抑制透明質酸酶活性的miRNA及其應用的製作方法
2023-10-04 15:45:24 1
專利名稱：抑制透明質酸酶活性的miRNA及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及微小核苷酸技術領域，尤其涉及一類抑制透明質酸酶活性的miRNA及其應用。
背景技術：
微小RNA (microRNAs ；miRNA,又稱小分子RNA)是真核生物中廣泛存在的一種長約16到26個核苷酸的RNA分子，可調節其他基因的表達。miRNA從一些DNA轉錄而來，但無法進一步轉譯成蛋白質的RNA (屬於非編碼RNA)。這些RNA是從初級轉錄本(primarytranscript),也就是pri_miRNA,轉變成為稱為pre_miRNA的莖環結構,最後成為具有功能的成熟miRNA。pr1-miRNA長度大約為30(Tl000個鹼基，pri_miRNA經過一次加工後，成為preniRNA即microRNA前體，長度大約為70 90個喊基；pre_miRNA再經過Dicer 酶酶切後，成為長約16 26nt的成熟miRNA。其特點有(I)位於基因組非編碼區；(2)進化上高度保守；(3)可在轉錄後水平對基因表達進行調節；(4)參與多種生命過程，調控多達30%的蛋白的表達。成熟miRNA通過RNA誘導的沉默複合體(RISC)與靶信使核糖核酸(mRNA)特異結合，從而抑制轉錄後基因表達，在調控基因表達、細胞周期、生物體發育時序等方面起重要作用。尤其微小RNA從5』端起第2-8位的核苷酸在相同微小RNA家族中高度保守，被稱為種子序列(seed sequence),其在轉錄後水平抑制祀信使核糖核酸(mRNA)翻譯過程中起至關重要作用。另外，目前已有研究表明植物的微小RNA可以跨界調控動物的基因表達，這為本發明的最初設想提供了重要依據。透明質酸(Hyaluronan、hyaluronic acid,又稱糖醒酸、玻尿酸、琉璃糖碳基酸)，其基本結構是由雙糖單位D-葡萄糖醛酸及N-乙醯葡糖胺組成的高級多醣類。與其它粘多糖不同，它不含硫。透明質酸為組織基質中具有限制水分及其它細胞外物質擴散作用的成分，它的透明質分子能攜帶500倍以上的水分，為目前所公認的最佳保溼成分，目前廣泛的應用在保養品和化妝品中。作為一種多功能基質，透明質酸廣泛分布於人體各部位，其中皮膚也含有大量的透明質酸。人類皮膚成熟和老化過程也隨著透明質酸的含量和新陳代謝而變化，它可以改善皮膚營養代謝，使皮膚柔嫩、光滑、去皺、增加彈性、防止衰老，在保溼的同時又是良好的透皮吸收促進劑。而透明質酸酶(Hyaluronidase, HYAL)作為一種能水解透明質酸的酶，在生物體皮膚、口腔和關節中的透明質酸酶會隨著機體的衰老或處於病態而分泌增加，隨之引起透明質酸的減少，出現皮膚粗糙乾燥、彈性下降、皺褶增加等衰老症狀，所以通過抑制作為透明質酸水解酶的表達，可有助於維持機體內透明質酸酶的含量。另外，透明質酸酶也是I型過敏反應(如蕁麻疹、特意反應性皮炎等)和腫瘤細胞增殖遷移的參與者，因此，抑制透明質酸酶的活性，既能使透明質酸不被分解以維持其正常生理功能，又能達到抗炎抗過敏的功效。目前，已經報導的透明質酸酶抑制劑按其化學組成可分為蛋白質類、多糖類、生物鹼和萜類等，而且大批量製備所需成本較高。迄今，沒有核酸類製劑對於透明質酸酶活性的抑制作用的報導，最接近的現有技術方案為從植物中提取分離純化I，2，3，4，6-五-O-沒食子醯基-D-葡萄糖(PGG)對透明質酸酶活性的抑制劑，但是其分離純化過程繁瑣，得率低。
發明內容
解決的技術問題本發明提供一種核酸類透明質酸酶活性抑制劑及其應用，具體的說，所涉及抑制透明質酸酶活性的miRNA，可從多種天然植物中特異性分離提取，純度高、得率高、成本低，抑制效果好。技術方案抑制透明質酸酶活性的miRNA，序列如SEQ ID No.1所示。序列如SEQ ID No.1所示的miRNA在抑制透明質酸酶活性的應用。
序列如SEQ ID No.1所示的miRNA在製備抑制透明質酸酶活性藥物上的應用。有益效果I)本發明是天然植物中特異性分離提取的微小核苷酸，簡單易行，成本相對低。2)本發明水解溶液可低溫保存，無其他有機溶劑殘留，安全無汙染。
圖1為生物信息學軟體RNAhybrid計算得出的上述miR164與所述透明質酸酶(HYALl)的mRNA3』 -非編碼區(3』 -UTR)相互作用從而產生轉錄後抑制作用機制關係；圖2為載體圖譜pMIR-REP0RT miRNA表達報告基因載體；圖3為過表達miR-164與過表達ncRNA對螢光素酶活性的抑制效果圖；圖4為miR164抑制HYALl的蛋白印記(western blotting)結果圖。
具體實施例方式本發明是一種透明質酸酶抑制劑，該透明質酸酶抑制劑中含有微小核苷酸miR164。此處，所述「miR164」是指下面的核酸序列UGGAGAAGCAGGGCACGUGCA。以下，通過實施例進一步詳細說明本發明，但本發明並不限於這些實施例。實施例1 :1、序列比對對所述miR164不特別限定植物物種，在對其進行物種間序列保守性對比發現 miR164 在葡萄(Vitis vinifera, vv1-miR164a/c/d),蘋果(Malusdomestica, mdm-miR164b/c/d/e/f ),甜瓜(Cucumis melo, cme_miR164c/d)等 22 種植物中
高度保守，序列比對結果如表I。
權利要求
1.抑制透明質酸酶活性的miRNA，其特徵在於序列如SEQID No.1所示。
2.序列如SEQID No.1所示的miRNA在抑制透明質酸酶活性的應用。
3.序列如SEQID No.1所示的miRNA在製備抑制透明質酸酶活性藥物上的應用。
全文摘要
抑制透明質酸酶活性的miRNA及其應用，序列如SEQIDNo.1所示。該miRNA可用於製備抑制透明質酸酶活性藥物。本發明是天然植物中特異性分離提取的微小核苷酸，簡單易行，成本相對低。本發明水解溶液可低溫保存，無其他有機溶劑殘留，安全無汙染。
文檔編號C12N15/113GK103013997SQ20121051235
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月4日 優先權日2012年12月4日
發明者李冬海, 張辰宇, 楊浩 申請人:南京大學