血細胞分析儀稀釋液及溶血劑的製作方法

2023-10-04 04:33:19

專利名稱：：血細胞分析儀稀釋液及溶血劑的製作方法
技術領域：
：本發明屬於醫療診斷儀器用試劑領域，特別涉及血細胞分析儀用試劑。
背景技術：
：稀釋液和溶血劑是醫學檢驗中血液分析儀最常用的一組試劑，是測定血紅蛋白(Hb)和白細胞(WBC)計數或分類的關鍵試劑。溶血劑在稀釋液的配合作用下，一方面使紅細胞(RBC)迅速溶解，釋放出血紅蛋白與溶血劑結合形成穩定的血紅蛋白衍生物，以供定量測定Hb,另一方面白細胞維持原有形態，並保持一定的體積，供WBC計數用，並且根據白細胞的大小來對白細胞進行三分群(淋巴細胞、中性粒細胞、中間型細胞)。1996年，國際血液學標準化委員會推薦氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法作為國際Hb測定標準方法，其主要物理指標為在波峰？^540nm，波谷入-504nm時，具有明顯的波峰、波谷。該法雖然能較精確地測量Hb;但不能同時測定WBC,因而，無法應用於臨床。目前，國內外臨床醫學檢驗學上常用的溶血劑是以有機季胺鹽加氰化鉀(KCN)組成的混合物，一方面其吸收光譜與HiCN較為接近，另一方面，有機季胺鹽破壞RBC後，Hb與KCN迅速生成穩定的CNHb，達到測定Hb的目的，同時又不破壞WBC。但這種配伍的溶血劑的最大缺點是KCN有劇毒，不僅嚴重危害實驗室工作人員的身體健康，同時給生產單位操作上也帶來很多不便，對環境汙染也極為嚴重。雖然臨床上制定了極為嚴格、繁瑣的降低氰汙染措施，但其對人身、環境的汙染還是無法避免。中國專利CN99115572.6中公開了一種無氰溶血劑，但是其只能在CD系列、F系列血細胞分析儀器中使用，不能在其它系列儀器中使用。而且沒相配的稀釋液(Dil)。配製中所用的水必須是重蒸餾水，在實際生產中操作困難，成本高。而且十六烷基三甲基溴化銨比重輕，配製時有懸浮粉末在空氣中漂浮。該產品吸入人體有害，要推廣到實際應用中存在一些問題，其應用範圍也受到限制。沒從根本上解決血液檢驗人員包括生產人員身體受到毒素侵害的難題，比如疊氮物的汙染、氰化物汙染，配製中十六烷基粉末對操作者的汙染。
發明內容本發明的目的在於克服現有技術之不足而提供一種既能迅速破壞RBC,又不損害WBC,且其吸收光譜接近HiCN,物理化學性質穩定的無迭氮物稀釋液和無氰溶血劑，無毒又便於搡作。本發明所述的稀釋液中各物質及組分如下，在l升稀釋液中氯化鈉12.0~4.Og硫酸鈉2.0~10.Og一三二甲基脲0.8~0.5g亞硫酸銅0.2~0.5g乙二胺四乙酸二鈉3.0~8.0gP底啦西啉鈉Q.2~0.7g硼酸鹽緩衝液調PH為7.2-7.8餘為水其中氯化鈉和硫酸鈉的加入量為互補，但兩者加入量之和《14g;—三二甲基脲和亞硫酸銅的加入量為互補，但兩者加入量之和<1.0g。本發明所述的稀釋液中的哌啦西啉鈉，可以用氟化鈉替代，其加入量為0.3~0.8g。本發明所述的哌啦西啉鈉和氟化鈉也可以同時加入，但兩者的加入量之和<1.0g。與本發明所述的稀釋液配對使用的溶血劑中各物質及組分如下，在l升溶血劑中氯化鉀G.8~5.0g十二烷基三甲基氯化銨0-60.0g十八烷基三甲基溴化銨14.0~0g異丙醇6.Q~10.Oral碳酸鹽或鹽酸緩衝液調PH3.25.8餘為水其中十二烷基三甲基氯化銨、十八烷基三甲基溴化銨的加入量為互補，但兩者的加入量之和《60g。本發明所述的碳酸鹽或鹽酸緩衝液調溶血劑的PH3.2~5.8,是指當前述所加入的各類物質使得溶血劑大於5.8時，用鹽酸緩衝液調PH至3.2~5.8;當前述所加入的各類物質使得溶血劑小於3.2時，用碳酸鹽緩衝液調PH至3.2~5.8。本發明所述的稀釋液和溶血劑適用於HL-系列血細胞分析儀，也可用於其它血細胞分析儀。本發明由於釆用上述方案，利用氯化鉀與金屬離子掩蔽劑的銅銨鹽代替氰化鉀，使其與血液反應後，形成穩定的血紅蛋白衍生物，且在入=540皿，入-504nm時，吸收光譜曲線相似，可滿足臨床檢驗的需要；同時，試劑中不含氰化物，不含疊氮物，無毒性，能有效改善操作人員的工作環境，降低毒物對人身健康的傷害。具體實施方式實施例l。(1)稀釋液的製備在純水中分別加入氯化鈉6.Og，硫酸鈉5.8g,—三二甲基脲0.8g,亞硫酸銅O.2g,乙二胺四乙酸二鈉3g,哌啦西啉鈉O.2g,溶解，加入硼酸鈉緩衝液調PH為7.3，用純水定量一升，過濾。(2)溶血劑的製備在純水中分別加入氯化鉀3.0g,十二烷基三甲基氯化銨50g，十八烷基三甲基溴化銨8g，異丙醇10ml，溶解，用碳酸鹽O.34g調PH在5.3，用純水定量到一升，過濾。實施例2。U)稀釋液的製備在純水中分別加入氯化鈉4.0g，硫酸鈉10g，一三二甲基脲0.5g，亞硫酸銅O.5g,乙二胺四乙酸二鈉3g,哌啦西啉鈉O.25g,溶解，加入硼酸鈉緩衝液調PH為7.5，同時用純水定量一升，過濾。(2)溶血劑的製備在純水中分別加入氯化鉀O.9g，十二烷基三甲基氯化銨60g,異丙醇6ml，溶解，用碳酸氫鈉調PH在4.5，同時用純水定量到一升，過濾。實施例3。(1)稀釋液的製備在純水中分別加入氯化鈉5.Og,硫酸鈉9g,—三二甲基脲O.6g，亞硫酸銅O.3g,乙二胺四乙酸二鈉5g，哌啦西啉鈉O.5g,溶解，加入硼酸鈉緩衝液調PH為7.8,用純水定量一升，過濾。(2)溶血劑的製備在純水中分別加入氯化鉀2g，十二烷基三甲基氯化銨40g,十八烷基三甲基溴化銨4g，異丙醇9ml，溶解，用碳酸鹽調PH為4.0,同時用純水定量到一升，過濾。實施例4。(1)稀釋液的製備在純水中分別加入氯化鈉8g,硫酸鈉5g，一三二甲基脲O.5g，亞硫酸銅O.5g,氟化鈉O.8g、乙二胺四乙酸二鈉6g，溶解，加入硼酸鈉緩衝液調PH為7.7,同時用純水定量一升，過濾。(2)溶血劑的製備在純水中分別加入氯化鉀5g，十八烷基三甲基溴化銨14g，異丙醇10ml，溶解，用碳酸鹽調PH為5.2,同時用純水定量到一升，過濾。實施例5。本實施例為本發明的應用實施例及與含疊氮物稀釋液和含氰化物溶血劑對比。本實施例所用的稀釋液、溶血劑為按實施例l的配比配製的稀釋液、溶血劑。對比組為常規的含疊氮物稀釋液和含氰化物溶血劑。本實施例所用儀器HL—系列血細胞分析儀，722型分光光度計；取二十分正常人抗凝血樣，兩組試劑分別檢測二十分標本所得(白細胞.紅細胞.血紅蛋白.血梢板.淋巴細胞.粒細胞)結果進行統計學處理，用t值查P值大於0.5,兩者結論無顯著差異。附表l為含疊氮物稀釋液和含氰化物溶血劑應用於血常規檢驗的檢驗結果。附表2為本發明的稀釋液、溶血劑(不含疊氮物稀釋液和不含氰化物溶血劑)應用於附表l所用血標本的血常規檢驗的檢驗結果。附表3有氰化物和迭氮化物試劑與本發明(無氰化物和無選氮化物)試劑吸收峰檢測對比表。其中A1為有氰化物試劑，A2為本發明試劑，組別為所用的標本號。表1tableseeoriginaldocumentpage6表2tableseeoriginaldocumentpage7表3tableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage9權利要求1.一種血細胞分析儀稀釋液，其特徵是在1升稀釋液中氯化鈉12.0～4.0g硫酸鈉2.0～10.0g一三二甲基脲0.8～0.5g亞硫酸銅0.2～0.5g乙二胺四乙酸二鈉3.0～8.0g哌啦西啉鈉0.2～0.7g硼酸鹽緩衝液調PH為7.2～7.8餘為水其中氯化鈉和硫酸鈉的加入量為互補，兩者之和≤14g，一三二甲基脲和亞硫酸銅的加入量為互補，兩者之和≤1.0g。全文摘要血細胞分析儀稀釋液及溶血劑，其特徵是在1升稀釋液中氯化鈉12.0～4.0g、硫酸鈉2.0～10.0g、一三二甲基脲0.8～0.5g、亞硫酸銅0.2～0.5g、乙二胺四乙酸二鈉3.0～8.0g、哌啦西啉鈉0.2～0.7g、硼酸鹽緩衝液調pH為7.2～7.8、餘為水；1升溶血劑中氯化鉀0.8～5.0g、十二烷基三甲基氯化銨0～60.0g、十八烷基三甲基溴化銨14.0～0g、異丙醇6.0～10.0ml、碳酸鹽或鹽酸緩衝液調pH3.2～5.8、餘為水，本發明試劑能形成穩定的血紅蛋白衍生物，且在λ＝540nm，λ＝504nm時，吸收光譜曲線相似，可滿足臨床檢驗的需要，試劑中不含氰化物，不含疊氮物，無毒性，能有效改善操作人員的工作環境，降低毒物對人身健康的傷害。文檔編號G01N15/10GK101281193SQ20081010689公開日2008年10月8日申請日期2008年6月4日優先權日2008年6月4日發明者劉鬱林,文玲梅,袁水斌申請人:南昌百特生物高新技術有限公司