑量可以以單劑量每天一次性施用，也可以以分劑量每天2次或3次施用。優選的，利巴韋林的日劑量以分劑量每天2次施用。根據本發明，利巴韋林與PEG-IFN-a綴合物聯合施用給患者，即，在患者接受利巴韋林劑量的相同或不同時段中，施用PEG-IFN-a綴合物劑量。在本發明的實施方案中，在至少一次劑量的PEG-IFN-a綴合物的同一周內，施用至少一次日劑量的利巴韋林。在更具體的實施方案中，大多數利巴韋林施用與一次或多次PEG-IFN-a施用發生在同一周內。在另一個具體的實施方案中，所有的或幾乎所有的利巴韋林施用都與一次或多次PEG-IFN-a施用在同一周內發生。目前，口月良施用PEG-IFN-a綴合物製劑是無效的，因此優選的PEG-IFN-a綴合物施用方法是腸胃外的，優選的通過皮下(sc)或肌內(im)注射。利巴韋林可以膠嚢劑或片劑形式口服施用，結合腸胃外施用PEG-IFN-ct綴合物。當然，兩種藥物的其它可用施用方式也是可預期的，例如通過鼻腔噴霧、經皮膚的、通過栓劑、通過緩釋劑型等。只要遞送了合適劑量而不會破壞活性成分，任何施用形式都將有效。通過聯合治療對比單一療法和/或IFN-a與利巴韋林的聯合治療的受控制的臨床實驗，可以測定治療的效果。在聯合治療對於減輕'艮性B型肝炎，優選的HBeAg-陰性或HBeAg-陽性的慢性B型肝炎感染，更優選HBeAg-陰性的慢性B型肝炎感染的徵兆和症狀中的功效，以及副作用的頻率和嚴重程度上，與以前的IFN-oc單一療法和/或IFN-a和利巴韋林的聯合治療相比較。三組患有慢性B型肝炎感染(優選的HBeAg-陰性或HBeAg-陽性，更優選的HBeAg-陰性的慢性B型肝炎)的群體與評估相關。研究患者群體的其中之一或全部三個，其具有下列組合1、以前未治療的患者。2、以前用IFN-a和/或利巴韋林或其它任何藥物治療過但隨後復發的患者。3、對以前的IFN-a和/或利巴韋林或其它任何藥物治療無反應的患者。通過前述的慢性B型肝炎(優選的HBeAg-陰性或HBeAg-陽性，更優選的HBeAg-陰性的慢性B型肝炎)的徵兆和症狀減輕的程度確定聯合治療的效果。實施例該研究的主要目的是比較具有PEG-IFN-a2A的PEG-IFN-a2A和利巴韋林的聯合在治療HBeAg-陰性的慢性B型肝炎中的效果和安全性。等數患者(每治療組61名患者)接受48周的PEG-IFN-a2A與利巴韋林的聯合、或PEG-IFN-a2A。第三患者組(165名患者)接受48周的PEG-IFN-a2A加安慰劑。單治療組為PEG-IFN-a2A聯合組提供安全性和效果的比較。與利巴韋林或安慰劑聯合，PEG-IFN-a2A的劑量是180照，每周皮下(sc)施用一次，進4亍48周。利巴韋林的劑量根據體重是每天1000mg或1200mg，以分劑量施用。患者體重<75kg(165lbs)，每天接受1000mg(早上400mg和晚上600mg)，而患者體重275kg的每天接受1200mg(早上600mg和晚上600mg)。主要的效果參數是，在未治療的隨訪期結束時組合的持續病毒學[即，AMPLICORPCR(靈敏度2100拷貝/ml)測定的HBV-DNA水平〈104拷貝/ml]和生物化學(血清ALT濃度正常化)反應。患者必須在第68周和72周均有正常的血清丙氨酸M轉移酶活性(ALT)，以及在第72周沒有可檢測的病毒，則所述患者被認為是有反應者。在篩選中、基線時、48周治療時期的第1、2、4、6和8周以及之後每4周都進行安全性評估。在隨後的24周隨訪期內繼續安全性評估。安全性的測量包括不利事件、生命體徵、實驗室測試和劑量調整表格，以及由於安全性或耐受性原因從治療提前撤出。在i^A本實驗的前6個月內沒有治療HBV、在前30天內沒有用任何試驗藥治療的，18周歲或以上的男性和女性HBeAg-陰性的慢性B型肝炎患者，構成患者群體。患者必須有可計量的HBV-DNA，在隨機化前的2個月內有兩次異常的ALT水平(允許之間有正常的ALT值)，在12個月內肝活組織檢查與HBeAg-陰性的慢性B型肝炎一致。排除了患有其它形式肝病、共感染了HCV、丁型肝炎或人免疫缺乏病毒(HIV)、肝細胞癌、已存在嚴重抑鬱或其它精神病、心臟病、腎病、癲癇發作、或嚴重的視網膜病變等的患者。在實驗的治療部分(48周)之前，有長達4周的篩選期(時間從第一次篩選評估到第一次測試藥物施用)。符合所有合格標準的患者被隨機分到兩個治療計劃中任一個。以隨訪末期的初步結果作為下列效能分析(附錄C)的基礎。PEG-IFN單一療法的估計的反應率是30%，聯合治療的為55%。通過成對比較隨訪末期反應率來解決主要的研究問題。成對的顯著水平被設定為a=0.05(雙側檢定)。效能被設定為80%。將中斷治療的計算為隨訪末期的無反應者。使總數隨機化為:tableseeoriginaldocumentpage11權利要求1.PEG-IFN-α綴合物與利巴韋林聯合用於製備治療慢性B型肝炎感染的藥物的應用。2.權利要求1的應用，其中所述慢性B型肝炎感染是HBeAg-陰性或HBeAg-陽性的慢性B型肝炎感染。3.權利要求1的應用，其中所述慢性B型肝炎感染是HBeAg-陰性的慢性B型肝炎感染。4.根據權利要求1至3的任一項的應用，其中PEG-IFN-a綴合物的量是約每周33至540mcg。5.根據權利要求1至4的任一項的應用，其中利巴韋林的量是每天400至1200mg。6.根據權利要求1至5的任一項的應用，其中PEG-IFN-a綴合物是具有以下式的PEG-IFN-a2A綴合物其中R和R'是甲基，X是NH,並且n和n'分別是或二者都是420或520。7.治療慢性B型肝炎感染的方法，其包括施用對慢性B型肝炎有效的一定量的PEG-IFN-a綴合物與一定量的利巴韋林的聯合。8.權利要求7的方法，其中所述慢性B型肝炎感染是HBeAg-陰性或HBeAg-陽性的慢性B型肝炎感染。9.權利要求7的方法，其中所述慢性B型肝炎感染是HBeAg-陰性的慢性B型肝炎感染。ROCH2CH2(OCH2CH2)n—e—NHR'OCHsCH^OCH^H^if-O—C—NHO210.根據權利要求7或9的方法，其中所述方法中施用的PEG-IFN-ot綴合物的量是約每周33至540mcg。11.根據權利要求7至10的任一項的方法，其中所述方法中施用的利巴韋林的量是每天400至1200mg。12.權利要求7至11的任一項的方法，其中PEG-IFN-a綴合物是具有以下式的PEG-IFN-a2A綴合物其中R和R'是甲基，X是NH，並且n和n，分別是或二者都是420或520。13.用於治療慢性B型肝炎感染的包括PEG-IFN-a綴合物和利巴韋林的試劑盒。14.權利要求13的試劑盒，其中所述慢性B型肝炎感染是HBeAg-陰性或HBeAg-陽性的慢性B型肝炎感染。15.權利要求14的試劑盒，其中所述慢性B型肝炎感染是HBeAg-陰性的慢性B型肝炎感染16.根據權利要求13至15的任一項的試劑盒，其中PEG-IFN-a綴合物的量是約每周33至540mcg。17.根據權利要求13至16的任一項的試劑盒，其中利巴韋林的量是每天400至1200mg。18.根據權利要求13至17的任一項的試劑盒，其中PEG-IFN-a綴合物是具有以下式的PEG-IFN-a2A綴合物ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O-c—MHOO其中R和R'是甲基，X是NH，並且n和n'分別是或二者都是420或520。19.在上文中描述的發明。全文摘要本發明提供了PEG-IFN-α綴合物與利巴韋林聯合在治療慢性B型肝炎感染中的應用。本發明還提供了在需要治療慢性B型肝炎感染的患者中治療慢性B型肝炎感染的方法，包括施用對治療慢性B型肝炎有效的一定量的PEG-IFN-α綴合物與一定量的利巴韋林的聯合。文檔編號A61K31/7056GK101242857SQ200680029339公開日2008年8月13日申請日期2006年8月3日優先權日2005年8月15日發明者H·L·A·詹森,M·波佩斯庫,N·普拉克申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司