馬齒莧提取物、溶液及其製備方法和應用的製作方法

2023-10-06 05:06:14

專利名稱：馬齒莧提取物、溶液及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明具體的涉及馬齒莧提取物、溶液及其製備方法和應用。
背景技術：
在化妝品及個人洗護用品中使用的一些組分如表面活性劑、香精、防腐劑及一些功效成分可能是刺激性的，特別是對「皮膚敏感」的人群。例如，表面活性劑十二烷基硫酸鈉作為化妝品配方的表面活性劑，在一定濃度下可偶然引起皮膚刺激。再例如，乙醇酸，是果酸的一種，應用於化妝品中，可使皮膚表皮表層之黏膠性脂質鬆軟，以利去除老舊角質，有加速細胞再生、減少皮膚皺紋及疤痕，增加皮膚光澤、美白等有益作用。但是，高濃度的甘醇酸具有一定的刺激性，可偶然引起皮膚刺激，有些人使用後會有紅斑點的過敏反應。由此可見，當產品配方中的組分是防腐、乳化或其他功能原因所必需時，而這些組分又會引起皮膚刺激時，找到一些能抵抗刺激的物質成為最關鍵的問題。目前在化妝品和個人洗護用品中常用的抗刺激物質有激素類藥物，但是，間斷性或長期使用激素可使皮膚產生嚴重的依賴，並可使皮膚發生萎縮變薄、毛細血管擴張(紅血絲)、硬化、喪失保水功能而產生紅腫、過敏、瘙癢、變黑、長毛、粉刺等不可逆轉的後果。甘草酸及其衍生物是眾所周知的具有抗炎症效果的天然物質，但是甘草酸及其衍生物穩定性較差且溶解度不好，實際使用時由於其濃度限制而無法達到預想效果。到目前為止，眾所周知的抗刺激劑不管是皮膚安全性方面還是化妝品原料的搭配的安全性方面大部分都存在問題所以使用受到限制。因此，找到一種實際使用效果良好，且可以抗刺激、抗過敏，且無副作用的純天然植物原料應用於化妝品和個人洗護用品顯得尤為重要。馬齒莧(Portulaca oleracea L.)又名馬齒草、長壽菜、五行草等，為馬齒莧科一年生肉質草本植物，廣布於全世界溫帶和熱帶地區，被醫藥界和食品界公認的一種「藥食同源」的植物。我國歷代本草醫書對馬齒莧都有記載馬齒莧具有清熱解毒、涼血止血的功能， 用於熱毒血痢、癰腫疔瘡、溼疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血、痔血和崩漏下血。現代藥理研究表明馬齒莧具有抗菌、抗炎消腫、鬆弛肌肉、降血脂和抗動脈粥樣硬化、抗衰老等作用。金英子等(金英子，張紅英等，馬齒莧提取物的抗炎消腫及鎮痛作用 [J].延邊大學醫學學報，2008,31 ) :258 沈0)的研究表明馬齒莧乙醇水溶液提取物可以有效抑制二甲苯及巴豆油所致小鼠耳廓腫脹，具有抗炎消腫及鎮痛作用。馮芳等(馮芳，丁志健，劉俊.馬齒莧對大鼠潰瘍性結腸炎的治療作用[J]·中草藥，2004，35 (7) 197) 的研究表明馬齒莧乙醇提取物可提高大鼠結腸組織中超氧化物歧化酶(SOD)，降低丙二醛 (MDA)含量，從而使結腸黏膜組織急性損傷程度減輕，具有明顯抗炎效果，且病理學研究結果顯示，馬齒莧醇提物對於潰瘍面的癒合具有明顯的修復作用。由上述可見，關於馬齒莧提取物的抗炎效果已有報導，但是關於馬齒莧提取物的主要組成成分及起到抗炎作用的成分沒有進行詳細報導。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供了一種與現有技術不同的馬齒莧提取物，馬齒莧提取物溶液及其製備方法。本發明的方法可高產率的製得有效成分含量較高的馬齒莧提取物，適於工業化。本發明製得的馬齒莧提取物含有生物鹼類和黃酮類物質，可作為抗刺激、抗過敏功效成分應用於化妝品，且具有防乾燥、增加皮膚舒適度，清除自由基、抗衰老等功效。本發明採用純水與乙醇溶液結合的方法充分提取馬齒莧的有效成分，然後對有效成分進行分離，得到不同組分，通過對不同組分進行分析研究，並通過高效液相-質譜聯用的檢測方法對提取物的組成成分進行鑑定，結果表明生物鹼類物質主要有馬齒莧醯胺 A、B、C、D、E及N-反式阿魏醯基酪胺、尿囊素等。且對提取物的功效進行研究，將馬齒莧生物鹼、黃酮提取物及兩者的混合提取物分別進行斑貼試驗，驗證其抗刺激功效，結果表明 生物鹼和黃酮的混合提取物的抗刺激效果最佳。因此，本發明涉及一種馬齒莧提取物的製備方法，其包含下列步驟步驟(1)將馬齒莧鮮草和/或乾草用水(優選純水)和水解酶進行提取和酶解； 所述水解酶包括複合植物水解酶、纖維素酶等果膠裂解酶或碳水化合物酶類；所述的水解酶的用量為馬齒莧鮮草和/或乾草與水和水解酶形成的水溶液的0. 0. 5% (W/V)；步驟O)將步驟(1)所得料液進行醇提，固液分離，得提取液A與濾渣；步驟(3)將步驟( 所得濾渣進行醇提，固液分離，得提取液B與濾渣；步驟(4)將步驟(3)所得濾渣用水提取，固液分離，得提取液C ；步驟(5)將步驟(2)、(3)和(4)所得提取液A、B和C合併，濃縮，靜置，過濾，得濾液，即可。較佳的，步驟(5)中，在過濾後，調節濾液的料液比重至相對密度為1.020 1. 030 (250C )，得馬齒莧提取物原液，即可。步驟(5)中，所述的濾液或馬齒莧提取物原液可根據需要，按照本領域常規方法進行進一步純化處理，製得純化程度更高的馬齒莧提取物，如馬齒莧提取物乾粉。本發明中，所述的馬齒莧鮮草和/或乾草為使用原料，鮮草為新鮮採摘或經過冷藏儲存的鮮草，乾草為鮮草除去水分後的乾燥品，本發明可以其中一種為原料，也可以任意比例的混合物為原料；進一步地，所述鮮草和或乾草各自經提取後，提取物可分別利用，也可混合後利用。所述鮮草和或乾草作為原料的使用方式沒有特殊要求。本發明中，所述步驟(1)的提取操作可為本領域常規操作和條件。步驟⑴中，所述的水與馬齒莧鮮草和/或乾草的質量比較佳的為0.5 1 3 1，所述酶的用量為0. 0.5% (W/V)。所述提取和酶解的溫度較佳的為30°C 55°C。所述提取和酶解的時間較佳的為Ih 池。所述步驟O)的提取操作可為本領域常規操作和條件。一般來說，是將步驟(1) 所得料液加入醇，進行醇提，固液分離，得提取液A與濾渣。步驟O)中，所述的醇提所用的醇可為乙醇或60% (V/V)以上的乙醇水溶液。所述的醇提中，所用的醇與步驟(1)所得料液的質量比可為常規醇提所用的質量比，較佳的為1 2 1 6。固液分離前的料液中乙醇的濃度較佳的達到30 80% (V/V)。所述醇提取的溫度較佳的為40°C 70°C。所述醇提取中，提取的時間較佳的為Ih 池。所述固液分離為本領域常規操作，一般進行過濾即可。步驟⑵較佳的包含下列步驟向步驟⑴所得料液中加入乙醇或60% (V/V)以上的乙醇水溶液，調節最終料液中乙醇的濃度達到30 80% (V/V)，繼續攪拌提取，之後固液分離，得提取液A與濾渣。所述步驟(3)的提取操作可為本領域常規操作和條件。步驟(3)中，所述的醇提所用的醇可為濃度達到30 80% (V/V)的乙醇水溶液。 所述的醇提中，所用的醇與步驟(2)所得濾渣的質量比較佳的為1 2 1 6。所述醇提取的溫度較佳的為40°C 70°C。所述醇提取中，提取的時間較佳的為Ih 池。所述固液分離為本領域常規操作，一般進行過濾即可。本發明中，所述步驟的提取操作可為本領域常規操作和條件。步驟(4)中，所用的水與步驟(3)所得濾渣的質量比較佳的為1 2 1 6。所述水提取溫度較佳的為40°C 70°C。所述的水提取中，提取的時間較佳的為Ih 池。所述固液分離為本領域常規操作，一般過濾即可。本發明中，所述步驟(5)中除去乙醇的方式為本領域常規方式，較佳的為減壓蒸溜。步驟( 中濃縮為本領域常規操作。所述濃縮較佳的為濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比<5%。所述濃縮的方式較佳的為減壓濃縮。其中，所述減壓濃縮的條件較佳的為真空度-0. 08mpa -0. lmpa，溫度 50°C 70"C。所述步驟(5)中靜置的溫度較佳的為2。C 10°C，靜置的時間較佳的為他以上。所述步驟(5)中的過濾可為一般過濾操作即可。本發明中，較佳的，所述的馬齒莧提取物的製備方法還可包含下列步驟步驟 (6)，或者步驟(6)和(7)，或者步驟(6)、(7)和(8)，或者步驟(6)、(7)、(8)和(9)，或者步驟(6)、(7)、(8)、(9)和(10)；各步驟如下步驟(6)將步驟(5)所述馬齒莧提取物原液調節pH值為4 6，並向其中加入明膠水溶液，保溫攪拌，攪拌結束加入助濾劑，繼續保溫攪拌，之後將料液在室溫(20 30°C ) 靜置，然後過濾除去沉澱，得濾液D ；所述的明膠水溶液的加入量為馬齒莧提取物原液體積的5% 10% ；所述明膠水溶液的濃度為0. 2% 1. 0% ；所述加入明膠水溶液後的保溫攪拌時間為0.證 lh，溫度為40°C 60°C;所述加入助濾劑後的保溫攪拌時間為0.證 lh， 溫度為40°C 60°C ；步驟(7)將步驟(6)所得濾液D通過超濾膜進行純化，收集透過液，得到馬齒莧提取物初步純化液；步驟(8)將步驟(7)所得馬齒莧提取物初步純化液上大孔吸附樹脂柱吸附，之後用純水洗脫至無多糖，棄洗脫液；之後再以乙醇水溶液洗脫至無黃酮，收集洗脫液E ；其中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇水溶液的濃度為50% 80% (V/V)；步驟(9)將步驟(8)所得洗脫液E進行脫色，過濾，濾液除去乙醇，濃縮至相對密度為1. 100 1. 300 (250C )，得到馬齒莧鮮草和或乾草提取物純化溶液；所述步驟(9)中脫色劑用量為洗脫液體積的0. 5% 2. 0% (W/V)，脫色溫度為30°C 60°C，脫色時間為 0. 5h 2h ；步驟(10)將馬齒莧鮮草和或乾草提取物純化溶液除去水分，之後進行乾燥得到馬齒莧提取物乾粉。本發明中，所述步驟(6)中調節溶液的pH值可採用弱的有機酸和/或無機酸，所述無機酸可為鹽酸和/或醋酸等。步驟(6)中所述助濾劑為本領域常用助濾劑，如硅藻土、活性陶土或活性白土等本領域常用助濾劑。步驟(6)中，所述室溫靜置的靜置時間較佳的為他以上。步驟(6)中，所述過濾為本領域常用的一般過濾等方法。本發明中，步驟(8)中馬齒莧提取物初步純化液與大孔吸附樹脂柱的用量及吸附時間本領域技術人員可根據具體使用的大孔吸附樹脂合理選擇。步驟(8)中馬齒莧提取物初步純化液的吸附流速較佳的為lBV/h !3BV/h，更佳的為lBV/h。本發明中，所述步驟⑶中大孔吸附樹脂較佳的為D101、AB_8或ADS-17等。其中， 所述的弱極性大孔吸附樹脂以及非極性大孔吸附樹脂為本領域常規技術術語，是大孔吸附樹脂根據分子結構及極性大小進行的分類。本發明中，所述步驟(8)中純水洗脫速度較佳的為lBV/h !3BV/h，更佳的為IBV/ h。本發明中，所述步驟(8)中純水洗脫至洗脫液無多糖的檢測方式較佳的為α -萘酚法和/或菲林試劑法。所述α-萘酚法與菲林試劑法均屬於本領域常規方法。本發明中，所述步驟⑶中乙醇水溶液的濃度為50% 80% (V/V)，洗脫速度較佳的為lBV/h !3BV/h，更佳的為lBV/h。步驟(8)中，所述乙醇水溶液洗脫至洗脫液無黃酮的檢測方式較佳的為鹽酸-鎂粉顯色法。所述鹽酸-鎂粉比色法屬於本領域常規測定黃酮方法。本發明中，所述步驟(9)中洗脫液的脫色可採用活性炭等本領域常用脫色劑。步驟(9)中，過濾為本領域常用的一般過濾方法。除去乙醇的方式為本領域常規方式，較佳的為減壓蒸餾。所述的濃縮為本領域常規操作，所述濃縮較佳的為濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比<5%。所述濃縮的方式較佳的為減壓濃縮。其中，所述減壓濃縮的條件較佳的為真空度-O. 08mpa -0. lmpa，溫度50°C 70°C。本發明中，步驟(10)中，所述除水的方式較佳的為減壓濃縮。所述乾燥方式較佳的為真空乾燥、冷凍乾燥或噴霧乾燥。因此，本發明進一步涉及上述製備方法製得的馬齒莧提取物。本發明中，按照上述馬齒莧提取物的製備方法，步驟(10)得到的馬齒莧提取物乾粉中，總生物鹼含量可達到0.02% 0. 10% (W/W)，總黃酮類含量可達到10. 0^-30% (W/W)。以上百分比均為生物鹼類物質或黃酮類物質佔提取物總量的質量百分比。本發明還涉及一種馬齒莧提取物溶液的製備方法，包括如下步驟①按照前述馬齒莧提取物的製備方法中的步驟(1) (9)製得馬齒莧鮮草和/或乾草提取物純化溶液；②將步驟①所得馬齒莧鮮草和/或乾草提取物純化溶液調節pH值至4. 0 6. 0，然後加入穩定劑，使最終溶液中穩定劑的體積百分比為0 40% (V/V)，並按照配製後溶液體積0.01% 0.15% (W/V)的量加入防腐劑，之後進行保安過濾，分裝，得到馬齒莧鮮草和或乾草提取物溶液；所述的保安過濾為本領域常用的微孔濾芯過濾法。本發明中，所述步驟②中調節溶液的pH值可採用鹽酸、醋酸等弱的有機酸和無機酸。本發明中，所述步驟②中的穩定劑為常規的水溶性穩定劑，如乙醇、丙二醇和正丁醇等水溶性有機溶劑中的一種或多種。本發明中，所述步驟②中的防腐劑較佳的包括山梨酸和/或其鉀鹽、尼泊金酯和 LIQUID GERMALL PLUS等常用防腐劑。其中，各種防腐劑的用量均可為常規用量。山梨酸及其鉀鹽常規用量可為 0. 05% 0. 15% ；尼泊金酯類常規用量可為0. 01% 0.03% ；LIQUIDGERMALL PLUS常規用量可為0. 10% 0. 15%。(以上百分比均為W/V)(防腐劑的加入量按配製後液體總量計算，W/V)。本發明中，所述步驟②中所述的保安過濾為本領域常用的微孔濾芯過濾法，所述的微孔濾芯較佳的為0. 22 μ m微孔濾芯。因此，本發明還涉及上述馬齒莧提取物溶液的製備方法製得的馬齒莧提取物溶液。本發明的馬齒莧提取物溶液中，總生物鹼含量可達到:3mg/kg 15mg/kg，總黃酮類含量可達到0. 2% 0. 5% (W/W)。本發明中，所述總生物鹼的檢測方法參照王仲英等(王仲英，李香蘭等，馬齒莧總生物鹼的測定[J]. 2001,32(2) :197 198)的測定方法以咖啡因醇溶液為標準品，質量濃度為1. Omg/ml ；用刻度移液管準確移取一定量的咖啡因醇溶液置於IOml比色管中，再分別加入Iml濃度為7. 2X 10_4mol/L的溴甲酚氯緩衝溶液和2ml無水乙醇溶液。用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，用Icm的比色皿以試劑空白為參比，于波長634nm處測定絡合物的吸光度值，以測定結果計算標準曲線。準確稱取或量取提取物，按標準曲線檢測方法操作，測定其在634nm處的吸光度值，根據標準曲線計算提取物中總生物鹼含量。本發明中，所述總黃酮的測定方法為以蘆丁為標準品，30%體積濃度乙醇超聲溶解，配製標準溶液；取適量標準溶液，加入5%質量濃度NaNO2水溶液，靜置5min，加入10% 質量濃度Al (NO3) 3的水溶液，靜置6min，加入濃度lmol/L的NaOH，加入30%體積濃度的乙醇，80°C水浴lOmin，同時以不加10%質量濃度Al (NO3) 3的反應體系作為空白對照，以調節分光光度計零點，待反應結束後，在510nm處測定吸光度值，以吸光度值為縱坐標，蘆丁含量為橫坐標，繪製標準曲線。準確稱取提取物，30%乙醇溶解，作為待測液，取適量待測液， 按標準曲線檢測方法操作，測定其在510nm處的吸光度值，根據標準曲線計算提取物中總黃酮含量。本發明還涉及上述馬齒莧提取物或馬齒莧提取物溶液在製備化妝品或個人洗護用品的應用。其中，所述的化妝品或個人洗護用品較佳的為抗過敏或抗刺激的化妝品或個人洗護用品。在不違背本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
本發明所用試劑和原料均市售可得。本發明的積極進步效果在於(1)本發明馬齒莧鮮草和或乾草提取物製備方法採用生物酶解技術進行提取，提高有效產物的收率。(2)本發明的馬齒莧鮮草和或乾草提取物製備方法採用一定濃度的乙醇水溶液和純水溶液聯合提取法，充分提取馬齒莧中的有效成分。(3)本發明馬齒莧鮮草和或乾草提取物製備方法採用超濾和樹脂吸附的工藝進行有效成分的富集。(4)本發明馬齒莧鮮草和或甘草提取物製備方法採用脫味、脫色工藝使所得產品具有高濃度有效成分的同時亦無味道、顏色等困擾。(5)本發明的馬齒莧鮮草和或乾草提取物可以製備成乾粉狀態，便於產品的運輸保存，且粉末水溶性良好。(6)本發明中，所述馬齒莧鮮草和/或乾草提取物具有有明顯的抗刺激、抗過敏功效，同時其又具有抑制頭屑(抗真菌)；消腫止癢；冬季防乾燥，增加皮膚舒適度；清除自由基、抗衰老的功效。可作為純天然植物原料應用於化妝品、個人洗護用品。
具體實施例方式下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。下述實施例中，除特殊說明外，百分比均為質量百分比。實施例1馬齒莧鮮草和或乾草提取物乾粉的製備方法採摘的馬齒莧鮮草浸沒在常溫(30°C以下)飲用水中漂洗至無泥土及其它雜質。 撈出、浙幹水分。將洗滌乾淨的馬齒莧鮮草500kg，利用膠體磨進行粉碎，形成漿狀物。向該漿狀物中加入250L純水，攪拌，加熱升溫至45°C，向其中加入複合植物水解酶0. 5L(諾維信公司出品)，保溫酶解汕。保溫酶解結束，向料液中補加60%乙醇，調節最終料液中乙醇含量達40%。在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至50°C，保溫攪拌提取lh，保溫提取結束，料液過濾，得濾液A，待濃縮脫醇。復向濾渣中加入1800L體積百分比為40%乙醇水溶液，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至50°C，保溫攪拌提取1. Oh,保溫提取結束，料液過濾，得濾液B，待濃縮脫醇。復向二次提取剩餘濾渣中加入2500L純水，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至50°C，保溫攪拌提取lh，保溫提取結束，料液過濾，得濾液C，待濃縮，棄殘渣。將濾液A、B、C合併，進行減壓濃縮，濃縮溫度70°C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。將脫醇後的濃縮液調節相對密度至1. 024(25°C )，即為馬齒莧提取原液。
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將「馬齒莧提取原液」加熱升溫至40°C，然後，向其中加入鹽酸調節原液PH =
4.2，向原液中加入其體積量5% (V/V)的明膠水溶液(明膠水溶液濃度0. 2% )，保溫攪拌
0.5h0保溫結束，向上述原液中加入原液體積1 % (W/V)助濾劑硅藻土，攪拌30min後，將料液靜置、室溫沉降他。然後用板框進行過濾，濾液為酒紅色透明、澄清溶液。濾渣棄去。上述濾液過超濾膜(截留分子量為10000道爾頓)，收集透過液。透過液上DlOl 大孔吸附樹脂柱，全部通過大孔樹脂吸附柱後(吸附速度為lBV/h)，用純水衝洗大孔吸附樹脂柱，洗脫速度為1.0BV/h，至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止(即生成磚紅色沉澱， 下同)，洗脫液棄去。用體積百分比為50%的乙醇溶液洗脫至洗脫液無黃酮(洗脫速度為 lBV/h)，收集洗脫液，減壓濃縮。向上述濃縮液中加入其體積0.5% (W/V)的活性炭，攪拌，將料液加熱升溫至 40°C，保溫脫色0. 5h。脫色結束，進行過濾，濾液顏色近無色澄清、透明液體。濾液進行減壓濃縮，濃縮控制溫度為70 °C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。濃縮至料液相對密度為1. 1左右(25°C )。濃縮液噴霧乾燥，得到淺白色固體粉末，即為；馬齒莧鮮草提取物乾粉。本實施例製得馬齒莧鮮草提取物乾粉收率為3. 2%。提取物乾粉中總生物鹼含量為0. 052% (W/W)，總黃酮含量為17. 86% (W/W)。實施例2馬齒莧鮮草和或乾草提取物溶液的製備方法取冷藏保存的馬齒莧鮮草浸沒在常溫(30°C以下)飲用水中漂洗至無泥土及其它雜質。撈出、浙幹水分。將洗滌乾淨的馬齒莧鮮草500kg，利用膠體磨進行粉碎，形成漿狀物。向該漿狀物中加入250L純水，攪拌，加熱升溫至55°C，向其中加入纖維素酶(山東安克生物工程有限公司出品)1. 0L，保溫酶解Ih0保溫酶解結束，向料液中補加70%乙醇，調節最終料液中乙醇含量達50%。在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至60°C，保溫攪拌提取池，保溫提取結束，料液過濾，得濾液A，待濃縮脫醇。復向濾渣中加入1200L體積百分比為50%乙醇水溶液，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至60°C，保溫攪拌提取2. Oh,保溫提取結束，料液過濾，得濾液B，待濃縮脫醇。復向二次提取剩餘濾渣中加入3000L純水，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至60°C，保溫攪拌提取2. Oh,保溫提取結束，料液過濾，得濾液C，待濃縮，棄殘渣。將濾液A、B、C合併，進行減壓濃縮，濃縮溫度60°C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。將脫醇後的濃縮液調節相對密度至1. 026 (25°C )，即為馬齒莧提取原液。將「馬齒莧提取原液」加熱升溫至50°C，然後，向其中加入醋酸調節原液PH =
5.0，向原液中加入其體積量8% (V/V)的明膠水溶液(明膠水溶液濃度0. 5% )，保溫攪拌
1.Oh0
保溫結束，向上述原液中加入原液體積(W/V)助濾劑活性白土，攪拌40min後， 將料液室溫靜置12h。然後減壓過濾，濾液為酒紅色透明、澄清溶液。濾渣棄去。上述濾液過超濾膜(截留分子量為10000道爾頓)，收集透過液。透過液上AB-8 大孔吸附樹脂柱，料液全部通過大孔樹脂吸附柱後(吸附速度為lBV/h)，用純水衝洗大孔吸附樹脂柱，洗脫速度為2BV/h，至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止(即生成磚紅色沉澱，下同)，洗脫液棄去。用體積百分比為60%的乙醇溶液依次繼續洗脫至洗脫液無黃酮(洗脫速度為 1.5BV/h)，收集洗脫液，減壓濃縮。向上述濃縮液中加入其體積1.0% (W/V)的活性炭，攪拌，將料液加熱升溫至 50°C，保溫脫色Ih。脫色結束，進行過濾，濾液顏色近無色澄清、透明液體。濾液進行減壓濃縮，濃縮控制溫度為60 °C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。濃縮至料液相對密度為1. 15左右(25°C )。將上述濃縮液調節pH值為4. 0，向其中加入其體積量一定量的正丁醇，並加入料液量0.1% (W/V)的山梨酸鉀防腐劑，攪拌混合均勻，然後將料液用0.22μπι微孔濾芯進行保安過濾，濾液直接分裝入事先滅菌、潔淨的包裝容器中，即得馬齒莧鮮草提取物溶液。本實施例製得馬齒莧鮮草提取物溶液的含固量為1.53%，產品收率為3. 4%，提取物溶液中總生物鹼含量為5. 7mg/kg，總黃酮含量為0. 28% (W/V)。實施例3馬齒莧鮮草和或乾草提取物乾粉的製備方法馬齒莧乾草去除泥土及其它雜質。取乾淨的馬齒莧乾草400kg，向其中加入800L 純水，攪拌，加熱升溫至30°C，向其中加入複合植物水解酶(諾維信公司出品)0. 8L，保溫酶解3h。保溫酶解結束，向料液中補加80%乙醇，調節最終料液中乙醇含量達60%。在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至70°C，保溫攪拌提取1.證，保溫提取結束，料液過濾，得濾液A，待濃縮脫醇。復向濾渣中加入MOOL體積百分比為60%乙醇水溶液，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至70°C，保溫攪拌提取1. 5h,保溫提取結束，料液過濾，得濾液B，待濃縮脫醇。復向二次提取剩餘濾渣中加入1800L純水，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至70°C，保溫攪拌提取池，保溫提取結束，料液過濾，得濾液C，待濃縮，棄殘渣。將濾液A、B、C合併，進行減壓濃縮，濃縮溫度60°C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。將脫醇後的濃縮液調節相對密度至1. 028 (25°C )，即為馬齒莧提取物原液。將「馬齒莧提取原液」加熱升溫至40°C，然後，向其中加入醋酸調節原液PH = 5. 5， 向原液中加入其體積量10% (V/V)的明膠水溶液(明膠水溶液濃度1. 0% )。保溫結束，向上述原液中加入原液體積(W/V)助濾劑硅藻土，攪拌40min後，將料液室溫靜置10h。然後用板框進行過濾，濾液為酒紅色透明、澄清溶液。濾渣棄去。上述濾液過超濾膜(截留分子量為10000道爾頓)，收集透過液。透過液上ADS-17大孔吸附樹脂柱，全部通過大孔樹脂吸附柱後(吸附速度為1. 5BV/h)，用純水衝洗大孔吸附樹脂柱，洗脫速度為3BV/h，至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止(即生成磚紅色沉澱，下同)，洗脫液棄去。用體積百分比為70%的乙醇溶液依次繼續洗脫至洗脫液無黃酮(洗脫速度為 1.5BV/h)，收集洗脫液，減壓濃縮。向上述濃縮液中加入其體積1.5% (W/V)的活性炭，攪拌，將料液加熱升溫至 60°C，保溫脫色0. 5h。脫色結束，過濾，濾液顏色近無色澄清、透明液體。濾液進行減壓濃縮，濃縮控制溫度為65 °C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。濃縮至料液相對密度為1. 125左右(25°C )。濃縮液噴霧乾燥，得到淺白色固體粉末，即為；馬齒莧鮮草提取物乾粉。本實施例製得馬齒莧鮮草提取物乾粉收率為2. 6%。提取物乾粉中總生物鹼含量為0. 056% (W/W)，總黃酮含量為23. 21% (W/W)。實施例4馬齒莧鮮草和或乾草提取物溶液的製備方法馬齒莧乾草去除泥土及其它雜質。將乾淨的馬齒莧乾草400kg，向物料中加入 600L純水，攪拌，加熱升溫至40°C，向其中加入纖維素酶(山東安克生物工程有限公司出品)2. 0L，保溫酶解2. 5h。保溫酶解結束，向料液中補加90%乙醇，調節最終料液中乙醇含量達75%。在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至40°C，保溫攪拌提取池，保溫提取結束，料液過濾，得濾液A，待濃縮脫醇。復向濾渣中加入1000L體積百分比為75%乙醇水溶液，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至40°C，保溫攪拌提取1. 5h,保溫提取結束，料液過濾，得濾液B，待濃縮脫醇。復向二次提取剩餘濾渣中加入1800L純水，攪拌，在攪拌狀態下將提取液慢慢加熱升溫至60°C，保溫攪拌提取1. 5h,保溫提取結束，料液過濾，得濾液C，待濃縮，棄殘渣。將濾液A、B、C合併，進行減壓濃縮，濃縮溫度65 °C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。將脫醇後的濃縮液調節相對密度至1. 030 (25°C )，即為馬齒莧提取原液。將「馬齒莧提取原液」加熱升溫至40°C，然後，向其中加入醋酸調節原液pH = 6. 0， 向其中加入其體積量5% (V/V)的明膠水溶液(明膠水溶液濃度1. 0% )。保溫結束，向上述原液中加入原液體積(W/V)助濾劑活性白土，攪拌30min後， 將料液室溫靜置12h。然後減壓過濾，濾液為酒紅色透明、澄清溶液。濾渣棄去。上述濾液過超濾膜(截留分子量為10000道爾頓)，收集透過液。透過液上AB-8 大孔吸附樹脂柱，料液全部通過大孔樹脂吸附柱後(吸附速度為lBV/h)，用純水衝洗大孔吸附樹脂柱，洗脫速度為2BV/h，至菲林試劑法檢測洗脫液中無多糖止(即生成磚紅色沉澱，下同)，洗脫液棄去。用體積百分比為80%的乙醇溶液依次繼續洗脫至洗脫液無黃酮(洗脫速度為 1.5BV/h)，收集洗脫液，減壓濃縮。
向上述濃縮液中加入其體積1. 0% (W/V)的吸附脫色土，攪拌，將料液加熱升溫至 55 °C，保溫脫色Ih。脫色結束，用板框進行過濾，濾液顏色近無色澄清、透明液體。濾液進行減壓濃縮，濃縮控制溫度為50 °C，濃縮真空度保持在-0. 08Mpa -0. 085Mpa。濃縮至料液相對密度為1. 25左右(25°C )。將上述濃縮液調節pH值為4. 5，向其中加入其體積量一定量的丙二醇，並加入料液量0. 02% (W/V)的尼泊金酯防腐劑，攪拌混合均勻，然後將料液用0. 22μπι微孔濾芯進行保安過濾，濾液直接分裝入事先滅菌、潔淨的包裝容器中，即得馬齒莧鮮草提取物溶液。本實施例製得馬齒莧鮮草提取物溶液的乾物質含量為1.32%，產品收率為 2. 9%。提取物溶液中總生物鹼含量為i:3mg/kg溶液，總黃酮含量為0. 42% (W/V)。安全性驗證實驗1急性經口毒性試驗1.試驗材料試驗動物昆明種小鼠20隻，體重18 22g，雌雄各半，每組10隻。供試液將實施例4馬齒莧提取物溶液用蒸餾水配製成20%濃度的供試液備用。2.試驗條件實驗室溫度20 M °C相對溼度60% 70%禁食時間小鼠在給藥前禁食他。3.試驗方法參照(化妝品衛生規範)2007衛生部衛生法制與監督司4.試驗結果動物一次經口服5000mg/kg (0. 5ml/20g體重)供試液(20 % )後，小鼠活動正常。連續觀察7天，體重正常1 28. 5g)，未見明顯動物毒性反應及動物死亡。LD5tl > 5000mg/kgo安全性驗證實驗2過敏試驗1.試驗材料試驗動物豚鼠(雌/雄)，體重325 354g.供試液將實施例1馬齒莧提取物溶液用蒸餾水配製成和2%濃度的供試液備用。2.試驗條件實驗室溫度20 25 °C相對溼度60% 70%3.試驗方法參照(化妝品衛生規範)2007衛生部衛生法制與監督司(Buethler Test BT 法)4.試驗結果除去激發貼敷物後Mh、48h、7a!觀察動物激發部位皮膚反應，馬齒莧提取液對豚鼠皮膚未見過敏反應，動物活動及體重正常G65 491g)。安全性驗證實驗3多次皮膚刺激試驗
1.試驗材料試驗動物豚鼠(雌/雄)，體重250 300g.供試液將實施例3馬齒莧提取物溶液用蒸餾水配製成2%濃度的供試液備用。2.試驗條件實驗室溫度20 25 °C相對溼度60% 70%3.試驗方法參照(化妝品衛生規範)2007衛生部衛生法制與監督司4.試驗結果馬齒莧提取液對豚鼠皮膚未見刺激反應。安全性驗證實驗4急性眼刺激試驗1.試驗材料試驗動物家兔(雌/雄)供試液將實施例2馬齒莧提取物溶液用蒸餾水配製成0. 5%濃度的供試液備用。2.試驗條件實驗室溫度20 25 °C相對溼度60% 70%眼部受試後不衝洗3.試驗方法參照(化妝品衛生規範)2007衛生部衛生法制與監督司4.試驗結果馬齒莧提取液對家兔眼睛未見刺激反應。功效性評價實驗1抗刺激、抗過敏試驗採用化妝品配方中常用的表面活性劑十二烷基硫酸鈉(SDQ作為刺激源，評價本發明的馬齒莧提取物對由於十二烷基硫酸鈉(SDS)引發的刺激的抵抗能力。1.試劑①號純水②號1%SDS+純水③號1% SDS+10%馬齒莧提取物溶液(實施例2)+純水④號1% SDS+10%馬齒莧黃酮提取物溶液(本公司提取)+純水⑤號1% SDS+10%馬齒莧生物鹼提取物溶液(本公司提取)+純水2.試驗方法測試方式用斑貼試紙法，用鑷子將直徑為50mm的圓形濾紙浸潤在不同編號的試劑內2秒鐘，將完全潤溼的濾紙放入試紙槽內，用粘性紙貼於受試者的前臂內側，保持24h 貼片不剝落。貼片前用酒精擦拭，貼後用酒精清洗。觀察方式觀察揭去貼片後6小時、24小時的刺激反應。^ id 5 IH is ICDRG(international contact dermatitis researchgroup)的推薦，斑貼試驗結果的記錄方法如下表1斑貼試驗結果記錄方法
權利要求
1.一種馬齒莧提取物的製備方法，其特徵在於包含下列步驟步驟(1)將馬齒莧鮮草和/或乾草用水和水解酶進行提取和酶解；所述水解酶包括 複合植物水解酶、纖維素酶等果膠裂解酶或碳水化合物酶類；所述的水解酶的用量為馬齒莧鮮草和/或乾草與水和水解酶形成的水溶液的0. 0. 5% (W/V)；步驟O)將步驟(1)所得料液進行醇提，固液分離，得提取液A與濾渣；步驟(3)將步驟( 所得濾渣進行醇提，固液分離，得提取液B與濾渣；步驟將步驟C3)所得濾渣用水提取，固液分離，得提取液C;步驟(5)將步驟( 、(；3)和(4)所得提取液A、B和C合併，濃縮，靜置，過濾，得濾液， 即可。
2.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(5)中，在過濾後，調節濾液的料液比重至相對密度為1.020 1.030(25°C ))，得馬齒莧提取物原液，即可。
3.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(1)中，所述的水與馬齒莧鮮草和 /或乾草的質量比為0.5 1 3 1 ；所述的提取和酶解的溫度為30°C 55°C;所述的提取和酶解的時間為Ih 池。
4.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟O)中，所述的醇提所用的醇為乙醇或60% (V/V)以上的乙醇水溶液；醇提中所用的醇與步驟(1)所得料液的質量比為 1 2 1 6;固液分離前的料液中乙醇的濃度為30 80% (V/V)；所述醇提取的溫度為 40°C 70°C ；所述醇提取的時間為Ih 池。
5.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟( 包含下列步驟向步驟(1)所得料液中加入乙醇或60% (V/V)以上的乙醇水溶液，調節最終料液中乙醇的濃度達到30 80% (V/V)，繼續攪拌提取，之後固液分離，得提取液A與濾渣。
6.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(3)中，所述的醇提所用的醇為濃度30 80% (V/V)的乙醇水溶液；所述的醇提中，所用的醇與步驟( 所得濾渣的質量比為1 2 1 6 ；所述醇提取的溫度為40°C 70°C ；所述醇提取的時間為Ih 池。
7.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(4)中，所用的水與步驟(3)所得濾渣的質量比為1 2 1 6;所述水提取溫度為40°C 70°C ；所述的水提取的時間為Ih 汕。
8.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(5)中，所述濃縮為濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%。
9.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於步驟(5)中，靜置的溫度為2°C 10°C， 靜置時間為他以上。
10.如權利要求1 9任一項所述的製備方法，其特徵在於所述的馬齒莧提取物的製備方法還包含下列步驟步驟(6)，或者步驟(6)和(7)，或者步驟(6)、(7)和(8)，或者步驟(6)、(7)、(8)和(9)，或者步驟(6)、(7)、(8)、(9)和(10)；各步驟如下步驟(6)將步驟(5)所述馬齒莧提取物原液調節pH值為4 6，並向其中加入明膠水溶液，保溫攪拌，攪拌結束加入助濾劑，繼續保溫攪拌，之後將料液在20 30°C靜置，然後過濾除去沉澱，得濾液D ；所述的明膠水溶液的加入量為馬齒莧提取物原液體積的5% 10% ；所述明膠水溶液的濃度為0. 2% 1. 0% ；所述加入明膠水溶液後的保溫攪拌時間為 0. 5h lh，溫度為40°C 60°C ；所述加入助濾劑後的保溫攪拌時間為0. 5h lh，溫度為40°C 60°C ；步驟(7)將步驟(6)所得濾液D通過超濾膜進行純化，收集透過液，得到馬齒莧提取物初步純化液；步驟(8)將步驟(7)所得馬齒莧提取物初步純化液上大孔吸附樹脂柱吸附，之後用純水洗脫至無多糖，棄洗脫液；之後再以乙醇水溶液洗脫至無黃酮，收集洗脫液E ；其中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇水溶液的濃度為50% 80% (V/ V)；步驟(9)將步驟(8)所得洗脫液E進行脫色，過濾，濾液除去乙醇，濃縮至相對密度為 1. 100 1. 300(25°C )，得到馬齒莧鮮草和或乾草提取物純化溶液；所述步驟(9)中脫色劑用量為洗脫液體積的0. 5% 2. 0% (W/V)，脫色溫度為30°C 60°C，脫色時間為0. 5h 2h ；步驟(10)將馬齒莧鮮草和或乾草提取物純化溶液除去水分，之後進行乾燥得到馬齒莧提取物乾粉。
11.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於步驟(6)中，所述助濾劑為硅藻土、 活性陶土或活性白土 ；所述20 35°C靜置的時間為8h以上。
12.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於步驟(8)中，馬齒莧提取物初步純化液的吸附流速為lBV/h !3BV/h ；所述大孔吸附樹脂為D101、AB-8或ADS-17 ；所述純水洗脫速度為lBV/h !3BV/h ；所述乙醇水溶液的濃度為50% 80% (V/V)，洗脫速度為IBV/ h 3BV/h。
13.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於步驟(9)中，所述濃縮為濃縮至濃縮液中乙醇體積百分比< 5%。
14.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於步驟(10)中，所述乾燥方式為真空乾燥、冷凍乾燥或噴霧乾燥。
15.如權利要求10所述的製備方法，其特徵在於步驟(10)得到的馬齒莧提取物乾粉中，總生物鹼含量達到0. 02% 0. 10% (W/W)，總黃酮類含量達到10. 0% 30% (W/W)，以上百分比均為生物鹼類物質或黃酮類物質佔提取物總量的質量百分比。
16.如權利要求1 15任一項所述的製備方法製得的馬齒莧提取物。
17.一種馬齒莧提取物溶液的製備方法，包括如下步驟①按照權利要求10中所述的馬齒莧提取物的製備方法中的步驟(1) (9)製得馬齒莧鮮草和/或乾草提取物純化溶液；②將步驟①所得馬齒莧鮮草和/或乾草提取物純化溶液調節PH值至4.0 6. 0，然後加入穩定劑，使最終溶液中穩定劑的體積百分比為0 40% (V/V)，並按照配製後溶液體積 0.01% 0.15% (W/V)的量加入防腐劑，之後進行保安過濾，分裝，得到馬齒莧鮮草和或乾草提取物溶液；所述的保安過濾為本領域常用的微孔濾芯過濾法。
18.如權利要求17所述的製備方法，其特徵在於步驟②中，所述的穩定劑為乙醇、 丙二醇和正丁醇中的一種或多種；所述的防腐劑包括山梨酸和/或其鉀鹽、尼泊金酯和 LIQUID GERMALL PLUS ；其中，山梨酸及其鉀鹽的用量為0. 05% 0. 15%;尼泊金酯類的用量為0. 01% 0. 03%;LIQUIDGERMALL PLUS的用量為0. 10% 0. 15%，其中防腐劑的加入量按配製後液體總量計算；所述的保安過濾中的微孔濾芯為0. 22μπι微孔濾芯。
19.如權利要求17或18所述的製備方法製得的馬齒莧提取物溶液。
20.如權利要求19所述的馬齒莧提取物溶液，其特徵在於所述的馬齒莧提取物溶液中，總生物鹼含量為3mg/kg 15mg/kg溶液，總黃酮類含量為0. 2% 0. 5% (W/W)，百分比為生物鹼類物質或黃酮類物質佔提取物溶液總量的質量百分比。
21.如權利要求16所述的馬齒莧提取物在製備化妝品或個人洗護用品的應用。
22.如權利要求19所述的馬齒莧提取物溶液在製備化妝品或個人洗護用品的應用。
全文摘要
本發明公開了一種馬齒莧提取物及其製備方法，其包含下列步驟(1)將馬齒莧鮮草和/或乾草用水和水解酶進行提取和酶解；(2)將步驟(1)所得料液進行醇提，固液分離，得提取液A與濾渣；(3)將步驟(2)所得濾渣進行醇提，固液分離，得提取液B與濾渣；(4)將步驟(3)所得濾渣用水提取，固液分離，得提取液C；步驟(5)將步驟(2)、(3)和(4)所得A、B和C合併，去醇，濃縮，靜置，過濾，得濾液，即可。本發明還公開了一種馬齒莧提取物溶液及其製備方法。本發明馬齒莧提取物或提取物溶液可作為抗刺激、抗過敏功效成分應用於化妝品。本發明的方法可高產率的製得有效成分含量較高的馬齒莧提取物。
文檔編號A61P37/08GK102389385SQ20111014826
公開日2012年3月28日 申請日期2011年5月27日 優先權日2011年5月27日
發明者劉桂雲 申請人:上海輝文生物技術有限公司